MEDIOS DE CULTIVO PREPARACION Y ESTIRILIZACION

I. INTRODUCCIÓN
Se entiende por medios de cultivos a los alimentos o nutrientes en el que
crecen los microorganismos, en este caso bacterias. Para conseguir un
medio de cultivo óptimo es necesario tener condiciones adecuadas de
temperatura, grados de humedad, presión de oxígeno, grados de acidez
o alcalinidad. Debe tener como mínimo carbono, hidrógeno, oxígeno y
sales inorgánicas.
Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo a su
consistencia en líquidos, sólidos y semisólidos, y según su composición
nutricional en enriquecidos, de enriquecimiento, sintéticos, generales,
entre otros. Los medios de cultivos, además deben de tener ciertos
requisitos o condiciones para poder permitirle a los microorganismos su
desarrollo, de ahí que la constitución de estos deben tener los
suficientes nutrientes y sustratos que le brinden condiciones para
realizar sus funciones metabólicas
Las técnicas de cultivos bacterianos, nos permiten aislar un tipo de
bacteria específico de una fuente natural, incrementar su número de
poblaciones o mantener en condiciones estables el cultivo, así como
cuantificar el número de bacterias que se encuentran en el material de
estudio.
II. OBJETIVOS
 Preparar medios de cultivo para sembrar bacterias.
 Conocer los distintos medios de cultivo en los cuales se
desarrollara las bacterias.
 Darles las adecuadas condiciones a los microorganismos para
que estos se desarrollen

.
III. MARCO TEÓRICO

MEDIOS DE CULTIVO
De manera general se denomina “medio de cultivo” a cualquier material
que presente una adecuada combinación de nutrientes para permitir el
crecimiento o el incremento del número de células de una población
microbiana.
CONSTITUYENTES BÁSICOS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. Fuentes de energía

Orgánicas: carbohidratos, proteínas, polisacáridos, grasas,

ácidos orgánicos, etc.

Inorgánicas: Ej. Amonio, nitritos, azufre, etc.

Luz.

2. Componentes estructurales celulares

Componentes principales: Carbono, hidrógeno, oxígeno,
nitrógeno, azufre, fósforo, potasio, magnesio, calcio, hierro y
sodio. Elementos trazas: Cobalto, zinc, molibdeno, cobre y
manganeso. Factores de crecimiento: Se llama así a cualquier
compuesto orgánico que un microorganismo requiere como
precursor o constituyente de su material orgánico celular, pero
que no puede sintetizarlo a partir de sus fuentes de carbono más
simples, por lo que se le debe proporcionar como nutriente. Ej.
Aminoácidos, purinas, pirimidinas y vitaminas. Ciertas bacterias
patógenas requieren sangre o heme. Ej. Género Haemophilus.
3. Agua
LA CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.
Según su estado físico
Líquidos
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los
nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones
con un elevado número de microorganismos. Ej. Caldo nutritivo.

Sólidos
Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los
cuales se les añaden agentes solidificantes como agar,
gelatina o sílica gel. Se utilizan con frecuencia en el
aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en
el laboratorio. Ej. Agar nutritivo

Semisólidos
SEGÚN LA NATURALEZA DE SUS CONSTITUYENTES
Medios naturales o complejos
Están constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el añadido de minerales y otras
sustancias. No se conocen todos los componentes del medio de cultivo,
ni las cantidades exactas en que están presentes. Ej. Extracto de carne,
extracto de levaduras.
Medios sintéticos o químicamente definidos
Se preparan a partir de ingredientes químicamente puros y por lo tanto
se puede conocer exactamente su composición cualitativa y
cuantitativa. Por su costo sólo se emplean en procedimientos
especiales.
SEGÚN SUS PROPÓSITOS DE USO
Medios de enriquecimiento
Se llama enriquecimiento a cualquier
cultivo en medio líquido que resulte en un
incremento en el número de un tipo dado
de microorganismo en relación con el
número de otros tipos de
microorganismos que puedan estar en el inóculo. Un medio de
enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el
crecimiento del microorganismo que nos interesa o que inhiban el
crecimiento de los otros tipos de microorganismos presentes. La
selectividad de un cultivo de enriquecimiento no está determinada
únicamente por la composición química del medio usado, sino que en un
medio dado puede ser variada significativamente modificando otros
factores tales como: temperatura, pH, fuerza iónica, iluminación,
aireación etc. Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de
las especies del género Salmonella provenientes de muestras de heces,
orina, agua o alimentos.

Medios selectivos
Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por
ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de
microorganismos específicos. Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para
el aislamiento de patógenos entéricos.
Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es
decir, permiten el crecimiento de muchos
tipos de microorganismos, pero si
contienen indicadores de productos
derivados de la actividad metabólica de los
microorganismos sobre algunos de los
componentes del medio. Se utilizan para la
identificación de los microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado
para detectar fermentación de carbohidratos.

Medios selectivos diferenciales

A veces se combinan en un mismo medio las características de ser
selectivo y diferencial. Ej.: el agar Mac Conkey contiene sales biliares y
cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram positivas.
Pero como también contiene lactosa y un indicador de pH permite
distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo
son.

Inoculación de los medios de cultivo

En microbiología se entiende por "siembra" la operación que consiste en

depositar un germen asépticamente en un medio de cultivo. Toda
siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales:

1. Practicarla en medios de cultivo favorable y previamente esterilizado.

2. Emplear instrumentos asépticos.
3. No contaminar ni destruir el inóculo
4. Depositarla asépticamente en los medios elegidos.
5. Esterilizar los instrumentos empleados antes y después de cada
operación.
Los medios de cultivo, como ya se ha dicho, pueden ser sólidos,
semisólidos o líquidos, y estar contenidos en tubos, placas o frascos. La
técnica general de las siembras variará según el estado físico del
material a sembrar y del medio de cultivo.
Métodos de cultivo de uso rutinario
Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mechero
Bunsen (30 cm.), o, en el ambiente dentro de una campana de flujo
laminar, ya que, la corriente ascendente de aire que va por la llama, o la
corriente de aire del flujo laminar arrastra el polvo y otras partículas con
el aire hacia arriba, o hacia afuera; impidiendo la contaminación del
medio de cultivo. El asa o pipeta pasteur deben ser flameadas
adecuadamente y enfriadas antes de tocar el inóculo, o el medio de
cultivo. 1. Siembra en placas 2. Siembra en tubos de agar tendido 3.
Siembra por picadura 4. Siembra en superficie y picadura 5. Siembra en
profundidad 6. INCUBACION:
Los medios de cultivo pueden ser: inoculados en estufa a 35°C en
aerobiosis, anaerobiosis o en atmósfera de C02. Para aerobiosis se
incuban las placas y tubos en estufa de cultivo a 35°C. Para
anaerobiosis se colocan las placas y tubos dentro de una jarra
Anaerobia y luego ésta se coloca en estufa de cultivo a 35°C. con un
sobre productor de atmósfera anaerobia. Para incubar en atmósfera de
C02 se colocan las placas y tubos dentro de la Jarra de C02 y ésta se
coloca en la estufa de cultivo a 35°C con un sobre productor de
atmósfera microaerófila.
FLUJOGRAMA
Medios de cultivo sólidos
1. verificar materiales

2. leer etiqueta

3. pesar la cantidad

4. medir agua

5. adicionar la mitad

6. agitar

7. adicionar la otra mitad

8. terminar la disolución

9. homogenizar a calor

10. agitar

11. Esterilizar

12. Enfriar

13. Verter en cajas de Petri

 14. Solidificar

15. Prueba de esterilidad

16. Refrigerar
Medios de cultivo líquidos
Seguir los pasos del 1-8 del paso anterior

Servir en tubos 3 ml de caldo

Esterilizar

Enfriar

Refrigerar
Medios de cultivo semisólido se siguen el mismo procedimiento que
el cultivo líquido

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

ANÁLISIS DE RESULTADOS
Desarrollo de bacterias en un medio de cultivo sólido. Hubo
formación de colonias esparcidas incontables las cuales se debieron a la
mucha presencia de humedad o, a demasiada cepa bacteriana.

V. CONCLUSIONES
 La utilización de medios de cultivos es de gran importancia
porque nos permite conocer las condiciones en las cuales se
desarrolla los microorganismos tales como bacterias, hongos,
algas, levaduras, etc.
 La esterilidad es uno de los requisitos necesarios que deben
cumplir los medios de cultivos para que se dé el crecimiento
adecuado de las bacterias.
  Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son:
temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado,
así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.

VI. Referencias bibliográficas

 http://www.geocities.com/lorigardeweg/page14.html
 http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/madre.html
 http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/micro2/tema06.html