Espectroscopia uv-visible

La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta-visible

(UV/VIS) es una espectroscopia de emisión de fotones y una espectrofotometría.
Utiliza radiación electromagnética (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana
(UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagnético, es decir, una
longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiación absorbida por las moléculas
desde esta región del espectro provoca transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales

de moléculas, y además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes
de soluciones de iones de metales de transición y compuestos orgánicos
altamente conjugados.

Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica para determinar

pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en
aleaciones o la concentración de cierto medicamento que puede llegar a ciertas
partes del cuerpo.

Principio de operación
El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorción de
radiación ultravioleta – visible por una molécula, causando la promoción de un
electrón de un estado basal a un estado excitado, liberándose el exceso de
energía en forma de calor. La longitud de onda ( λ ) comprende entre 190 y 800
nm.
La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, estos son
promovidos a estados excitados (de energía mayor). Al absorber radiación
electromagnética de una frecuencia correcta, ocurre una transición desde uno de
estos orbitales a un orbital vacío. Las diferencias entre energías varían entre los
diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles, provocan coloración en las
moléculas ya que absorben energía en el visible así como en el UV, como es el
caso del β-caroteno.
Cuando un haz de radiación UV-Vis atraviesa una disolución conteniendo un
analito absorbente, la intensidad incidente del haz (I0) es atenuada hasta I. Esta
fracción de radiación que ha logrado traspasar la muestra es denominada
transmitancia (T) (T = I/I0). Por aspectos prácticos, se utilizará la absorbancia (A)
en lugar de la transmitancia (A = -logT), por estar relacionada linealmente con la
concentración de la especie absorbente según la ley de Beer-Lambert: A = ϵ ·l·c
(ϵ: coeficiente de absortividad molar, l: camino óptico, c: concentración de la
especie absorbente).

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Naturaleza ondulatoria: caracterizada por su frecuencia (ν) o longitud de onda (λ).

ν = número de ondas que pasan por un punto en la unidad de tiempo.

λ = distancia que hay ente dos puntos iguales de la onda, máximos, mínimos, etc.
Naturaleza corpuscular, partícula: formada por fotones con energía (E) E = h·ν,
donde h es la constante de Plank. La radiación electromagnética se puede ordenar
en un espectro que se extiende desde ondas de frecuencias muy elevadas
(longitudes de onda pequeñas; rayos gamma) hasta frecuencias muy bajas
(longitudes de onda altas; ondas de radio). La luz UV-visible es sólo una pequeña
parte del espectro electromagnético, visible (780-380nm); UV (380-200nm).

Esta radiación puede ser emitida por sustancias bajo condiciones de gran
excitación, como, por ejemplo, altas temperaturas o descargas eléctricas.
La ν λ c = radiación electromagnética al incidir sobre la materia puede sufrir los
siguientes procesos:

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Ejemplo de aplicación
Aplicaciones

 Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas

 Análisis de muestras bioquímicas
 Determinación de metales en compuestos de coordinación
 Análisis de semiconductores
 Medidas de color
 Determinación cuantitativa
 Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos

BIORREMEDIACION
Producción de nano partículas de ZnS utilizando cepas de hongos.
Método:
 Cultivo de microorganismos: hongos fusarium sp. Y la cepa B-1, se obtiene
suspensiones de esporas la cuales se inoculan a 28°C por 72 horas en
sistema agitado.
 Separación de biomasa: el micelio obtenido se separa por filtración l vacío
se lava con agua destilada y se guarda en recipiente estéril.
 Producción de nano partículas: un micelio fue puesto en contacto con
ZnSO4 durante 5 días, la suspensión fue filtrada y analizada
 Caracterización de las muestras: las muestras se analizaron por técnicas de
espectroscopia UV-VIS, Espectroscopia de Fluorescencia y microscopia
para confirma presencia de ZnS.

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DETERMINACIÓN DEL pKA DE UN INDICADOR.
Amabas sustancias, HA y A, tienen diferentes colores (si no fuera así la sustancia
no serviría como indicador).
Equilibrio químico de un indicador ácido orgánico HA.

Para poder determinar

el cociente de
concentraciones
utilizamos los puntos
isosbesticos, que
indican la existencia de
equilibrio.

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En estos puntos la absorbancia es INDEPENDIENTE del pH.

 AHa a la absorbancia (media a una longitud de onda) del espectro de una

dilución de indicador a un pH para el que solo exista la especie HA.
 Aa- a la absorbancia (a la misma longitud de onda) del espectro de una
dilución de indicador a un pH para el que solo exista la especie A.
 Ai a la absorbancia (a la misma longitud de onda) del espectro de una
dilución de indicar a un pHi para el que solo existan tanto la especie HA
como la A.