Carlos Manuel Flórez

Sebastian Giraldo Correa

Carlos Andrés Ochoa

Obtención de etanol a partir de pasto elefante (Pennisetum purpureum) por vía

biotecnológica

Ficha: 1134340

Tecnología química aplicada a la industria

Sena

Centro textil y de gestión industrial

Medellín

1
 Índice

Contenido
Introducción.......................................................................................................................................3
Planteamiento del problema..............................................................................................................4
Justificación........................................................................................................................................7
Objetivos............................................................................................................................................8
Propósito........................................................................................................................................8
Objetivo general.............................................................................................................................8
Objetivo especifico.........................................................................................................................8
Metodología.......................................................................................................................................9
1. Documentación y lectura de trabajos previos similares.........................................................9
2. Se hizo varios experimentos los cuales fueron descartados...................................................9
3. Se consiguió y se trató la materia prima................................................................................9
4. Deslignificación con NaOH según la matriz de experimento..................................................9
5. Determinación de lignina después de la deslignificación según la matriz............................10
6. Validación de deslignificación con las mejores variables......................................................10
7. Determinación de lignina.....................................................................................................11
8. Hidrolisis enzimática:............................................................................................................11

2
 Introducción

Debido a la gran problemática, llevada en la ciudad de Medellín, de la contaminación del

aire la cual se relaciona en un gran porcentaje a la combustión de combustibles fósiles, se
ha determinado que a causa de contaminantes del aire las personas tienden a padecer
cáncer de pulmón, enfermedades respiratorias, EPOC, entre otras; debido a que en la
mayor parte los contaminantes provienen del uso de combustibles fósiles es necesario
hacer algo para reducir su impacto ambiental, en este proyecto se llevó a cabo la
obtención de etanol, el cual es un oxigenante para la gasolina, se ha comprobado que una
mezcla de gasolina-etanol se disminuye en gran proporción las emisiones de SO X, NOX,
CO, y las partículas suspendidas4, y así aumentando el CO2.

El etanol se obtuvo a partir de la gramínea Pennisetum purpureum (Pasto elefante), el

cual crece en un suelo húmedo, y fue obtenido en el municipio de caldas cerca de un
arroyo, este por su gran contenido de biomasa y rico en celulosa, además de que no
produce un impacto en el área alimenticia, fue pretratado con NaOH, para así liberar la
celulosa de la lignina, para llevar la hidrolisis enzimática con la celulasa en condiciones
óptimas para su posterior fermentación con la levadura Saccharomyces cerevisiae

3
 Planteamiento del problema

Se han aumentado las muertes causadas por enfermedades debido a la contaminación

del aire. En una entrevista para EL COLOMBIANO, en abril de 2014, el médico
epidemiólogo Elkin Martínez había dado la alerta sobre las consecuencias que tenía el
aire contaminado de Medellín sobre la salud.

Sus cifras señalan que cada año unas mil personas mueren por año como consecuencia
de enfermedades respiratorias crónicas, y otras 500 fallecen al padecer cáncer de
pulmón.

Recientemente, a raíz de la emergencia ambiental, ratificó estas estadísticas y añadió que

otras 1.500 personas estarían muriendo cada año en la ciudad, aquejadas de
enfermedades cardiovasculares asociadas a componentes tóxicos provenientes de las
partículas que se encuentran en el aire contaminado y que ingresan al torrente sanguíneo,
luego de entrar por las vías respiratorias.

La declaración de contingencia atmosférica por parte de la autoridad ambiental del Área

Metropolitana, por un incremento considerable de la contaminación del aire, se debe a
factores geográficos; a hábitos y costumbres sociales; a la descarga de partículas sólidas
y gases que produce la industria y, sobre todo, al uso de los automotores.

Como lo explica el médico neumólogo y profesor de la Facultad de Medicina de la

Universidad de Antioquia, Héctor Ortega, en el fenómeno de la contaminación se
presentan elementos tanto gaseosos como partículas suspendidas en el aire, que pueden
tener efectos tóxicos sobre el organismo humano.

Agrega que las partículas suspendidas son las más complejas con relación a su tamaño
reducido.

En los efectos de la contaminación sobre la salud se pone especial atención a las

partículas PM10 y PM2.5, estas últimas las más complejas porque por su tamaño, 2.5
micras, al ser inhaladas pueden llegar a las partes más periféricas de las vías
respiratorias y los pulmones, es decir a los bronquiolos y a los alvéolos.

Estas partículas suspendidas se vuelven más problemáticas para el organismo en la

medida que su concentración en el aire que respiramos es más grande.2

Según explica el decano de la Facultad Nacional de Salud Pública de la Universidad de

Antioquia, Álvaro Franco, para el caso de partículas PM10, o sea hasta 10 micras, la
concentración estimada por la OMS que no afecta la salud es de 20 microgramos por
metro cúbico. Y en el caso de las PM2.5, esta concentración estimada como aceptable es
de 10 microgramos por metro cúbico.

En su presentación del pasado mes de noviembre, el director del Air Clean Institute
mostraba cómo la concentración de PM10 en Medellín en promedio hacia el año 2011 era

4
de 49 microgramos por metro cúbico, y en partículas de 2.5 micras era de 29
microgramos por metro cúbico.

Explica el docente Héctor Ortega que las consecuencias de respirar un aire de mala
calidad como el que se está inhalando en Medellín y otras zonas del Valle de Aburrá
genera diversas reacciones en el cuerpo.

“Son efectos muy variados, porque depende tanto de efectos irritativos, como
eventualmente otros efectos de daño directo de algunos contaminantes sobre el sistema
respiratorio”.

Una de las primeras evidencias de las consecuencias de la contaminación ambiental está

en un aumento de síntomas como la tos, el aumento de flemas y la sensación de cuerpo
extraño en las vías aéreas.

En pacientes con enfermedades preexistentes, señala Ortega, estas pueden presentar

empeoramientos. “Pacientes asmáticos que pueden perder el control de su enfermedad
durante su exposición en forma significativa. O pacientes con enfermedades crónicas
como el Epoc, que pueden empeorar con la exposición a agentes ambientales
contaminantes”.

Si bien la Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (Epoc) tiene una mayor relación con
el hábito de fumar, cerca de un 20 por ciento de los casos detectados en el mundo tienen
una causalidad diferente, y entre esas causas, también podría estar el permanente
contacto con un ambiente que tiene aire contaminado.

De igual manera la exposición a ambientes contaminados, en especial por la presencia de

las partículas suspendidas, genera un aumento en las infecciones respiratorias.2

La contaminación puede comprometer el mecanismo de defensa, que es el movimiento

ciliar, unos pequeños pelitos -microscópicos- que están en la vía aérea y tienen
movimiento para barrer las impurezas que se respiran. “Uno de los efectos es reducir la
motilidad (movimiento) de las cilias, o incluso causar su parálisis, haciendo que las
impurezas permanezcan en la vía área, con el riesgo de aumentar las infecciones”.2

Para el investigador, el fenómeno de la creciente contaminación del aire en la ciudad está

mediado por tres factores. En primer lugar el aumento del urbanismo, con un 98 por ciento
de la población en zona urbana. También el crecimiento del parque automotor, que según
cifras de la Secretaría de Movilidad era de 1,2 millones de vehículos a 2014. Se suma la
densidad poblacional con más de 17.800 habitantes por kilómetro cuadrado en la capital
antioqueña.

En su petición al alcalde Federico Gutiérrez y al director del Área Metropolitana Eugenio

Prieto, el laureado escritor Montoya sugiere que se necesitan más que horas de pico y
placa y días sin carro para acabar con el grave problema de contaminación del aire en la
ciudad: “si bien son medidas necesarias, en el fondo son insuficientes si no se realizan
planes estructurados y a largo plazo”.

5
Producto de la emergencia se extendió el pico y placa a los diez municipios del Valle de
Aburrá con el mismo esquema de Medellín, y es la única medida que se mantiene hasta
hoy. Sin embargo, la ampliación de ciclorrutas aún no inicia construcción. El control a los
vehículos contaminantes se hace pero no se percibe. El pico y placa industrial sigue
siendo a voluntad de las empresas, muy pocas lo aplican. Y casi ningún ciudadano hace
el aporte que les corresponde: bajarse del vehículo particular y usar más el público o las
ciclas. Gisela Posada, promotora de la iniciativa SOS por el aire, integrado por el G8
(grupo de ocho universidades que se unieron para formular propuestas ambientales),
señala que ha pasado ya casi un año y el mensaje que se da es que no se han tomado
medidas de fondo contra el problema.

“Llegó el momento de levantar la voz contra la nube de humo que atesta las calles. Como
ciudadanos debemos ser más responsables y exigentes con los gobernantes”, señala
Posada. Advierte que, en caso de que se declare la emergencia ambiental, lo peor sería
que de nuevo los niños sean las víctimas del suceso: “Los más indignante fue que el año
pasado a los niños se les prohibiera en los colegios hacer educación física” 2

La ciudad de la eterna primavera tiene la evaluación del aire más estricta del país.

Es decir, mientras que una alerta naranja en Bogotá se da cuando se alcanzan 55.5
microgramos por metro cúbico, en Medellín se decreta cuando se llegan a los 35. En
varias ciudades de China, la alerta naranja se da cuando hay 200 microgramos por metro
cúbico. La Alcaldía de Medellín ya toma cartas al respecto.

Por ejemplo, aseguran que el 60% de contaminación es causada por los automóviles y
por eso se vieron obligados este año a aumentar de 6 a 21 los puestos de control en las
vías para percatarse de que los vehículos cumplieran con la revisión técnico mecánica y
de gases.

Paralelamente, los Centros de Diagnóstico Automotriz (CDA), una iniciativa de la Alcaldía

y autoridades ambientales, fueron creados con el fin de que se expidan certificados
legales, porque el 46 % de los automóviles revisados no cumplen con el estándar mínimo
de calidad, pero cuentan con un documento que dice lo contrario.

“Aquí vamos a hacer un llamado al juego limpio, a la legalidad, tanto a los ciudadanos
como a los CDA, vamos a pedir acompañamiento al Ministerio de Transporte y seremos
mucho más estrictos con lo que está pasando para que no se haga una trampa que
perjudique a la ciudad”, dijo Federico Gutiérrez, alcalde de Medellín.

Otra petición de Gutiérrez fue referente a Ecopetrol para que pudiera mejorar la calidad
del combustible bajando de 300 a 50 partículas por millón de azufre en la gasolina, todo
en pro de tener un mejor aire. Luego de que hayan pasado tres días consecutivos en
alerta naranja se decreta alerta roja.3

6
 Justificación

El gran problema ambiental que se deriva del uso de combustibles fósiles, proviene de la
ineficiencia del proceso de combustión en los motores, en condiciones de combustión
óptimas, el contenido total de carbono de los combustibles debería convertirse en CO 2; los
procesos de combustión reales no son químicamente estequiométricos lo cual ocasiona la
producción de pequeñas cantidades de carbono parcialmente oxidado y no oxidado.
(Emisiones de: dióxido de carbono, monóxido de carbono, compuestos orgánicos volátiles
y óxidos de azufre).

Los principales contaminantes del aire se clasifican en primarios y secundarios. Los

primarios permanecen en la atmósfera y son emitidos por la fuente (como el monóxido de
carbono); mientras que los secundarios están sujetos a cambios químicos, entre los que
destacan los oxidantes fotoquímicos y algunos radicales de corta existencia como el
ozono. Vinculado estrechamente con el problema de la contaminación tenemos el
fenómeno del calentamiento global a tal grado que durante los últimos años del siglo
pasado la temperatura ha aumentado aproximadamente 0,6 °C, presentando una
aceleración mayor en las últimas décadas. El dióxido de carbono, el metano y óxidos de
nitrógeno, que se producen al quemar carbón, petróleo o gas, son la principal causa del
calentamiento global.1

Respecto a las emisiones producidas por la combustión de biocombustibles en motores

de combustión interna, se puede decir que gracias al combustible oxigenado (etanol-
gasolina), es evidente la reducción en la emisión de monóxido de carbono (CO), por lo
tanto ocasiona el aumento del dióxido de carbono (CO2) emitido al ambiente, el cual es
proporcional a la disminución en CO. Este CO2 adicional que se produce no tendrá un
efecto directo como gas invernadero, ya que proviene del proceso de combustión de un
combustible cuya materia prima es una fuente renovable de energía a partir de biomasa

El etanol es un oxigenante de gasolina, mejora su octanaje lo que ayuda a la reducción de

producción de gases causantes del efecto invernadero; el octanaje del etanol puro es de
113 y se quema mejor a altas compresiones que la gasolina.

El etanol es un combustible que ofrece ventajas en muchas de sus características físicas

y químicas, que pueden ser resumidas como un líquido de baja densidad y alta fluidez con
alto calor de combustión, pero sobre todo considerando las materias primas de origen y
su sustentabilidad, los costos de producción y transporte y los bajos efectos negativos en
el ambiente.

Aquí se va evaluar si el etanol como adictivo a la gasolina ayuda a la reducción de la

contaminación y con eso a la disminución de las enfermedades respiratorias.

Otro resultado interesante tiene que ver con la emisión de material particulado. En
motores con ciclo de presión constante y ciclo de volumen constante, se ha observado
que disminuye a medida que aumenta la proporción de etanol en la mezcla.4

7
 Objetivos

Propósito: Obtener el etanol mediante la caracterización, Optimización deslignificación

alcalina, Hidrólisis enzimática, Sacarificación y fermentación simultánea que se le harán
al pasto elefante (Pennisetum purpureum).

Objetivo general: Obtener etanol a partir de la fermentación de Pennisetum purpureum

(Pasto elefante) mediante la levadura Saccharomyces cerevisiae.

Objetivo especifico

 Realizar la caracterización fisicoquímica del pasto elefante

 Definir el pretratamiento más adecuado para el material lignocelulósicos (Pasto
elefante) utilizado en la ejecución de este proyecto.
 Desarrollar la hidrólisis enzimática.
 Llevar acabo la fermentación mediante la levadura

8
 Metodología

1. Documentación y lectura de trabajos previos similares

2. Se hizo varios experimentos los cuales fueron descartados

3. Se consiguió y se trató la materia prima : Se utilizó la gramínea Pennisetum
purpureum (pasto elefante) el cual fue recolectado del municipio de Caldas,
Antioquia
 Se clasifico el pasto en bolsas, para facilitar su manejo, el cual consistía en
clasificar tallo y hojas.
 El pasto fue pesado y guardado en bolsas herméticas.
 Después se secó a 60°C durante 24 horas e igualmente guardado, según su
clasificación, en sus bolsas respectivamente.
 Se pesó nuevamente, se determinó la cantidad de agua que tenía al inicio, y
guardado en las bolsas.
 Se seleccionó las partes del pasto, que se hallaba en 5 bolsas herméticas más
significativas y a estas partes se le hizo una disminución de tamaño en un molino
de cuchillas, el cual fue en una licuadora durante 30 minutos, después se pesó
nuevamente y guardado en sus respectivas bolsas.
 Las bolsas que contenían el pasto previamente pasado por la licuadora fueron
vaciadas en el tamizador, en el cual a trabajos previos se determinó que las mallas
adecuadas serían las 20,30,40, también se utilizó la malla 10, 16, 80 y fondo, el
pasto retenido en las mallas 20,30,30, fue depositado en bolsas herméticas, se
determinó el peso total de muestra.

4. Deslignificación con NaOH según la matriz de experimento

 Se hicieron 22 experimentos en los cuales se determinaría cuál de ellos sería el
mejor para la liberación de celulosa. Se varió la concentración de NaOH y la
relación de solido-liquido (g de pasto-ml [NaOH % w/w]). Salieron 11 experimentos
donde estos se hicieron por duplicado.
 En 22 Erlenmeyer se agregó la cantidad pasto necesario, en cada Erlenmeyer
fueron de 5 gramos, y con ayuda de la balanza se pudo ver el peso.
 Los Erlenmeyer fueron numerados así: 1 - 1,1; 2 - 2,2 ; 3 - 3,3 ; 4 – 4,4 ; 5 – 5,5 ;
6 – 6,6 ; 7 – 7,7 ; 8 – 8,8 ; 9 – 9,9 ; 10 – 10,10 ; 11 – 11,11.
 Se preparó una solución de NaOH en la cual se tomaron alícuotas para luego con
ml ya calculados de agua preparar las soluciones necesarias dependiendo de
cada par de experimentos
 Se le agrego a cada par de Erlenmeyer el volumen de cierta concentración de
[NaOH % w/w] que la matriz nos había dado.
 Los Erlenmeyer con la muestra se llevaron a la autoclave, hasta una temperatura
de 120°C durante 20 minutos a presión de 15 psi.
 Después de que la presión bajara a cero se enfrió la tapa de la autoclave y se
abrió para así sacar los Erlenmeyer.

9
 Cada par de Erlenmeyer fue filtrado con una tela, donde era fácil de exprimir el
pasto tratado, liberando un licor negro y este se recogió en sus respectivos 22
Beaker de 500 ml, el pasto tratado se lavó con agua para así dejarlo lo más limpio
posible del licor obtenido de la deslignificación.
 Cada muestra salida de los 22 Erlenmeyer fue colocada en papel aluminio
previamente pesado, y llevada al horno durante 24 horas a 60°C.
 Al cumplirse las horas se sacó las muestras y cada una fue pesada.

5. Determinación de lignina después de la deslignificación según la matriz

 El licor negro que salió después del filtrado y el lavado con agua de los 22
experimentos, se le midió la densidad y el pH el cual posteriormente bajado a un
pH de 4 con unas gotas de H2SO4 concentrado, para hacer que la lignina se
precipitara.
 Se vació cada licor negro a tubos falcón para llevarlos a la centrifugadora, a 5000
rpm durante 15 minutos, cuando salían los primeros 6 tubos falcón se metían los
siguientes 6 tubos falcón, se vació el líquido resultante a un Beaker de residuos.
 Se pesaron pedazos de papel aluminio para depositar el sólido en el fondo de
cada falcón, después se llevaron al horno para su secado, a 40°C durante 48
horas.
 Se pesó la muestra y se realizó los análisis, y determinación de cuál de los 22
experimentos fue el mejor, el cual fue el experimento 3 y su pareja 3,3 de
concentración 2% w/w NaOH y de relación sol-liq de 1-9.

6. Validación de deslignificación con las mejores variables

 Se preparó la solución de 315 ml de NaOH 2 % w/w.
 Se pesó 35 gramos del pasto, en un Erlenmeyer y se le agrego la solución de
NaOH.
 Se llevó esto a la autoclave hasta una presión de 15 psi y temperatura 120°C
durante 20 minutos.
 Se esperó a que descendiera la presión e igualmente la temperatura de la
autoclave, se sacó la muestra y el sólido fue filtrado en una tela, el licor negro fue
recogido en un Erlenmeyer de 250 ml, después se lavó el sólido con 1500 ml de
agua desionizada, y se recogió licor salido con el agua en otro Erlenmeyer de 2 l.
 Al solido se le agrego agua desionizada y se le midió el pH, el cual fue
neutralizado con ácido cítrico, posterior mente filtrado y se secó a 90°C durante 3
horas
 Durante ese tiempo se preparó una buffer de más de 120 ml de ácido cítrico y
citrato de sodio de pH 4,8
 Se analizó la capacidad que soportaría la balanza analítica, haciendo el montaje
de fermentación, lo cual se tomó como decisión que se haría en Erlenmeyer de
100 ml.
 Se pesó el sólido.
10
7. Determinación de lignina

8. Hidrolisis enzimática:
 Se pesó 11,4 gramos del sólido y en dos Erlenmeyer de 100 ml se añadió la mitad
a cada uno, se tomó la solución buffer, dos fermentometros con tampones, una
probeta de 100 ml, puntas de micro y macro pipeta, al igual de agua en un
Erlenmeyer, y todo lo llevamos a esterilización en la autoclave hasta una presión
de 15 psi, temperatura de 120°C durante 15 minutos.
 Mientras se cumplía el tiempo se limpió la cabina y se prendió la luz UV.
 Nos lavamos las manos con jabón antibacterial y se climatizó la enzima que se
encontraba en la nevera
 Al salir todo de la autoclave se pasó rápidamente a la cabina, en donde se añadió
a cada Erlenmeyer 57 ml de solución buffer se agito y homogenizo con agitación
manual, se midieron 2,5 ml de enzima con la macropipeta y se añadió a un
Erlenmeyer y se llevado al shaker, igualmente se le agrego el mismo volumen de
enzima al otro Erlenmeyer y llevado al shaker. Durante 24 horas con 195 rpm y
una temperatura de 50°C
 Al cumplir el tiempo se coge una alícuota de cada muestra anterior y depositada
en tubos falcón.

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Bibliografía

1https://unfccc.int/files/national_reports/non-
annex_i_natcom/training_material/methodological_documents/application/pdf/7-bis-
handbook-on-energy-sector-fuel-combustion.pdf

2http://www.elcolombiano.com/colombia/salud/la-contaminacion-del-aire-en-medellin-y-
los-perjuicios-para-la-salud-LL3951148. (Publicado el 14 de abril del 2016)

3http://confidencialcolombia.com/es/1/actualidad/30175/La-Alcaldia-de-Medellin-inicia-
proyecto-para-mitigar-la-contaminacion-del-aire-Medell%C3%ADn-Contaminaci
%C3%B3n-Aire-Medio-Ambiente.htm. (Publicado el 21 de marzo del 2017)

4 http://www.bdigital.unal.edu.co/3493/1/TJMMG_13V2.pdf

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