INSTITUTO TECNOLOGICO DE CAMPECHE

Reporte de
Cromatografía
Reporte de cromatografía en columna, Destilació n y Cromatografía de
papel

MORENO CHE JESSICA RUBÍ, MARTIN CAMARA JAINA REBECA

INDICE GENERAL
1.- Objetivos.......................................................................................................................................3
2.- Introducción..................................................................................................................................3
3.- Marco teórico:..............................................................................................................................3
Cromatografía líquido-sólido (columna).........................................................................................4
Cromatografía líquido-sólido (capa fina)........................................................................................4
4.- Material.........................................................................................................................................6
5.- Procedimiento experimental........................................................................................................6
Preparación de la columna.............................................................................................................6
Preparación de la mezcla a separar................................................................................................7
6.- Desarrollo......................................................................................................................................7
Cromatografía de Columna............................................................................................................7
1° Corrida:..................................................................................................................................7
2° corrida:...................................................................................................................................8
3° Corrida:..................................................................................................................................9
Destilación....................................................................................................................................10
Material....................................................................................................................................10
Procedimiento para realizar la destilación...............................................................................10
Desarrollo de la destilación......................................................................................................11
Cromatografía de papel de flores amarillas.................................................................................12
Material....................................................................................................................................12
Procedimiento experimental....................................................................................................12
7.-Conclusión....................................................................................................................................16

Índice de IlustracionesY
Ilustración 1 Columna de Cromatografía............................................................................................7
Ilustración 2 Primera corrida..............................................................................................................8
Ilustración 3 Segunda corrida.............................................................................................................9
Ilustración 4 Tercera corrida..............................................................................................................9
Ilustración 5 Destilación...................................................................................................................11
Ilustración 6 Resultado de Hexano...................................................................................................13
Ilustración 7 Resultado de Tolueno..................................................................................................14
Ilustración 8 Resultado de Cloroformo.............................................................................................15
Cromatografía en columna. Separación de pigmentos de flores amarillas

1.- Objetivos
1. Manejo de técnicas de separación. Introducción a las sofisticadas técnicas de
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y cromatografía de gases (GC).
2. Aprender a preparar un micro columna para cromatografía en columna.
3. Comprobar la eficiencia de la separación de la mezcla, mediante la técnica de
cromatografía de adsorción en columna, por la pureza de cada uno de los componentes
separados.

2.- Introducción
La cromatografía en columna es la técnica de separación e identificación de sustancias
químicas, por la diferente retención que experimentan los componentes de una mezcla, al
ser más o menos adsorbidos por los componentes de una fase fija situada en una
columna, cuando son arrastrados por un fluido (fase móvil). Si la fase móvil es líquida
hablamos de cromatografía líquida y si es gas será cromatografía de gases. El
adsorbente, suele ser gel de sílice o alúmina, pero pueden ser otros.
Intervienen los fenómenos de adsorción y disolución, por consiguiente es fundamental
tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si
queremos tener una buena separación.
El disolvente al descender arrastra las sustancias a distinta velocidad según la mayor o
menor retención que experimenten, y salen de la columna a distinto tiempo.
La técnica, en forma generalizada, comprende:
* Preparación del disolvente
* Preparación de la columna
* Desarrollo del cromatograma
* Estudio del tiempo de retención
* Revelado de las sustancias separadas, si no son visibles
El tiempo de retención es un parámetro útil porque es constante cuando se reproduce el
experimento en todas las condiciones, se pone en tablas y sirve para identificar
compuestos; es fundamental en Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) y en
Cromatografía de Gases.

3.- Marco teórico:

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas
variantes. En toda separación cromatografía hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La
muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en
recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la
mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se
encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho
más lenta.

La más utilizada en química orgánica es cromatografía líquido-sólido en sus dos variantes:

cromatografía en columna (CC) y cromatografía de capa fina (TLC)

Cromatografía líquido-sólido (columna)

Se emplea para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala
preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o alúmina dentro
de una columna. La elección del disolvente es crucial para una buena separación. Dicho
disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicación de
presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente
y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de vidrio,
para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en la columna y d el disolvente se
enrasada hasta el nivel del soporte. A continuación se introduce la muestra por la parte
superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general
en tubos de ensayo.

La técnica, en forma generalizada, comprende:

- Preparación del disolvente

- Preparación de la columna

- Desarrollo del cromatograma

- Estudio del tiempo de retención

Cromatografía líquido-sólido (capa fina)

La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa
fina se basa en el principio del reparto entre dos fases.  En general, una
cromatografía se realiza permitiendo que  la mezcla de m o l é c u l a s q u e s e
desea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de
s o p o r t e q u e s e denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase móvil) que es
inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" (eluír) a las
moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan
diferente coeficiente de reparto, la fase móvil "lavará" a los distintos componentes
con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la
fase móvil serán eluidos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la
fase estacionaria .E n l a c r o m a t o g r a f í a d e c a p a f i n a , l a f a s e e s t a c i o n a r i a
e s u n a d e l g a d a c a p a d e u n s o p o r t e s ó l i d o granulado, tal como gel de
sílice, alúmina, ácido silícico u otros, que se depositan sobre una placa de
vidrio, aluminio u otro soporte inerte. Para que adquiera firmeza y no se
desmorone, la capa de fase estacionaria se aglutina con una pequeña
cantidad de sulfato de calcio u otro agente cementante. Las muestras se
aplican añadiendo pequeñas gotas de solución en un pequeño círculo cerca
del extremo inferior de la placa. La gota se deja secar y si se desea poner más muestra
se pueden aplicar más gotas, cuidando de que la mancha no se haga demasiado grande.
La placa seca se sumerge en un pequeño volumen de fase móvil (mezcla de solventes).
La polaridad de l a m e z c l a d e s o l v e n t e s s e e l i g e d e a c u e r d o a l a m e z c l a
d e c o m p u e s t o s q u e s e d e s e a s e p a r a r . E n cromatografía de capa fina la
fase estacionaria está hidratada, por lo que se le considera como la fase polar.
Como sólo la base de la placa queda sumergida, el solvente comienza a mojar
la fase estacionaria y asciende por capilaridad. Al recorrer la placa la fase
móvil va arrastrando a las substancias apolares y aquellas más polares son
retenidas por la fase estacionario dando lugar a la separación. La placa desarrollada se
deja secar y se revela con un reactivo que tiña a las substancias de interés. La movilidad
relativa o Rf es la relación entre la distancia recorrida por la mancha de un compuesto,
dividida por la distancia recorrida por el frente de solvente al momento de sacar la placa
del solvente.

La técnica de cromatografía en capa fina (TLC) es una de las más comunes empleadas
en un laboratorio de Química Orgánica. Entre oras cosas permite:

*Determinar el grado de pureza de un compuesto

*Comparar muestras
*Realizar el seguimiento de una reacción
*Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografía de columna

La cromatografía en capa fina usa como fase estacionaria un sólido como gel de sílice a
alúmina conteniendo algún material que hace que se mantenga la fase estacionaria sobre
un soporte tal y como placas de vidrio, aluminio e incluso materiales plásticos.
4.- Material
 -1 tubo de vidrio
 -Embudo
 -1 soporte y pinzas
 -Mortero de porcelana
 -Probeta graduada de 250 ml y una de 100 ml
 -3 vasos precipitados de 75 ml
 -1 pipeta de
 -Una pera
 -3 Corchos
 -Algodón
 -Gasa
 -Vidrio
 -3 matraces aforados de 100ml
 -Flores amarillas

Reactivos

 -Hexano
 -Tolueno
 -Cloroformo

5.- Procedimiento experimental

Preparación de la columna
Se toma una bureta o una pipeta como columna, se sujeta en el soporte con las pinzas.
Se engrasa la llave y se mantiene en posición de cerrado. Se introduce hasta el fondo un
pequeño trozo de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, se agregan 3 ml de Etanol
absoluto DIDACTIC y se presiona suavemente el algodón para que quede bien colocado
y sin burbujas. A través del embudo se vierte el vidrio en la columna golpeando
ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme.
 Ilustración Columna de Cromatografía

Preparación de la mezcla a separar

Se recogen hojas y flores verdes, amarillas, rojas,...., se ponen en un mortero, junto con
alcohol y una pequeña cantidad de Calcio Carbonato precipitado DIDACTIC (que evita la
degradación de los pigmentos fotosintéticos).
Se tritura la mezcla hasta que las hojas se decoloran y el disolvente adquiere un color
verde intenso, se decanta y se realiza la práctica con el líquido como extracto de
vegetales

6.- Desarrollo
Cromatografía de Columna
Se realizaron 3 corridas por día cada eluyente

1° Corrida:
Se afora 100ml de hexano en una probeta graduada de 250ml y se vierte en la columna
tomando el tiempo que tarda desde que entra la primera gota a la columna hasta que
salga la primera gota de la columna y por último se afora en una probeta de 100ml el
hexano recuperado de la columna esperando de 20-25 min que termine de caer todo el
hexano de la columna.

El segundo es el tolueno que se realiza la misma operación mencionado con el hexano y

por último el cloroformo de igual manera que se realizó con el hexano y el tolueno.

Esta operación se realizó un eluyente por día, para dejar que la columna se seque bien y
poder verter el siguiente eluyente.

Resultados de la primera corrida:

Eluyente ml Tiempo de la 1° Eluyente

gota hasta las 1° recuperado (ml)
gota que sale de la
columna
Hexano 100 21s 86
Tolueno 100 10s 99
Cloroformo 100 12s 92

Ilustración Primera corrida

Tabla Resultados de 1ra corrida

2° corrida:
Se realizó el mismo procedimiento que en la primera corrida solo que no se utilizó nuevo
eluyente, si no se vertió el mismo eluyente recuperado en la primera corrida y los
resultados fueron los siguientes:

Eluyente ml Tiempo de la 1° Eluyente

gota hasta las 1° recuperado (ml)
gota que sale de la
columna
Hexano 86 18s 79
Tolueno 99 32s 78
Cloroformo 92 1m 90
Tabla Resultados 2da Corrida
 Ilustración Segunda corrida

3° Corrida:
Se realizó el mismo procedimiento ahora con el eluyente recuperado de la 2° corrida y los
resultados fueron los siguientes:

Eluyente ml Tiempo de la 1° Eluyente

gota hasta las 1° recuperado (ml)
gota que sale de la
columna
Hexano 79 48s 75
Tolueno 78 1m con 8s 70
Cloroformo 90 3s 82
Tabla Resultados de 3ra corrida

Ilustración Tercera corrida

Destilación
La destilación, es un proceso que consiste en calentar un líquido hasta que sus componentes más
volátiles pasan a la fase de vapor y, a continuación, enfriar el vapor para recuperar dichos
componentes en forma líquida por medio de la condensación. El objetivo principal de la destilación
es separar una mezcla de varios componentes aprovechando sus distintas volatilidades, o bien
separar los materiales volátiles de los no volátiles. En la evaporación y en el secado, normalmente el
objetivo es obtener el componente menos volátil; el componente más volátil, casi siempre agua, se
desecha.

La destilación depende de parámetros como: El equilibrio liquido vapor, temperatura, presión,

composición, energía.

·         El equilibrio entre el vapor y el líquido de un compuesto está representado por la relación
de moles de vapor y líquido a una temperatura determinada, también puede estudiarse este
equilibrio a partir de sus presiones de vapor.

·         La temperatura influye en las presiones de vapor y en consecuencia de la cantidad de energía

proporcionada al sistema, también influye en la composición del vapor y el líquido ya que esta
depende de las presiones del vapor.

·         La presión tiene directa influencia en los puntos de ebullición de los líquidos orgánicos y por
tanto en la destilación.

·         La composición es una consecuencia de la variación de las presiones de vapor, de la

temperatura que fijan las composiciones en el equilibrio.

·         Puntos de ebullición, son aquellos puntos o temperaturas de compuestos puros a las que sus
presiones de vapor igualan a la presión atmosférica, produciéndose el fenómeno llamado ebullición

Material
-Matraz de destilación     -Pinza para refrigerante         

-Mangueras                       -Termómetro                     

-Refrigerante                    -3 sustancias de la última corrida en la cromatografía de columna

 -Parrilla de calentamiento

Procedimiento para realizar la destilación

1°  Se arma el aparato de destilación, con el equipo de destilación.

 2°Se colocan en un matraz de bola el hexano, el tolueno y el cloroformo (El sobrante de la 3° corrida que se
realizó en la cromatografía en columna)
Desarrollo de la destilación
1) Al verter el tolueno, el hexano, y el cloroformo en su respectivo matraz , se enciende la parrilla
de calentamiento y se comienza a calentar los 75ml de hexano, los 70 ml de tolueno y los 90ml de
cloroformo contenidos en el matraz, observando el incremento  de temperatura en el
termómetro.

2) Se esperó durante un tiempo, aproximadamente como unos 45 min, hasta que, alcanzó su
punto de ebullición el hexano, que en este caso fue de 69°C  y comenzó a destilar, evaporándose
gran parte del hexano.

Lo mismo se realizó con el cloroformo solo que se esperó unos 35 min, hasta que alcanzó su punto
de ebullición, que en este caso fue de 110.6°C y por último el tolueno que se esperó como 1 y
media para que llegara a su punto de ebullición, que en este caso fue de 61.2°C

Ilustración Destilación
Cromatografía de papel de flores amarillas
Material
-Papel filtro del #5

-Tijeras

-Regla

-Cámara con luz ultravioleta

-1 vaso precipitado de 50 ml

-Lápiz

-1 pipeta Pasteur

-1 tapa para el vaso precipitado

Reactivos

-Etanol

-Las muestras de los resultados en cromatografía en columna de la 3° corrida que fue la ultima

Procedimiento experimental
Cortar los papel filtro de manera que entren en el vaso precipitado y que se pueda tapar, marcar con un punto
donde el etanol que se va encontrar en el vaso precipitado no toque la mancha o la gota marcada en el papel
filtro.

Se realizaron 3 cromatografías en papel una con el hexano, otra con tolueno y por ultimo con el cloroformo ya
todos destilados.

La primera una vez marcado el punto a colocar la muestra, se coloca una gota con la pipeta pasteur del
hexano y colocándolo en el vaso precipitado con etanol que contiene 50 ml de etanol, se tapa y se deja que
corra la muestra evitando que llegue hasta el borde final del papel, y este fue nuestro resultado:
Ilustración Resultado de Hexano

La segunda se realizó con la muestra de tolueno, realizando la misma operación solo que una gota de tolueno
y dejándolo un rato en el etanol tapado y este fue nuestro resultado:
Ilustración Resultado de Tolueno

Y por último la tercera muestra que fue el cloroformo destilado, una gota con la pipeta Pasteur, realizando la
misma operación y nuestro resultado fue el siguiente:
Ilustración Resultado de Cloroformo

Todos se dejaban secar por un rato y luego lo checábamos en una luz ultravioleta para corroborar la mancha
7.-Conclusión
En conclusión aprendimos que era la cromatografía y que usos se le dan. En nuestra opinión se nos
hizo muy lento todo el experimento, pero en esencia, fue muy interesante. Nos dimos cuenta con
cuales sustancias es más factible descomponer los pigmentos vegetales, mientras que también
aprendimos el proceso de destilación, que básicamente sirve para separar de una mezcla diluida
cierta sustancia.