TRABAJO DE VIROLOGIA

DOCENTE
ANDERSON RAMIRAZ AYALA

INTEGRANTES
MARIA JOSE CALDERON CONTRERAS
LINDA LUCIA GUTIERREZ HINOJOSA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA
VALLEDUPAR - CESAR

2019
 1. se extrajo de un 100-
hasta 150 ml de volumen de
muestra (fluidos de huevo,
material de cultivo de
tejidos, especificaciones
clínicas mens y controles de
agua)

6. luego se seca a 56 ° C
durante 10 min.
2. mediante un método de
Era luego se resuspendió en unión de tiocianato de
30 ml de agua libre de guanidinio y sílice.
ARNasa y se convirtió en
ADNc mediante RT-PCR.

Extracción
de ADN
viral
5. el ARN que unía a la sílice 3. se añadió una muestra a
se lavó dos veces con 1 ml un tubo que contenía 840 a
de tampón L2 (120 g de 890 ml de lisis. tampón (120
guanidinio tiocianato, 100 g de tiocianato de
ml de Tris-HCl 0.1 M [pH guanidinio, 100 ml de Tris-
6.4]), dos veces con 1 ml de HCl 0,1 M [pH 6,4], 22 ml de
70% (vol / vol) etanol, y una EDTA 0.2 M [pH 8.0], 2.6 g
vez con 1 ml de acetona de Triton X-100)

4. 10 ml de suspensión de
sílice, mezclado e incubado
durante 10 minutos a
temperatura ambiente
 1. El ARN viral se
extrajo de los hisopos
nasofaríngeos de los
pacientes o
sobrenadantes de
medio de cultivo
donde se inocularon
los virus

2. las muestras de
100 μl se mezclaron
7. luego se purificó
con 500 μl de TRIzol
por extracción con
(GIBCO BRL, Life
éter.
Technologies,
Rockville, MD)

Extracción
de ARN
6. El ARN se precipitó
con 100% de
isopropanol a
viral 3. se le añadio 100 μl
temperatura de cloroformo.
ambiente durante 10
minutos

4. Después de la
5. las mezclas se
incubación durante 5
centrifugaron para
minutos a
separar el ARN de la
temperatura
fase acuosa superior
ambiente
TIPO DE PCR PROCEDIMIENTO FOTOGRAFIA
PCR LAS CONDICIONES DE PCR:
ANIDADA 94 ° C durante 3 min seguidos de
30 ciclos de 94 ° C durante 30 s,
50 ° C durante 30 sy 72 ° C
LINK: durante 30 s, y la extensión final
https://ww se realizó a 72 ° C/7 min.
w.ncbi.nlm.n SECUENCIAS DE PRIMERS: M2-
ih.gov/pmc/ For3(5′-
articles/PMC CTAGTCAGGCCAGGCAAATG-3 ')
120099/#! M2-Rev (5′-
po=48.5294 ACTGTCGTCAGCATCCACAG-3')
TAMAÑO DEL FRAGMENTO:
100pb
TIPO DE MUESTRA: hisopos
nasofaríngeos en ancianos
RT-PCR CONDICIONES DE PCR:
1 ciclo a 94°C/2 min seguidos, 35
ciclos a 94°C/1 min, 35 ciclos a
50°C/1 min y 35 ciclos a
LINK: 72°C/1min.
https://jcm. SECUENCIAS DE PRIMERS:
asm.org/con BHA B (5’-
tent/36/10/ CATTTTGCAAATCTCAAAGC-3’)
2990.long RSVA F (5’-
GATGTTACGGTGGGGAGTCT-3’)
TAMAÑO DE FRAGMENTO:
600Pb – 200Pb
TIPO DE MUESTRA:
Hisopos de la nariz y la garganta.
PCR CONDICIONES DE PCR:
MULTIPLEX Desnaturalización de 5 minutos a
95 ° C y un programa de
amplificación de 35 ciclos
(desnaturalización a 94 ° C
durante 40 s, 56 ° C durante 40 s
LINK: y alargamiento a 72 ° C durante
https://ww 50 s), seguido de una extensión a
w.ncbi.nlm.n 72 ° C durante 10 min.
ih.gov/pmc/ SECUENCIAS DE PRIMERS:
articles/PMC PCV1-F 5’-
6727504/ GAAAGTGAGCGGGAAGAT-3’
PCV1-R 5’-
CTGATTGCTGGTAATCAA-3’
TAMAÑO DE FRAGMENTO:
1000pb, 500pb y 250pb
TIPO DE MUESTRA: Tejido de
cerdo
PCR RFLPs CONDICIONES DE PCR:
Desnaturalización 94°C por
5 min; 94 °C por 30 s; 56
LINK: °C por 35 s; 68 °C por 35
http://www. s; 68 °C por 5 min, y por
scielo.org.pe ultimo 4 °C
/scielo.php? indefinidamente, sumando
script=sci_ar 35 ciclos de amplificación.
ttext&pid=S TAMAÑO DE FRAGMENTO:159pb
1726- TIPO DE MUESTRA:
4634201500 escobillados cervicales 
0300015 ENZIMA DE RESTRICCIÓN: AFA1