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Guia Implantacion Validacion y Verificacion de Metodos Analiticos Inecc 2013
Guia Implantacion Validacion y Verificacion de Metodos Analiticos Inecc 2013
LABORATORIOS ABC
QUÍMICA INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS S.A. DE C.V.
DICIEMBRE 2009
Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:
INECC-CCA, (2010). GUÍA PARA LA IMPLANTACIÓN, VALIDACIÓN Y VERIFICACIÓN DEL DESEMPEÑO
CONTINUO DE UN MÉTODO ANALÍTICO. México, p.27.
CONTENIDO
1.0 INTRODUCCIÓN
2.0 OBJETIVOS
4.0 BIBLIOGRAFIA
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1.0 INTRODUCCIÓN
Todos los laboratorios analíticos y en especial los de la Red de PRONAME se deben
obligar a seguir los 6 Principios básicos de buenas prácticas de mediciones
analíticas (ref. 3)
2.- Las mediciones analíticas deben ser realizadas usando métodos y equipos
que han sido probados para asegurar que son adecuados para el propósito de
la medición.
3.- El personal que realiza las mediciones analíticas debe ser calificado y
competente para llevar a cabo sus tareas.
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Las 3 definiciones tienen en común en que la validación es el proceso para
demostrar que el desempeño en un laboratorio determinado con un método analítico
específico cumple con las especificaciones necesarias para las necesidades de
medición especificadas.
5.4.1 “El laboratorio debe usar métodos y procedimientos apropiados para todos
los ensayos dentro de su alcance. Estos incluyen muestreo, manejo, transporte,
almacenamiento y preparación de los elementos que serán ensayados.....”
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Los parámetros de una validación completa de un método analítico (ref. 3) son los
siguientes:
Recuperación
Sensibilidad
Selectividad / Especificidad
Robustez
Límite de detección
Límite de cuantificación
Intervalo lineal y de trabajo
Reproducibilidad
Repetibilidad
Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la Recuperación)
Incertidumbre inicial
PARÁMETRO INDICADOR
Pruebas estadísticas en diferentes
Selectividad / Especificidad
matrices con diferentes interferencias
Pruebas Interlaboratorios con
Robustez variaciones en las condiciones de
prueba
Sensibilidad Límite de detección
Repetibilidad, Reproducibilidad e
Precisión
Incertidumbre
Exactitud Recuperación y sesgo
Límite de Cuantificación, Intervalo
Intervalo lineal y de Trabajo
lineal, curva de calibración
Recuperación
Sensibilidad
Límite de detección
Límite de cuantificación
Intervalo lineal y de trabajo
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Reproducibilidad
Repetibilidad
Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la Recuperación)
Incertidumbre inicial
Los criterios de cuando se debe realizar una Validación Parcial o Completa son los
siguientes:
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Establecer un método en un laboratorio
Parcial
diferente
Establecer un método con diferente
Parcial
instrumentación
Establecer un método con diferente operador Parcial
Esta PIDA puede ser utilizada por el laboratorio para evidenciar que su método sigue
validado a través del tiempo.
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Para la estimación de la incertidumbre se debe utilizar un estudio de precisión
que cumpla con lo siguiente:
o Número de muestras de QC mayor a 20
o Todas dentro de control estadístico
o Que pertenezca a una distribución normal
o Que se hayan elaborado a través de todo el intervalo de trabajo del
método de ensayo (diferentes concentraciones).
Los valores obtenidos en la Validación Parcial del Método deben cumplir con
los de la Validación del Método de Referencia y son la base para establecer
los Criterios de Aceptación y Rechazo del Laboratorio (pueden ser mejores
que los del Método de Referencia pero no peores).
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2.0 OBJETIVOS
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En este capitulo se presentan los procedimientos específicos para realizar todos los
parámetros de una validación parcial, no se presentan los procedimientos para
determinar la Especificidad, Robustez por estar fuera de los alcances de un
laboratorio de ensayo.
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de
Masas
Cromatografía de Líquidos de Alta Presión
Espectrofotometría UV/VIS
Espectrofotometría de Absorción Atómica
Espectrometría de Emisión Óptica con Plasma Inducido
Acoplado (ICP/OES)
Espectrometría de Masas con Emisión de Plasma Inducido
Acoplado (ICP/MS)
NOTA IMPORTANTE:
ESTE PROCEDIMIENTO NO SE DEBE APLICAR A TÉCNICAS
GRAVIMETRICAS, VOLUMÉTRICAS, POTENCIOMETRICAS Y
CONDUCTIMETRICAS, PARA ESTAS TECNICAS LA CANTIDAD MINIMA
DETECTABLE ES EQUIVALENTE AL LIMITE PRACTICO DE CUANTIFICACION
INSTRUMENTAL.
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-Calcule la media y la desviación estándar de los resultados obtenidos.
-El Límite de Detección del Método que se obtenga, debe ser igual o
menor al que se presenta en el Método Fuente. Cuando el LDM no
puede ser igual o menor al del método fuente, pero es menos de 10
veces el valor del Límite Máximo Permisible (LMP) o del criterio
ambiental aplicable, éste puede ser aceptado.
Ejemplo 1:
LMP: 0,20 mg/L
Curva de calibración: 0,04; 0,10: 0,20; 0,40; 1,0
Intervalo de trabajo: 0,04 – 1,0 mg/L
LMP: 0,20 mg/L Pb para agua potable y 1,0 mg/L para agua residual
Curva de calibración: 0,04; 0,10; 0,20; 0,40; 1,0; 2,0; 5,0 mg/L
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Intervalo de trabajo: 0,04 – 5,0 mg/L
-La curva de calibración debe ser lineal (r2 > 0,997 con 5 puntos de
curva y 0,98 con 3 puntos de curva).
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donde:
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-Compare los valores obtenidos del promedio y la desviación estándar
del %R y del Sesgo con los que se presentan en el método de
referencia, si existen.
donde:
DPR = Diferencia Porcentual Relativa
X1 = Valor medido de la muestra original
X2 = Valor medido de la muestra duplicada (apareada)
-Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas
y corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del método.
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Donde:
DPR = Diferencia Porcentual Relativa
X1 = Valor medido de la muestra original
X2 = Valor medido de la muestra duplicada (apareada)
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presenta un acercamiento de como poder obtenerla, existen otros, los cuales
pueden ser igualmente válidos.
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trasciende regularmente a los alcances del servicio que estos laboratorios
proporcionan. Además, regularmente tampoco se pueden evaluar las incertidumbres
relativas a las condiciones de almacenamiento, ya que en la mayoría de los casos,
las determinaciones analíticas solo se pueden dentro de un periodo de tiempo corto
(holding times). Lo anterior debe ser claramente definido en los informes de prueba.
NO es posible con estos conceptos determinar cuales son las causas del error
o de la variabilidad, ya que están basadas en el cálculo de solo un número
final, normalmente por el uso de MRs o MRCs.
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PROCEDIMIENTO PARA LA ESTIMACION DE LA
INCERTIDUMBRE EXPANDIDA (U)
Definir el Mensurando
Estimar correlaciones
Toma de la muestra
Condiciones de almacenamiento de la muestra
Efectos instrumentales
Pureza de reactivos
Estequiometría asumida del analito
Preparación de la muestra
Condiciones de la medición
Efectos de la muestra (interferencias de matriz)
Efectos de las computadoras (modelos de curvas de calibración, cifras
significativas en los cálculos, etc.)
Corrección por blancos de reactivos
Efectos de los analistas
Efectos aleatorios
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Todas las fuentes de incertidumbre tienen variabilidad y sus propias incertidumbres,
las cuales se deben expresar en términos de la desviación estándar, pero
normalmente en unidades diferentes (C, ml, mg, etc.)
donde:
o u(xi) = desviación estándar experimental de la media
o Esta u(xi) representa un intervalo centrado en el mejor estimado del
mensurando (media aritmética) que contiene el valor verdadero con
una probabilidad p del 68.27% (si los datos siguen una distribución
Normal)
s/1 = Normal
s/2 = Normal (k=2)
s/3 = Rectangular (especificaciones simétricas, sin límites de confianza y
donde se pueden esperar valores limítrofes, +- x% como en el material de
vidrio)
s/6 = Triangular (especificaciones simétricas, sin límites de confianza y
donde no se esperan valores limítrofes, pero con datos de alguna distribución
estadística, como en el material de vidrio anterior pero verificado en el
laboratorio y donde no se aprecian valores en los extremos de la
especificación)
Se debe determinar la relación entre las magnitudes de entrada, de tal forma que se
conozca si existe o no correlación entre ellas, con objeto de utilizar el modelo
matemático pertinente para el cálculo de la incertidumbre combinada.
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de modelo matemático que se emplea para calcular la concentración del
mensurando:
1.- Para modelos donde en la formula de cálculo solo existan sumas y restas:
donde:
uc = incertidumbre combinada de y respecto a p,q,r
u(p) = incertidumbre estándar de p
u(q) = incertidumbre estándar de q
u(r) = incertidumbre estándar de r
p = valor de r
q = valor de r
r = valor de r
p,q,r = fuentes de incertidumbre
Puede ser otro número dependiendo del número de datos utilizados, en poblaciones
pequeñas se utiliza la t de Student de una tabla de 2 colas.
Incertidumbre Expandida = U = uc k
donde:
uc es la incertidumbre combinada
k es el factor de cobertura, este factor es generalmente 2, el cual
equivale a 2 desviaciones estándar y por lo mismo a una
probabilidad del 95.45%.
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EJEMPLO DE LA DETERMINACION DE LA INCERTIDUMBRE DE LA NOM 009 SSA1 1993
Preparación
Acondicionamiento
de la superficie
Lixiviación por 24
hs.
Preparación de
Homogeneización
Estándares de
del lixiviado
Calibración
Resultado
I.- r (Masa de Cadmio lixiviado por unidad de area mg/dm2) = ((Co * Vl) / Av) * d * Facido * Ftiempo * Ftemp
II.- Co = (Ao-Bo)/Bi
Ao Absorbancia del metal en la muestra
Bo Intercepción de la curva de calibración
Bi Pendiente de la curva de calibración
Por lo tanto:
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2.2- Identificación de todas las fuentes de incertidumbre (a través de un diagrama causa-efecto)
Co Vl
Av d
Curva de calibración:
Area (Av):
Longitud 1 (altura):
La superficie se calculo en 2.37 dm2, se estima que la medición está +- 2 mm al 95% de confianza (LC)
si la altura es de 1 dm entonces la Ustd = 2 mm/2 por ser LC 95% = 1 mm
Longitud 2 (ancho):
idem anterior Ustd = 1 mm = 0.01 dm
Area:
Ya que no es exactamente geométrico se utiliza una Uc=5% al 95% LC,
Ustd= 5/2 = 2.5 dm2
Area = 2.37 dm2
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CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE POR LA CURVA DE CALIBRACION
n 5 No de datos
X 0,5 Media de X
Y 0,1292 Media de Y
r 0,9983
b 0,2410
a 0,0087
Efecto de temperatura:
El efecto de la temperatura está publicado y es 5%/grado C (ver ref 1-5 Eurachem) para el rango de +- 2 que permite
el metodo, el Ftemp sería 1+-0.1
Efecto de Tiempo:
Un estudio (ref 1 eurachem) 1.8 mg/l en 86 mg/l = 0.3%/h por el rango de +- 0.5h en 24 h el Ft = 1+-(0.5x0.003) = 1+- 0.0015
Ustd del Facido = 0.008 x 0.1 = 0.0008, como esta en Ustd, no se hacen mas calculos 0,008 mg/L
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PASO 4 CALCULO DE LA INCERTIDUMBRE ESTANDAR COMBINADA:
r (Masa de Cadmio lixiviado por unidad de area mg/dm2) = ((Co * Vl) / Av) * d * Facido * Ftiempo * Ftemp
U = Uc * t95 0,00694
RESUMEN:
Magnitud de Incertidumbre Incertidumbre
Valor Fuente de Incertidumbre Tipo de Incertidumbre Coeficiente de
Símbolo Entrada o Fuente de Unidades Calculo de la Us Estándar Estándar
Estimado (x) Información Original Distribución Estándar Sensibilidad
Incertidumbre Combinada Relativa U(x)/x
Concentración de Concentración de Curvas de
mg/L 0,26 0,017801 0,06847
Cadmio (Co): Cadmio (Co): calibración
No se hizo
Diluciones (D) Diluciones (D) #¡DIV/0!
dilución
Volumen (Vl): Volumen (Vl): L 0,332 0,001829 0,00551
Llenado L Practica 99.5+-0.5% Triangular 0.005*332/6^0.5 0,0007
(2.1e-4*332*2) /
Temperatura L Metodo 22+-2 C Rectangular 0,0001
(3)^0.5
Lectura del
L Practica 1% error Triangular 0.01*332/(6)^0.5 0,0014
Volumen
Calibración L Especificacion 500+-2.5 ml Triangular 2.5/(6)^0.5 0,0010
Area (Av): dm2 2,37 0,062091 0,02620
Longitud 1 altura dm Practica 2 mm al 95%P Normal 0.02/1.96 0,010
Longitud 2 ancho dm 2 mm al 95%P Normal 0.02/1.96 0,010
Area dm2 5 % error Normal (0.05*2.37)/1.96 0,060
0.1% por %v/v
Estudio + U de la
Concentración del acido + 0.008% U
mg/L 1 titulación del 0.008*0.1 0,0080 0,00800
ácido acético: de la titulación con
ácido
NaOH
Efecto de Tiempo: mL 1 0,0015 Rectangular 0.0015/(3)^0.5 0,001 0,00100
Efecto de
mg/L 1 0,1 Rectangular 0.1/(3)^0.5 0,06 0,06000
temperatura:
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HOJA DE CALCULO PARA LA ESTIMACION DE LA INCERTIDUMBRE
Concentra
ción de Volumen Concentración Efecto de Efecto de
Area (Av):
Cadmio (Vl): del ácido acético: Tiempo: temperatura:
(Co):
Valor 0,26 0,332 2,37 1 1 1
Incertidumbre Std 0,01780 0,00183 0,06209 0,00800 0,00100 0,06000
Concentración de Cadmio0,26
(Co): 0,2778011 0,26 0,26 0,26 0,26 0,26
Volumen (Vl): 0,332 0,332 0,33382877 0,332 0,332 0,332 0,332
Area (Av): 2,37 2,37 2,37 2,432091166 2,37 2,37 2,37
1
Concentración del ácido acético: 1 1 1 1,008 1 1
Efecto de Tiempo: 1 1 1 1 1 1,001 1
Efecto de temperatura: 1 1 1 1 1 1 1,06
Inceridumbre
0,003462
Combinada Uc(r)
r 0,003462
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4.0 BIBLIOGRAFIA
4.- Managers guide to VAM, UK Dept. of Trade and Industry, Valid Analytical
Measurements Programme.
5.- EAL P-11, “Validation of Test Methods”, European Cooperation for Accreditation
of Laboratories, 1997.
6.- USEPA “Guidance for method development and methods validation for the RCRA
Program”, 1992.
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measurement uncertainty” http://physics.nist.gov/cuu/Uncertainty/international1.html
y 2, 3/09/98
27