INFORME DE LABORATORIO PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Presentado por:

MICHAEL LEONARDO BELTRAN

YENNY PAOLA PEREZ
XIMENA PLATA HERNÁNDEZ

Ficha: 433472

Instructora:

ALEXANDRA CUCAITA

SENA
CENTRO NACIONAL DE HOTELERÍA, TURISMO Y ALIMENTOS
CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS
BOGOTÁ D.C
2014
 INFORME LABORATORIO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA
(POLLO CRUDO)

MARCO TEÓRICO

Pseudomonas aeruginosa (o Pseudomonas pyocyanea) es una bacteria Gram-negativa,

aeróbica, con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista en humanos y también en plantas.
Como otras Pseudomonas, P. aeruginosa secreta una variedad de pigmentos como piocianina
(azul verdoso), fluoresceína (amarillo verdoso fluorescente) y piorubina (rojo pardo). King,
Ward, & Raney desarrollaron "Pseudomonas Agar P" (también conocido como "medio King A")
para mejorar la producción de piocianina y piorubina; y "Pseudomonas Agar F" (también
conocido como "medio King B") para la fluoresceína.
P. aeruginosa es a menudo identificada, de modo preliminar, por su apariencia perlada y olor a
uvas in vitro. La identificación clínica definitiva de P. aeruginosa frecuentemente incluye, tanto
identificar la producción de piocianina y fluoresceína como determinar su habilidad de crecer a
42 °C. P. aeruginosa es capaz de crecer en combustibles como queroseno o gasóleo, ya que
es un microorganismo capaz de nutrirse a partir de hidrocarburos, causando estragos de
corrosión microbiana, y creando una gelatina oscura que a veces se identifica
inadecuadamente con un alga.

Este patógeno oportunista de individuos inmunocomprometidos, P. aeruginosa infecta el tracto

pulmonar, el urinario, tejidos, heridas, y también causa otras infecciones de sangre.
Pseudomonas puede causar neumonías a grupos, necesitando a veces ayuda mecánica para
superar dichas neumonías, siendo uno de los más comunes agentes aislados en muchos
estudios. La piocianina es un factor de virulencia de la bacteria y se ha conocido que puede
hasta causar muerte en C. elegans por estrés oxidativo. Sin embargo, la investigación indica
que el ácido salicílico puede inhibir la producción de piocianina. Uno en diez hospitales se
infecta con pseudomonas. La fibrosis quística está también predispuesta a la infección con P.
aeruginosa de los pulmones. P. aeruginosa es el causante de dermatitis, causada por
disminución del control de la calidad del agua de bebida. El más común causante de altas
fiebres e infecciones es P. aeruginosa. También ha estado involucrado en foliculitis de tinas de
agua caliente, en especial aquellas sin un control higiénico continuo.

P. aeruginosa es naturalmente resistente a una gran cantidad de diferentes familias de

antibióticos. Es indispensable usarlos con una guía de tratamiento acorde con los resultados de
antibiogramas (sensibilidad de la especie de P. aeruginosa a diferentes potentes antibióticos),
más que a elegir determinado antibiótico empíricamente. Si se comienza con un antibiótico
genérico empíricamente, hay que realizar lo adecuado para obtener cultivos y elegir el mejor de
los resultados bioquímicos, revisando el elegido.

NTC 3644-2 Industrias Alimentarias. Pollo.

 MEDIOS DE CULTIVO, CARACTERÍSTICAS Y COMPONENTES

Agar Cetrimide:

Medio selectivo para el recuento de Pseudomonas aeruginosa en diversas muestras biológicas.

Sinónimos:

Medio N.

Historia:

La formulación del medio es una modificación de la del King A y corresponde a las

recomendaciones de la U de la Ph. Eur.

Fundamento:

La cetrimida actúa como elemento inhibidor de una amplia variedad de microorganismos, de tal
manera que inhibiendo el crecimiento de las Pseudomonas aeruginosa si lo hace con otras
especies de Pseudomonas.
Además su acción tensioactiva produce la liberación del fosfato y del nitrógeno a las células
bacterianas distintas de Pseudomonas aeruginosa.Por la presencia de Magnesio Cloruro y
Potasio Sulfato se favorece la producción de piocianina que dará al medio coloración azul
verdoso o marrón.
Algunas especies de Proteus, Klebsiella y Providencia pueden contaminar el medio. Si se
precisa aumentar la selectividad del medio, puede suplementarse con ácido nalidikico 15 g/ml.
También puede reducirse la temperatura de incubación (20°C de 3 a 5 días) para evitar las
contaminaciones antes mencionadas.
Formulación:

Composición g/l Cantidad

Cetrimida 0,3 g

Digerido Pancreático de 20,0 g

Gelatina

Agar 13,6 g

Magnesio Cloruro 1,4 g

Potasio Sulfato 10,0 g

pH 7,2 - 0,2

Procedimiento:

Suspender 45,3 g en 1L de agua destilada, añadir 10 ml de glicerina y mezclar bien. Calentar y

agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos, y
distribuir en placas de Petri estériles.

Modo de empleo:

Se recomienda este medio para el control de Pseudomonas aeruginosa.

Se incuban las placas a 30-35°C durante 18-24 horas con muestras pre enriquecidas en Soja
Triptona (TSB), Caldo. El crecimiento de colonias sobre este medio indica presunción de
P.aeruginosa.

Control de calidad:

Aspecto: Polvo fino

Solubilidad: Opalescente con precipitado
Color: Beige
pH: 7,2 - 0,2

Control Microbiológico:

Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a
temperatura de 30-35°C y observada ha las 18-72 horas, después de haber añadido 10 ml de
glicerina.
 Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia

Escherichia coli Inhibido -

Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio Amarillo-Verde Azul

Staphylococcus aureus Inhibido -

Caldo Triptona de Soya:

Se emplea como medio de uso general para el cultivo de todo tipo de microorganismos.

Fundamento:

Por el contenido de peptona de soja y peptona de caseína resulta una aportación nutritiva que
permite el desarrollo óptimo de un gran número de microorganismos, tanto o como base para
preparar medios especiales (Agar Sangre, Agar Proteus).

Fórmula por litro del Agar

Composición g/l Cantidad

Peptona de Soja 3,0 g

Peptona de Caseína 17,0 g

D(+)-Glucosa 2,5 g

di-Potasio Hidrógeno Fosfato 2,5 g

Sodio Cloruro 5,0 g

pH 7,3 - 0,2

Procedimiento:

Suspender 30 g en 1L de agua destilada, mezclar bien y calentar ligeramente hasta disolución

total. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Modo de empleo:
Tratar el medio según los fines a conseguir.

Control de calidad:
Aspecto: Polvo fino
Solubilidad: Total
Color: Beige Claro
pH: 7,3 - 0,2

Control Microbiológico:

Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a
temperatura de 37°C.

Microorganismos Desarrollo Hemólisis

Neisseria meningitidis Bueno -

Staphylococcus epidermidis Bueno -

Staphylococcus aureus Bueno beta

Streptococcus pneumoniae Bueno Alfa

Streptococcus pyogenes Bueno beta

OBJETIVOS
● Detectar la ausencia o presencia de Pseudomonas aeruginosa en productos cárnicos
como el pollo.
● Conocer su forma macroscópica para el medio de cultivo empleado.

MATERIALES

● Cajas de Petri
● Frascos schott
● Espátula
● Vidrios de reloj
● Mecheros
● Asas

EQUIPOS

● Incubadora a 37°C
● Balanza
● Autoclave
● Nevera 4ºC

MÉTODO - PROCEDIMIENTO
 ● Técnica ausencia-presencia

Día 1:
Pre - enriquecimiento en medio no selectivo:

1. Alistamiento del material a utilizar.

2. Preparar 225 ml de caldo peptona en una concentración y medir 40 ml agua destilada
necesaria para preparar el medio.
3. Autoclavar el caldo peptona, el agua para la preparación del medio, el agua para el
caldo Triptona de Soya y el material para necesario para pesar.
4. Agregar 25 gramos de muestra al caldo peptona y preparar el medio CAB (Cetrimida
Agar Base), posteriormente servir en dos cajas de Petri, dejar gelificar y llevar a la
nevera.
5. Respectivamente enviar el caldo Triptona de Soya a la nevera para el día siguiente.
6. Incubar a 37ºC el frasco schott con el caldo peptona y la muestra de 24 a 48 horas.

Día 2:
Enriquecimiento selectivo:

1. Del pre-enriquecimiento preparado el día anterior, tomar 1000 microlitros con una
micropipeta y agregarlos a un tubo de ensayo que contiene nuestro Caldo Triptona de
Soya.
2. Incubar nuestro tubo de ensayo a 37°C por 24 horas.

Día 3:
Aislamiento o siembra en medio selectivo:

1. A partir del caldo de enriquecimiento líquido preparado con anterioridad, este deberá ser
inoculado en una caja de Petri cada 1 utilizando un asa microbiológica estéril.
2. Una vez listo nuestro medio selectivo sólido, se deberá enviar a incubación nuestras
cajas de Petri previamente vinipeladas a una T° de 37°C por 24 h.
Día 4:
Expresión de resultados:
Presencia o Ausencia para Pseudomona aeruginosa

RESULTADOS
 Análisis Medio de cultivo Características Macros. Imagen

Caja No. 1. Cetrimide ➢ Colonias circulares e

irregulares en su
mayoría
➢ De tonalidad amarilla
opaca.
➢ Colonias Crateriformes
brillantes.

Caja No. 2. Cetrimide ➢ Colonias circulares e

irregulares en su
mayoría
➢ De tonalidad amarilla
opaca.
➢ Colonias Crateriformes
brillantes.

Ausencia de Pseudomonas Aeruginosa.

 DISCUSIÓN

En nuestro medio no se identifica un crecimiento de P. aeruginosa posiblemente porque la

muestra cárnica fue suministrada en las cocinas del SENA y según la información suministrada
por uno de los instructores de la cocina, nos hace referencia que el proveedor cumple con un
sistema de inocuidad en el cual se garantiza su crianza, BPAV y la cadena de frío.

La P. aeruginosa produce infecciones locales en pollitos jóvenes o en etapa de crecimiento,

contaminando los huevos fértiles y causando la muerte a embriones y a pollitos recién salidos
de su cascarón.

Como causa de esta infección un ave con hinchazones y hemorragias producidas por este
microorganismo que no se le dé un manejo adecuado y se sacrifiquen y comercialicen estas
canales, aeruginosa siendo un bacilo móvil podría contaminar toda la canal y contagiando a la
persona por la ingesta de este.
La Pseudomona aeruginosa al encontrarse ampliamente distribuida en el suelo, agua y en el
ambiente, las especies que más se encuentran susceptibles son los pollos, pavos, patos,
faisanes, gansos avestruces y aves exóticas.
En los pollos las partes donde más se presentan estas inflamaciones son en la zona plantar, en
los ojos puede causar conjuntivitis, en patas artritis y periartritis.
Si se realiza la detección temprana se debe eliminar el agente causal siendo de manera
importante mantener una higiene estricta en las incubadoras y en la introducción de
inyecciones en aves para poder prevenir la infección por Pseudomonas. En muchos de los
casos su eliminación resulta bastante difícil debido a que es resistente a un alto número de
drogas antimicrobianas.

P. aeruginosa tiene importancia para el hombre tanto porque le representa problemas, como
porque puede ser útil en el tratamiento de la contaminación ambiental. Contrariamente a lo que
parece, todos nosotros estamos en contacto diariamente con Pseudomonas aeruginosa, ya que
se encuentra en bajas cantidades en nuestros alimentos y en algunos artículos de limpieza. De
hecho, se obtienen aislamientos de esta bacteria a partir de entre el 2 y el 8% de las heces de
personas sanas, lo que nos muestra que nuestro contacto con esta bacteria es cotidiano y sólo
representa una amenaza para nuestra salud en condiciones especiales.

Aquellas colonias que crecieron en nuestro medio, corresponden a la especie Proteus, según
información suministrada por la instructora, Proteus es un género de bacterias gramnegativas,
que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario, heridas y
neumonía. Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa y son oxidasa-
negativas y ureasa-positivas. Este tipo de bacterias se encuentra ampliamente distribuido en la
naturaleza, son móviles y no forman esporas. Estas bacterias forman o producen el fenómeno
swarming, el cual trató de presentarse en nuestro medio aunque en las imágenes no pueda
verse claramente. La presencia de este microorganismo puede darse seguramente a un
ambiente contaminado, pues como lo mencionamos anteriormente, el proveedor cumple con un
sistema de inocuidad en el cual se garantiza su crianza, BPAV y la cadena de frío, del pollo
muestra.
Ocasionalmente, algunas cepas de Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Proteus;
anteriormente mencionada, Alcaligenes y Aeromonas pueden crecer en el medio de cultivo
generando un color amarillo muy suave en este.
 RECOMENDACIONES

● Es recomendable realizar una correcta manipulación de los alimentos. Cumplir con los
tiempos y temperaturas de cocción para reducir al máximo la supervivencia de
Pseudomona.
● En las plantas de producción es de vital importancia la rotación de productos
desinfectantes para que los microorganismos no creen resistencia.
● Realizar un chequeo periódico de las ppm que se están dosificando por el aparato o de
forma manual por el operario realizando las respectivas calibraciones o usando las
herramientas más adecuadas para esta operación.
● Si se manifiesta alguna sintomatología, visitar al médico para que diagnostique la
problemática y formule el antibiótico pertinente para Pseudomona si es el caso, debido
a que Pseudomona es resistente a diferentes antibióticos. No auto medicarse.

CONCLUSIONES

● P. aeruginosa sobresale entre las bacterias por su extraordinaria capacidad de

adaptación. No se determinó presencia de este microorganismo en la muestra
analizada, aun así, no se encuentra dentro de los requisitos microbiológicos para el
pollo según la NTC, por tanto podemos decir que respecto a este género de bacterias
cumple con la norma.
● No fue posible conocer la forma macroscópica de P. aeruginosa debido a su ausencia.
● La importancia de Proteus en un alimento se debe a su peligrosidad para la salud por
corrupción de los alimentos, por esta razón es un indicador de calidad y debe ser
analizado.

BIBLIOGRAFÍA

http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa
http://www.slideshare.net/sangel06/manual-de-medio-de-cultivos
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/cetagarbase.htm
http://www.biblioweb.tic.unam.mx/libros/microbios/Cap3/
http://www.pseudomonas.com/
http://www.fenavi.org/index.php?
option=com_content&view=article&id=1650&Itemid=587&limitstart=1&limit=1
http://www.elsitioavicola.com/publications/6/enfermedades-de-las-aves/248/infecciones-
producidas-por-empseudomona-aeruginosa-em
http://www.scribd.com/fullscreen/75268545?access_key=key-
2a60kpv4tn30600kanbx&allow_share=true&escape=false&view_mode=scroll
http://www.slideshare.net/trecemicro/proteus