Técnicas de tinción - observación y
diversidad celular
OBJETIVOS
Identificar la diversidad celular en
las muestras realizadas (yogurt,
moho tomate de árbol y pan, y agua
de florero)
Realizar correctamente técnicas de
tinción de Gram
Diferenciar microorganismos Gram
positivos y Gram negativos, con
base en la coloración de Gram.
INTRODUCCIÓN
Las bacterias son organismos
procariotas unicelulares, que se
encuentran en casi todas las partes
de la Tierra. Son vitales para los
ecosistemas del planeta y algunas
especies pueden vivir en
condiciones realmente extremas de
temperatura y presión. La tinción
de Gram consiste en diluir ciertos
colorantes en la muestra ya
esterilizada para lograr que estos se
adhieran mejor a la superficie de
las células, las bacterias Gram-
positivas y Gram-negativas se tiñen
de diferente forma, debido a la
diferencias que contienen las
estructuras de sus paredes
celulares (Mora Xavier. 2012).
Los Hongos son organismos
unicelulares y pluricelulares
heterótrofos que no forman
auténticos tejidos y que no tienen
sensibilidad ni se pueden movilizar
y se caracterizan por una pared
celular compuesta por Quitina. Por
otro lado los protozoos son
organismos microscópicos,
unicelulares protistas; heterótrofos,
fagótrofos, depredadores o con agua destilada.
detritívoros, que viven en
ambientes húmedos o directamente
en medios acuáticos al igual que los
Nematodos, quienes constituyen un
Phylum de individuos parecidos a
gusanos redondos o cilíndricos
(Roldan, L. 2020).
MUESTRA AGUA DE FLORERO
1. Se tomó con un gotero una cantidad del agua estancada del
florero.
2. Se agrego las gotas de la muestra de agua de florero en un
portaobjetos.
3. Se cubrió con una laminilla, para así poder ser observado
en el microscopio.
METODOLOGÍA
MUESTRAS MOHO TOMATE DE
ÁRBOL Y PAN
1. Se tomó una porción de cinta
transparente, la cual se colocó
sobre el hongo presente en la
fruta de tomate de árbol y el pan,
para que estos se adhirieran, y
luego poder colocarlo sobre la
respectiva lamina que debía
contener una gota de azul de
metileno, para llevar a cabo la
observación en el microscopio.
MUESTRAS DE YOGURT
1. Se colocó la muestra sobre el
portaobjetos, la cual se disperso
realizando un frotis
2. Se fijo la muestra por secado,
pasándolo sobre un mechero. El
paso del portaobjetos sobre la
llama del mechero debe ser
rápido, se realizo repetidas veces
hasta que la muestra estuviera
seca.
3. Se agregó unas gotas del
colorante violeta de genciana,
cubriendo la extensión, dejando
un tiempo de 1 min para que
actuara.
4. Se Lavó con agua destilada para
retirar el colorante.
5. Se colocó solución de Lugol
durante 1 minuto.
6. Se volvió a lavar nuevamente
con agua destilada para retirar el
reactivo.
7. Se decoloró con unas gotas de
alcohol, dejando actuar durante
30 segundos, para quitar el
colorante que queda libre.
8. Se volvió a realizar un lavado
9. Se agregó unas gotas de
safranina durante 1 minuto.
10. Se retiró con agua destilada.
11. Se coloco al secado al aire.
12. Se observó las muestras en el
microscopio a diferentes
objetivos, para una mejor
resolución.
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diversidad celular

DISCUSIÓN

RESULTADOS Yogurt:
Las bacterias acido-lácticas se han empleado para
fermentar o crear cultivos de alimentos. Se
MUESTRA YOGURT
observaron bacterias presentes en el yogurt como
los estreptococos Gram positivos y lactobacilos
Gram negativos.
Los lactobacilos son bacilos microaerófilos,
grampositivos y catalasa negativos, estos organismos
forman ácido láctico como producto principal de la
fermentación de los azúcares. Los Lactobacilos
homofermentativos dan lugar a ácido láctico como
MUESTRA MOHO TOMATE producto principal de fermentación. Se consideran
DE ÁRBOL "bacterias amistosas" que viven normalmente en
nuestros sistemas digestivo, urinario y genital sin
causar enfermedades. Los lactobacilos también se
encuentran en alimentos como el yogurt y en
suplementos dietéticos (Vallejo, F. & Toro, M.A.)
El yogurt es una leche fermentada que se obtiene a
partir de la acción de diferentes bacterias
(streptococcus termophilus y Lactobacillus
MUESTRA MOHO PAN bulgaricus) que transforman una parte de la lactosa
en ácido láctico y se produce un aumento de la
consistencia por coagulación de sus proteínas
(Vallejo, F. & Toro, M.A.).
Moho Pan:
La levadura es la principal responsable del
crecimiento de moho en el pan, ya que al estar
presente, se alimenta de las azucares y minerales que
se utilizaron para la elaboración del pan. Esto causa
MUESTRA AGUA DE FLORERO la formación de alcohol y dióxido de carbono,
produciéndose así la fermentación de la masa. El
crecimiento del moho en el pan también depende de
la cantidad de oxígeno presente en el ambiente, la
temperatura a la que esté sometida la masa y la
humedad (Camacho, A., Giles, M., Ortegón, A., Palao,
M., Serrano, B y Velázquez. O. 2009). En la
observación microscópica con el objetivo 10x,
identificamos una gran presencia de Rhizopus
nigricans que es el moho del pan con una coloración
negruzca y en forma de colombina. Presentan un
micelio formado por abundante cantidad de hifas.
En el extremo de algunas hifas se desarrollan los
esporangios. Las esporas contenidas en los
esporangios son generalmente azules oscuras o
negras. Cuando quedan libres dan origen a la
formación de nuevos micelios (Ceibal. P., s. f).
Moho Fruta:
El tomate de árbol, se ve afectados por el hongo en ramas y tallos, principalmente en los frutos,
normalmente afecta el ápice o puntos donde varios frutos queden conectados de una
inflorescencia, debido a que en estos lugares es común la acumulación de agua y humedad lo
que beneficia el crecimiento del hongo.(Botero. M. 1999) La fruta tiene presencia de
antracnosis, la cual muestra un hundimiento en el pedúnculo de la fruta con lesiones de color
pardo, rodeados de una textura algodonosa de color blanco, esto es característico de dos
hongos, Alternaria sp. y Cladosporium sp. En la observación se podría pensar en la presencia
hongo Alaternaria, pues esta presenta un micelio de hifas ramificadas o libres, y también
muestra conidióforos de color marrón elongados ( Molina. J., 2010).
Agua Florero:
Se observó en el microscopio a través de una gota de agua de florero, la presencia de seres
vivos, unicelulares, como los protozoos, también llamados protozoarios, son organismos
microscópicos, por lo general, incoloros, móviles debido a la presencia de cilios, unicelulares
eucariotas; heterótrofos, fagótrofos, depredadores o detritívoros, a veces mixótrofos
(parcialmente autótrofos) (Uyaban Sandoval. A. 2018).
Por otro lado se pudieron observar pequeños nematodos pues estos son organismos que
suelen habitar el suelo y diversos medios acuáticos entre ellos las aguas estancadas como los
charcos y en ocasiones el agua de florero pues son medios donde pueden proliferar ya que se
pueden alimentar de estructuras vegetales y por lo tanto hasta vivir en estas (Seminis. 2017).
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diversidad celular

CONCLUSIONES

Se concluye que por medio de la tinción de azul de metileno se pude evidenciar en el

moho del pan y el tomate de árbol, los cuales fueron Rhizopus nigricans y Alternaria
sp. respectivamente.
Con la tinción Gram fue posible evidenciar 2 tipos de bacterias en el yogurt, la primera
fue estreptococos Gram + (coloración violeta) y lactobacilo Gram - (coloración rosa).
En la muestra de agua de florero se pudo observar 2 distintos tipos de
microorganismos que se pueden encontrar en los cuerpos de agua (un nematodo y
varios protozoos).

REFERENCIAS
Camacho, A., Giles, M., Ortegón, A., Palao, M., Serrano, B y Velázquez. O. (2009).
"Método para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos.". . Técnicas para el
Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.
Roldan, L. (2020). "Qué son los nematodos: características, clasificación y ejemplos".
Ecología verde. Recuperado de: https://www.ecologiaverde.com/que-son-los-
nematodos-caracteristicas-clasificacion-y-ejemplos-2556.html
Ceibal. P. (s.f). "Reino de los hongos. Hongo negro del pan Rhizopus". Recuperado de:
https://contenidos.ceibal.edu.uy/fichas_educativas/_pdf/ciencias-naturales/reino-
de-los-hongos/005-hongo-negro-del-pan.pdf
Mora Xavier. (2012). "DIFERENCIANDO BACTERIAS GRAM+ y GRAM". Patología.
Recuperado de https://seleccionesavicolas.com/pdf-files/2012/2/6536-diferenciando-
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Rojas Triviño, A. (2011). “Conceptos y Práctica de Microbiología General”. ”Práctica 5.
Técnicas de siembra para hongos y bacterias”. Universidad Nacional de Colombia -
Sede Palmira. Recuperado de: https://core.ac.uk/download/pdf/11054932.pdf
Botero. M. (1999). "Estudio de la interacción biológica de microorganismos
relacionados con Collectotrichum gloeosporioides (Penz) Penz. Sacc., agente causante
de la antracnosis en tomate de árbol (Solamun batacea (Cav.) Sendt.)." Corporacion
colombiana de investigacion agropecuaria. Manizales, Colombia. Recuperado de:
http://bibliotecadigital.agronet.gov.co/bitstream/11348/6400/1/20061127162055_Inte
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Molina. J. (2010). "AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE HONGOS PATÓGENOS
PRESENTES EN LULO, TOMATE DE ÁRBOL Y MORA DE CASTILLA
POTENCIALMENTE PATÓGENOS PARA LOS CULTIVOS DE GULUPA (Pasiflora edulis
var. edulis sims.)". Pontifica Universidad Javeriana, facultad de ciencias basicas y
vererinaria. Bogota, Colombia. Recuperado de:
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/8661/tesis614.pdf?
sequence=1
Vallejo, F. & Toro, M.A. (2002). "ANALISIS MICROBIOLOGICO EN YOGURT CON
PROBIOTICOS". Universidad de Valparaíso, Escuela de Medicina, Cátedra de
Micología. Casilla 92 V, Valparaíso, Chile. Boletín Micológico Vol. 17 : 15 - 19
Seminis. (2017). "Que son los nematodos". Bayer, Bayer Cross Design and Seminis® are
registered trademarks of Bayer Group.

Rodríguez Danna
Sanabria Hugo
Turmequé Maria Fernanda