Universidad Autónoma de Tlaxcala

Facultad Ciencias de la Salud

Licenciatura Química Clínica

Tema 2. Manipulación Genética

2.3 Técnicas básicas
Tema 3. Vectores de clonación
Tema 4. Vectores de expresión
Docente: Magdalena

Juárez Nahuatlato Ana Karen

Electroforesis
Clonación
Transformación
 Las bacterias pueden recolectar ADN de otros
organismos en un proceso
llamado transformación.

 Ocurre después de los tratamientos de digestión

con enzimas de restricción y ligación y transfiere
plásmidos recién hechos a las bacterias.

 Después de la transformación, las bacterias

se seleccionan en placas con antibióticos y cada una
formará una colonia.

 Las colonias con el plásmido adecuado pueden

cultivarse para producir grandes cultivos de bacterias
idénticas que se utilizan para producir plásmido o
hacer proteína.
Transformación
I. Bacterias preparadas especialmente se mezclan con ADN (de una ligación, por ejemplo).

II. Se aplica un choque de calor a las bacterias lo que provoca que algunas recolecten el
plásmido.

III. Los plásmidos que se usan en la clonación contienen un gen de resistencia a antibióticos.
Por lo tanto, todas las bacterias se colocan en una placa con antibióticos para seleccionar
las que recolectaron plásmido.

IV. Las bacterias sin plásmido mueren. Cada bacteria con plásmido da lugar a una colonia o
comunidad de bacterias idénticas que contiene el plásmido.

V. Varias colonias se analizan para identificar una con el plásmido adecuado.

VI. Una colonia que contenga el plásmido adecuado se deja crecer a mayor escala y se utiliza
para producir proteína o plásmido.
Vectores de Clonación
 Plásmidos
Son pequeñas moléculas de ADN circular que se replican en el
interior de las bacterias de forma independiente.

Lo único que se necesita es que en el ADN plasmídico exista un

origen de replicación (la secuencia de ADN que señaliza el inicio de la
replicación a la celula huésped).

Los plásmidos portan genes que confieren resistencia a antibióticos

(por ejemplo resistencia a la ampicilina) por lo que las bacterias que
portan los plásmidos pueden ser seleccionadas.
 Plásmidos
El ADN de los plásmidos contiene únicamente entre 2 y 4 kb de
ADN facilitando el análisis del fragmento de ADN insertado.

Para clonar utilizando un plásmido como vector :

Se separan del ADN

cromosómico
La molécula Las colonias bacteriano y el
Se replica en
Se liga al fragmento recombinante se resistentes que resultado es ADN
usa para contienen el determinado
de ADN que se numero de ciclos y plasmídico
desea insertar transformar un plásmido son purificado apropiado
se extrae su ADN.
cultivo de coli. seleccionadas. para el análisis del
fragmento
insertado.
Virus Bacterianos
Son virus que infectan
naturalmente bacterias y se Bacteriófagos λ
01 comportan como parásitos
intracelulares obligados que se
multiplican haciendo uso de la
maquinaria biosintética de las
bacterias.

02 Se replican de forma
autónoma, portan
información genética y
pueden conferirle a la
bacteria nuevas propiedades
o desarrollarle procesos
patológicos.
Virus Bacterianos Bacteriófagos λ

03
El bacteriófago lambda posee un
genoma de una molécula lineal de
aprox. 45000 pb.
Cuyos extremos son 12 nucleótidos,
Para convertirlo en un vector, que contienen secuencias
complementarias entre sí,
el bacteriófago silvestre (virus denominados sitios cos, que utiliza
natural) es modificado para “circularizar” su genoma a
genéticamente. través de la acción de una ligasa de
la célula huésped.
Dichas modificaciones consisten
en la adición de sitios de
restricción específicos y la
eliminación de aquellos genes
que no se requieren para la
replicación, lo que permite la
incorporación de fragmentos de
ADN de mayor longitud que los
plásmidos (de hasta 23 kb).
04
 Virus Eucariontes
Virus recombinantes

Las partículas virales silvestres no se

pueden emplear directamente como
vectores de expresión, es necesario
convertirlos en virus deficientes en su
replicación dentro de la célula diana.

Los virus recombinantes son estructuras

capaces de transferir material genético a
una célula diana.
 Virus Eucariontes
Los virus recombinantes son la Virus recombinantes
herramienta más eficiente en la
transgénesis, permiten sobre expresar
proteínas en células humanas (Figura 2) y
como consecuencia se pueden obtener
proteínas recombinantes con un
procesamiento postraduccional
adecuado.

Entre los virus recombinantes con

aplicaciones en transgénesis se
encuentran los adenovirus, los retrovirus,
los virus adeno asociados, los lentivirus,
además de otros ADN o ARN virus.
 Cósmidos
Los cósmidos son plásmidos recombinantes que combinan características útiles de plásmidos
y del bacteriófago λ. Permiten la clonación de fragmentos de DNA de hasta 45.000 pb. Los
cósmidos son moléculas de DNA pequeñas (5.000‐7.000 pb)
y circulares, que contienen:

(1) Un origen de replicación plasmídico.

(2) Uno o más marcadores seleccionables.
(3) Un número de sitios de restricción
donde insertar DNA foráneo.
(4) Un sitio cos (Secuencia de DNA del
bacteriófago λ necesaria para el
empaquetamiento).

Los cósmidos se propagan en E. coli

como si fueran plásmidos.
 Fásmidos
Son vectores que combinan las características de un fago
filamentoso (M13) y un plásmido (pBR323) y contienen tanto el
origen de replicación del fago como del plásmido.

Normalmente la replicación depende del plásmido, pero cuando

una célula que contiene un fásmido se infecta con un fago de
tipo silvestre, el origen del fago es responsable de la replicación
y se generan copias monocatenarias.

Este ADN monocatenario es empaquetado en viriones y puede

aislarse fácilmente y ser utilizado para secuenciar.

Habitualmente, los fásmidos pueden transportar de forma

estable un fragmento de ADN clonado mayor que un vector
típico derivado de M13.
BAC (Cromosoma artificial bacteriano)
YAC
 Referencias
M. Cooper Geoffrey, E. Housman Robert. (2006) La Célula. 2da ED. MARBAN ISBN: 978-84-7101-
488-7 pág. 727.

Montes, A. S., Rodríguez, A. S. S., & Borunda, J. S. A. (2013). Biología molecular: fundamentos y
aplicaciones en las ciencias de la salud. McGraw-Hill Education.

Xunta de Galicia. (2013). BIOQUÍMICA II Grupo B. https://www.edu.xunta.gal/. Recuperado 4 de

septiembre de 2022, de
https://www.edu.xunta.gal/centros/cafi/aulavirtual/pluginfile.php/49443/mod_resource/conte
nt/1/TEORÍA%20CURSO%20CLONAJE-ÁCIDOS%20NUCLEICOS.pdf
 Info about past years

2014 2017 2020

Place Mars Venus Saturn

Write here the Write here the Write here the

Activities activities activities activities

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 02
Who was he?
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Who was St. Joseph?
Do you know what helps you make your point
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● You’ll never forget to buy milk!

And the most important thing: the audience

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 His family tree
Jacob Unknown Anna Joaquim
Jupiter is the biggest Venus is the second Neptune is very far Mercury is the closest
planet of them all planet from the Sun away from Earth planet to the Sun

Joseph Mary
Saturn is a gas giant Earth is the third planet
and has rings from the Sun

Jesus
Ceres is located in the
main asteroid belt
 Important information
What was Where was Who was
he doing? he born? his son?
Jupiter is the biggest Earth is the third Saturn is a gas giant
planet of them all planet from the Sun and has several rings

How long Who was

did he live? his wife?
Despite being red, Venus is the second
Mars is a cold place planet from the Sun
 9h 55m 23s
Jupiter's rotation period

386,000 km
Distance between Earth and the Moon

333,000
The Sun’s mass compared to Earth’s
03
About his life
You can enter a subtitle here if you need it
 History of St. Joseph
Venus is the second It’s the farthest planet
planet from the Sun from the Sun

Venus Neptune

01 02 03 04

Jupiter Saturn
Jupiter is the biggest It’s composed of hydrogen
planet of them all and helium
A pictures always
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concept
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remember: use an image instead of a long text.
Your audience will appreciate it
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 Important moments of his life

Mercury Venus Mars

Mercury is the closest Venus is the second Mars is actually a very
planet to the Sun planet from the Sun cold place

Jupiter Saturn Neptune

Jupiter is the biggest It’s composed of It’s the farthest planet
planet of them all hydrogen and helium from the Sun
 Let’s use some percentages

25% 50% 75%

Mercury Mars Venus
It’s the closest planet to Despite being red, Mars is Venus is the second
the Sun a very cold place planet from the Sun
The
importance of
St. Joseph
Mercury is the closest planet to the Sun and
the smallest in the Solar System
Saint Joseph and Virgin Mary

Saint Joseph
Mercury is the closest planet to the Sun and the smallest one in
the Solar System—it’s only a bit larger than the Moon

Virgin Mary
Venus has a beautiful name and is the second planet from the
Sun. It’s hot and has a poisonous atmosphere
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 This is a map
Mercury
1 Mercury is the closest
planet to the Sun

1
2 Venus
3 2 Venus is the second
planet from the Sun

Mars
3 Mars is actually a very
cold place
04 Conclusion
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 Our team

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