ORIGINAL BREVE

TÓXICIDAD DE LA APITOXINA EN UN
MODELO DE Artemia salina
Juan Manuel-Pérez Agudelo1; Juan Felipe-Salazar Espinosa1,2; Jorge Hernán-Hernández Guevara2
1
Médico y Cirujano. MSc Ciencias Biomédicas – Farmacología. Docente e Investigador Universidad de Caldas, Manizales, Colombia. Director del
semillero de investigación en farmacología experimental.
2
Estudiantes V semestre de Medicina Universidad de Caldas. Semillero de Investigación en Farmacología Experimental (SEMFEX). Manizales, Co-
lombia.
3
Miembro activo de la Asociación científica de estudiantes de medicina de la Universidad de Caldas (ACEMCAL).

CIMEL 2014; 19(2):75-78

RESUMEN
Objetivo:Determinar la toxicidad del extracto acuoso de Apitoxina mediante bioprospección en el modelo de Artemia salina. Materiales y métodos: Previo mon-
taje de Biorreactor, un grupo fue expuesto al extracto acuoso de Apitoxina (n=20) y el grupo control fue expuesto a agua destilada (n=20) la toxicidad se definió
por la muerte de la Artemia salina a las 24 horas de administración del extracto. Se realizó análisis estadístico no paramétrico mediante la prueba de Chi cuadrado
de homogeneidad (Pearson) para determinar la diferencia en mortalidad de los grupos.Resultados:El Grupo Control no presentó mortalidad, en tanto el Grupo
Apitoxina presentó una mortalidad del 95%. Se demostró una asociación estadísticamente significativa con un p<0,05(IC: 95%) entre la mortalidad de la Artemia
salina y la administración de apitoxina.Conclusión:El extracto acuoso de apitoxina presenta toxicidad a una concentración de 0.35 en el modelo de Artemia salina.
Palabras Clave: Apitoxina, Artemia salina, Toxicidad

TOXICITY OF APITOXIN IN AN ARTEMIA SALINA MODEL

ABSTRACT
Objective: To determine the toxicity of the aqueous extract of Apitoxin by bioprospecting in the model of Artemiasalina. Materials and methods: Previous assembly
bioreactor, one group was exposed to aqueous extract of Apitoxin (n = 20) and control group was exposed to distilled water (n = 20) toxicity was defined by the death
of the brine shrimp to 24 hours of administration of the extract. Non-parametric statistical analysis was performed using Chi-square test of homogeneity (Pearson)
to determine the difference in mortality among groups. Results: The Control Group did not show mortality, while the Apitoxin Group presented a mortality of
95%. Between mortality of Artemiasalina and the administration of bee venom: a statistically significant association with p <0.05 (95% CI) it was demonstrated.
Conclusion: The aqueous extract of bee venom toxicity presents a concentration of 0.35 in Artemiasalina model.
Keywords: Apitoxin, Brine shrimp, toxicity.

INTRODUCCIÓN analizar toxicidad de extractos de plantas y desde un punto de

La apitoxina es el veneno secretado por varias especies de
abejas; en su composición se destacan: péptidos como me-
litina (40-50%), apamina (2-3%), fosfolipasa A2 (10-12%)
yhialuronidasa (1-1,5%)1, todas ellas desarrollan actividades
biológicas, antiinflamatoria, antimicrobiana, antitumoral2 y
citotóxica. El compuesto que ha mostrado mayor cantidad y
efectividad en sus funciones es la melitinaque inhibe los cana-
les de calcio, mejora la transfección de material genético hasta
el núcleo celular, inhibe oncogenes, actúa sobre cascadas de
señalización intracelular dependientes de proteína G, activi-
dad antiparasitaria y antiviral3. Este veneno ha sido utilizado
como terapia para dolor crónico4,5, la esclerosis lateral amio-
trófica6 y las enfermedades reumáticas como artritis reuma-
toide7.
vista farmacológico, posible actividad antitumoral11,12.
La Artemia salina es un crustáceo de fácil adquisición en un
estado que le permite permanecer en un medio seco durante
años, hasta que un agente externo lo estimule para salir de su
estado larvario y convertirse en adulto en 48 horas aproxima-
damente13. Tiene un amplio perfil de resistencia ante condi-
ciones como escasez de nutrientes, diversas concentraciones
de sal y cambios de temperatura13.
Debido al aumento del uso de apitoxina como terapia alter-
nativa, se viene incrementando la búsqueda de métodos que
permitan una mejor comprensión de la misma. Es por eso
que el objetivo del presente estudio es evaluar la toxicidad de
la apitoxina en un modelo de Artemia salina.

Recientemente, se han incorporado el uso de Artemia salina MATERIALES Y MÉTODOS

un ensayo pre-clínico de gran utilidad y eficacia que requiere
pequeñas cantidades de muestras y permiten la evaluación
rápida de extractos crudos y fracciones, conduciendo con
seguridad a los principios activos y descartando todo lo que
no sea de interés8,9,10. Este biomodelo ha sido empleado para
Se realizó un estudio analítico, llevado a cabo en el laboratorio
de farmacología experimental de la Facultad de Ciencias para
la Salud de la Universidad de Caldas, Colombia.

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Artemia salina: Se utilizaron 45g de huevos de Artemia salina mg de huevos (estado criptobiótico) Fig 1.
en estado criptobiótico con el objetivo de mantener el grado
de proporciones con respecto a la cantidad de agua y sal que Después de 48 horas de montar el biorreactor, se llevó a cabo la
se agregó en el biorreactor con el fin de incubar y mantener extracción del preparado para agregarla a 40 tubos de ensayo
vivos las larvas o nauplios de Artemia. Esta proporción va de mediante pipeta automática. Estos se separaron en 2 grupos,
acuerdo a la cantidad de Artemia salina usada en los bioensa- Control y Grupo Apitoxina de 20 tubos de ensayo cada una y
yos realizados por Meyer y Cols. cada tubo de ensayo con 2 ml extraídos del recipiente. Final-
mente, a cada tubo de ensayo del grupo control se le agregó
Apitoxina: Se utilizó extracto crudo acuoso de la apitoxina de 0,2 ml de agua destilada y cada tubo de ensayo del grupo Api-
abejas Apis mellifera al 35% o 0.35 el cual se mantuvo a tempe- toxina fue expuesto a 0,2 ml del extracto acuoso de apitoxina
ratura de 25-30°C. Se empleó el extracto proporcionado por la medidos mediante pipeta automática Fig 2. Cada tubo estuvo
empresa Apis Health en un periodo de incubación de 24 horas para su posterior
evaluación de la mortalidad de la artemia frente al preparado
Procedimiento: Primero se llenó con 2L de agua el biorreac- de apitoxina.
tor. Luego se le añadieron 500 mg de cloruro de sodio al 0.9 %,
gas de saturación de aire (O2 al 21%) por sistema de bomba Toxicidad: Se determinó la toxicidad por la mortalidad (no
de flujo continuo a una temperatura de 25 – 30 º C controlada movimiento por más de 10 minutos)inducida en la artemia
por 24 horas por una bombilla. Finalmente se añadieron 45 salina después de la administración de la apitoxina11

Fig 1. Montaje del Biorreactor posterior a las 48 horas de colocar
los huevos de artemia salina para su eclosión.
Análisis estadístico: Se realizó el análisis estadístico mediante
el software IBM SPSS 19 para determinar asociación entre la
muerte de la población de artemia salina, con respecto a la ex-
posición a Apitoxina a través de la prueba no paramétricachi
cuadrado.

Consideraciones éticas: De acuerdo a la clasificación dela

Agencia de Protección Ambiental de Estados Unidos, este
crustáceo es permitido para usarse en bioensayos sin restric-
ciones bioéticas14.

RESULTADOS

El Grupo Control no presentó mortalidad (0/20), en tanto el

Grupo Apitoxinapresentó una mortalidad del 95% (19/20)
(Gráfico 1)

Fig 2. Población control expuesta a agua destilada y población muestra expuesta al extracto acuoso de la apitoxina al 35%
de izquierda a derecha respectivamente.

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Gráfico 1. Se muestra cuantitativamente la mortalidad en los tubos de ensayo de las poblaciones control y expuesta a la apitoxina.

Se demostró una asociación estadísticamente significativa con través de la disminución en la capacidad genotóxica de este
un p<0,05(IC: 95%) entre la mortalidad de la Artemia salina y medicamento sobre tejido sano y a su vez disminuye la pre-
la administración de apitoxina. sencia de malignidad secundaria19.

DISCUSIÓN Por otro lado la apitoxina también puede explicar su toxici-

dad por la capacidad antimicrobiana; en un estudio previo se
La muerte de la Artemia Salina se dio en el 95% de la mues- evidenciódisminución de la carga micótica sobre diferentes
tra a la cual se administró Apitoxina, lo que nos indica que tejidos de ratones,infectados con CandidaAlbicans, por inhi-
a una cantidad de 0,2 ml con una concentración de 0.35 del bición del dimorfismo de estos microorganismos e impedi-
extracto acuoso podemos encontrar la toxicidad de la Arte- mento en su proliferación y crecimiento, actuando a favor de
mia Salina o también llamado Brine Shrimp. Esto nos indica la apoptosis de células del hongo20.
que la DL50 se encuentra a esta concentración o por debajo
de esta. La toxicidad de la apitoxina se puede explicar por los Las limitaciones del presente estudio radican en que solo se
compuestos antitumorales que contiene; en un estudio rea- usó una concentración lo que no nos permite fijar el rango
lizado por Brand y Cols se menciona que la aplicación de la de la DL50, sin embargo se realizó una aproximación lo que
Saururuscernuuscon propiedades antitumorales sobre el Bri- contribuye a la escases de información con respecto a la Api-
ne Shrimp produce la mortalidad de las misma atribuyéndole toxina.
la toxicidad de la planta que el estudio reporta11. Asimismo, la
apitoxina contiene en su composición la melitinaque inhibe En conclusión, la capacidad de inducción de citotoxicidad en
el proceso de metástasis y crecimiento tumoral de diferentes poblaciones de artemia por parte de la apitoxina, junto con
líneas celulares cancerígenas15,16. También se ha encontrado la evidencia científica previa que demuestra la actividad an-
que la inhibición de la metaloproteinasa 9 explica la capaci- tineoplásica a través de apoptosis, inhibición del crecimiento
dad de la apitoxina para inhibir la metástasis y colonización e impedimento en la diseminación de células cancerígenas,
neoplásica17, además de tener acción sobre factores de trans- perfilan a la apitoxina como compuesto que puede ser im-
cripción específicos de ciertos tumores, lo cual genera acción plementado en futuros tratamientos para enfermedades ma-
citotóxica sobre dichas células, aunque aún se necesitan más lignas.
estudios para determinar qué tan específica es18.
Recomendamos para futuras investigaciones la determina-
Un estudio previo realizado en linfocitos de ratones reporta ción de la Dosis Letal 50% y comprobar la efectividad en mor-
que la apitoxina puede ser usada como terapia coadyuvante talidad de líneas celulares cancerígenas.
de quimioterapia con bleomicina para manejo de cáncer, a

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