ARTÍCULO EN PRENSA

Revista de magnetismo y materiales magnéticos 293 (2005) 483–496

www.elsevier.com/locate/jmmm

Revisar

Nanopartículas superparamagnéticas para aplicaciones biomédicas: posibilidades y limitaciones

de un nuevo sistema de administración de fármacos

Tobias Neubergera, Bernhard Schöpfa, Heinrich HofmannB,

Margarete HofmannC, Brigitte von Rechenberga,
aUnidad de Investigación Musculoesquelética, Hospital Equino, Facultad Vetsuisse Zúrich, Universidad de Zúrich, Winterthurerstr. 260,

8057 Zúrich, Suiza

BLaboratorio de Tecnología de Polvo, Instituto de Materiales, Instituto Federal Suizo de Tecnología, EPFL, 1015 Lausana, Suiza
CMatSearch Pully, Chemin Jean Pavillard, 14, CH-1009 Pully, Suiza

On-line el 2 de marzo de 2005

Resumen

Las nanopartículas se pueden utilizar en aplicaciones biomédicas, donde facilitan el diagnóstico de laboratorio, o en la selección de
fármacos médicos. Se utilizan para aplicaciones in vivo, como agentes de contraste para imágenes por resonancia magnética (MRI), para
terapia tumoral o enfermedades cardiovasculares. Las nanopartículas muy prometedoras para estas aplicaciones son las nanopartículas
superparamagnéticas basadas en un núcleo formado por óxidos de hierro (SPION) que se pueden dirigir a través de imanes externos.
SPION están recubiertos con materiales biocompatibles y pueden funcionalizarse con fármacos, proteínas o plásmidos. En esta revisión,
se introducen y discuten las características y aplicaciones de SPION en el sector biomédico.

r 2005 Elsevier BV Todos los derechos reservados.

Palabras clave: Nanopartículas de óxido de hierro superparamagnéticas (SPION); Nanopartículas; Orientación magnética de fármacos (MDT); Clasificación de
células inmunomagnéticas (IMS); Hipertermia magnética; Toxicidad; Hipertermia; Revisar; Agente de contraste; Funcionalización de nanopartículas;
Aplicación de nanopartículas

1. Introducción partículas con un tamaño de núcleo deo10 nm y un revestimiento

orgánico o inorgánico. Si el tamaño del cristal es lo suficientemente
Las nanopartículas de óxido de hierro superparamagnéticas pequeño, la energía térmicakT (dónde k es

(SPION) son pequeñas gramo-Fe2O3o Fe3O4 Constante de Boltzmann yT es el absoluto

temperatura) puede ser suficiente para causar fluctuaciones en la
dirección de magnetización. El término '' superparamagnetismo '' se
Autor correspondiente. Tel .: +41 1 635 84 10;
utiliza para inferir una analogía entre el comportamiento del pequeño
fax: +41 1635 89 17.
Dirección de correo electrónico:
momento magnético de un solo átomo paramagnético y que
bvonrechenberg@vetclinics.unizh.ch (B. von Rechenberg).

0304-8853 / $ - ver el documento preliminarr 2005 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
doi: 10.1016 / j.jmmm.2005.01.064
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del momento magnético mucho mayor de una partícula
magnética de tamaño nanométrico que surge del
acoplamiento de muchos espines atómicos [1]. Después
eliminando el campo magnético, las partículas ya no muestran
interacción magnética; una característica que es importante para su
usabilidad[2,3]. Las partículas como los liposomas que contienen
partículas de óxido magnético en sus cavidades se denominan
magnetosomas.[4], mientras que
los agregados que consisten en compuestos orgánicos
(dextrano, almidón, etc.) en combinación con partículas de
óxido de hierro a nanoescala se denominan perlas o
aglomerados superparamagnéticos.
Las partículas están bien dispersas en un líquido, para
aplicación médica normalmente en agua, o forman
compuestos con matrices orgánicas o inorgánicas, las
llamadas perlas. La magnetización superparamagnética es,
en comparación con los materiales paramagnéticos
normales, mucho más alta y puede alcanzar casi la
saturación de magnetización del óxido de hierro
ferromagnético. Este comportamiento permite el
seguimiento de tales partículas en un gradiente de campo
magnético sin perder la ventaja de una suspensión coloidal
estable. Adicionalmente, aplicando un campo magnético
alterno, se puede observar el calentamiento de las partículas
basado en el mecanismo de relajación de Néel.
La modificación de la superficie por moléculas orgánicas
tiene diferentes tareas que cumplir: (i) estabilizar las
nanopartículas en una suspensión biológica con un pH
alrededor de 7,4 y una alta concentración de sal, (ii)
proporcionar grupos funcionales en la superficie para una
posterior derivatización, y finalmente (iii ) evitar la absorción
inmediata por parte del sistema reticulendotelial (RES) [5].
La selección de fármacos se ha convertido en una de las tecnologías
modernas para la administración de fármacos. [6]. SPION
en combinación con un campo magnético externo,
permiten entregar partículas al área objetivo deseada
y fijarlas en el sitio local mientras el medicamento se
libera y actúa localmente (dirección magnética de
fármacos, MDT) [6-10]. Por lo tanto, la dosis del
medicamento puede reducirse y el efecto sistémico
de los medicamentos se puede mantener al mínimo.
[1,6].
Las posibilidades de las aplicaciones SPION se han incrementado
drásticamente en los últimos años. [1,2,4,9,11]. En
el área clínica de la medicina humana, estas partículas se están
utilizando como sistemas de administración de fármacos [12],
genes [13,14] y radionucleidos [4]. Además,
Los ferro fl uidos, como agentes de contraste en la resonancia
magnética (MRI), se aplican de forma rutinaria en el campo de la
formación de imágenes diagnósticas. [15-20]. Los SPION también son
atractivos para aplicaciones in vitro en diagnósticos médicos, como la
investigación en genética.[14] y
tecnologías basadas en la separación magnética inmune
(IMS) de células, proteínas, ADN / ARN, bacterias, virus y
otras biomoléculas [21]. Además, en los últimos años, se
han realizado avances utilizando SPION en estudios
clínicos de terapia del cáncer en veterinaria.
[22,23] y medicina humana [7,24] atacando
tumores sólidos con 4-epidoxorrubicina dirigida
magnéticamente, o quimioterapia intraarterial mejorada
a través de la retención dirigida de partículas. La
hipertermia por fl uidos magnéticos (MFH) es otro
campo en el que se aplica SPION para crear un aumento
de temperatura mediante la aplicación de un campo
magnético oscilante para matar las células tumorales.
[25,26]. Este tipo de terapia ya se utiliza en pacientes
humanos en el campo de la oncología.
Una de las aplicaciones prometedoras de SPION en el
futuro podría centrarse en el sistema
musculoesquelético en humanos y animales. [27].
Muchas de las enfermedades del sistema
musculoesquelético se caracterizan por procesos
inflamatorios locales y actualmente se tratan con
antiinflamatorios no esteroides sistémicos (AINE).[28]o
corticosteroides [29–31]. Aparte de los efectos
secundarios sistémicos de estos fármacos, como úlceras
gástricas o tendencias hemorrágicas, el acceso local o el
mantenimiento de las concentraciones terapéuticas del
fármaco puede ser un problema. SPION podría servir
para un propósito principal mediante la administración
de fármacos a sitios inflamatorios para mantener las
concentraciones adecuadas y, al mismo tiempo, reducir
el costo, la dosis general y los efectos secundarios no
deseados. Los imanes utilizados junto con SPION como
portadores de fármacos permitirían encender y apagar
el campo magnético, dirigiendo así las partículas al sitio
local durante el tiempo, la dosificación y la eliminación.
Una de las razones por las que el uso de SPION fue
limitado en las últimas 2 décadas fue su caracterización
insuficiente, la morfología no homogénea y la rápida
eliminación a través de la RES. [1]. Cómo-
Siempre, las nuevas tecnologías en síntesis y métodos de análisis de
partículas junto con recubrimientos más sofisticados optimizaron las
propiedades de SPION y, por lo tanto, su uso se ha vuelto altamente
atractivo para la medicina.
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aplicaciones en diagnóstico y terapia. Las nanopartículas de óxido de
hierro con un tamaño medio inferior a 10 nm generalmente se
pueden obtener mediante varios métodos de síntesis química y física.
[1,2]. Sus propiedades sobresalientes están relacionadas
principalmente con su pequeño tamaño, y por esto principalmente
con sus distribuciones de tamaño estrechas.[32,33]. Se pueden
preparar tres tipos diferentes de coloides magnéticos a través de
varios métodos de estabilización[34]. El primer coloide magnético se
prepara revistiendo un núcleo magnético con un tensioactivo
adecuado, por ejemplo, oleato de sodio (NaOl), dextrano, PVA sobre
SPION. El segundo método de estabilización se basa en la formación
de nanocompuestos constituidos por SPION distribuidos a lo largo de
un recubrimiento no magnético, compuesto por un material como el
almidón polimérico.[35]. La presencia de almidón polimérico durante
la formación de SPION dificulta el crecimiento de los racimos después
de la nucleación. Estas redes poliméricas cubren un gran número de
monodominios de óxido de hierro formados continuamente y los
mantienen separados frente a las fuerzas de atracción. La tercera
suspensión coloidal magnética se estabiliza mediante la formación de
vesículas parecidas a liposomas llenas de SPION. Pueden consistir en
una matriz polimérica (nanoesferas) o en un sistema de depósito en el
que un núcleo aceitoso o acuoso está rodeado por una pared
polimérica delgada (nanocápsulas)[5]. Los polímeros adecuados para
preparar nanopartículas incluyen poli (alquilcianoacrilatos), poli
(metiliden malonato y poliésteres como poli (ácido láctico), poli (ácido
glicólico), poli (mi-caprolactona) y sus copolímeros. Los métodos para
la preparación de nanopartículas pueden comenzar con un
monómero o con un polímero preformado. Se revisan en Barratt et al.
[36]. Las nanoesferas también se pueden formar a partir de
macromoléculas naturales tales como proteínas y polisacáridos, de
lípidos no polares y de materiales inorgánicos tales como óxidos
metálicos y sílice, como muestran Chastellain et al.
[37].
Las nuevas tecnologías mencionadas que utilizan
SPION permiten minimizar los efectos secundarios
sistémicos mientras se mantienen las concentraciones
terapéuticas a nivel local, lo que puede llevar un paso
más hacia la '' Bala Mágica '', una expresión introducida
por Paul Ehrlich ya en 1906 [38,39].
La focalización de fármacos implicaActivo pasivoo
físico focalización. En la focalización pasiva, la
485
La distribución de los fármacos dentro del organismo se produce a través de
las propiedades del fármaco y del portador que no se modifican (``
profármacos ''). [13]. Orientación activa es
se logra con mecanismos que permiten la focalización directa de
fármacos y / o portadores en células, tejidos o sistemas de
órganos específicos a través de mecanismos de reconocimiento
específicos. Físico la focalización permite distribuir
distribución de fármacos y sistemas portadores a
través de influencias externas, como imanes en el
caso de SPION o calor [40,41].
Son posibles varias estrategias para dirigir fármacos y
sistemas portadores a su locus de interés: para la terapia
locorregional, el sistema se administra lo más cerca
posible del sitio objetivo (focalización en primer lugar).
La aplicación de fármacos y portadores se produce por
vía intravascular o en una cavidad, como se hace
actualmente en la terapia del cáncer con fármacos
citostáticos. Los sistemas de fármaco / portador
orientados al receptor aprovechan la interacción entre el
acoplamiento de anticuerpos y / o hormonas a los
receptores locales (focalización de segundo orden)[42].
El uso de sistemas coloidales, en los que se utilizan
como sistemas portadores sustancias con una
distribución muy fina y un tamaño de partícula entre 5 y
500 nm, modifica el patrón de distribución de los
fármacos en el organismo. [43]. Aparte de las
nanopartículas, también pertenecen a este grupo las
micropartículas, nano y microemulsiones, liposomas,
niosomas, farmacosomas y conjugados tensioactivos.
Es necesaria una caracterización completa del sistema de
partículas para tomar una decisión sobre si el uso de un sistema
nanoportador es apropiado para una aplicación in vivo específica. Las
nanopartículas se pueden describir con las siguientes propiedades
fisicoquímicas[44–48] dependiendo de factores vitales para su
distribución dentro del sistema corporal: tamaño de partículas,
toxicidad, carga superficial, capacidad de adsorción de proteínas,
hidrofobicidad superficial, velocidad de carga, cinética de liberación,
estabilidad resp. degeneración del sistema portador, comportamiento
de hidratación, movilidad electroforética, porosidad, características
específicas de la superficie, densidad, cristalinidad, ángulo de
contacto y peso molecular. El tamaño de las partículas, la toxicidad, la
carga superficial y la capacidad de adsorción de proteínas son las
características más importantes para su uso in vivo y, por lo tanto, se
discutirán con más detalle.
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2. Propiedades y características de las partículas
Tamaño de partículas: El tamaño de las partículas generalmente se
refiere al diámetro total de las partículas, incluido el núcleo de hierro y el
revestimiento. Dado que el diámetro más pequeño de los capilares en el
cuerpo es 4metrometro
[49], las partículas más grandes serán capturadas y
retenidas principalmente en los pulmones [50]. Las
partículas con tamaños más grandes y / o agregaciones de
partículas pequeñas pueden quedar atrapadas, causando
émbolos dentro del lecho capilar de los pulmones.[45].
Dependiendo de su energía magnética, la mayoría de las
nanopartículas tienden a agregarse, reduciendo así su carga
superficial. Esto puede provocar una precipitación que
podría resultar peligrosa si estas partículas se inyectan por
vía intravenosa. Por lo tanto, es importante conocer la carga
superficial y el comportamiento de agregación de las
partículas en sangre.[51]. La mayoría de las nanopartículas
aplicadas por vía intravenosa se reconocen como "extrañas"
del sistema corporal y se eliminan inmediatamente a través
de los macrófagos del sistema de fagocitosis mononuclear
(MPS).[52]. Partículas menores de 4metrom se captan a
través de las células del sistema reticuloendotelial,
principalmente en el hígado (60-90%) y el bazo (3-10%)
[45,52]. Si bien es más probable que las partículas pequeñas
de hasta 100 nm se fagociten a través de las células
hepáticas (las aberturas en el endotelio de los sinusoides
hepáticos se encuentran entre 100 y 150 nm), existe una
tendencia a que las partículas mayores de 200 nm sean
filtradas por la vía senos del bazo[53]. Si
las partículas entre 30 y 100 nm se aplican por vía intravenosa, el
hígado elimina las partículas más grandes del torrente
sanguíneo más rápido en comparación con los tamaños más
pequeños. Por lo tanto, cuanto más grandes son las partículas,
más corto es su período de vida media plasmática.[54]. Delaware-
dependiendo del tamaño de partícula, la captación puede subdividirse en
fagocitosis (todos los tamaños) o pinocitosis (partículas
o150 nm) [52,55]. Las partículas grandes solo serán eliminadas
por células capaces de fagocitosis, mientras que las partículas
más pequeñas pueden ser eliminadas por todos los tipos de
células mediante pinocitosis (todas las células son capaces de
pinocitosis). La actividad fagocitótica aumenta con el tamaño de
las partículas.[55].
En condiciones fisiológicas, las partículas de más
de 10 nm no pueden penetrar el endotelio. [1].
Sin embargo, esta barrera de permeabilidad puede
aumentar en condiciones patológicas, como
inflamación o infiltración tumoral. He aquí el
El umbral de penetración se puede aumentar para permitir partículas
de 700 nm. [53]. Esto también se puede lograr temporalmente con la
ayuda de medicamentos, inmunomoduladores, calor o radiación.[1].
En conclusión, la absorción de nanopartículas depende en gran
medida del tamaño de partícula, como se demostró in vitro.[56,57] y
en vivo [55,58].
Toxicidad de partículas:Todas las sustancias farmacéuticas
destinadas al uso en humanos y animales requieren pruebas
exhaustivas para detectar efectos secundarios tóxicos. Esto también
es cierto para SPION. Aparte de la toxicidad aguda, la toxicidad de los
productos de degradación, la estimulación de las células con la
posterior liberación de mediadores inflamatorios.[55], y los efectos
tóxicos a través del sistema de partículas deben considerarse
seriamente.
Se puede obtener una primera indicación sobre la toxicidad
mediante el estudio histológico de tejidos de cultivos celulares
después de la incubación con nanopartículas.
[27,59–62]. Sin embargo, la citotoxicidad suele ser
mucho mayor in vitro en comparación con in vivo. Esto
puede explicarse por el hecho de que los productos de
degradación responsables de la toxicidad se eliminan
continuamente del sitio de aplicación in vivo. Por lo
tanto, las pruebas de toxicidad realizadas in vitro pueden
tener una aplicación limitada.[55].
Si se utilizan suspensiones que contienen nanopartículas
in vivo, deben ser hidrófilas y su pH debe estar cerca de 7,4.
[1]. Además, deben ser degradados y eliminados por el
sistema corporal sin dejar residuos, de lo contrario pueden
acumularse en determinados compartimentos celulares,
como los liposomas, o tejidos del sistema de fagocitosis
(MPS).[55].
Una de las pruebas de toxicidad factibles in vivo es la
aplicación intraperitoneal de nanopartículas en ratones
[63,64] que permite estudiar la dosis de LD50, el índice
mitótico (mutagenicidad) y el efecto de las partículas sobre
los macrófagos y otras células (hígado, bazo, riñón, células
peritoneales) mediante histología. La toxicidad (toxicidad
aguda y subaguda, mutagenicidad) y farmacocinética
(distribución corporal, metabolismo, biodisponibilidad,
eliminación) de nanopartículas con un diámetro medio de 80
nm (medido por dispersión de luz láser) se investigó
anteriormente en un gran estudio experimental en perros
como bien como ratones[sesenta y cinco]. Las partículas
analizadas se planificaron para estudios posteriores
centrados en el diagnóstico por resonancia magnética de
problemas hepáticos. Antes de la aplicación intravenosa, las
partículas se funcionalizaron con
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Se estudiaron el hierro radiactivo y varios parámetros: (i) la
distribución de la radiactividad dentro de diferentes tejidos
utilizando un indicador especial para Feisótopos, (ii) el tiempo de
relajación del hígado y el bazo en la resonancia magnética, (iii) la
capacidad de tratar un déficit de hierro previamente inducido
anemia, (iv) patología de varios sistemas orgánicos mediante
histología, (v) chemscreen de sangre y orina y (vi) la
mutagenicidad mediante una prueba especial (Ames Salmonella
Microsome Reverse Mutation Assay). Una hora después de la
inyección, se pudo detectar el 82,6% de las partículas en el
hígado y el 6,2% en el bazo. La concentración de partículas
radiactivas disminuyó lentamente en el hígado (semivida
plasmática de 3 días) y el bazo (4 días) y el hierro radiactivo se
incorporó a la hemoglobina de los eritrocitos. El tiempo medio de
detección (T2) en la RM fue menor (2 días), ya que solo las
partículas inalteradas son capaces de inducir suficiente contraste
para ser detectadas. Sin embargo, la anemia previamente
inducida se trató con éxito en un período de 7 días. No se
encontraron efectos secundarios tóxicos agudos o subagudos en
histología o análisis de sangre serológicos, aunque una dosis
máxima de 3000metromol Fe / kg
se aplicó en perros y ratas. Esto corresponde a 150
aumento de la dosis en comparación con lo que es
necesario para las pruebas de diagnóstico de hígado mediante
resonancia magnética. Otras pruebas in vivo con SPION basadas
en partículas de 100 a 1000 nm con recubrimiento de dextrano,
anhidroglucosa o carbonato, e incluso pruebas clínicas en
humanos, mostraron una excelente biocompatibilidad.
[7,24,66,67].
Carga superficial: La carga superficial medida de
SPION está relacionada con el potencial eléctrico en
el plano de corte de la doble capa, el llamado
potencial zeta, que se mide a través de la motilidad
electroforética. [55]. Usando la estabilización
electrostática de SPION, se necesita un alto potencial
zeta. El potencial zeta depende de la concentración
de electrolitos del medio soluble in vitro y, además,
de las proteínas plasmáticas adsorbentes in vivo.[68].
Si el potencial zeta es menor que un valor crítico dado
del sistema de partículas, se produce la agregación y
precipitación de las partículas.
La carga superficial también juega un papel importante
durante la endocitosis. Debería haber una absorción más
lenta de partículas cargadas negativamente debido al efecto
negativo de "rechazo" de las partículas negativas.
487
membrana celular cargada. Sin embargo, el índice de endocitosis
in vitro es mínimo con un potencial zeta cercano a cero.[69]. Por
el contrario, la fagocitosis aumenta con una carga superficial
más alta, independientemente de si la carga es negativa o
positiva.[52].
Cuanto mayor es la carga superficial, menor es el
tiempo de residencia de SPION en el sistema
circulatorio [54].
Capacidad de adsorción de proteínas: Si las nanopartículas son
inyectado por vía intravenosa, se produce una interacción inmediata con las
proteínas plasmáticas. La adsorción de proteínas en la superficie de la
partícula se llama opsonización.
[70]. La cantidad de proteínas adsorbidas se basa en el tamaño
de las moléculas y la carga e hidrofobicidad de la superficie de la
partícula. Al aumentar el tamaño, la carga y la hidrofobicidad de
las partículas, aumenta la capacidad de adsorción de proteínas.
[52]. Además, las interacciones hidrofóbicas tienen un efecto
sobre la adsorción de proteínas.[71] tal que
La deshidratación de áreas hidrófobas da como resultado
una ganancia de entropía que a su vez facilita la adsorción
de proteínas. [72]. Los componentes proteicos adsorbidos
juegan un papel importante en la biodistribución,
degradación y eliminación de las nanopartículas.
[52,73–75]. Las proteínas que estimulan la fagocitosis se
denominan opsoninas (p. Ej., Inmunoglobulina G (IgG),
sistema del complemento, fibronectina)[49,76], mientras que
los que inhiben la fagocitosis se denominan
disopsoninas [70,77].
La adsorción de una variedad de proteínas en sistemas de
nanopartículas se ha investigado in vitro e in vivo. [70,78–81]
. Las opsoninas y disopsoninas, así como otras proteínas
inactivas del plasma sanguíneo, son responsables del
comportamiento general de las nanopartículas in vivo. Por lo
tanto, no es óptimo estudiar el comportamiento de
adsorción de
único proteínas con nanopartículas [70]. Es mucho más
eficaz estudiar todas las proteínas plasmáticas presentes en
sangre mediante electroforesis bidimensional en gel de
poliacrilamida.[52,82]. Con este método, se pueden separar
varios miles de proteínas plasmáticas al mismo tiempo de
acuerdo con su punto isoeléctrico y peso molecular. El
principal desafío que se encuentra con este método es
identificar las proteínas adsorbidas en combinación con las
partículas sin crear artefactos.[52]. Revista-
Por el contrario, las partículas neticas pueden separarse con
relativa facilidad del plasma sanguíneo por medio de un
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488 T. Neuberger y col. / Journal of Magnetism and Magnetic Materials 293 (2005) 483–496

técnica de separación magnética (ver más abajo tabla 1

Lista de los materiales magnéticos biodegradables más utilizados
aplicación in vitro de SPION). Los estudios que aclararon
partículas
el patrón de adsorción de proteínas en SPION con un
diámetro de 65 nm y revestimiento de carboxidextrano Matriz de partículas magnéticas Aplicación biomédica
revelaron una adsorción de 40% de IgG y 20% de
Eritrocitos Orientación por medicamentos
fibronectina de la proteína adsorbida total. Además, se
Separación celular
detectaron IgM, IgD, factor del complemento C3,
apolipoproteína A-1 y otras tres proteínas indefinidas. Liposomas Orientación por medicamentos

Estas partículas fueron rápidamente eliminadas y Fosfolípidos Inmovilización de enzimas

fagocitadas por las células de Kupffer en el hígado. ligadas a la membrana

Albúmina Orientación por medicamentos

Separación celular

Almidón Orientación por medicamentos

Resonancia magnética

3. Aplicación de nanopartículas superparamagnéticas Radioterapia

(SPN) / microesferas
Ácido polilactico) Radioterapia

Dextrano
El número de posibilidades de uso de SPION ha Separación celular
Inmovilización de enzimas
aumentado drásticamente en los últimos años.
MRT
[1,2,4,9,11,14]. En el campo de la medicina clínica, Hipertermia local
SPION se ha propagado para transporte de genes, Orientación por medicamentos

resonancia magnética, hipertermia y radioterapia ( Ensayo de inmunoenzimas

Tablas 1 y 2) en vivo. Además, SPION se utiliza para la Quitosano Orientación por medicamentos

separación de células, proteínas, ADN / ARN,

Polialquilcianoacrilato
bacterias, virus y biomoléculas.[21]. En vivo
Orientación por medicamentos

La degradación de SPION depende del material del Imina de polietileno Orientación por medicamentos

núcleo y del recubrimiento. Los materiales como el óxido

de hierro, la albúmina, el dextrano, el quitosano pueden
degradarse, mientras que la etilcelulosa, el poliestireno,
el polimetacrilato, la sílice y otros no son degradables.[1]. Tabla 2
Lista de las partículas magnéticas no biodegradables más utilizadas
Últimamente, se prefieren las nanopartículas que consisten
en un núcleo de óxido de hierro debido a sus excelentes
propiedades magnéticas y baja toxicidad para el sistema Matriz de partículas magnéticas Aplicación biomédica
corporal. [5]. Las microesferas disponibles comercialmente
Etilcelulosa Quimioembolización arterial
que contienen SPION tienen un diámetro entre 1 y 5metrom,
Polímeros sintéticos (p. Ej., Separación magnética de
pero también se pueden comprar partículas más grandes Poliestireno, bacterias, virus, parásitos
[83]. En la mayoría de los casos, las nanopartículas se polimetilmetacrilato)
pueden distinguir en tres grupos: (i) SPION no modi fi purificación de ARNm
cada, sin recubrimiento con un máximo de fl exibilidad Aislamiento de secuencias de genes
específicas
que luego se puede modificar, (ii) SPION con una modi fi
Ensayos inmunomagnéticos
cación química específica de la superficie, como
dextrano, carboxilo. o grupos amina que permiten la
funcionalización con otras moléculas, y (iii) SPION con
sustancias específicas o grupos de reconocimiento, 3.1. Uso in vitro de SPION
donde las moléculas unidas son productos
farmacéuticos, anticuerpos u otras sustancias médicas. SPION ha demostrado ser una herramienta muy útil para
A continuación se describen varias posibilidades de las técnicas de separación magnética en uso clínico y ha
uso de SPION in vitro e in vivo. reemplazado a otras tecnologías de separación.
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[1,2,9,21,84–91]. Esto es cierto para la separación y purificación
de células inmunomagnéticas, como fase sólida para
inmunoensayos para aislamiento, purificación y reconocimiento
de proteínas.[9,84,89]. Además se utilizan para biología
molecular, donde se demostró que son útiles para el aislamiento,
purificación, hibridación, síntesis y como marcadores de ADN /
ARN.[2,9,84,87,89]. El aislamiento y la detección de
microorganismos es posible fácilmente con SPION
[2,84], así como una transferencia de genes eficiente de
nucleótidos o secuencias de genes a las células [14].
En el diagnóstico médico y clínico, la interacción de antígenos y
anticuerpos se utiliza de forma rutinaria para medir las
concentraciones de marcadores biológicos. Tradicionalmente, los
anticuerpos y / o antígenos se inmovilizan como fases sólidas sobre
filtros, estructuras tubulares, esferas o placas de plástico. El uso de
SPION como fases sólidas para estas técnicas de separación ha
revolucionado y simplificado este campo de la química clínica
mediante el desarrollo de inmunoensayos más sensibles, altamente
eficientes y automatizados.[1,3,9,85,90,91]. También las perlas
magnéticas que consisten en partículas de polímero macroporosas
que contienen partículas magnéticas de óxido de hierro dentro de los
poros (microesferas) se utilizan con éxito para esta tecnología de IMS.
[21,87]. Esta técnica es una alternativa atractiva y rentable para la
clasificación de células activadas por fl uorescencia (FACS), que a
diferencia de la IMS es menos e fi ciente, más lenta, requiere una alta
dilución de la suspensión celular y también tiene problemas de
esterilidad.[85]. IMS permite detectar concentraciones muy bajas de
células (hasta 10 células / ml) y esto es una ventaja en el diagnóstico
temprano de cáncer en la búsqueda de células tumorales circulantes
en la sangre.[21,86] o médula ósea [1,21,85,88].
Células [9,21], proteínas, ácidos nucleicos [9], bacterias,
virus, parásitos [2,85] y los agentes fúngicos pueden
conservarse bien si se separan con IMS, y pueden
cultivarse posteriormente en medios de cultivo
apropiados sin tener que eliminar las partículas. [2].
La mayoría de los sistemas de separación magnética
disponibles comercialmente funcionan según el mismo principio:
la superficie de SPION está marcada con anticuerpos contra
epítopos de células, bacterias u otros antígenos diana. [92]. A
continuación, las partículas marcadas se mezclan con la
suspensión que se va a ensayar. Después de la reacción de
antígeno y anticuerpo, la célula o bacteria inmunomagnética
marcada
489
la suspensión se pipetea en un recipiente de separación
y se aplica un campo magnético. Mientras que las células
marcadas inmunomagnéticamente permanecen dentro
del contenedor, todas las demás sustancias se eliminan
por lavado. A través del desarrollo del llamado '' Sistema
de flujo microfabricado '', la tecnología IMS se refinó
hasta el punto en que se puede lograr una separación
continua en un procedimiento de un solo paso y sin
lavados complicados.[85].
SPION también ha demostrado su eficacia como vectores
de genes no virales que facilitan la introducción de
plásmidos en el núcleo de forma múltiple en comparación
con las tecnologías estándar habitualmente disponibles. Al
igual que en la separación celular, el campo magnético
aplicado permite transportar los genes selectivamente a las
células locales deseadas dentro de los cultivos celulares. Esto
es posible para la investigación de factores de diferenciación
celular en células vecinas no manipuladas por genes dentro
del mismo cultivo celular.[14].
3.2. Aplicación in vivo de SPION
Imagen de resonancia magnética: Diagnóstico clínico
Los tics con resonancia magnética se han convertido en un método
popular no invasivo para diagnosticar principalmente patologías
recientes de tejidos blandos o cartílagos, debido a los diferentes
tiempos de relajación de los átomos de hidrógeno. [1,93]. SPION
fueron desarrollados como agentes de contraste para
resonancia magnética y aumentan la sensibilidad y la
especificidad diagnóstica debido a las modi fi caciones del
tiempo de relajación de los protones [1,16,20,94–115]. Las
primeras SPION recubiertas de dextrano ya se registraron
oficialmente hace 10 años como agentes de contraste para
la resonancia magnética del hígado en Europa.[17]. La
eficacia de SPION como agente de contraste en varios
tejidos depende de sus propiedades fisicoquímicas, como el
tamaño, la carga y el recubrimiento.[54], y puede
incrementarse mediante modificaciones superficiales por
sustancias biológicamente activas (anticuerpos, ligandos de
receptores, polisacáridos, proteínas, etc.) [1,16,116].
El diámetro hidrodinámico de la SPION utilizada con la
resonancia magnética varía entre 20 y 3500 nm, aunque las
partículas aplicadas por vía intravenosa son relativamente
pequeñas y oscilan entre 20 y 150 nm con o entre 5 y 15 nm
sin recubrimiento. [15,95]. Revestimientos
generalmente están hechos de derivados de dextrano y
poli (etilenglicol) [95], pero también almidón, albúmina,
sílice, etc. [15].
 ARTÍCULO EN PRENSA
490 T. Neuberger y col. / Journal of Magnetism and Magnetic Materials 293 (2005) 483–496
Dado que la mayoría de las partículas se ingieren
de las células del sistema reticulendotelial (RES), su
distribución se hace más fácilmente visible en el
hígado, el bazo y la médula ósea. [117] y linfa
nodos [15,16,18,94,97,104,106,118]. Renal también fl ujo puede
puede visualizarse por medio de SPION
[99,119,120].
La SPION estabilizada con dextrano con un tamaño
total de 45 nm y un núcleo de óxido de hierro de 5
nm se funcionalizó con proteínas Tat del VIH y podría
introducirse en varios tipos de células, como células
hematopoyéticas CD34 + humanas, células
progenitoras neurales de ratón, linfocitos CD4 +
humanos y esplenocitos de ratón, in vitro. Esto fue
posible usando una concentración de 10-30 pg
SPION / celda (0.5-2 107 /célula) sin pérdida de
viabilidad o función celular [62]. When these cells
were injected intravenously in mice, their
accumulation could be observed by means of MRI in
the bone marrow, liver and spleen of these
experimental animals. Even single cells could be
detected through MRI. There was no difference in the
biodistribution of loaded compared to non-loaded
cells. Part of the loaded cells could even be re-
harvested effectively by means of the IMS
technology. It was also possible to follow the
distribution of T-lymphocytes from the bone marrow
with MRI in mice using the same SPION [61]. These
results have great implications for research in the
field of immunology and stem cell biology [61,62].
Furthermore, SPION were used as oral contrast
agents for the diagnosis of gastrointestinal tumors
[18,19,87,121], or intravenously for the detection of
other tumors in the body system [16,17,23,105],
infarcts in the cardiovascular system [18,96,
122–126], experimentally in cerebral areas
[103,109,127] with increased permeability of the
blood brain barrier [16,128].
SPION are also predestined for use as combined
carrier systems for drug delivery while at the same
time serving as contrast agent [16]. In this way, the
kinetics of the pharmaceutical agent could be
followed by means of MRI. In addition, distribution of
particles can be influenced through the application of
an external magnet [23].
Magnetic drug targeting (MDT):One of the
major problems in pharmacotherapy is the delivery of
drugs to a specific location and maintenance
de su ubicación durante el período de tiempo deseado. La
concentración total de fármacos podría reducirse
drásticamente y evitarse los efectos secundarios. Utilizando
un campo magnético externo, SPION funcionalizado con
fármacos unidos de forma reversible podría administrarse a
ubicaciones específicas y localizarse en su lugar.[7,9]. La
El método de MDT no solo depende de las
propiedades físicas, la concentración y la cantidad de
partículas aplicadas, sino también del tipo de unión
de los fármacos. Además, la geometría, el tamaño y
la duración de la aplicación del imán externo y la vía
de inyección de SPION, así como el suministro
vascular de los tejidos objetivo influirán en su efecto.
Los parámetros fisiológicos del paciente, como el
peso corporal, el volumen sanguíneo, el gasto
cardíaco, la resistencia periférica del sistema
circulatorio y la función de los órganos también
afectarán la e fi ciencia del imán externo, además de
la posibilidad de colocar el imán cerca de la ubicación.
[1,66]. El MDT, sin embargo, depende de este campo
magnético externo que en la mayoría de los imanes
disponibles comercialmente se logra una profundidad de
penetración de unos pocos milímetros en el tejido. Sin
embargo, investigaciones más recientes informan sobre
imanes permanentes de neodimio hierro boro en
combinación con SPION de excelentes propiedades
magnéticas que aumentan la profundidad del campo
magnético hasta 10-15 cm.[22,67].
Un buen modelo para simular las propiedades magnéticas de
SPION / sistema magnético en los vasos sanguíneos es la '' captura de
campo magnético de SPION in fl uyendo
sistema''. Con este sistema que consta de un circuito de
tubos de goma, bombas, imanes y gausímetro que
miden la fuerza del campo magnético, es posible imitar
la distancia necesaria para retener y acumular la SPION
en un sistema de fluido en movimiento con diferentes
viscosidades (agua, glicerol 30%)[129,130]. Pero también
SPION in vivo se aplicó con éxito por vía intravenosa y se
acumuló en lugares específicos por medio de imanes
externos.[7,9,14,22,23,66]. Esto es especialmente
atractivo para su uso en la terapia del cáncer, donde la
quimio o la radioterapia están demostrando efectos
secundarios graves y extensos, mientras que solo tienen
un pequeño margen terapéutico. Se investigaron
diferentes métodos, como los liposomas termosensibles
y sensibles al pH que contienen agentes
quimioterapéuticos encapsulados o anticuerpos
específicos de tumores.[7]. A finales de los setenta
 ARTICLE IN PRESS
T. Neuberger et al. / Journal of Magnetism and Magnetic Materials 293 (2005) 483–496
magnetic particles comprised of magnetite were
developed for transport of chemotherapeutics in the
form of magnetic erythrocytes, magnetic albumin
and polymer microspheres [131]. Their
intravenous application in combination with an
external magnet resulted in accumulation of the drug
within the tumor area and tumor regression
compared to a control group. The magnetic
properties, however, were not sufficient in these
particles and thus, further development was not
pursued [22]. Experimental trials followed these initial
studies investigating several tumor types, and
localizations in animal species or even in humans
using different types of SPION and magnetic
microspheres [1]. There it was shown by means of
MRI, histology and gammaradiography that a 6–10
times accumulation of 99Tc
radioactively marked SPION (Fe3C, 0.5–5 mm)
was achieved after intravenous injection under
angiographic control in the liver and lung area in pigs
[4]. Alexiou et al. were capable of achieving complete
remission of experimentally induced VX-2 squamous
cell carcinomas after intraarterial injection of starch
coated SPION functionalized with methotrexate in the
hind limbs of rabbits [23]. Local, reversible gray
discoloration and alopecia was noted in the area of
the external magnet, as well as rare urine
discoloration that was not considered to be irritating.
Further interesting experiments were conducted
by Lübbe et al. [66] using 100 nm SPION coated with
polymeric anhydroglucose partially functionalized
with epirubicin. The SPION were injected into the
femoral vein of rats under the influence of an
external magnetic field (0.2T for 5, 10 and 30min).
Approximately 5% of the overall blood volume was
injected. Groups without a magnetic field served as
controls. With this intravital method, it is possible to
visualize the microcirculation in the capillary bed of
intact cremaster musculature with the help of a
microscope. An irreversible thrombus formed within
the capillary bed of the muscle after 10min of magnet
application indicating that this method could be used
to induce microembolization of tumors. These
observations were repeated by other authors in a
similar experiment [67]. In further experiments,
491
Lübbe et al. reported complete tumor regression of
malignant, aggressively metastasizing
adenocarcinomas and hypernephromas that were
implanted into ears or abdomen of mice. Again,
starchcoated SPION partially functionalized with
epirubicin were injected into the tail vein while an
external magnetic field was applied in the area of the
tumors. Regression was achieved with already an
SPION amount equal to 0.5% of the total blood
volume, whereas tumor embolization could only be
achieved with unphysiologically large doses equal to
10% of the total blood volume. Side effects were
minimal after SPION application, except if doses of
more than 10–20% of the blood volume were
injected. Then, lethargy, reduced food intake over 12–
24 h and a grayish discoloration of the skin over the
tumor area could be observed in some of the
animals. However, the skin discoloration disappeared
after 7–14 days.
After these encouraging results, the SPION
functionalized with epirubicin were used in clinical
trials in humans [7,24]. In 14 patients with different
types, localization and stages of solid tumors, a test
dosage of non-functionalized SPION (0.2% of blood
volume) and thereafter, 2–3 0.5% of the blood volume
with epirubicin functionalized SPION were injected
into veins contralaterally to the tumors while an
external magnetic field (0.5–0.8T) was applied over
the tumor for 60–160min. Blood tests were taken in
regular intervals and toxicity was assessed according
to the WHO guidelines. In addition, MRI of the tumors
and the liver were performed after 24 h and 5 weeks
after the last treatment. The sizes of the tumors were
measured weekly, and in one case a biopsy sample
was studied histologically. In 6 patients, particle
accumulation could be detected within the tumor
tissue. The application of the non-functionalized
SPION went without complications, while the side
effects of the epirubicin functionalized particles could
be kept to a minimum. As in the animal experiments
a grayish, reversible discoloration of the skin was
noticed in some of the patients for 24–36 h. Transient
increases (24–48 h) of iron and ferritin blood values
were reported, although without clinical symptoms.
Myelodepression in one patient was attributed to side
effects of the
 ARTICLE IN PRESS
492 T. Neuberger et al. / Journal of Magnetism and Magnetic Materials 293 (2005) 483–496
chemotherapy with epirubicin. An accumulation of
SPION in the liver was recorded within the first 2
days, whereas no particles could be detected after 60
days confirming the results of previous studies
[1,22,65]. Therefore, it was concluded that MDT was
safe to be used in cancer therapy
[7,24,66].
Carbon coated SPION (0.1–1 mm size) functionalized with
carminomycin and rubomycin were injected into the tail vein
of rats with tumors [67].
Using MDT, a three-fold higher concentration of
chemotherapeutic agents could be measured in the
tumor tissues and a 60% healing rate of the tumors
could be achieved. Similar experiments in dogs had
the same results after injection of SPION in the
arterial vessels of the tumor. Microembolization was
also detected. These experiments lead to a clinical
trial in 150 human patients with far advanced,
different type of tumors. Although the authors
reported that most of the patients were cured or
their conditions significantly improved, these results
must be interpreted with care, because only an
extended abstract is available in the literature [67].
Apart from grayish discoloration of skin areas above
the tumors, discoloration was also noticed in regional
lymph nodes indicating that these particles could be
helpful in eliminating metastatic tumor spreading.
An entirely different use of SPION in MDT is
visualized in postoperative prophylaxis of infections
around surgical implants and prosthesis
[130]. There, the idea is to combine the implants with
soft ferromagnetic materials, for example spirals in
vascular prostheses, or frames around artificial heart
valves. If complications develop after implantation,
such as infection, thrombosis, rejection or
calcification, appropriate medication could be
delivered to the implant site by means of
functionalized SPION injected into an adjacent artery
and under the influence of an external magnet. The
implant itself would act as a magnet and attract the
particles that would release the medication on the
local site. After successful preliminary tests with the
‘‘magnetic field capture of SPION in flowing system’’
experimental in vivo studies with dogs using carbon
coated SPION (0.1–1 mm) were conducted [67]. A 5
cm long prosthesis was used to replace part of the
carotid
artery in those dogs. Thereafter, 99mTC marked
SPION were injected and particle accumulation was
followed with the help of a gamma detector. The
majority of the particles could be detected close to
the implant [130]. In another canine model thrombi
of the carotid arteries were experimentally induced
and treated with MDT. Dextran coated SPION (1 mm
in size) functionalized with streptokinase, a common
thrombolyticum, were injected into the arteries while
an external magnet was applied over the thrombus.
Although, the dosage of streptokinase was lower as
generally used in clinics, all thrombi could be
dissolved in contrast to the control groups where no
external magnetic field was applied [132].
MDT with SPION was also successfully used in gene
therapy (magnetofection) in first experiments
[14]. The transfection efficiency of commonly used
viral vectors could be increased up to 100-fold
through coupling of these vectors to SPION and
application of an external magnetic field. The
duration of the gene transport could be reduced to a
few minutes, the tropism of adenoviral vectors could
be enforced and the low titer of retroviral vectors
compensated. The efficiency of this system could be
reproducibly proven in vitro and in vivo in gene
transport to cells of the gastrointestinal tract in
rodents as well as in blood vessels of pigs. Most of
the authors using magnetotransfection reported a 2–
10 fold particle accumulation and at the same time a
significant regression of tumors compared to control
groups. After removing the external magnetic field,
most of the particles could be found in the liver
[1,7,22,23].
Hyperthermia with magnetic ferrofluids: Super-
paramagnetic particles exposed to an alternating
magnetic field can be used for heat induction
[5,133]. Through the oscillation of the magnetic
moment inside the particles the magnetic field
energy in the form of heat is liberated and conducted
to the tissue environment [1,5]. SPION
have a much higher rate of specific absorption
compared to larger magnetic particles with several
magnetic domains and therefore, are predestinated
for use in hyperthermia, where the tissue is heated
up to 41–46 1C [25,26,133]. If the temperature
exceeds 56 1C, necrosis, coagulation or carbonization
of the tissue is the result; a procedure called
 ARTICLE IN PRESS
T. Neuberger et al. / Journal of Magnetism and Magnetic Materials 293 (2005) 483–496
‘‘thermoablation’’ [133,134]. For obvious reasons
thermoablation is only of limited value in clinical
applications [25]. In contrast, hyperthermia is highly
suitable for cancer therapy, since tumor cells are
highly susceptible to elevated temperatures [5,135]. If
tumor cells are heated up to 41–45 1C, the tissue
damage for normal tissue is reversible while the
tumor cells are irreversibly damaged. This can be an
advantage when used in combination with therapies
such as radio- and chemotherapy[26,133,136].
Interestingly, hyperthermia seems to induce
modifications of the cell surface receptor molecules
and thus, tumor cells are recognized by the immune
system (killer cells) more easily [137]. Furthermore,
the bloodbrain barrier is reduced for 60min when
temperatures reach 42.5–43 1C promising an
improvement in combined chemotherapies of brain
tumors [133]. Conventional hyperthermia treatments
including microwaves, ultrasound, radiofrequency,
and infrared, have already been successfully used.
However, their disadvantage is based on their
inability to selectively induce heat formation in
specific tumor tissue, inhibition of heat conduction
through less heat conductive tissue, such as fat and
cranial bone, the invasiveness of the methods, and
temperature distribution inhomogeneities.
In many in vitro tests with different types of tumor
cells and SPION, the optimal physical properties of
the SPION [138], antibody mediated tumor adhesion
[135,139], particle uptake into tumor cells [138],
duration and strength of the magnetic field
[135,138,139] was studied to achieve the most
efficient tumor cell inactivation. They were then
confirmed in animal experiments in vivo (mostly in
mice) with experimentally induced tumors
[25,26,134,136]. The homogenous celltissue
inactivation including temperature increase
correlated well with the homogenous distribution of
SPION within the target tissue. Temperature varied
from 47 to 80 1C in these experiments.
It was demonstrated that the location of the
particles within the cell (intracellular, interstitial,
membrane bound) was very important concerning
the efficiency of hyperthermia induction.
Intracellularly induced hyperthermia increased the
efficiency of particles and allowed reducing their
493
dosage [25]. Even after mitosis, 50% of the particles
were still present within the tumor cells. This is
advantageous if repeated hyperthermia is applied. It
means that SPION should be slowly degraded from
the cells for this type of application, since changes in
the physical properties of cells would drastically
reduce the absorbed heat energy.
SPION functionalized with antibodies against
surface receptors can bind to the cell membrane.
Induction of hyperthermia will therefore damage the
cell membranes locally without changing the
environment. Thus, the particle concentration can be
reduced [140]. Currently, clinical trials in human
patients affected with prostate and brain tumors are
conducted using local magnetic hyperthermia in
combination with radiotherapy
[133].
Apart from cancer therapy, local magnetic
hyperthermia could be used for blood coagulation in
small vessels [1], for selective temperature increases
in virus infected cells (eg. HIV after coupling of CD4
glycoproteins to SPION) [5] and
as a drug delivery mechanism, where substances are
coupled to magnetic microspheres or SPION [141].
As a summary, the application of SPION for local
magnetic hyperthermia is a promising tool for future
therapy where selective, efficient and non-invasive
methods for heat induction in tissues are warranted.
4. Conclusions and outlook
The use of SPION in the medical field opens new
avenues for selective treatment of local tissues where
efficiency is increased through local concentrations
while at the same time general side effects can be
avoided. Although their use is still considered
experimental except in MRI, new technologies for
particle synthesis, coating and functionalization will
render them even more attractive for all kinds of
medical applications in the near future. Last but not
the least, systematic studies about their detection
and elimination behavior within the body system will
elicit more reliable data about their clinical safety.
 ARTICLE IN PRESS
494 T. Neuberger et al. / Journal of Magnetism and
Acknowledgements
This work was supported by the European
Community, 5th Framework Program,
‘‘Magnanomed’’ G5RD-2000-00375 and theVetsuisse
Research Grant SPION, University of Zürich,
Switzerland.
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