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DEPARTAMENTO: CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

LABORATORIO DE SISTEMAS PERIODO 201811 PREGRADO. S-II.
ASIGNATURA: NIVEL: 1
BIOLÓGICOS LECTIVO: OCTUBRE 18 – FEBRERO 19
DOCENTE: LOURDES KARINA PONCE LOAIZA NRC: 4076, 4077, 4079, 4080 PRÁCTICA N°: 4
LUGAR DE LA PRÁCTICA: DOCENCIA DE BIOTECNOLOGÍA. PLANTA BAJA. BLOQUE G.
IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLÉCULAS: CARBOHIDRATOS, PROTEÍNAS Y LÍPIDOS EN
TEMA DE LA PRÁCTICA: MUESTRAS DE ALIMENTOS: VERDURAS, FRUTAS U OTROS, UTILIZANDO LOS
REACTIVOS DE LUGOL, BENEDICT’S, BIURET Y SUDAN III.
INTRODUCCIÓN:
Los seres vivos, desde su unidad fundamental (la célula), están constituidos por carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, azufre y
fósforo (Mader, 2013; Tortora, Funke, Case, 2013; Reece, Taylor, Simon, Dickey, 2012; Miller, Levine, 2010; Willey, Sherwood,
Woolverton, 2008; Brown, A. 2007). Estos macro elementos (nominados así: por su alta concentración en las células) se combinan
formando compuestos de complejidad diversa (Tortora et al., 2013; Reece et al., 2012; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008).
Adicionalmente, para que las células funcionen necesitan micro elementos y oligo-elementos, cuyas concentraciones en la célula
son bajas, pero son relevantes por su intervención en procesos catalíticos vitales en las células como la polimerización, la
replicación o el transporte celular, por mencionar algunos (Reece et al., 2012; Miller, 2010). Las moléculas de mayor importancia se
encuentran formando polisacáridos estructurales de alto peso molecular, como los carbohidratos, proteínas, ácidos nucleicos y
lípidos, que a la vez son polímeros porque pueden estar formados por pequeñas moléculas llamados monómeros (Mader, 2013).
Estos polímeros forman las membranas y paredes celulares, el citoesqueleto, estructuras de motilidad y adherencia como los cilios,
fimbrias y flagelos, por ejemplo; entre los micro – elementos y oligoelementos se puede mencionar los iones sodio (Na+), potasio
(K+), magnesio (Mg+2), calcio (Ca+2) y las vitaminas; todos ellos son importantes cofactores de las reacciones químicas a partir de
las cuales se da el metabolismo celular (descomposición y formación de las macromoléculas) (Mader, 2013; Reece et al., 2012;
Tortora et al., 2013; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008).
Se puede identificar las macromoléculas y medir su concentración en diferentes sustancias que provienes de seres vivos (Mader,
2013; Tortora et al., 2013; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008). Hay que considerar que la materia orgánica es utilizada como
fuente de nutrientes para otros seres vivos dando lugar a una transformación constante de la materia en los sistemas biológicos
(Brown, 2007). Las biomoléculas pueden ser utilizadas para la obtención de energía química, necesaria como combustible celular
en la construcción de nuevas moléculas que serán destinadas a cumplir funciones estructurales, catalíticas, metabólicas o
señalizadoras (Mader, 2013; Tortora et al., 2013; Reece et al., 2012; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008). La identificación
cualitativa se hace enfrentando dichas macromoléculas a reactivos químicos cuya afinidad dará lugar a cambios de coloración de la
matriz analizada (Mader, 2013). Los lípidos pueden ser solubles en agua, siempre y cuando sean tratados con molecular
anfipáticas que las rodean dando lugar a emulsiones. Se puede entonces observar fenómenos de saponificación, donde los lípidos
se descomponen a ácidos grasos y glicina (Mader, 2013; Reece et al., 2012).
En esta práctica de laboratorio se estudiarán las moléculas orgánicas de las células:
Carbohidratos (monosacáridos, disacáridos, polisacáridos). Incluye los azúcares y moléculas que contienen cadenas de azúcar; la
glucosa tiene una sola unidad de azúcar (monosacárido); la maltosa, lactosa, celobiosa dos azúcares (disacárido); el glucógeno,
almidón y celulosa son polisacáridos, pues tienen muchas unidades de glucosa (monómero); la glucosa es usada como fuente de
energía para los organismos, los animales contienen glucosa y glucógeno, mientras las plantas glucosa y almidón, y además sus
paredes celulares están compuestas de celulosa (Mader, 2013).

Tomado de Mader, 2013

La presencia de almidón se puede identificar al reaccionar con una solución de yodo (color amarillo-café), que cambiará a color
azul-negro, lo que se debe a que las moléculas de iodo se alojan en la estructura espiral del almidón (Mader, 2013).
Los monosacáridos (como la glucosa) y algunos disacáridos (maltosa) reaccionan con el reactivo de Benedict’s, donde los iones de
cobre reacciona con las moléculas de azúcar y es reducida, dando un color verde, amarillo, naranja hasta rojo (Mader, 2013;
Miller, 2012).
Las proteínas tienen numerosas funciones en las células, los anticuerpos son proteínas que se combinan con los patógenos; la
hemoglobina es una proteína que transporta oxígeno por todo el cuerpo, albúmina es otra proteína de transporten la sangre; la
hormona insulina regula la glucosa en la sangre (proteína reguladora); proteínas estructurales son la keratina encontrada en el
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cabello, miosina componente de los músculos; enzimas reaccionan químicamente como las amilasas (Mader, 2013). Contienen un
número largo de aminoácidos (el monómero), unidos por enlaces péptidicos; una cadena de dos o más aminoácidos son llamados
péptidos, unidos por enlaces peptídicos, un polipéptidos es una cadena larga de aminoácidos; una proteína contiene unos o más
cadenas de polipéptidos, ejemplo la insulina contiene una cadena simples, la hemoglobina tiene 4 polipéptidos (Mader, 2013).

Tomado de Mader, 2013

Pueden ser detectadas con el reactivo de Biuret compuesto de sulfato cúprico (CuSO4)m tartrato de sodio y potasio
(KNaC4O6·4H2O), además de péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos, el reactivo cambia de color
azul a violeta si la reacción es positiva para proteínas y vira a rosa si existen polipéptidos de cadena corta, porque los enlaces de
las proteínas o péptidos se combinan con los iones de cobre (Mader, 2013).
Lípidos son componentes que son insolubles en agua y solubles en solventes (no polares), como el alcohol o éter; incluyen:
grasas, aceites, fosfolípidos, esteroides y colesterol; las grasas como el tejido adiposo de los animales y los aceites como los
provenientes de vegetales, están compuestos de 3 moléculas de ácidos grasos unidos a una molécula de glicerol; los fosfolípidos
poseen la misma estructura que las grasas; estas últimas dan energía al cuerpo humano; el colesterol, molécula transportada en la
sangre, está implicada e enfermedades cardiovasculares, entre los ejemplos de esteroides están las hormonas sexuales (Mader,
2013).
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Tomado de Mader, 2013

Para detectar la presencia de lípidos se utilizará el reactivo de Sudan III (soluble en grasas-lisocromo), que produce una reacción
hidrofóbica, donde los grupos no-polares (los hidrocarbonos) se agrupan y son rodeados de moléculas del reactivo, tiñe los lípidos
o hidrocarbonos de rojo (Miller, Levine, 2010)
El laboratorio tiene como fin: identificar los carbohidratos, proteínas y lípidos en muestras de alimentos, verduras, frutas y otros.
OBJETIVOS:
 Identificar y diferenciar terminología acerca de las biomoléculas en base a bibliografía confiable.
 Definir con criterio los pasos necesarios para realizar el experimento en forma individual y grupal.
 Reconocer adecuadamente las moléculas esenciales para la vida, los grupos funcionales y sus características.
 Establecer con criterio la importancia de las macromoléculas en los sistemas biológicos, desde la célula.
 Realizar y responder con criterio preguntas relacionadas con temática biomoléculas en los sistemas biológicos.
 Diferenciar apropiadamente actividades prácticas aplicables en la detección cualitativa de macromoléculas.
 Utilizar correctamente instrumentos y reactivos en el laboratorio para preparación de soluciones y evaluación química de
macromoléculas, respetando normas de bioseguridad y el medio ambiente.
 Adquirir destrezas en la manipulación de instrumentos y reactivos, siguiendo normas universales.
 Determinar cualitativamente las biomoléculas (carbohidratos, proteínas y lìpidos) presentes en muestras biológicas
(alimentos), en base a bibliografía confiable y observaciones con criterio.
 Discutir con criterio sobre las reacciones obtenidas para las biomoléculas analizadas y presentes en cada muestra.
 Realizar apropiadamente registros fotográficos y/o videos de resultados en red social para la asignatura, cuaderno de laboratorio
y aula virtual.
 Compartir los resultados obtenidos entre los compañeros de la clase y los demás paralelos.
 Respetar plazos de tareas programadas al cumplir con un control de lectura e investigación en el cuaderno de laboratorio.
 Mantener correctamente el cuaderno de laboratorio con investigación científica actualizada de la práctica y sus resultados.
 Redactar correctamente un informe con uso de método científico en base a la práctica de laboratorio.
MATERIALES:
REACTIVOS: Reactivo de Benedict’s, Biuret, Lugol, Sudán III,
INSUMOS: Tubos de ensayo de vidrio (entre 3 y 5 mL),
alcohol antiséptico, alcohol 96%, glicerol; controles: almidón,
mortero con pistilo, pinzas para tubo de ensayo, Erlenmeyer,
glucosa, dextrosa, manosa, galactosa, fructuosa, maltosa, xilosa,
cuchillos, gradillas, espátulas, cucharas, probetas, vasos de
sucrosa, celobiosa.
precipitación, cita masking, pipetas desechables, guantes para
MATERIALES DE PROTECCIÓN PERSONAL: Mandil manga
calor, Tijeras, parafilm,
larga y puño, mascarilla y guantes.
EQUIPOS: Balanza, plancha térmica.
MUESTRA: Alimentos que contengan carbohidratos, proteínas y lípidos, como: Nueces, maní, grenetina, azúcar, almidón
(calentar), jugo de frutas, clara de huevo 50%, hongos, leche, aceite de cocina, queso, papas, aguacate, mellocos, granos frescos
(habas, frejol, choclo) otros alimentos.
ORGANISMOS: Ninguno
INSTRUCCIONES:
 Revisar la información subida al aula virtual o grupo de Facebook u otro destinado a la clase.
 Preparar el cuaderno de investigación con las características explicadas en la clase introductoria.
 Obtener y resumir información en el cuaderno de investigación sobre los temas planificados según sílabo: Macro y
micromoléculas en la estructura de la célula y los organismos vivos; y responder las siguientes preguntas: Qué diferencia existe
entre azúcares reductores y no reductores, mencione ejemplos de cada uno?, ¿Por qué la sacarosa es un azúcar no reductor,
cuáles son sus características?, ¿Cuáles son las reacciones obtenidas en la identificación de carbohidratos, proteínas y lípidos.
 Pegar o transcribir los objetivos y procedimiento de esta guía de laboratorio.
 Depositar mochilas u otro en los lugares destinados a la entrada de los laboratorios de docencia.
 Portar mandil manga larga con puño y cerrado, zapatos cerrados, pantalón, cabello recogido, cuaderno y esferos.
 Ingresar al laboratorio con tiempo antes de la hora asignada, ya que, la clase empieza puntualmente. Un estudiante o el docente
según planificación realiza una exposición para dar inicio a la introducción y análisis del tema.
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
Preparación de soluciones al 1% aproximadamente de muestras de alimentos y controles
1. Si se tratan de muestras sólidas triturar en un mortero, y líquidas hacer las respectivas mediciones para obtener cantidad
suficiente según volumen de tubos de ensayo provistos.
2. Según identificación preparar controles positivos (almidón, glucosa u otro, clara de huevo, aceite de cocina) y negativos (agua,
alcohol 96% en el caso de lípidos).
3. Agregar con pipetas desechables u otras, la cantidad adecuada para los tubos de ensayo provistos en un máximo de la mitad
del volumen.
4. Rotular tubos con marcadores sobre el tubo o con etiquetas adhesivas.
5. Anotar en los cuadernos, las muestras a analizar, haciendo tablas para reporte de resultados, donde se identifique controles,
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muestras, diluciones, reacciones, reactivos y biomolécula a analizar.

Identificación de almidón
1. Añadir 5 a 10 gotas de solución de yodo a los tubos conteniendo las soluciones de muestras y controles.
2. Mezclar, observar y reportar resultados.

Identificación de azúcares
1. Añadir 5 a 10 gotas de Reactivo de Benedict’s (color azul) a los tubos conteniendo las soluciones de muestras y controles.
2. Mezclar y llevar a baño María por 5 a 10 minutos
3. Observar y reportar resultados.

Identificación de proteínas
1. Con una pipeta desechable o otra colocar 3 mL de muestra o según volumen de tubo provisto, puede usar como control
albúmina de huevo (clara).
2. Añadir 10 gotas de reactivo de Biuret y mezclar.

Identificación de lípidos
1. Añadir 10 gotas de Sudán III, tomar en cuenta hacer soluciones en alcohol si necesita diluir una muestra.
2. Agitar, observar y reportar resultados.

Aplicaciones:
1. Elaboración de bioplástico
a. Prepare 15 gramos de almidón:
i. Pesar desechos de papa (200g) y lavarlos
ii. Triturar las papas y cernir en un vaso de precipitación
iii. Dejar precipitar el almidón
iv. Hacer lavados sucesivos con agua destilada y etanol
b. Colocar 15g de almidón, 70mL de agua y 15 mL de Glicerol
c. Agitar hasta tener una mezcla homogénea
d. Colocar la mezcla en la hornilla
e. Mezcla constantemente hasta que llegue a punto de ebullición
f. Disminuir al mínimo la intensidad del calor
g. Mantener 15 minutos a baño maría en hervor. La mezcla va a adquirir una apariencia de pasta vizcosa
h. Colocar la mezcla en moldes
2. Películas poliméricas
a. Preparar una suspensión de almidón al 10%
b. Calentar a 80°C durante 30 minutos
c. Agregar glicerol al 5% p/v
d. Enfriar a temperatura ambiente, colocar en moldes y secar a 50°C hasta que el peso sea constante
RESULTADOS OBTENIDOS:
 Identificación de carbohidratos, proteínas y lípidos en diferentes muestras de alimentos.
 Observación de reacciones de cada identificación de macromoléculas con diferentes metodologías.
CONCLUSIONES:
Al final de la práctica el estudiante:
 Identifica y diferencia terminología acerca de las biomoléculas.
 Reconoce las moléculas esenciales para la vida, los grupos funcionales y sus características.
 Discrimina la relevancia de la dinámica de las macromoléculas en los sistemas biológicos.
 Distingue diferencias entre carbohidratos, proteínas y lípidos.
 Realiza y responde preguntas relacionadas con la temática de biomoléculas.
 Diferencia actividades prácticas aplicables en la detección cualitativa de macromoléculas.
 Utiliza instrumentos y reactivos en el laboratorio para preparación de soluciones y evaluación química de macromoléculas,
respetando normas de bioseguridad y el medio ambiente.
 Adquiere destrezas en la manipulación de instrumentos y reactivos.
 Determina cualitativamne biomoléculas presentes en muestras biológicas de alimentos, en base a bibliografía confiable
y observaciones.
 Identifica biomoléculas (carbohidratos, proteínas y lìpidos) presentes en muestras biológicas (alimentos).
 Discute sobre las reacciones obtenidas para las biomoléculas analizadas y presentes en cada muestra.
 Identifica y diferencia diferentes metodologías para identificación de biomoléculas en alimentos.
 Realiza registros fotográficos y/o videos de resultados en red social para la asignatura, cuaderno de laboratorio y aula virtual.
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 Registra información, resultados u observaciones experimentales.

 Comparte los resultados obtenidos entre los compañeros de la clase y los demás paralelos.
 Respeta plazos de tareas programadas al cumplir con un control de lectura e investigación en el cuaderno de laboratorio.
 Mantiene el cuaderno de laboratorio con investigación científica actualizada de la práctica y sus resultados.
 Redacta correctamente un informe con uso de método científico en base a la práctica de laboratorio.
 Asiste puntualmente a clases.
 Planifica la siguiente investigación: Uso del microscopio.
RECOMENDACIONES:
 Anotar cada uno de los detalles del proceso de la práctica y resultados obtenidos.
 Portar siempre el mandil cerrado.
 Limpiar superficies con savlon diluido y lavarse las manos con jabón.
 Asegurarse de que todo el material está limpio y en completo orden para poder salir.
 Depositar todos materiales en la canasta destinada.
BIBLIOGRAFÍA:
• Brown, A. 2007. Bensons Microbiological applications. Laboratory Manual in general microbiology. Editorial interamericana Mc.
Graw Hill. Eighth edition. U. S. A.
• Campbell, N., Reece, J, Molles, M, Urry, L, Heyden, R. 2007. Biología. Editorial médica panaméricana. España.
• Mader, S., 2013. Laboratory Manual to accompany Biology. Mc Graw Hill. Eleventh edition. USA.
• Miller, K., Levine, J. 2010. Biología. Pearson. Edición en español. USA.
• Reece J., Taylor, M., Simon, E., Dickey, J. 2012. Campbell Biology. Concepts & Connections. Pearson. Seventh edition. USA.
• Tortora, G., Funke, B., Case, Ch. 2013. Microbiology. An introduction. Pearson. Eleventh edition. U. S. A.
• Willey, J., Sherwood, L., Woolverton, C. 2008. Microbiología de Prescott, Harley y Klein. Mc. Graw Hill. Séptima edición. España.
AUTORÍA DE GUÍAS PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO: Lourdes Karina Ponce Loaiza y María Fernanda Loayza Villa
(Docentes de la Carrera de Ingeniería en Biotecnología - Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE). Edición: 17/05/2018.
FIRMAS

Nombre: KARINA PONCE LOAIZA M. S. Nombre: VALERIA OCHOA M. S. Nombre: PATRICIA JÍMENEZ PH. D.
DOCENTE DE LA CARRERA COORDINADOR DE ÁREA DE COORDINADOR DE LABORATORIOS
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA CONOCIMIENTO DE BIOTECNOLOGÍA

ANEXO
Preparación de reactivos:
 Benedict
Disolver 100 g de Carbonato anhídro de sodio (Na2CO3), 175 g de citrato de sodio, 17.3 g de Sulfato cúprico (CuSO4.5H2O) en un
litro de agua destilada.

 Biuret
Disolver 1,5 g de sulfato cúprico (CuSO4) y 6,0 g de tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O) en 500 mL de agua en un matraz
aforado de 1 litro. Agregar 300 mL de solución de hidróxido de sodio libre de carbonato (1 en 10), diluir con solución de hidróxido de
sodio libre de carbonato (1 en 10) a 1 litro y mezclar.

 Reactivo Sudán III

Disolver 0,5 g. de Sudán III (1-((4-(fenildiazenil)fenil)diazenil) naftaleno-2-ol) en 100 mL. de alcohol al 80%, calentar a 50° en baño
María. Fórmula: C22H16N4O