Prácticas de Laboratorio

Biometria Hemática
Dosificación de hemoglobina
MÉTODO MANUAL
La sangre puede ser hemolizada y la hemoglobina convertida a cianometahemoglobina,
mezclando la muestra con un reactivo que contenga cianuro y ferrocianuro. La
cianometahemoglobina se lee en un espectrofotómetro en la región de 540 nanómetros
(nm), comparándola con una solución de concentración conocida (solución estándar).
MATERIAL Y REACTIVOS
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
Pipeta lineal de 5ml o dispensador automático
Espectrofotómetro
Pipeta Sahli o pipeta automática de 20 ul
Drabkin (cianuro de potasio, ferricianuro de potasio y bicarbonato de sodio).
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo 13 x 100 mm, coloque 5 ml de drabkin.
2. Con la pipeta tome exactamente .02 ml de sangre y páselos al tubo que contiene el
drabkin.
3. Deje en reposo 5 minutos al término de estos coloque en una cubeta para leer la
transmitancia de la solución contra el blanco de reactivo.
4. La lectura obtenida en transmitancia se lee directamente en la curva de calibración
correspondiente.
NOTA: En las muestras que contengan un número elevado de leucocitos (más de 50,000
por mm3 ) éstos enturbian la solución y las lecturas son inexactas. En tales casos, antes de
leer se debe centrifugar y el sobrenadante puede ser leído.
VALORES NORMALES
Mujer: 12 a 16 gr %
Hombre 14 a 18 gr %

Hematocrito
El hematocrito es el volumen porcentual que los glóbulos rojos ocupan en la sangre y se
obtiene mediante la centrifugación de ésta en tubos capilares (microhematocrito). El valor
del hematocrito es una cuantificación de uso frecuente y de carácter fidedigno que se
practica junto con los estudios de hemoglobina y recuento eritrocitario.
Existen dos métodos:
Macrométodo. Se utilizan los tubos de wintrobe Desventaja. Se utiliza un volumen mayor de
sangre y se tarda más tiempo. Micrométodo. Se utilizan tubos capilares de 7cm de longitud
por 1mm de diámetro.
MATERIAL
Tubos capilares con y sin heparina
Plastilina
Microcentrífuga
Disco lector
Sangre venosa o capilar
PROCEDIMIENTO
1.- Por capilaridad llene de sangre ¾ partes de dos capilares sin anticoagulante si se usa
sangre venosa o con heparina si se usa sangre capilar.
2.- Cierre el extremo distante de la sangre con plastilina y centrifugue a 10000 rpm durante
4 min y proceda a leer en el disco lector.

LECTURA
1.-Coloque el capilar en la ranura del indicador (ver figura) de modo que el fondo de la
columna de eritrocitos coincida con la línea negra transversal.
2.- Deslice el platillo inferior hasta que la línea del indicador coincida con el número 100.
Ahora usando el agujero del platillo superior, hágalo deslizar sin mover el platillo inferior
hasta que la línea espiral coincida con el extremo superior del plasma.
3.- Deslice ambos discos (juntos) hasta que la línea superior coincida con el extremo
superior de la columna de eritrocitos.
4.- El volumen porcentual será el que marque la línea del indicador sobre la escala que está
debajo de ella.

Concentración media de hemoglobina

Es la relación entre el peso de la hemoglobina en gramos por 100 ml de sangre y el
volumen porcentual de eritrocitos que en ella está contenida, permite apreciar
indirectamente la concentración de hemoglobina en promedio dentro del eritrocito. Este
índice corresponde gruesamente con normocromía eritrocítica cuando está entre las cifras
normales de 30 a 35 % y con hipocromía eritrocítica, si es inferior a 30%.
PROCEDIMIENTO
Se obtiene dividiendo la hemoglobina en gramos en 100 ml de sangre, multiplicando por
100 entre el valor del hematocrito.
El resultado se expresa en % Hemoglobina gr % X 100 = CMHB Hematocrito

Cuenta de leucocitos
El principio de esta prueba consiste en determinar el número de glóbulos blancos por mm3
de sangre, esto se logra haciendo una dilución de la sangre y llenando con ello una cámara
de conteo de tipo Neubawer. La cámara está dividida en 9 cuadros grandes, cada uno de
los cuales tiene un área de 1mm2 y una profundidad de .1mm por lo cual cada uno de ellos
proporciona una lectura correspondiente a .1mm3 . El diluyente utilizado (turk) contiene
ácido acético al 2%, que provoca hemólisis de los eritrocitos, aunque respeta los
eritroblastos, además contiene 1 o 2 gotas de azul de metileno, que hace más aparentes las
células nucleadas. La pipeta de dilución de uso habitual para leucocitos (pipeta Thoma)
proporciona una dilución de 1:20 si se llena de sangre hasta la marca 0.5 y una dilución de
1:10 si se llena hasta la marca de 1.0.

MATERIAL Y REACTIVOS
Contador manual
Gasas
Sangre venosa o capilar
Agitador
Microscopio
Cámara de Neubauer
Pipetas para leucocitos (Thoma).
Ácido acético al 2% (Turk)
PROCEDIMIENTO
1. Llene de sangre la pipeta de leucocitos hasta la marca de 0.5 aforando exactamente.

2. Llene el resto de la pipeta hasta la marca 11 con el diluyente (Turk)

3. Agite la pipeta cuando menos 1 minuto, a fin de que la suspensión de leucocitos se
homogenice perfectamente. La agitación puede hacerse manual o con el agitador mecánico
de pipetas. Limpie la cámara y el cubre-objetos y colóquelo sobre la cámara.
4. Expulse 3 gotas de la pipeta y con la gota siguiente llene por capilaridad la cámara
Neubawer, cuidando que no escurra el líquido por los canales laterales.
5. Cuente al microscopio con el objetivo de 10x, los leucocitos presentes en los cuadros
grandes de las esquinas.
El recuento se efectuará en dirección de la flecha contando todas las células dentro de la
zona de medición.
Cuenta diferencial de leucocitos
Las extensiones sanguíneas se preparan con el fin con el fin de efectuar un recuento
diferencial de los glóbulos blancos, de examinar la morfología de los mismos, así como la
de los glóbulos rojos y examinar el tamaño y número de plaquetas. Los glóbulos blancos
tienen predilección por el azul de metileno, mientras que los rojos se tiñen con eosina; los
glóbulos blancos con gránulos que toman ambos colores se denominan neutrófilos mientras
que las células cuyos gránulos se tiñen de azul, reacción básica, son los basófilos y los que
se tiñen con eosina les llamamos eosinófilos.
Por regla general los neutrófilos y los monolitos predominan en los bordes y al final del frotis
y los linfocitos se encuentran en la parte media de la extensión.
MATERIAL Y REACTIVOS
Portaobjetos
Sangre venosa o capilar
Colorante de Wright y buffer

COLORACIÓN DE WRIGHT
1. Cubrir la extensión de sangre (ya seca) con el colorante Wright y dejar 5min para que la
sangre se fije por acción del metanol.
2. Agregar un volumen similar de buffer o agua destilada sin derramar el colorante y soplar
suavemente con una pipeta para lograr una mezcla uniforme del colorante con el buffer y
dejar 7 min. (se debe observar un color verde metálico).
3. Enjuagar con agua corriente y dejar secar en posición inclinada.
4. Observar al microscopio con el objetivo seco débil (10 x) para seleccionar los campos y
después con el de inmersión (100x).

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO
En el campo del microscopio se verán predominar los glóbulos rojos o eritrocitos, teñidos en
color rojo, no tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.
Hay varias clases de glóbulos blancos.
Linfocitos. con un núcleo muy grande ocupa casi todo el glóbulo es teñido en color morado.
Monocitos. son los más grandes tienen un núcleo muy grande teñido de color morado.
Neutrófilos. presentan el núcleo fragmentado y se dividen en neutrófilo banda y neutrófilo
segmentado
Eosinófilos. tiene granulaciones en color naranja y el núcleo teñido en color azul, estos
aumentan en caso de parasitosis y procesos alérgicos.
Basófilos. presentan granulaciones muy oscuras y un núcleo teñido de rojo
Velocidad de sedimentación globular
Se refiere al tiempo que tardan los glóbulos rojos en separarse del plasma, se mide en
milímetros /hora.
La velocidad con que los eritrocitos caen al fondo de un tubo colocado verticalmente es
variable de acuerdo con diversos factores patológicos particularmente en relación a la
constitución del plasma.
Esta velocidad también puede acelerarse cuando el número de glóbulos rojos es más bajo
que lo normal.
Después de las comidas la velocidad de sedimentación suele ser ligeramente más alta que
antes de ellas.
Normalmente este examen se incluye en un perfil reumático.
MATERIAL
Pipetas pasteur
Tubo de wintrobe
Gradilla para tubos wintrobe
Material adecuado para una toma sanguínea (se utiliza sangre completa con EDTA)
PROCEDIMIENTO
1. Por medio de la pipeta pasteur llene de sangre el tubo wintrobe, hasta el # 10.
2. Coloque el tubo en la gradilla verticalmente y déjese a temperatura del laboratorio,
durante una hora al final de la cual se hará la lectura, en la escala cuyo # 0 está arriba. Este
dato se reporta en milímetros / hora.
VDRL
Este examen es empleado como ayuda en el diagnóstico de sífilis a pesar de que no es una
prueba específica, ya que el antígeno que se emplea no es obtenido de treponemas. El
antígeno que se usa está compuesto fundamentalmente por fosfolípidos que se conoce con
el nombre de cardiolipina y es extraído del corazón de los bovinos.
Esta prueba emplea una técnica de floculación en placa y puede proporcionar datos
cualitativos y cuantitativos.
Las pruebas positivas son consideradas como diagnóstico de sífilis cuando tienen un título
alto de anticuerpos y cuando la historia clínica del paciente es compatible con sífilis. La
reacción se fundamenta en una reacción antígeno-anticuerpo. El anticuerpo se encuentra
en el suero del paciente y el antígeno en el reactivo que es utilizado.

MATERIAL Y REACTIVOS
-Placas de vidrio para V.D.R.L.

-Aplicadores

-Pipeta automática de 50 microlitros o pipeta serológica de 0.1 ml

-Suero del paciente

-Antígeno para V.D.R.L

PROCEDIMIENTO PRUEBA CUALITATIVA
1. Coloque en un óvalo de la placa 0.05 ml (50 microlitros) del suero del paciente.
2. Coloque 0.05 ml de control negativo y del control positivo en otro óvalo de la placa uno
para cada control.
3. Añada una gota del antígeno con la aguja provista en el reactivo a cada uno de los
óvalos, mezcle con un aplicador y agite por 4 min. con movimientos rotatorios.
4. Observe al microscopio con el objetivo 10x y buscar la aparición de un pequeño
conglomerado (floculación) que significa un resultado positivo.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Las partículas del antígeno tienen forma de cilindros cortos, en presencia de un suero
negativo no se observa negativo.

En presencia de sueros positivos se agrupan o floculan en mayor o menor grado

dependiendo de la cantidad de anticuerpos.

PRUEBA CUANTITATIVA

Si un suero resulta positivo en la prueba cualitativa se efectúa lo siguiente.

La prueba se lleva a cabo haciendo una serie de diluciones del suero problema en tubo o en
placa. 1. Se colocan 6 tubos limpios y secos en una gradilla y se enumeran. 2. Coloque con
una pipeta 0.5ml de solución salina al .9% a cada uno de los tubos. 3. Añadir 0.5ml del
suero problema al primer tubo, mezcle bien y transfiera 0.5ml de esta mezcla al tubo 2,
mezcle bien y pase 0.5ml al tubo 3, continúe haciendo esto hasta llegar al tubo 6 4. Y se
procede hacer la prueba cualitativa, pero con las diluciones.

Nota: Si las diluciones se realizan en placa se hace lo mismo solo que con menor cantidad
de solución salina y suero (0.05ml). Las diluciones efectuadas son las siguientes: Se
colocan 0.5ml de solución salina a cada tubo
 DILUCIONES

INTERPRETACIÓN

El título del suero corresponderá a la última dilución que presente floculación franca.

Ejemplo: Si la dilución 1:16 (tubo Nº 4) da una floculación franca y la dilución 1:32 (tubo Nº
5) da negativo; el título se reporta como V.D.R.L positivo 1:16.

NOTA: Esta prueba no es específica ya que da muchas reacciones falsas positivas y por lo
tanto si un suero resulta positivo es conveniente realizar una prueba específica como el TIP
reacción de inmovilización de treponema.

(TPIA) Reacción de inmunoadherencia del complemento.

(TPCT) Reacción de fijación del complemento

(IHA) Inhibición de la hemoaglutinación.

Reacciones Febriles
Grupo Sanguíneo
Examen General de Orina
Glucosa