ARTÍCULO

pubs.acs.org/Langmuir

Síntesis de crecimiento de semillas controladas cinéticamente de

nanopartículas de oro estabilizadas con citrato de hasta 200 nm:
concentración de tamaño versus maduración de Ostwald
,† †, ‡, § , †, §, ||
Neus G. Bast? Us, * Joan Comenge, y Víctor Puntes *
†
Institut Catal ? a de Nanotecnologia (ICN), Campus UAB, 08193 Bellaterra, Barcelona, España
‡
Laboratorio Ibérico Internacional de Nanotecnología (INL), Av. Central 100, 4710-229 Braga, Portugal
§
Universitat Autonoma ?de Barcelona (UAB), Campus UAB, 08193 Bellaterra, Barcelona, España
Institut Catal ? a de Recerca i Estudis Avanc ) ats (ICREA), 08010 Barcelona, España
(

b S Información complementaria
RESUMEN: Se sintetizaron nanopartículas de oro
estabilizadas con citrato monodispersas con una forma
Langmuir 2011 27: 11098-11105. por TULANE UNIV el

cuasi esférica uniforme de hasta ∼ 200 nm y una distribución de

tamaño estrecha siguiendo una estrategia de crecimiento de
semillas controlado cinéticamente mediante la reducción de
HAuCl 4 por citrato de sodio. La inhibición de cualquier
nucleación secundaria durante el crecimiento homogéneo se
controló ajustando las condiciones de reacción: temperatura,
precursor de oro a la concentración de partículas de semilla y
pH. Este método presenta
.22/01/19. Sólo para uso personal

mejores resultados con respecto al método tradicional de Frens en varios aspectos: (i) produce partículas de mayor monodispersidad;
(ii) permite un mejor control del tamaño y la distribución del tamaño de las nanopartículas de oro; y (iii) conduce a concentraciones
más altas. Las nanopartículas de oro sintetizados siguiendo este método se pueden funcionalizar adicionalmente con una amplia
variedad de moléculas, por lo tanto, este método parece ser un candidato prometedor para su aplicación en las fi campos de la
biomedicina, fotónica y electrónica, entre otros.

' INTRODUCCIÓN acompañado de una 13

segunda población14
de partículas en forma de
varilla . Murphy y Liz-Marzan mejoraron aún más este
Descargado de pubs.acs.org

Tamaño y la forma de control de nanopartículas metálicas

(NPS) ha sido el foco de continua e ff Orts durante las últimas trabajo al informar sobre la síntesis de NP de Au monodispersas
décadas. En particular, las NP de Au se han estudiado de hasta ∼ 180 nm de diámetro utilizando ácido ascórbico como
intensamente debido a sus propiedades fisicoquímicas agente reductor y bromuro de cetil-trimetilamonio (CTAB) como
1 tensioactivo catiónico. . Aunque los métodos basados en CTAB
dependientes del tamaño y la forma , que son de enorme interés
para aplicaciones en fotónica, catálisis, electrónica y biomedicina. permiten el control de la morfología de NP de Au, el uso de
1,2 moléculas que se unen fuertemente a la superficie de Au restringe
La síntesis de citrato estabilizado Au NPs basado en el
de una sola fase de reducción acuosa de tetra- ácido choloauric la posibilidad de funcionalización adicional porque
15
su reemplazo /
(HAuCl 4 ) por 3citrato de sodio, inicialmente desarrollado por desplazamiento por tioles es difícil de lograr. Esta condición es
4 especialmente importante en la biomedicina, donde la capacidad
Turkevich et al. en 1951 y más re fi nida por Frens et al., sigue
siendo el método más comúnmente empleado acuosa. Siguiendo de rendir una funcionalidad biológica a nanoestructuras
esta estrategia, es posible controlar el tamaño de NP de Au de 5 a inorgánicas es una de las piedras angulares de este emergente fi
150 nm simplemente variando las condiciones de reacción ELD. En este contexto, las NP de Au estabilizadas con citrato son
4 5 candidatas únicas porque la capa de cobertura ligeramente unida
(relación de6
citrato de sodio a sal de oro, pH de la solución, y
disolvente ). Sin embargo, la calidad (tamaño y distribución del proporcionada por el citrato de sodio puede intercambiarse
tamaño) de las partículas es bastante mala y las formas obtenidas fácilmente por moléculas tioladas que se unen
16
son no uniformes e irregulares, como cuasiesferas, elipsoides y pseudocovalentemente ( ∼ 45 kcal / mol) a la superficie del oro.
7 De esta manera, Au NPs17derivadas con proteínas, péptidos,
triángulos. 19
anticuerpos, y tiolado ADN se han utilizado en la promesa de
aplica- ciones en las fi campos de diagnóstico, la terapia, la
Hoy en día, mediadas por la siembra de estrategias de síntesis entrega, y la detección, entre otros.
20
basado en la separación temporal de los procesos de nucleación y
de crecimiento se considera que es muy e FFI métodos cientes
8,9
para controlar el tamaño Au NP y dar forma con precisión. Por lo tanto, el desarrollo de rutas alternativas que conduzcan
Natan y sus colaboradores fueron pioneros en el crecimiento tanto a una alta monodispersidad como a una química superficial
sembrado de NP de Au utilizando agentes reductores suaves como versátil todavía
10 11,12
el citrato de sodio o la hidroxilamina para obtener NP de
Au de hasta 100 nm de diámetro. Aunque las NP resultantes Recibido: 24 de mayo de 2011
mostraron propiedades físicas mejoradas en comparación con las Revisado: 30 de junio de 2011
3+
obtenidas por la reducción de citrato de Au (método de Frens), Publicado: 5 de julio de 2011
su síntesis fue

r2011 Sociedad Química Estadounidense 11098 dx.doi.org/10.1021/la201938u | Langmuir 2011, 27, 11098–11105

 
Langmuir ARTÍCULO

sigue siendo una tarea desafiante para NP de Au de más de 40
nm. En este contexto, varias estrategias de síntesis
mediadas por semillas , basadas en el uso de ácido
21 22
2-mercaptosuccínico o ácido ascórbico como reductores
experimentos. Todo el material de vidrio se limpió con acetona,
se enjuagó con agua desionizada y se almacenó a 150 L C antes de
su uso.
Síntesis de nanopartículas de oro. Síntesis de Au Seeds. UNA
agentes en disolventes acuosos, se han informado recientemente.
13,14
En la fi primer caso, como cuando se utiliza CTAB, el
crecimiento es controlado por
las moléculas de tensioactivo fuertemente unidas, lo que
compromete una mayor funcionalización de las NP. En el segundo
caso, se cultivaron NP de Au en una amplia gama de tamaños
mediante la incorporación de pequeños racimos de oro en la
superficie de las partículas de semillas. La recristalización
mediada por calor adicional condujo a NP de Au cuasi esféricas a
través de un proceso de maduración entre partículas. En este
trabajo, estudiamos las condiciones por las cuales es posible
obtener NP de Au grandes estabilizadas con citrato a través de un
método de crecimiento sembrado mientras se suprime la nueva
nucleación de partículas. Este método permite un mejor control
de la fi nal tamaño Au NP y proporciona partículas
extremadamente estables y fácilmente funcionalizados.
En este documento, se describe una estrategia de crecimiento
sembrado para la síntesis de NP de Au estabilizadas con citrato
grandes controladas por tamaño y forma basada en el sistema de
reacción clásico de Turkevich / Frens. Se centra en la inhibición
de la nucleación secundaria durante el proceso de crecimiento
homogéneo, lo que permite el agrandamiento3+de NP de Au pre-
sintetizadas a través de la reducción de Au catalizada en la
superficie por citrato de sodio. El éxito del método se basa en el
control cinético del proceso de crecimiento mediante el ajuste de
las condiciones de reacción, en detalle, la temperatura, el nivel de
pH y la concentración de semillas. Destaca en varios aspectos: (i)
produce partículas de alta monodispersidad; (ii) permite que las
partículas más pequeñas se conviertan en partículas más grandes
de un tamaño predeterminado; y (iii) conduce a mayores
concentraciones de NP de Au en relación con el método de Frens
(de 3
12 9
10 NPs / ml, 8,5 nm a 5 10 NPs / ml, 180,5 nm). Además,
proporciona aspectos clave, identificando y explicando las
importantes variables sintéticas que deben ser controladas para
controlar la morfología de Au NP. Los resultados muestran la
preparación reproducible de NP de Au estabilizadas con citrato
con una forma cuasi esférica uniforme de 10 a ∼ 180 nm, una
distribución de tamaño estrecha y una concentración controlada.
Estos resultados permiten ampliar la conocida aplicabilidad de
estos NP en aplicaciones biológicas y biomédicas. Por lo tanto, los
NP de Au grandes surgen como candidatos ideales para el
20
bioetiquetado debido a su mayor contraste electrónico. Del
mismo modo, la intensa absorción visible de mayor Au NPs (que
se traduce en mucho mayor electromagnéticos locales fi campos)
promueve su uso como una mayor superficie de agentes
23
espectroscopía Raman (SERS) con una actividad superior. El di
ff ER- ent comportamiento acumulación / penetración de Au NPs
en los tumores hace que el control preciso de la tamaño Au NP
24
necesario. Además, el aumento del tamaño de Au NP (que
conlleva una disminución de los radios de curvatura) aumenta la
densidad numérica de moléculas que se pueden liberar. Además,
la biodistribución dependiente del tamaño de las25NP de Au junto
con la elucidación de su toxicidad potencial, generalmente
relacionada con la morfología,
26
composición o revestimiento de la
superficie de las NP, requiere un amplio catálogo de NP con
tamaño y morfología controlados y estructura idéntica. ,
composición y química superficial. Este método puede ser
potencialmente adaptada para procesos continuos como en fl
reactores OW, donde la producción de un gran número de
partículas de la más alta calidad es una limitación de Au NP
implementación de la tecnología.
' SECCIÓN EXPERIMENTAL
Materiales Se adquirieron HAuCl 4 3 3H 2 O (99%) y citrato
trisódico (99%) de Sigma-Aldrich. Se utilizó agua Milli-Q en todos
Langmuir
Se calentó una solución de citrato de sodio 2,2 mM en agua Milli-Q (150 ml) con
una manta calefactora en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 250 ml
durante 15 min con agitación vigorosa. Se utilizó un condensador para evitar la
evaporación del disolvente. Una vez que había comenzado la ebullición, se
inyectó 1 ml de HAuCl 4 (25 mM). El color de la solución cambió de amarillo a
gris azulado y luego a rosa suave en 10 min. Las partículas resultantes ( ∼ 10
12
nm, ∼ 3 10 NP / ml) se recubren con iones citrato cargados negativamente y,
por lo tanto, se suspenden bien en H 2 O.
Crecimiento sembrado de NP de Au de hasta 30 nm de diámetro.
Inmediatamente después de la síntesis de las semillas de Au y en el mismo
recipiente, la reacción se enfrió hasta que la temperatura de la solución alcanzó
90 L C. Luego, 1 mL de citrato de sodio (60 mM) y 1 mL de una solución de
HAuCl 4 (25 mM) se inyectaron secuencialmente (retardo de tiempo ∼ 2 min).
Después de 30 min, se extrajeron alícuotas de 2 mL para su posterior
caracterización mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) y
espectroscopía UV vis. Al repetir este proceso (adición secuencial de 1 ml de
citrato de sodio 60 mM y 1 ml de HAuCl 4 25 mM ), se cultivaron hasta 14
generaciones de partículas de oro de tamaños progresivamente mayores (más
detalles en el esquema S1). La concentración de cada generación de NP fue
aproximadamente la misma que la de las partículas de semillas originales ( ∼ 3
12
10 NP / mL).
Crecimiento sembrado de NP de Au de hasta 180 nm de diámetro.
Inmediatamente después de la síntesis de las semillas de Au y en el mismo
recipiente de reacción, la reacción se enfrió hasta que la temperatura de la
solución alcanzó 90 L C. Luego, se inyectó 1 mL de una solución de HAuCl 4 (25
mM). Después de 30 min, se terminó la reacción. Este proceso fue repetido dos
veces. Después de eso, la muestra se diluyó extrayendo 55 mL de muestra y
agregando 53 mL de agua MQ y 2 mL de citrato de sodio 60 mM (más detalles en
el Esquema S2). Esta solución se usó luego como solución de semillas y el
proceso se repitió nuevamente. Al cambiar el volumen extraído en cada paso de
crecimiento, es posible ajustar la concentración de partículas de semillas.
Técnicas de caracterización. Espectroscopía UV Vis. Los espectros UV visibles
se adquirieron con un espectrofotómetro Shimadzu UV-2400 . Se colocó una
solución de Au NP (1 ml) en una celda y se realizó un análisis espectral en el
rango de 300 a 800 nm a temperatura ambiente. En el caso de medidas
dependientes del tiempo , se sacaron alícuotas de la solución y las muestras se
enfriaron en agua helada para apagar la reacción.
Microscopio de transmisión por electrones. Las nanopartículas de
oro se visualizaron usando TEM de 80 keV (JEOL 1010, Japón). Se
vertieron gota a gota gotas de diez microlitros de la muestra
sobre un trozo de rejilla de cobre de malla 200 ultrafina
revestida con Formvar (Ted-pella, Inc.) y se dejó secar al aire. Se
utilizaron imágenes TEM de las NP de Au coloidales preparadas
para las medidas de distribución de tamaño. Para cada muestra,
se midió el tamaño de al menos 100 partículas y se obtuvo el
tamaño promedio y la distribución estándar.
Cálculos de Mie. Los cálculos del coeficiente de dispersión de
NPs de Au coloidal de diferentes diámetros se obtuvieron
utilizando el software Mie plot considerando esferas de Au
incrustadas en agua a 25 L C. En todos los casos, se utilizaron
para los cálculos el tamaño medio y la distribución estándar
medida por TEM.
' RESULTADOS
Síntesis de crecimiento sembrado de NP de Au de hasta 30 nm. Oro
12
semillas ( ~ 10 nm, ~ 3 10 NPs / ml) se prepararon mediante la
inyección de un HAuCl acuosa 4 solución de precursor en una
solución en ebullición de citrato de sodio (SC), y la reacción se
realizó hasta que alcanzó un rojo vino color. Después de eso, la
temperatura de la solución se redujo a 90 L C y más citrato de
sodio y HAuCl 4 se inyectaron precursor. La disminución de la
temperatura a 90 L C permite tanto la inhibición de la nueva
nucleación de Au NPs como la ralentización de la reacción, lo que
ayuda en la
11099 dx.doi.org/10.1021/la201938u | Langmuir 2011, 27, 11098–11105
ARTÍCULO

Figura 1. Crecimiento de semillas sin la dilución de la solución de semillas.
Imágenes (A) Microscopía electrónica de transmisión de partículas de Au de
semillas y los obtenidos después de di ff Erent pasos de crecimiento. El tamaño
de partícula aumenta de
13,5 ( 2,1-19,2 ( 2,6, 24,8 ( 3,4, y 30,5 ( 3,9 nm después de 3, 6, y 13
pasos de crecimiento, respectivamente. (B) Espectros de
absorción de coloides de oro obtenidos después de di ff Erent
pasos crecimiento y la evolución de la onda SPR - longitud en
función de la etapa de crecimiento Todos los espectros están
normalizados a 400 nm para facilitar la comparación.
seguimiento de la cinética de reacción y el retraso del período de
desenfoque (vide infra). La Figura 1A muestra la caracterización
morfológica de las NP de Au obtenidas después de diferentes
pasos de crecimiento. Como puede verse, el tamaño de los NP de
Au aumentó de 13,5 ( 2,1 a
30,5 ( 3,9 nm después de 13 pasos de crecimiento consecutivos
para obtener NP de Au con diámetros de 19,2 ( 2,6 y 24,8 ( 3,4 nm
después de tres y seis pasos de crecimiento, respectivamente)
(Figura S1). Las propiedades ópticas de las soluciones coloidales
de Au medidas por espectroscopía UV vis son representado en la
Figura 1B. Los espectros se normalizaron
a 400 nm, donde la absorbancia se debe principalmente a
14
transiciones entre bandas, para facilitar la comparación. En
todos los casos, los espectros muestran una banda de absorción de
plasmón superficial bastante simétrica, que se desplaza hacia el
rojo (recuadro de la Figura 1B) y aumenta en intensidad como
consecuencia del crecimiento de partículas. Curiosamente, al
comparar el tamaño del NP de Au medido a partir de imágenes
TEM después de diferentes pasos de crecimiento, se puede ver
que el crecimiento de NP de Au no es homogéneo y disminuye a
medida que aumenta el tamaño de partícula. Esto se debe
simplemente al hecho de que la tasa de crecimiento está
determinada por la relación entre el diámetro de la partícula en
crecimiento y la cantidad de oro agregado (considerando una
concentración de NP constante).
11100
Langmuir
Tres di ff aspectos Erent son de importancia crucial para la
obtención de Au NPs de gran tamaño y alta estabilidad: (i) la
temperatura de la solución, (ii) el control del pH de la solución, y
(iii) el número de átomos de Au inyecta en cada paso de
crecimiento. En primer lugar, debido a la cinética de la reducción
de oro signi fi depende significativamente de la temperatura
(Figura S2), es de esperar que a baja tempera- turas la velocidad de
nucleación disminuye, dando lugar a condiciones más favorables
para el crecimiento de partículas. Así, la temperatura se
disminuyó a 90 L C para evitar cualquier nucleación secundaria
durante la etapa de crecimiento. Esta hipótesis fue
experimentalmente con fi rma repitiendo el
descrito anteriormente experimento en 100 L C. Considerando
partículas sintetizadas en 90 L C presentó excelente morfología y
distribuciones de tamaño estrechas, los obtenidos a 100 L C (Figura
S3) mostró dos di ff tamaño Erent poblaciones, una de ellas más
pequeña que las NP iniciales de Au de semillas. Esto indica que no
se evitó la nucleación secundaria. Otro aspecto importante es el
papel del citrato de sodio como un pH bu ff er en la reacción.
Debido
3+
a que cada paso de crecimiento implica
5
la adición de un
Au precursor que acidi fi es la solución, el pH de la solución
disminuye progresivamente a medida que el proceso de
crecimiento está teniendo lugar. Esto se demostró
experimentalmente repitiendo la reacción sin la adición de citrato
de sodio y midiendo el pH de la solución después de cada paso de
crecimiento (Figura S4). Encontramos una disminución de
0,3 unidad de pH tras cada inyección, consiguiendo un valor de
3,14 tras 14 inyecciones consecutivas. En este punto, la solución de
Au NP
precipitado. Esto puede explicarse considerando los valores de p K
a del citrato de sodio (6.4, 4.8 y 3.2). Debido a que a pH 3,14 se
produjo la protonación de todos los grupos carboxílicos, las
interacciones electrostáticas no pueden impartir estabilidad a las
partículas en solución. Por lo tanto, la cantidad de citrato de sodio
añadido en cada etapa de crecimiento fue el experimentalmente
determinada para mantener un pH constante de ~ 7 durante todo
el proceso de crecimiento. El último punto a abordar es la
cantidad de precursor de Au añadida en cada paso de crecimiento.
Como se discutió anteriormente, el crecimiento de las NP de Au
está determinado por la relación entre los átomos de oro
agregados y los presentes en la superficie de la semilla, lo que
conduce a una tasa de crecimiento que disminuye drásticamente a
medida que las partículas se hacen más grandes. Este problema no
se puede resolver inyectando grandes cantidades de sal de oro. La
inyección de cantidades mayores (5) amplía la distribución de
tamaños, lo que lleva a
no esférica (oval) Formas probablemente debido a la cementación
27
de di ff Erent semillas durante el proceso de crecimiento,
mientras que el ción inyecciones de cantidades mayores (10)
induce la nucleación de nuevo Au NPs (Figura S5). En este
contexto, estudiamos la posibilidad de disminuir la concentración
de partículas de semillas a medida que crecían las NP.
Síntesis de crecimiento sembrado de NP de Au de hasta 180 nm.
Para obtener partículas más grandes con un tamaño, morfología y
concentración controlados, estudiamos la posibilidad de hacer
crecer una generación sucesiva de partículas esféricas con
tamaños más grandes ajustando tanto la concentración de
partículas de semillas como el número total de átomos de oro
inyectados en la solución. Por tanto, después de dos pasos de
crecimiento, las semillas de Au se diluyeron y se añadieron más
precursor de oro y citrato de sodio. Al repetir este proceso,
sintetizamos NP de Au con un tamaño creciente y una
concentración decreciente. La morfología de las NP de Au
resultantes se determinó mediante microscopía TEM. La Figura 2
muestra cómo el tamaño final de las partículas aumenta a medida
que aumenta el número de pasos de crecimiento, y es posible
sintetizar NP de Au esféricas y monodispersas de hasta ∼ 200 nm
de diámetro (Tabla 1). En consecuencia, la concentración de las
soluciones de oro coloidal depende del tamaño de partícula.
Por lo tanto, las partículas de semillas iniciales están presentes en una
concentración de ∼ 3
12 9
10 NP / mL pero a ∼ 5 10 NP / mL para las NP de Au más
grandes. Además, aunque las partículas están más bien facetadas
y, por lo tanto, no
dx.doi.org/10.1021/la201938u | Langmuir 2011, 27, 11098–11
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Figura 2. Crecimiento de semillas con la dilución de la solución de semillas. Imágenes Microscopía Electrónica de Transmisión de
partículas de Au de semillas y los obtenidos después de di ff Erent pasos de crecimiento. El tamaño de partícula aumenta de 8,4 ( 1,0 a
180,5 ( 10,7 nm) y su concentración disminuye de ∼ 3 10 12 a ∼ 5 10 9 NP / mL.

Tabla 1. Resumen de tamaños, concentraciones y propiedades ópticas de los NP de Au obtenidos después de diferentes pasos de crecimiento
paso de crecimiento diámetro (nm) DAKOTA DEL SUR (%)concentración (NP / mL)Pico de SRP (dipolar) (nm)Pico SRP (cuadrupolar) (nm) diámetro esperado (nm)

semillas 8.4 ( 1.0 11,9 3,0 10 12 518

   
12
Primero 17,6 ( 1,2 6,8 1,9 10 521,5 18,2
 
2do 22,3 ( 2,2 9,8 1.2 10 12 523,5 24,5
 
11
Tercero 31,1 ( 2,8 9.0 7,6 10 525,5 30,4
 
Cuarto 36,0 ( 2,4 6.6 4.8 10 11 527,5 36,7
 
11
Quinto 42,2 ( 2,3 7.8 3.1 10 530,5 43,7
 
11
Sexto 54,4 ( 3,3 6.1 1,9 10 535 51,5
 
11
Séptimo 64,8 ( 3,4 5.2 1.2 10 540 60,5
 
10
Octavo 69,3 ( 4,5 6.5 7.8 10 542,5 70,7
 
10
Noveno 80,1+ 5,4 6,7 4.9 10 546,5 82,6
 
10
Décimo 96,1 ( 5,6 5.8 3.1 10 555,5 96,4
 
10
11º 109,2 ( 7,6 6,9 2.0 10 574,5 112,4
 
12 123,6 ( 10,6 8,6 1.2 10 10 606 131,0
 
9
13 150,0 ( 9,9 6.6 7,9 10 649 545 152,6
9
14 180,5 ( 10,7 5.9 5,0 10 720 560 177,8
                 

Perfectamente esférico, el crecimiento es muy uniforme hasta ∼
180 nm sin la formación de partículas alargadas o una segunda
población de partículas más pequeñas (S6 y S7). La síntesis se
terminó cuando logramos un tamaño de partícula de ∼ 180 nm
como límite de transparencia coloidal, pero no hay razón para no
llevar a cabo pasos de crecimiento posteriores para lograr NP de
Au más grandes.
Seguimiento del proceso de crecimiento de la nanopartícula de oro
cles. Para determinar si el crecimiento de las NP de Au fue a
través de la adición de átomos o la agregación de unidades más
22,28
pequeñas formando agregados compactos, monitoreamos un
solo paso de crecimiento extrayendo diferentes alícuotas de la
reacción después del evento de inicialización (adición de
3+
precursor de Au a la solución de NP de semillas). Se tomaron
varias alícuotas en diferentes tiempos de reacción y se apagaron
inmediatamente por inmersión de la muestra en hielo / agua.
mezcla para análisis adicional TEM y UV vis. La evidencia del
crecimiento de Au NP se puede ver a partir de los datos de UV vis
(Figura 3), y se pueden observar dos comportamientos diferentes.
En tiempos cortos (de 15 sa 6 min), se puede observar un gran
desplazamiento hacia el rojo (de 524,5 a 532,5 nm) en la posición
de la banda de resonancia de plasmón superficial (SPR), mientras
que los valores de absorbancia aumentaron solo ligeramente (de ∼
0,31 a ∼ 0,48) . En tiempos más largos (a partir de 6 min), se
observó un gran aumento de la absorbancia (de ∼ 0,48 a ∼ 1,21) y
un ligero desplazamiento al azul (de 532,5 a 529,5 nm). Las
mismas alícuotas se analizaron mediante TEM. Inicialmente, las
partículas de semillas tenían 29,8 ( 3,3 nm de diámetro y crecían
hasta 30,5 ( 3,5 nm (15 s), 32,2 ( 3,3 nm (30 s), 32,8 ( 3,3 nm (45 s) y
34,6 ( 3,8 nm (1 m En estos momentos iniciales, las NP de Au iban
acompañadas de agregados (15 s) o partículas pequeñas, que no se
tenían en cuenta para calcular la

11101 dx.doi.org/10.1021/la201938u | Langmuir 2011, 27, 11098–11

 
Langmuir ARTÍCULO
Figura 3. Evolución temporal del crecimiento de Au NP en función del tiempo. Imágenes (A) Representante de TEM de crecimiento Au NP
en di ff Erent veces. La formación de agregados se observó en etapas tempranas (15 s) en las que se formaron partículas pequeñas (45 s) y
luego se disolvieron, actuando como fuente de átomos para el crecimiento de partículas grandes. (B) Espectros UV vis de crecimiento de
Au NP. El aumento de la absorción a 400 nm junto con el desplazamiento al azul de la SPR indica que las partículas crecen átomo por
átomo y, por tanto, no se forman mediante agregados más pequeños.

distribución de tamaño porque las partículas pequeñas
desaparecieron en momentos posteriores y probablemente se
redisolvieron. Después de 6 min, no se observaron más agregados
y el tamaño de partícula aumentó hasta 36,0 ( 3,7 nm (6 min), 38,1
( 3,7 nm (8 min), 42,1 ( 4,1 nm (12 min) y
45,0 ( 4,4 nm (25 min). Este aumento gradual en el tamaño
de NP de Au sugiere que las partículas resultantes crecieron
por la incorporación de átomos de Au en la superficie.
Efecto de la concentración de semillas. Para estudiar cómo la
concentración de semillas afecta el tamaño de partícula final,
crecimos NP de Au usando
concentraciones de partículas de semillas (de
diferente   11   ∼
∼ 1,5 10   NP / mL). En todos los casos, las semillas iniciales de
17.0 ( 1.7 nm de diámetro, el volumen final de la solución fue el
mismo y la cantidad de precursor de Au agregado se mantuvo
constante. El tamaño de partícula promedio y la morfología de
partícula se determinaron por TEM, donde el tamaño de partícula
promedio disminuyó a medida que
la concentración de semillas aumentó (Figura 4A, Figura S8). Por
lo tanto, es posible lograr NP de Au de 23,3 ( 1,7 a 36,6 ( 4,3 nm en
11 11
un paso diluyendo (de ∼ 7.5 10 a ∼ 1.5 10 NPs / mL) una
solución de partículas de semilla de Au de una solución de 17.0 (
1.7 nm. Estos resultados fueron corroborados por espectroscopía
UV vis, que muestra cómo la banda roja máxima cambia de 521,5
a 526,5 nm a medida que disminuye la concentración de
partículas de semillas (Figura 4B).
Sin embargo, cuando la concentración de Au NP es demasiado
baja (la relación entre la concentración de Au NP y la cantidad de
precursor de oro agregado excede un cierto valor), no se pudo
evitar la nucleación de nuevas partículas (Figura 4A, flechas
rojas). Es interesante que esta relación depende, entre otras cosas,
de la temperatura de la solución, por lo que podría ser posible
controlar aún más el crecimiento de partículas más grandes
disminuyendo la temperatura de la solución y / o utilizando una
concentración más baja de NP de semillas.
Determinación del tamaño de partícula. Suponiendo que (i) todo el
precursor de oro inyectado se consume durante la reacción, (ii) las
partículas son de forma esférica y (iii) la reducción y el
crecimiento tienen lugar sin más nucleación, el tamaño de las
partículas cultivadas se puede predecir cuantitativamente usando
la siguiente expresión
3 m Au
r AuNP 3 ¼ r semilla 3 þ πF
4 semillas de Au n
donde m Au , n semilla y F Au son la masa de Au añadida, el
número de partículas de semilla y la densidad del oro,
respectivamente.
Figura 5 muestra la curva teórica de diámetro Au NP para los di
ff condiciones Erent utilizados en cada experimento: (i) la adición
directa de Au precursor (Figura 1), (ii) el enfoque combinado
(Figura 2), y (iii) la dilución de semillas de Au en un solo
crecimiento

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Langmuir ARTÍCULO

Figura 4. E ff ect de la concentración de la semilla. Imágenes (A) microscopía

electrónica de transmisión de partículas de Au obtuvieron utilizando di ff Erent
concentraciones ciones de las semillas mientras se mantiene la cantidad de Au Figura 5. Diámetro promedio de NP de Au y comparación con los
precursor constante añadido. La fi tamaño de partícula final depende de la resultados esperados. La comparación de la curva teórica (---) y los datos
concentración semilla utilizada, la obtención de valores de 23,3 ( 1,7 nm (7,5 10 experimentales para di ff Erent experimentos: (A) el crecimiento
11
NPs / ml), 25,6 ( 2,6 nm (5 sembrado sin una dilución de la solución de semilla, (B) el crecimiento
11 11
( (
10 11 NP / mL), 29,2 ( 3,0 nm (3 10 11 NP / mL) y 36,6 ( 4,3 nm (1,5 10
11
NP / mL). La nucleación de una nueva población de partículas
apareció en proporciones bajas de precursor de Au a Au semillas
(flechas rojas). Au semillas usadas fueron 17,0 ( 1,7 nm de
diámetro. (B) espectros de absorción de coloides de oro obtenidos
en di ff Erent concentraciones. todos los espectros todo normal-
izada que hay en 400 nm para facilitar la comparación.
sembrado con una dilución de la solución de semilla, y (C ) el e ff ect de
la concentración de la semilla. La línea azul corresponde al tamaño de
las NP iniciales de Au de semillas utilizadas. En todos los casos, los
resultados obtenidos concuerdan con los calculados, lo que indica que no
se produjo nueva nucleación y que los átomos de Au se depositan sobre
las superficies de las partículas preformadas.

paso (Figura 4). Como puede verse, en todos los casos los
resultados esperados concuerdan con los obtenidos
experimentalmente.
Propiedades ópticas de las nanopartículas de oro. Las propiedades
ópticas de las diferentes generaciones de soluciones de Au NP
representadas en la Figura 2 se midieron mediante espectroscopía
UV vis (Figura 6A), donde la tendencia observada concuerda muy
bien con los cambios esperados en el comportamiento óptico para
14
aumentar el tamaño de partícula. El desplazamiento rojo inicial
de 518,5 a 556 nm a medida que el tamaño de las NP de Au
aumenta de 8,4 a 96,1 nm confirma el crecimiento de las NP de
Au. Además, considerando que la forma ovalada alargada de
Las NP de Au obtenidas por el método de Frens se caracterizan
generalmente por una línea de base de extinción distinta de cero a
una longitud de onda más larga y una notable asimetría de banda;
5
estos resultados son una indicación más de que las NP de Au son
monodispersas y de forma cuasi esférica . Cuando el diámetro de
Au NP aumenta aún más, la banda de resonancia dipolar principal
roja se desplaza y se ensancha, alcanzando un máximo de 574,5
nm para Au NP con un diámetro medio de 109,2 nm.
Curiosamente, por encima de 120 nm, la banda única está
acompañada por un hombro en longitudes de onda más bajas,
correspondiente a una resonancia cuadrupolar colocada a 560 nm
para NP de Au de 180,5 nm. La absorbancia experimental

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Figura 6. Crecimiento sembrado con la dilución de la solución de semilla. (A) UV vis espectros de Au coloides obtenidos después de di ff
Erent pasos de crecimiento y (B) calculados espectros de extinción de Au esferas con el mismo tamaño medio y distribución de tamaño
como se ha obtenido experimentalmente. Todos los espectros se normalizaron a 400 nm para facilitar la comparación.

a
Esquema 1. Ilustración de las diferentes vías de crecimiento para el crecimiento de semillas controlado cinéticamente de NP de Au

a El control de la temperatura de la solución junto con el uso de una proporción baja de precursor de oro a partículas de semilla nos
permite desplazar el equilibrio hacia el período de enfoque de tamaño . La adición de mayores cantidades del precursor de oro conduce a
la formación de partículas de forma ovalada o a la nueva nucleación de NP de Au más pequeñas.
los datos se pueden comparar fácilmente con cálculos basados en
la teoría estándar de Mie de partículas esféricas. La Figura 6B ' DISCUSIÓN
31,32
traza los espectros de extinción (que contienen contribuciones de Según el mecanismo LaMer, el proceso de crecimiento de NPs
absorción y dispersión) calculados para esferas de Au, con el implica dos di ff períodos Erent: (i) el período de enfoque, donde el radio
tamaño promedio y la distribución estándar medidos a partir de medio de las partículas aumenta rápidamente y la distribución del
imágenes TEM de cada muestra experimental utilizando el tamaño se hace más estrecho y (ii) el período de desenfoque , donde las
software MiePlot. Los resultados obtenidos para partículas tasas de crecimiento disminuyen drásticamente y las distribuciones de
grandes (> 50 nm) están totalmente de acuerdo con los que se tamaño se amplían. Este período, conocido como maduración de
miden experimentalmente. De hecho, son mejores de lo esperado Ostwald, se caracteriza por el crecimiento de partículas grandes que
considerando la pequeña desviación de la forma esférica reciben los átomos de las partículas más pequeñas que se disuelven. El
observada en las imágenes TEM. Esta es una indicación más de punto de estos dos di conmutación ff períodos Erent depende, entre
que se produjo la nucleación secundaria y que el precursor de oro
otros, en la con- centración de monómero (Esquema 1). Por lo tanto,
se depositó sobre las NP de Au existentes, aumentando su tamaño.
Se encontraron diferencias significativas en el caso de NP de Au mientras que a concentraciones de monómero relativamente altas, los
pequeñas (<50 nm), donde la teoría de Mie no explica NP más pequeños en la distribución crecen más rápido que los más
teóricamente la dependencia del tamaño de la banda de grandes (enfoque), cuando la concentración de monómero se agota por
absorción del plasmón superficial. Aunque este problema se el crecimiento, la distribución se amplía porque algunos NP más
puede resolver asumiendo un NP de Au dependiente del tamaño pequeños se encogen y eventualmente desaparecen (maduración de
Ostwald).
función dieléctrica, estas modificaciones están más allá del
29,30
alcance de este trabajo y se informan en otra parte.
11104
Langmuir
disminuir la temperatura de la solución y / o inyectar monómero
adicional. Por lo tanto, al realizar la reacción de síntesis a
temperaturas más bajas, es posible no solo prevenir la nucleación
de nuevas NP sino también retrasar el período de desenfoque.
Este fue medido experimentalmente, donde el tiempo necesario
para alcanzar el período de desenfoque depende de la
temperatura de la solución, en detalle a 90 min y 100 L C y a más
de 3 hy 90 L C. Sin embargo, la inyección de más El precursor de
oro favorece que el período de focalización se mantenga para un
radio medio grande, lo que conduce al crecimiento controlado de
los NP de Au. Esto se correlaciona con la distribución de tamaño
de los NP de Au, que se enfoca del 11,9 al 5,9% a medida que el
diámetro medio aumenta de
8.4 a 180.5 nm, respectivamente. Adicionalmente, considerando
que las necesidades de cada paso de crecimiento más de 45 min a
fi acabado, el di ff usion del monómero oro a partir de partículas
más pequeñas a las más grandes tendrían lugar si la
concentración de monómero no aumentaría. Sin embargo,
aunque la adición de más monómero permite el movimiento del
sistema hacia las condiciones de enfoque, debe mantenerse por
debajo del valor de sobresaturación; de lo contrario, se produce la
nueva nucleación de NP de Au y / o la aparición de partículas de
forma ovalada . En este contexto, el control de la relación entre
el número de semillas de Au y la cantidad de monómero de
3+
oro inyectado (Au NPs / Au ) permite el crecimiento de Au
NP en cada paso de crecimiento.
' Conclusiones
Reportamos una ruta de crecimiento general de semillas para
sintetizar grandes,
Au NP monodispersas estabilizadas con citrato mediante el
control cinético de las condiciones de reacción. Tres di ff Erent
aspectos son de importancia crucial en la obtención de Au PN con
grandes dimensiones y alta estabilidad. La disminución de la
temperatura de la solución permite ralentizar la reacción y evita
cualquier nucleación secundaria. El control del pH de la reacción
permite controlar la reactividad de las especies de oro, lo que ha
demostrado ser un punto importante para mejorar la
monodispersidad de las partículas resultantes. Por último, el
número de átomos de Au inyectados en cada paso de crecimiento
permite el desplazamiento del sistema hacia las condiciones de
enfoque, que se estrecha los Au NP fi distribuciones nales. Como
consecuencia, se han sintetizado NP de Au con diámetros de hasta
∼ 200 nm. La capacidad de sintetizar tamaños de NP de Au
estabilizados con citrato de 10 a 200 nm con una concentración y
estado de superficie controlados permite la expansión de la
aplicabilidad bien conocida de estas NP a aplicaciones biológicas y
biomédicas. En detalle, la funcionalización adicional con una
amplia variedad de moléculas biológicamente activas, como
péptidos, anticuerpos y ADN, permite su uso como portadores de
administración de fármacos , fuentes de energía locales y remotas
y plataformas de espectroscopía Raman mejorada en superficie
(SERS). Además, se pueden utilizar como sistemas de NP modelo
para estudios de toxicidad y para dilucidar el impacto de la
morfología de NP en los sistemas biológicos.
' Contenido asociado
b S Información complementaria. Caracterización de la muestra
(distribución de tamaño y TEM) y resultados adicionales. Este
material está disponible de forma gratuita a través de Internet en
http://pubs.acs.org.
' La información del autor
Autor correspondiente
* Correo electrónico: neus.bastus@icn.cat,
victor.puntes.icn@uab.es.
11105
En este escenario, es posible reenfocar la distribución de
33
tamaño de los NP modificando la cinética de la reacción como
por
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ARTÍCULO
' RECONOCIMIENTO
Este trabajo fue apoyado por el Ministerio de Ciencia de
España (MAT2009-14734-C02-01). Agradecemos al Dr. Isaac
Ojea-Jimenez por su lectura crítica del manuscrito.
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