DX Virology Metohds 2000.en - Es

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SECCIÓN ESPECIAL: MICROBIOLOGÍA MÉDICA
L. Barth Reller y Melvin P. Weinstein, editores de sección
Virología diagnóstica
Gregory A. Storch Departamentos de Pediatría, Medicina y Microbiología Molecular,

Facultad de Medicina de la Universidad de Washington, St. Louis, Missouri
Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

La virología diagnóstica ha entrado ahora en la corriente principal de la práctica médica. Se utilizan múltiples métodos para el
diagnóstico de laboratorio de infecciones virales, que incluyen cultivo viral, detección de antígenos, detección de ácidos nucleicos y
serología. El papel del cultivo está disminuyendo a medida que se desarrollan nuevas pruebas inmunológicas y moleculares que
brindan resultados más rápidos y pueden detectar una mayor cantidad de virus. Esta revisión proporciona recomendaciones
específicas para el enfoque diagnóstico de infecciones virales clínicamente importantes.
La virología diagnóstica se está moviendo rápidamente hacia la corriente sivo (y en algunos casos potencialmente tóxico) ha creado una necesidad obvia de un
principal de la medicina clínica como resultado de la convergencia de varios diagnóstico viral específico.
desarrollos independientes. En primer lugar, el progreso espectacular en la En algunos casos, establecer un diagnóstico viral específico limita otros procedimientos
terapéutica antiviral ha aumentado la necesidad de diagnósticos virales específicos. de diagnóstico y puede permitir la interrupción de la terapia con antibióticos [1]. Asimismo,
En segundo lugar, los avances tecnológicos, especialmente en el área de la química en algunos casos, la con fi rmación de un diagnóstico viral específico ayuda a determinar el
de los ácidos nucleicos, han proporcionado nuevas herramientas importantes para el pronóstico. Un estudio reciente de pruebas de diagnóstico para el virus respiratorio sincitial
diagnóstico viral. En tercer lugar, el número de pacientes en riesgo de contraer (VSR) documentó que los médicos generalmente creían que los resultados de las pruebas
infecciones virales oportunistas se ha expandido enormemente como resultado de la rápidas influían en el manejo de los casos [2]. Las pruebas rápidas de VSR también se han
epidemia del VIH / SIDA. Por último, el tratamiento moderno de la infección por VIH utilizado como base para la colocación del paciente para limitar la transmisión nosocomial
y la hepatitis C está proporcionando un nuevo paradigma para la integración de [3]. Finalmente, el diagnóstico viral puede ser importante para propósitos de salud pública.
técnicas moleculares en el tratamiento de las infecciones virales crónicas. Estos Por ejemplo, la documentación de laboratorio de casos de rubéola o rubéola puede poner
avances no solo están aumentando el uso de la virología diagnóstica, sino que están en marcha amplias campañas de vacunación.
remodelando el campo.
Métodos utilizados en virología diagnóstica
El aislamiento viral y una serie de métodos para la detección de antígenos, ácidos

nucleicos y anticuerpos virales (serología) son el repertorio básico de técnicas utilizadas
Justificación del diagnóstico viral específico
para el diagnóstico de laboratorio de infecciones virales, aunque también se utilizan
ocasionalmente algunas otras técnicas (tabla 1). El aislamiento viral mediante cultivo celular
Históricamente, la virología diagnóstica ha tenido que justificar su uso. Las
se realiza prácticamente siempre en laboratorios de virología designados. Los otros métodos
razones han sido que las técnicas tradicionales de diagnóstico viral, especialmente el
también se pueden realizar en esos laboratorios, pero también se pueden realizar en
cultivo, son lentas, costosas y, a menudo, periféricas a la toma de decisiones clínicas, diversas secciones de laboratorio, como microbiología general, serología, banco de sangre,
particularmente cuando no hay agentes terapéuticos disponibles. La disponibilidad de química clínica, patología o virología molecular. Es probable que la tendencia a realizar
agentes terapéuticos antivirales como aciclovir, ganciclovir, foscarnet, cidofovir, pruebas de diagnóstico viral fuera de los laboratorios de virología tradicionales se acelere a
fármacos antirretrovirales, inhibidores de neuraminidasa e IFN- un que son efectivos medida que las técnicas de diagnóstico rápido basadas en metodologías inmunológicas y de
para infecciones virales específicas pero caros ácidos nucleicos reemplacen cada vez más el cultivo viral.
Cultivo de células. La era moderna de la virología diagnóstica se remonta a

Recibido el 21 de junio de 2000; publicado electrónicamente el 4 de octubre de 2000. Reimpresiones o
las primeras descripciones de aislamiento viral en cultivo celular por Weller y Enders en 1948
correspondencia: Dr. Gregory A. Storch, Departamento de Pediatría, Facultad de Medicina de la Universidad
[4] y Enders et al. en 1949 [5]. De hecho, la necesidad de técnicas de cultivo celular es la
de Washington en el Hospital de Niños de St. Louis, One Children's Place, St. Louis, MO 63110 ( storch @
kids. wustl.edu ). razón de ser de los laboratorios de virología como entidades separadas de otros laboratorios
de microbiología clínica general. Si bien la importancia relativa del aislamiento viral como
Enfermedades infecciosas clínicas 2000; 31: 739–51
método de diagnóstico está disminuyendo rápidamente, sigue siendo necesario
q 2000 por la Sociedad de Enfermedades Infecciosas de América. Todos los derechos reservados. 1058-4838 / 2000 /
3103-0018 $ 03.00
740 Storch CID 2000; 31 (septiembre)
Tabla 1. Técnicas empleadas en virología diagnóstica. afectado en líneas de células indicadoras para dirigir la inserción de receptores virales en la
Cultivo de células
superficie de la célula y / o para dirigir la expresión de promotores que responden a una proteína
Detección de antígenos viral específica presente en la muestra. La activación del promotor desencadena una enzima
Tinción de anticuerpos fluorescentes informadora como segundo-
Tinción de anticuerpos inmunoperoxidasa
galactosidasa que actúa sobre un sustrato para indicar la presencia del virus que se
Inmunoensayo enzimático
Detección de ácido nucleico
busca. Este enfoque ha sido el más utilizado para el VHS [8] y el VIH [9].
Reacción en cadena de la polimerasa
Otros métodos de amplificación de ácidos nucleicos El virus para el que el cultivo sigue siendo más útil es el HSV. El cultivo celular también se
Microscopía electrónica
aplica a veces para la detección de CMV, VZV, adenovirus, RSV, virus de la influenza y parain fl
Citología

uenza, rinovirus y los enterovirus. También se puede utilizar para detectar los virus del
Histología
Inmunohistoquímica sarampión, la rubéola y las paperas, aunque esas enfermedades son actualmente muy
Hibridación in situ inusuales en los Estados Unidos. Para todos los virus mencionados, las pruebas rápidas que se
Serología describen a continuación están reemplazando gradualmente el cultivo viral.
Detección de antígenos. Los métodos de detección de antígenos incluyen fl uo-

porque es la única técnica capaz de proporcionar un aislado viable que se puede utilizar para
tinción con anticuerpo rescente (FA), tinción con inmunoperoxidasa y EIA. De estos, la
una caracterización adicional, como con las pruebas de susceptibilidad antiviral fenotípica. Una
tinción con FA es la más utilizada en virología diagnóstica. El diagnóstico rápido de virus
ventaja adicional es que, a diferencia de la mayoría de los métodos de detección de antígenos
mediante tinción con AF fue descrito por primera vez por Liu en 1956 [10] para la
y ácidos nucleicos, el cultivo viral permite la detección de múltiples virus, de los cuales no todos
detección de la gripe y Gardner y McQuillan [11] fueron pioneros en numerosos virus. El
pueden haberse sospechado en el momento en que se ordenó el cultivo.
método fue ampliamente adoptado por los laboratorios clínicos durante la década de
1980, en particular para la detección de virus respiratorios. La disponibilidad comercial
Debido a que ningún tipo de cultivo celular puede apoyar el crecimiento de todos
de anticuerpos monoclonales específicos fue crucial. Los métodos de tinción de FA
los virus médicamente relevantes, los laboratorios de virología deben mantener
continúan mejorando mediante el uso de citocentrifugación para preparar muestras [12,
varios tipos de cultivos celulares diferentes. Los requisitos mínimos son una línea
13] y tinción simultánea con múltiples anticuerpos diferentes marcados con diferentes
celular primaria de riñón de mono, utilizada para el aislamiento de enterovirus y
etiquetas fluorescentes [14].
respiratorios, y una línea de fibroblastos humanos, utilizada para el aislamiento de
citomegalovirus (CMV), virus varicela-zoster (VZV) y rinovirus. Se requiere una línea
celular epitelial humana continua como HEp-2 para el aislamiento de RSV. Las
Los métodos de detección de antígenos son particularmente útiles para virus que crecen
líneas celulares que se utilizan para una muestra específica se determinan mediante
lentamente o son lábiles, lo que dificulta la recuperación en cultivo. Las dianas más
la información comunicada por el médico que realiza la solicitud al laboratorio y por
el conocimiento de las muestras generalmente aisladas de un tipo de muestra dado. importantes han sido el VSR, los virus de la influenza y parain fl uenza y los adenovirus en las
Por ejemplo, el CMV es el principal virus aislado de las muestras de orina, muestras respiratorias; HSV y VZV en muestras cutáneas; rotavirus en muestras de heces; y
CMV y virus de la hepatitis B (antígeno de superficie) en muestras de sangre. Los virus como
los enterovirus y los rinovirus que tienen una gran heterogeneidad antigénica y carecen de
antígenos de reacción cruzada no son adecuados para las técnicas de detección de
antígenos. Las ventajas de las técnicas de detección de antígenos son la rapidez (los
El crecimiento de virus en cultivo celular generalmente se detecta visualizando cambios resultados pueden estar disponibles pocas horas después de la recepción de la muestra en el
morfológicos en las células, conocido como efecto citopático (CPE). Las características del laboratorio) y la falta de requisitos de viabilidad viral en la muestra, lo que permite una mayor
CPE son a menudo lo suficientemente distintivas como para permitir que el laboratorio fl exibilidad en la manipulación y transporte de las muestras.
sospeche de qué virus es responsable. Cuando sea necesario, la con fi rmación se puede
lograr raspando las células infectadas de las paredes del tubo o vaso en el que están
creciendo y preparando una tinción de anticuerpo fluorescente con el uso de anticuerpos Detección de ácidos nucleicos. El desarrollo del análisis de PCR en
monoclonales específicos para el virus o virus que se cree que son responsables del ECP. Por 1985 [15] hizo posible el diagnóstico de infección viral mediante la detección
lo general, los cultivos celulares se observan al microscopio para detectar el ECP cada uno o sensible de ácidos nucleicos virales específicos. Cualquier virus puede
dos días durante la primera semana de incubación. El tiempo necesario para detectar la ECP potencialmente detectarse de esta manera, y se siguen desarrollando aplicaciones
varía de 1 a 2 días después de la inoculación del virus del herpes simple (HSV) a 1 a 3 de análisis de PCR y otras técnicas de amplificación de ácidos nucleicos. Hay pocas
semanas para el CMV. dudas de que durante la próxima década, las aplicaciones de las técnicas de
detección de ácidos nucleicos remodelarán drásticamente el campo de la virología
diagnóstica. Mediante la inclusión de un paso que emplea la enzima transcriptasa
El método de cultivo en vial de concha, desarrollado por primera vez para CMV [6, 7], inversa (RT), el análisis de PCR se puede adaptar para detectar ARN viral. Los
reduce drásticamente el tiempo necesario para la detección de virus en cultivo celular. El ensayos de carga viral para el VIH y el virus de la hepatitis C (VHC) son ejemplos de
método implica la centrifugación de la muestra en la monocapa de cultivo celular y la técnicas cuantitativas de detección de ácido nucleico. Las técnicas multiplex
incubación durante 1 a 2 días, seguida de tinción con anticuerpo fluorescente del cultivo permiten la detección simultánea de más de un virus o incluso de un virus y una
celular, independientemente de si el CPE es visible. Además de la detección de CMV, clase diferente de patógeno. Por ejemplo, Toxoplasma gondii se ha utilizado para el
también se han utilizado cultivos de viales de concha para acelerar la detección de HSV, diagnóstico de lesiones masivas en el cerebro de pacientes con SIDA [16].
VZV, virus respiratorios y enterovirus.
Otra modificación del cultivo celular tradicional implica el uso de líneas celulares
modificadas genéticamente. En estos sistemas, los genes se trans- Los ensayos de amplificación de ácido nucleico se pueden clasificar como
CID 2000; 31 (septiembre) Virología diagnóstica 741
ensayos de plificación o ensayos de amplificación de señales. Ejemplos de ensayos de amplificación de cualquier anticuerpo antiviral es siempre (VIH) o generalmente (VHC) indicativo de una
de diana además de la PCR incluyen la reacción en cadena de la ligasa, que se ha utilizado para la infección actual. Por último, la serología es especialmente útil para definir una inmunidad
detección de agentes de enfermedades de transmisión sexual [17], y el ensayo de amplificación antiviral específica. Los virus para los que es útil definir el estado inmunológico por serología
mediado por transcripción [18]. En los ensayos de amplificación de señales, la diana en sí no se incluyen VZV, CMV, EBV, HSV, virus del sarampión y rubéola, parvovirus B19, hepatitis A
amplifica; más bien, la amplificación es de una señal química utilizada para detectar la hibridación de (anticuerpos totales) y hepatitis B (anticuerpos contra el antígeno de superficie de la hepatitis
una sonda con el ácido nucleico diana. Los ejemplos incluyen el ensayo de ADN de cadena B).
ramificada (ADNb) [19] y el ensayo de captura híbrida [20]. Los ensayos de amplificación de señales
son menos sensibles que los ensayos de amplificación de diana, pero también son menos propensos
a producir resultados falsos positivos debido a la contaminación de las reacciones con ácido nucleico

amplificado en laboratorio. Aproximación al diagnóstico de infecciones virales específicas
Infecciones mucocutáneas. Los métodos utilizados para el laboratorio
Las modificaciones recientes del análisis de PCR denominadas PCR "en tiempo real" son El diagnóstico teórico de las infecciones mucocutáneas causadas por virus se muestra
un desarrollo espectacular que puede ampliar en gran medida la aplicabilidad del análisis de en la tabla 2. La razón más común para el diagnóstico viral de las infecciones
PCR para el diagnóstico de infecciones virales. En estos ensayos, se genera una señal mucocutáneas es la presencia de lesiones vesiculares o ulcerativas, que pueden ser
fluorescente a medida que tiene lugar la PCR. Los ensayos se ejecutan en instrumentos causadas por HSV o VZV y ocasionalmente por enterovirus. Cuando se requiere un
automatizados altamente especializados que incluyen sistemas ópticos para excitar los tintes
diagnóstico de laboratorio, el cultivo y la tinción con AF son los procedimientos de
fl uorescentes y detectar emisiones fl uorescentes. Ejemplos de instrumentos de PCR en
elección. Se ha estimado que la sensibilidad del cultivo para detectar el VHS en las
tiempo real incluyen el Light Cycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania) y el Prism
lesiones genitales es del 80% en general [21] y es mayor para las lesiones vesiculares
7700, que utiliza tecnología “Taqman” (Perkin Elmer, Foster City, CA). La combinación de
o pustulosas que para las lesiones con costra [22]. Los cultivos para el VHS suelen ser
amplificación y detección de señales reduce notablemente el tiempo necesario para la
positivos en 1 a 3 días. El VZV es un virus más lábil que el HSV y los cultivos son
detección de ácido nucleico y reduce en gran medida la probabilidad de contaminación de
reacciones con ácido nucleico amplificado en laboratorio. ya que no es necesario abrir los menos sensibles y más lentos, y por lo general requieren de 4 a 10 días para su
tubos en los que se ha realizado la PCR. Por ejemplo, las reacciones de PCR ejecutadas en detección.
el Light Cycler se pueden completar en 30 minutos.
La tinción con FA de una muestra obtenida raspando la base de una lesión con
una hoja de bisturí o frotándola vigorosamente con un hisopo de poliéster o rayón es
A pesar de las aplicaciones potenciales virtualmente ilimitadas, la disponibilidad de ensayos
más sensible para detectar VZV que el cultivo [23] y debe considerarse el
de amplificación de ácido nucleico para diagnóstico sigue siendo limitada porque pocos de estos
procedimiento de elección. La tinción de FA para el VHS también se puede realizar de
ensayos están actualmente autorizados por la Administración de Drogas y Alimentos de los
forma eficaz con el mismo espécimen, especialmente si se utiliza citocentrifugación
Estados Unidos (FDA). Los únicos ensayos actualmente autorizados y disponibles para los
para procesar el espécimen en el laboratorio [12]. Un estudio reciente mostró que el
laboratorios en forma de kit son el ensayo Amplicor HIV-1Monitor para ARN del VIH (Roche
análisis de PCR era más sensible que el cultivo viral para la detección de HSV en
Molecular Systems, Indianapolis), el ensayo Nuclisens para ARN pp65 de CMV
lesiones cutáneas, lo que sugiere la posibilidad de una futura aplicación del análisis de
(Organon-Teknika, Durham, NC) y la captura híbrida ensayos para CMV y virus del papiloma
humano (HPV; Digene Corporation, Beltsville, MD).

PCR para la detección rutinaria de HSV [24].
Muchos laboratorios han desarrollado sus propios ensayos de PCR "caseros". La

implementación y el uso de estos ensayos están regulados por las Enmiendas de mejora de los Otras infecciones virales comunes de la piel o las membranas mucosas son
laboratorios clínicos de 1988 (CLIA '88). La disponibilidad de ensayos de elaboración casera se causadas por VPH y poxvirus (p. Ej., Molusco contagioso y orf). Estos virus no se
limita en gran medida a laboratorios universitarios seleccionados cuyo personal tiene las cultivan en laboratorios clínicos. La función de la prueba del VPH de muestras del
habilidades y el interés necesarios y a los grandes laboratorios comerciales de referencia. La tracto genital femenino para detectar los tipos de VPH de alto riesgo que están
calidad y el rendimiento de estos ensayos varían ampliamente. Los programas de certificación
asociados con el carcinoma de cuello uterino aún no está establecida, aunque es
entre laboratorios para ayudar a estandarizar estos ensayos apenas están comenzando a estar
probable que se utilice en el futuro en situaciones específicas, como para la
disponibles.
evaluación del riesgo de cáncer de cuello uterino en mujeres con frotis de
Papanicolaou equívocos [25].
Serología. El diagnóstico de infecciones virales mediante la detección de anticuerpos
antivirales específicos es un método tradicional cuya utilidad clínica está limitada por la necesidad
Cuando se requiere un diagnóstico viral específico, las infecciones por VPH pueden
de comparar los títulos de anticuerpos agudos y convalecientes. Sin embargo, la detección de
anticuerpos IgM específicos de virus permite realizar un diagnóstico a partir de una sola muestra.
Los virus para los que es útil la detección de anticuerpos IgM específicos de virus incluyen EBV Tabla 2. Diagnóstico de laboratorio de infecciones virales de la piel y
(anticuerpos IgM contra el antígeno de la cápside viral); CMV; virus de la hepatitis A; virus de la membranas mucosas.
hepatitis B (anticuerpos IgM contra el antígeno central de la hepatitis B); parvovirus B19; virus del Virus Métodos)
sarampión, la rubéola y las mucosas; y los arbovirus como el virus de la encefalitis de St. Louis.
Herpes Simple Cultivo, tinción de anticuerpos fluorescentes Tinción de
Varicela zoster anticuerpos fluorescentes, cultivo Cultivo
Enterovirus
Papiloma humano Ensayo de captura híbrida, análisis de PCR, histología, citología Histología,
Otra área de utilidad de los métodos serológicos es para determinadas infecciones
Poxvirus microscopía electrónica
crónicas como el VIH o el VHC, en las que la presencia
Tabla 3. Diagnóstico de laboratorio de infecciones virales de las vías respiratorias. Virus A y B. Este ensayo tuvo una sensibilidad comparable a la del cultivo en una
tracto.
evaluación [30]. Zstat fl u (ZymeTx, Oklahoma City, OK) se basa en la detección de
Virus Detección de antígenos Cultura la actividad de la gripe neuraminidasa y también detecta pero no distingue entre los
Sincitial respiratorio si si virus de gripe A y B. Este ensayo tuvo una sensibilidad (en comparación con el
Gripe si si
cultivo) del 76% para el virus de la influenza A y del 46% para el virus de la influenza
Parain fl uenza si si
Adenovirus si si
B en una evaluación, sobre la base del análisis de muestras de lavado nasal y
Rinovirus No si aspirado nasal [31]. Cabe señalar que este ensayo está autorizado actualmente solo
Coronavirus No No
para su uso con muestras de frotis de garganta. Una prueba rápida llamada prueba
de gripe QuickVue (Quidel, San Diego) está autorizada por la FDA para su uso en

hisopos nasales, aspirados o lavados, pero aún no se ha evaluado en ninguna
ser diagnosticados mediante métodos de detección de ADN como el ensayo de captura híbrida
publicación revisada por pares. El rendimiento de todos estos ensayos puede verse
[26] y el análisis de PCR [27] o mediante la visualización de cambios citológicos o histológicos
afectado por la muestra utilizada para la prueba.
característicos. El ensayo de captura híbrida, pero no el análisis de PCR, está actualmente
autorizado por la FDA para la detección del VPH. Debido a los diferentes riesgos de cáncer de
cuello uterino conferidos por los diferentes tipos de virus del papiloma, habrá que realizar
pruebas útiles para discriminar entre los tipos de alto riesgo y los de bajo riesgo. Tanto el
ensayo de captura híbrida como el análisis de PCR tienen esta capacidad.
Infección del SNC. Para fines de diagnóstico, es útil para di-

Infecciones respiratorias. Los métodos disponibles para el diagnóstico de laboratorio de
Divida las infecciones virales del SNC en tres categorías: meningitis aguda en huéspedes
las infecciones respiratorias víricas se muestran en la tabla 3. El diagnóstico específico de
inmunológicamente normales, encefalitis aguda que ocurre en huéspedes
las infecciones respiratorias víricas se realiza ampliamente en pacientes pediátricos y cada
inmunológicamente normales e infecciones oportunistas que ocurren en individuos
vez más también en pacientes adultos. Los métodos más utilizados son el cultivo viral y la
inmunodeprimidos. En cada categoría, las pruebas basadas en la amplificación de ácidos
detección de antígenos mediante tinción con FA o EIA. Las muestras adecuadas incluyen
nucleicos se están convirtiendo rápidamente en el medio más importante de diagnóstico de
aspirados nasofaríngeos, lavados o hisopos; lavados bronquiales; y líquido de lavado
laboratorio. Las pruebas utilizadas para el diagnóstico de laboratorio de meningitis aguda y
broncoalveolar. Las pruebas de detección de antígenos realizadas directamente en las
encefalitis se muestran en la tabla 4.
muestras tienen la mayor utilidad clínica debido al potencial de rápida disponibilidad de los
resultados. Se dispone de procedimientos de detección de antígenos para el VSR, los virus

Actualmente, las causas virales más comunes de meningitis aguda son los
de la parain fl uenza y la influenza y los adenovirus, pero no para los rinovirus ni los
enterovirus y el VHS tipo 2 (VHS-2). Un informe reciente sugiere que el VZV también
coronavirus. Todos estos virus, excepto los coronavirus, pueden cultivarse en cultivos
puede ser una causa importante, que a veces produce meningitis en ausencia de
celulares.
lesiones cutáneas [33]. Para la detección de enterovirus, RT-PCR realizada en LCR
Las técnicas de detección de antígenos son más sensibles que el cultivo para el VSR,
Cuadro 4. Diagnóstico de laboratorio de meningitis y encefalitis virales.
pero menos sensibles para los demás virus respiratorios [25]. La sensibilidad de la tinción
con AF para la influenza y la parainfluencia en comparación con el cultivo varía Virus Métodos) un
ampliamente. Muchos laboratorios informan sensibilidades de ∼ 80%, aunque algunos HSV Análisis de PCR
laboratorios informan sensibilidades cercanas al 100% [11]. La sensibilidad de la tinción VZV Análisis de PCR
Enterovirus Análisis de RT-PCR (preferido), cultivo (el LCR es

con FA aumenta cuando el laboratorio utiliza citocentrifugación para la preparación de
el espécimen preferido para cultivo; el cultivo de
muestras [13]. nasofaringe, garganta y heces son más sensibles pero
menos específicos)
Arbovirus Serología (pruebas de detección de IgM específicas de virus
Se encuentran disponibles varios ensayos comerciales para la detección rápida del virus
ferred) en LCR y suero
de la influenza. Estas pruebas son interesantes porque son similares a las pruebas rápidas Fiebre por garrapatas de Colorado Análisis de PCR (sangre completa), serología (para
IgM específica del virus de la fiebre de las garrapatas de Colorado)

ampliamente utilizadas para los estreptococos del grupo A y pueden ser realizadas por
Rabia segundo Análisis de RT-PCR (saliva, piel), tinción de FA
personas sin conocimientos especializados en virología, circunstancia que potencialmente
(piel), cultivo (saliva), serología (LCR y suero)
hace que el diagnóstico rápido de influenza esté ampliamente disponible fuera de los
laboratorios de virología. El ensayo Directigen (Becton Dickinson, Cockeysville, Paperas Serología (para IgM específica de paperas), cultivo
(LCR, saliva, orina)
Sarampión (esclerosante subagudo
MD) es un EIA que se puede utilizar para detectar el virus de la gripe A. Una versión panencefalitis) Serología
mejorada, actualmente en desarrollo, también puede detectar el virus de la influenza B. El Coriomeningitis linfocítica Serología (suero), cultivo (LCR y sangre)
ensayo Directigen tiene una sensibilidad de ∼ 80% en relación a la cultura [28, 29]. NOTA. FA, anticuerpo fluorescente; HSV, virus del herpes simple; RT, reverso
transcriptasa; VZV, virus varicela-zoster.
un Realizado en LCR a menos que se especifique otra muestra.
FluOIA (Biostar, Boulder, Colorado) es un inmunoensayo óptico que detecta pero segundo Consultar a los laboratorios de salud pública siempre que se considere el diagnóstico de rabia; las pruebas se
no distingue entre la influenza realizan en laboratorios de salud pública.

Cuadro 5. Diagnóstico de laboratorio por análisis de PCR de oportunistas Infección por HSV del SNC. También recomendamos que se pueda utilizar un
infecciones virales del SNC.
resultado negativo como base para suspender el tratamiento con aciclovir si la
Análisis de PCR sospecha clínica de ese diagnóstico es baja. Sin embargo, cuando la sospecha clínica
Sensibilidad, Ciudad específica, es alta, se debe continuar con aciclovir incluso cuando el análisis de PCR del VHS
Virus Síndrome % %
sea negativo, porque la sensibilidad de la prueba es! 100%. En estos casos, puede
Epstein-Barr Linfoma primario del SNC 97 98 ser útil repetir el análisis de PCR en una muestra obtenida uno o dos días después y
Citomegalovirus Encefalitis, radiculomielitis 82 98
considerar otros diagnósticos que puedan simular la encefalitis por VHS [47].
Varicela-zóster Encefalitis, mielitis N/A N/A
JC Multifocal progresivo 72 99
leucoencefalopatía

Herpes Simple Meningoencefalitis 100 99,5
Los arbovirus también son causas importantes de encefalitis en huéspedes normales. Los virus más
NOTA. Los datos proceden de [51]. NA, no disponible. importantes que causaron infección humana en los Estados Unidos en los últimos años son los de California
(LaCrosse), St. Louis, equinos del este, equinos occidentales, equinos venezolanos y del Nilo occidental. Estas
infecciones se diagnostican mejor mediante serología, especialmente con pruebas que detectan anticuerpos IgM
es considerablemente más sensible que el cultivo viral [34, 35]. Primers que
específicos del virus. Tanto el suero como el LCR deben analizarse siempre que sea posible. La sensibilidad de
amplifican un segmento altamente conservado de los 5 ′ La región no traducida del
estas pruebas se acerca al 100% al décimo día de la enfermedad [48]. Las técnicas de cultivo y amplificación de
genoma del enterovirus detecta 60 de los 67 serotipos de enterovirus [36], incluidos
ácidos nucleicos son menos útiles que la serología para el diagnóstico de estas infecciones debido a los niveles
los serotipos más comúnmente asociados con la meningitis [36, 37]. Las técnicas de
bajos y transitorios de viremia que son característicos. Los laboratorios estatales de salud pública están
amplificación rápida de ácido nucleico, como el análisis de RT-PCR para detectar
implementando actualmente pruebas de diagnóstico para el virus del Nilo Occidental. Las muestras de suero y
enterovirus, tienen el potencial de disminuir el uso necesario de antibióticos,
LCR en fase aguda deben enviarse al laboratorio de salud pública estatal cuando se considere este diagnóstico.
especialmente en pacientes que han sido tratados previamente con antibióticos
Se ha descrito el uso de un ensayo de RT-PCR, pero no fue positivo en todos los casos [49]. La fiebre por
(para quienes la retirada de antibióticos sobre la base de cultivos bacterianos
garrapatas de Colorado también se considera a menudo junto con las enfermedades arbovirales y es una causa
negativos de LCR y sangre podría de lo contrario, debe hacerse a regañadientes) y
importante de infección del SNC en partes del oeste de los Estados Unidos. El virus causante es un coltivirus,
para pacientes con características clínicas atípicas. Incluso en casos con
que causa la infección de los eritrocitos circulantes y puede detectarse mediante cultivo, tinción con AF o análisis
características clínicas típicas, las pruebas rápidas pueden ser útiles para acortar la
de PCR realizado en un coágulo de sangre [50]. y es una causa importante de infección del SNC en partes del
hospitalización y reducir los costos médicos [1, 38, 39]. Desafortunadamente, la FDA
oeste de Estados Unidos. El virus causante es un coltivirus, que causa la infección de los eritrocitos circulantes y
aún no ha autorizado ningún ensayo de amplificación de ácido nucleico de
puede detectarse mediante cultivo, tinción con AF o análisis de PCR realizado en un coágulo de sangre [50]. y
enterovirus.
es una causa importante de infección del SNC en partes del oeste de Estados Unidos. El virus causante es un
coltivirus, que causa la infección de los eritrocitos circulantes y puede detectarse mediante cultivo, tinción con AF
o análisis de PCR realizado en un coágulo de sangre [50].

En pacientes adultos, la meningitis por HSV, generalmente causada por HSV-
2, es una causa común de meningitis aséptica. Esta enfermedad se presenta con o

sin lesiones genitales concomitantes y puede tener episodios recurrentes. Si bien las
infecciones primarias pueden producir un cultivo positivo de LCR, los casos
Las pruebas de detección de rabia, que se realizan en laboratorios de salud pública, deben
recurrentes siempre son cultivos negativos. El análisis de PCR ha sido muy útil para
considerarse para pacientes con antecedentes de exposición o con encefalitis de etiología
permitir el reconocimiento rápido de casos tanto primarios como recurrentes [40, 41].
desconocida. Al comienzo de la enfermedad, el diagnóstico se basa en la detección de antígenos
Asimismo, el análisis de PCR para VZV puede ser fundamental para identificar casos
de la rabia o ácidos nucleicos en la saliva, el líquido cefalorraquídeo o la piel obtenidos por biopsia
de meningitis aguda causada por VZV, que puede ocurrir como una complicación de
de la parte posterior del cuello. Después del octavo día de enfermedad, el diagnóstico también
varicela o zoster y puede ocurrir con o sin lesiones cutáneas [33, 42].
puede realizarse mediante la detección de anticuerpos contra la rabia en suero o LCR. Los
anticuerpos contra la rabia también pueden estar presentes en el suero pero no en el LCR como
resultado de la inmunización previa a la exposición. Se recomienda consultar con las autoridades

El HSV-1 es la causa más común de encefalitis esporádica en los Estados Unidos. El
de salud pública siempre que se considere el diagnóstico de rabia.
reconocimiento precoz de esta entidad es extremadamente importante porque la terapia
antiviral precoz puede reducir la morbilidad y la mortalidad, que pueden alcanzar el 70% entre
los casos no tratados [43]. Los resultados del análisis de PCR realizado en LCR se
Los virus más importantes que causan infección del SNC en pacientes
correlacionan muy estrechamente con los resultados de la síntesis de anticuerpos contra el
inmunodeprimidos son CMV, EBV, VZV y JC
VHS a partir de biopsias cerebrales y / o muestras intratecales [44, 45]. En un metaanálisis
reciente que comparó el análisis de PCR del LCR con uno de estos procedimientos de
referencia, la sensibilidad del análisis de PCR fue del 96% y la especificidad fue del 99% [46].
Cuadro 6. Diagnóstico de laboratorio de gastroenteritis viral.
Por esta razón, el análisis de PCR del LCR ahora se acepta ampliamente como un sustituto
Virus Método (s) de prueba preferido un
del análisis de una muestra de biopsia cerebral para el diagnóstico de encefalitis por HSV.
Rotavirus EIA
Sobre la base de un modelo de análisis de decisiones, recomendamos aceptar un resultado
Adenovirus (serotipos entéricos) EIA
de análisis de PCR de LCR positivo como diagnóstico de Calicivirus Análisis de PCR con transcriptasa inversa EIA, análisis de
Astrovirus PCR con transcriptasa inversa
un Todo realizado en heces.

Cuadro 7. Métodos de prueba preferidos para el diagnóstico de citomegalovirus utilizados para el diagnóstico de laboratorio de gastroenteritis viral se muestran en la tabla
infección.
6.
Necesidad de diagnostico Prueba (s) preferidas un
El rotavirus es la causa más importante de gastroenteritis en niños pequeños. Debido
Estado inmunológico Serología (IgG) a que grandes cantidades de rotavirus se eliminan en las heces durante la infección
Infección congénita, posparto Cultivo de orina
aguda por rotavirus, las pruebas de detección de antígenos realizadas en muestras de
Infección congénita, mononucleosis in Análisis de cultivo o PCR de serología de líquido amniótico
utero, huésped normal (IgM)
heces son muy sensibles para establecer la presencia de este virus. La FDA ha
Infección sistémica pp65 Ensayo de antigenemia, captura híbrida autorizado varios ensayos de antígenos de rotavirus y están ampliamente disponibles.
huésped inmunosuprimido ensayo, análisis NASBA, análisis PCR, cultivo
Los EIA son generalmente más sensibles que los ensayos basados en aglutinación
[56].

Inicio de la terapia preventiva pp65 Ensayo de antigenemia, análisis de PCR,
ensayo de captura híbrida, análisis NASBA Análisis
Seguimiento de la respuesta a la terapia cuantitativo de PCR, antígeno pp65
Los adenovirus entéricos son serotipos de adenovirus específicos (especialmente
ensayo mia, ensayo cuantitativo de captura híbrida
40 y 41) que causan gastroenteritis y, a diferencia de los serotipos que causan
Retinitis Análisis de PCR de líquido vítreo segundo infecciones respiratorias, no crecen en los cultivos celulares que se utilizan
Enfermedad gastrointestinal Histología, inmunohistoquímica
normalmente en los laboratorios de virología de diagnóstico. Un EIA con licencia de
Neumonitis Histología, inmunohistoquímica
Enfermedad del SNC Análisis de PCR de LCR
la FDA llamado Adenoclone (Meridian Diagnostics, Cincinnati) está disponible para
la detección de estos virus en muestras de heces. Los calicivirus como el agente de
NOTA. NASBA, amplificación basada en secuencias de ácidos nucleicos.
un Realizado en sangre a menos que se indique lo contrario. Norwalk son las causas virales más comunes de brotes de gastroenteritis. Estas
segundo La mayoría de los casos se diagnostican sobre la base de hallazgos clínicos.
infecciones son leves y generalmente no requieren hospitalización. El diagnóstico
específico es más importante en el contexto de un brote. Se han desarrollado
ensayos de RT-PCR para detectar calicivirus en las heces [57] y están disponibles
poliomavirus. Los síndromes neurológicos asociados con cada uno de estos virus en pacientes
en muchos laboratorios de los departamentos de salud estatales. Los astrovirus
inmunodeprimidos y la sensibilidad y especificidad informadas del análisis de PCR para el diagnóstico se
pueden detectarse en muestras de heces por EIA y por ensayo de RT-PCR [58].
muestran en la tabla 5 [51]. El CMV es una causa importante de encefalitis y radiculomielitis en pacientes con
SIDA avanzado. En estos casos, el virus sólo se puede cultivar a partir de LCR en raras ocasiones, pero es
detectable mediante análisis de PCR [52]. La cuantificación del nivel de ADN del CMV es útil para distinguir
entre una infección del SNC por CMV clínicamente significativa y los casos con infección asintomática o
presintomática [53]. El VEB causa linfoma primario del SNC en pacientes con sida, y la detección del ADN del
VEB mediante análisis de PCR realizado en LCR de pacientes con sida con lesiones tumorales que realzan el
CMV. El cultivo viral y las pruebas serológicas fueron los
contraste visualizadas mediante técnicas de neuroimagen se correlaciona estrechamente con la presencia de
métodos alternativos utilizados para diagnosticar la infección por CMV, pero ambos están
linfoma del SNC [54]. El análisis de PCR para el virus JC es útil para diagnosticar la leucoencefalopatía
siendo reemplazados cada vez más por una serie confusa de métodos alternativos. La
multifocal progresiva, aunque la sensibilidad en la mayoría de los laboratorios es ≥ 100% [51]. El uso de la PCR
razón para buscar reemplazos es que ni el cultivo ni la serología tenían la sensibilidad y
del VZV para el diagnóstico de la mielitis y encefalitis asociadas al VZV se complica por la observación de que el
especificidad adecuadas para definir una infección clínicamente significativa. Los métodos
ADN del VZV a veces es detectable en el LCR de pacientes con zóster agudo que no tienen manifestaciones
de detección directa más nuevos incluyen el ensayo de antigenemia pp65 realizado en
neurológicas [55]. El análisis de PCR puede ser más útil para el diagnóstico de infecciones por VZV del SNC que
leucocitos de sangre periférica [59] y una variedad de métodos de detección de ácido
ocurren en ausencia de lesiones cutáneas (herpete de zóster sinusoidal). El uso de la PCR del VZV para el
nucleico, incluido el análisis de PCR, el ensayo de captura híbrida [60] y la amplificación
diagnóstico de la mielitis y encefalitis asociadas al VZV se complica por la observación de que el ADN del VZV a
basada en secuencias de ácido nucleico (NASBA) [61 ]. Este último es único en el sentido
veces es detectable en el LCR de pacientes con zóster agudo que no tienen manifestaciones neurológicas [55].
de que detecta el ARN del CMV, posiblemente un indicador más específico de infección
El análisis de PCR puede ser más útil para el diagnóstico de infecciones por VZV del SNC que ocurren en
activa que el ADN del CMV. Con el tiempo, es probable que los ensayos cuantitativos de
ausencia de lesiones cutáneas (herpete de zóster sinusoidal). El uso de la PCR del VZV para el diagnóstico de
amplificación de ácido nucleico se conviertan en las pruebas de fi nitivas para CMV debido
la mielitis y encefalitis asociadas al VZV se complica por la observación de que el ADN del VZV a veces es
al creciente cuerpo de información que respalda
detectable en el LCR de pacientes con zóster agudo que no tienen manifestaciones neurológicas [55]. El análisis
de PCR puede ser más útil para el diagnóstico de infecciones por VZV del SNC que ocurren en ausencia de
lesiones cutáneas (herpete de zóster sinusoidal).
Infección del tracto gastrointestinal. Cuatro virus o grupos de Cuadro 8. Perfiles de anticuerpos contra el virus de Epstein-Barr (VEB).
Los virus se reconocen actualmente como causas importantes de gastroenteritis: Perfil de anticuerpos
rotavirus, adenovirus entéricos, calicivirus y astrovirus. Ninguno de estos se cultiva en Estado de EBV VCA-G VCA-M EA-D OREJA EBNA
laboratorios clínicos y, en consecuencia, el cultivo viral no tiene ningún papel en la

Mononucleosis infecciosa 1 1 1 2 2
evaluación de laboratorio del paciente con diarrea. Estos virus fueron descubiertos por Mononucleosis convaleciente 1 2 1/2 1 1
microscopía electrónica de materia fecal. Aunque la microscopía electrónica de Infección pasada 1 2 2 2 1

Susceptible 2 2 2 2 2
transmisión con tinción negativa se puede utilizar como prueba de diagnóstico, ensayos
NOTA. EA-D, componente difuso del antígeno temprano; EA-R, compuesto restringido
más nuevos y más convenientes han reemplazado a la microscopía electrónica en todos
componente del antígeno temprano; EBNA, antígeno nuclear de Epstein-Barr; VCA-G, IgG al antígeno de la
los laboratorios, excepto en unos pocos. Pruebas cápside viral; VCA-M, IgM al antígeno de la cápside viral; 1, positivo; 2, negativo; 1/2, variable.
Cuadro 9. Pruebas de diagnóstico de hepatitis viral.
Virus, función probada para Significado, uso y comentarios
Hepatitis A
IgM Útil para el diagnóstico de infección aguda
Anticuerpo total Mide todos los anticuerpos contra el virus de la hepatitis A. La presencia indica pasado o actual
alquiler de infección o inmunización. Se utiliza para evaluar el estado inmunológico del VHA
Hepatitis B
Antígeno de superficie La presencia indica una infección actual y puede representar una infección aguda o
porte crónico
Anticuerpo de superficie La presencia indica infección o inmunización pasadas. Ocasionalmente positivo en individuos

personas que también son positivas para el antígeno de superficie de la hepatitis B
Anticuerpo de núcleo total Mide todos los anticuerpos contra el antígeno central de la hepatitis B. La presencia indica pasado o
infección actual. No se vuelve positivo como resultado de la inmunización. Positivo en una infección reciente.
Anticuerpo central Ocasionalmente positivo a niveles bajos en portadores crónicos. La presencia indica una infección actual activa y se
antígeno e correlaciona con la infectividad. La presencia indica una infección actual menos activa con una infectividad más
Anticuerpo contra el ADN del antígeno e baja. Cuantitativo; mide el nivel de replicación
Hepatitis C
Anticuerpo Una EIA. La presencia de anticuerpos indica una infección actual o pasada; falso-
los positivos son frecuentes, especialmente en una población de bajo riesgo, como los donantes de sangre. Un ensayo de
Anticuerpo radioinmunobligación. La presencia de anticuerpos indica una infección actual o pasada.
ción; con fi rma una EIA positiva, especialmente en poblaciones de bajo riesgo
ARN La presencia indica una infección actual; con fi rma una EIA positiva e indica una
esponse a la terapia
Genotipo Hay varios métodos disponibles, incluido el ensayo de sonda de línea, EIA y secuencia de nucleótidos.
extinción el genotipo afecta la respuesta a la terapia con interferón

Hepatitis D
Anticuerpo La presencia indica una infección actual o reciente
Hepatitis E
IgM un Útil para el diagnóstico de la infección actual
IgG un La presencia indica una infección pasada o actual; de fi ne el estado inmunológico del virus de la hepatitis E
un Disponible solo sobre una base de investigación y en algunos laboratorios de referencia especializados.
una relación entre el nivel de CMV en sangre y la probabilidad de enfermedad valor [68]. El análisis de PCR realizado en plasma puede ser más específico [69], pero
sintomática presente o futura [62-66]. se requiere una evaluación clínica adicional. La infección localizada por CMV, como
La elección de la prueba comienza con el propósito de la prueba. Las neumonitis o enfermedad del tracto gastrointestinal, se diagnostica mejor mediante el
consideraciones importantes incluyen el síndrome clínico que se está investigando y examen histológico de la biopsia.
si el paciente es inmunológicamente normal o inmunodeprimido. Los métodos de tejido, complementado cuando necesario con
prueba para diferentes necesidades de diagnóstico relacionadas con el CMV se inmunohistoquímica.
muestran en la tabla 7. En general, la infección activa se diagnostica mejor mediante La terapia preventiva es ahora un enfoque ampliamente utilizado para el control del
pruebas directas de la presencia del virus, aunque una excepción es el diagnóstico CMV después de un trasplante de órganos sólidos o de médula ósea. Este enfoque se
de mononucleosis por CMV en huéspedes normales, en los que las pruebas para basa en el uso de un marcador de laboratorio que señala el inicio de la infección por
anticuerpos IgM específicos contra CMV es útil [67]. Una advertencia en el uso de CMV antes de que se produzcan manifestaciones clínicas importantes. Para este
esta prueba es que para algunos pacientes con infección aguda por VEB, las propósito, el análisis por PCR de leucocitos o plasma, el ensayo de antigenemia pp65
pruebas dan falso positivo para anticuerpos IgM específicos contra CMV [67], lo que y el ensayo de captura híbrida son todos apropiados. El análisis de PCR se prefiere
sugiere que las pruebas para infección aguda por VEB deben realizarse para los pacientes con trasplante de médula ósea debido a su mayor sensibilidad [70,
simultáneamente. La infección congénita se puede diagnosticar convenientemente 71]. En pacientes asintomáticos con sida, la detección de CMV por cualquiera de una
mediante urocultivo, variedad de métodos significa un mayor riesgo de enfermedad sintomática futura [72],
pero este hallazgo no se utiliza actualmente como indicación para iniciar el tratamiento
con fármacos anti-CMV.
Para el diagnóstico de infección sistémica por CMV en pacientes Virus de Epstein Barr. El VEB es la causa de la mayoría de los casos de infección
inmunodeprimidos, el ensayo de antigenemia pp65 [59] probablemente tiene la mejor mononucleosis fecciosa. También se asocia con linfoma primario del SNC en
combinación de sensibilidad y especificidad entre los métodos de prueba ampliamente pacientes con sida y síndrome linfoproliferativo postrasplante en receptores de
disponibles. Una ventaja adicional es que proporciona una estimación cuantitativa del trasplantes de órganos sólidos y médula ósea. El enfoque diagnóstico difiere para
nivel de viremia por CMV. El análisis de PCR cualitativo realizado en leucocitos de cada uno de estos síndromes clínicos. Dado que los cultivos para el VEB son
sangre periférica es demasiado sensible para el diagnóstico de infección sistémica demasiado lentos y engorrosos para realizarlos en laboratorios clínicos, se deben
clínicamente significativa, con un valor predictivo positivo bajo utilizar otros métodos de diagnóstico. Métodos serológicos
se utilizan para diagnosticar la mononucleosis infecciosa y otras manifestaciones en imposible de cultivar y, por lo tanto, todas las pruebas de laboratorio actuales implican la
individuos inmunológicamente normales, mientras que los métodos moleculares se detección de antígenos, anticuerpos o ácidos nucleicos específicos. Aunque la FDA no autoriza
utilizan en individuos inmunodeprimidos. actualmente las pruebas moleculares, los médicos que atienden a pacientes con VHC utilizan
En la mayoría de los casos, el diagnóstico de mononucleosis infecciosa se puede ampliamente las pruebas moleculares para el VHC, y las pruebas moleculares para el virus de la
realizar sobre la base de los hallazgos clínicos característicos, la presencia de linfocitos hepatitis B también están adquiriendo un uso más amplio. Los bancos de sangre utilizan
atípicos y la demostración de anticuerpos heterófilos, generalmente con una prueba actualmente pruebas moleculares para detectar el VHC en unidades de sangre de forma
rápida en portaobjetos. Las pruebas serológicas específicas para el VEB están experimental. La Tabla 9 muestra las pruebas de diagnóstico para la hepatitis viral y sus usos
reservadas para los niños pequeños, especialmente los de 4 años, que pueden no específicos.
desarrollar anticuerpos heterófilos con la infección aguda por el VEB [73], y para los

adultos con sospecha de infección por el VEB “heterófilo negativo”. La mayoría de los VIH y otros retrovirus humanos. Varias pruebas para el VIH
paneles de anticuerpos del VEB incluyen pruebas de anticuerpos IgG e IgM contra el se han convertido en parte de la corriente principal de la práctica médica moderna. Las
antígeno de la cápside viral (VCA) y anticuerpos contra el antígeno temprano (EA) y el indicaciones para el uso de estas pruebas se resumen en la tabla 10. En la mayoría de las
antígeno nuclear (EBNA) [74]. Algunos laboratorios también distinguen entre circunstancias, el diagnóstico de laboratorio del VIH se basa en un EIA positivo realizado en
componentes difusos y restringidos de EA porque la presencia de anticuerpos contra el suero o plasma. Los EIA del VIH están ampliamente disponibles y tienen sensibilidad y
componente difuso es más específica para una infección reciente. especificidad. 1 99,9% [77]. Sin embargo, los falsos positivos todavía representan un porcentaje
sustancial de todos los positivos cuando estas pruebas se utilizan en poblaciones de bajo
riesgo, como los donantes de sangre. Por esta razón, todos los EIA del VIH positivos por
La prueba de IgM anti-VCA es muy útil en el diagnóstico de la infección aguda por VEB primera vez deben con fi rmarse con una prueba adicional, generalmente una
porque estos anticuerpos suelen detectarse solo unos pocos meses después de la inmunotransferencia. Ya que se necesita ∼ 22 días después de la infección para que los
infección. La prueba de IgG VCA es útil para definir el estado inmunológico del VEB, ya anticuerpos del VIH sean detectables [78], la EIA del VIH puede ser falsamente negativa
que estos anticuerpos son detectables a lo largo de la vida del individuo. Los anticuerpos durante las primeras semanas después de la infección. El ARN del VIH es detectable en
contra EA surgen pocas semanas después de la infección, pero no se detectan en todos plasma antes de que el EIA del VIH se vuelva positivo y puede ser un indicador de infección
los pacientes con mononucleosis infecciosa aguda. Los anticuerpos contra el componente aguda por VIH. Es importante recordar que se han producido falsos positivos en las pruebas
restringido de un antígeno temprano pueden persistir durante varios años después de la de ARN del VIH [79] y que el diagnóstico del VIH no debe basarse únicamente en un ensayo
infección [75]. Los anticuerpos antinucleares surgen más tarde después de la infección que de carga viral.
los anticuerpos contra EA y persisten de por vida.
Las pruebas rápidas de anticuerpos contra el VIH ya están disponibles y permiten
Por tanto, la medición de anticuerpos contra EA (especialmente el componente realizar pruebas de anticuerpos contra el VIH en minutos. Una de esas pruebas, llamada
difuso) y anticuerpos antinucleares es útil en ocasiones para determinar el momento SUDS (Murex Diagnostics, Norcross, GA), ha sido autorizada por la FDA. El Servicio de
Salud Pública de EE. UU. Recomienda las pruebas rápidas para situaciones en las que las
de la infección. La Tabla 8 resume el patrón esperado de estos anticuerpos en
personas que necesitan pruebas corren un alto riesgo de no regresar para una visita
varios estados patológicos relacionados con el VEB. Las pruebas serológicas de
separada para recibir los resultados de las pruebas [80]. Las pruebas para medir los
VEB no deben usarse para la evaluación de la fatiga crónica porque la relación entre
anticuerpos del VIH en el trasudado oral [81] y en la orina [82] funcionan bien y también han
el VEB y este síndrome no ha sido validada.
sido autorizadas por la FDA.
La serología es mucho menos útil en el diagnóstico de ciertas manifestaciones

Los análisis de anticuerpos no se pueden utilizar para diagnosticar la infección por VIH en
específicas de la infección por VEB que ocurren en individuos inmunodeprimidos. En
bebés nacidos de madres infectadas por el VIH debido al paso transplacentario de anticuerpos,
pacientes con sida, el VEB está muy asociado con el linfoma primario del SNC y el
independientemente del estado de infección del bebé. La prueba de PCR de ADN del VIH ahora
análisis de PCR del VEB realizado en el LCR es útil para establecer este diagnóstico
se usa ampliamente para
[54]. El VEB también se asocia con enfermedad linfoproliferativa después de un
trasplante de órganos sólidos o de médula ósea. Las pruebas cuantitativas de PCR
de leucocitos de sangre periférica pueden ser útiles para el reconocimiento Cuadro 10. Pruebas de laboratorio para el VIH.
temprano del trastorno linfoproliferativo postrasplante, particularmente en pacientes

Utilizar Prueba (s)
de alto riesgo, como los receptores de trasplantes pediátricos, y también pueden ser
Diagnóstico de rutina EIA / Western blot
útiles para controlar la respuesta al tratamiento [76]. Se requieren pruebas Diagnóstico de infección aguda Diagnóstico de Análisis de ARN del VIH en plasma un
cuantitativas porque muchos receptores de trasplantes tienen VEB detectable en infección congénita Análisis de PCR de ADN del VIH, VIH en plasma
Análisis de ARN un
células mononucleares de sangre periférica después del trasplante.
Pronóstico Análisis de ARN del VIH en plasma Análisis
Respuesta a la terapia de ARN del VIH en plasma
Examen de donantes de sangre EIA / western blot, ensayo de antígeno p24,

análisis de ARN del VIH en plasma
Resistencia a los fármacos antirretrovirales Susceptibilidad genotípica o fenotípica

ensayo
Hepatitis viral. Cinco organismos, los virus de la hepatitis A a E, son un Una prueba positiva para el ARN del VIH en plasma no debe utilizarse como única base para el diagnóstico,
actualmente se sabe que causa hepatitis. Todos son difíciles o ya que se han obtenido resultados falsos positivos [79].
este propósito y permite la determinación del estado de infección por el VIH durante los primeros Cuadro 11. Diagnóstico de laboratorio de diversas infecciones virales.
meses de vida [83]. También se pueden utilizar ensayos de ARN del VIH (véase más adelante) Virus; indicación de prueba Prueba (s)
[84]. Sarampión; infección aguda Anticuerpo IgM contra el sarampión, cultivo
Los ensayos de ARN del VIH en plasma, a menudo denominados ensayos de Rubéola
Infección aguda Anticuerpo IgM de rubéola, cultivo Cultivo o PCR
carga viral, son ahora un componente esencial del tratamiento de los pacientes
Infección congénita, en el útero con transcriptasa inversa
infectados por el VIH [85]. El nivel de HIVRNA predice la tasa de progresión y puede análisis de líquido amniótico Anticuerpo IgM
usarse para monitorear la respuesta a la terapia. El único ensayo actualmente Infección congénita, posparto contra la rubéola, cultivo Anticuerpo IgM contra
Paperas; infección aguda las paperas, cultivo

autorizado por la FDA es el Roche Amplicor HIV-1 Monitor (Roche Diagnostics,
Parvovirus
Indianapolis), que es un ensayo de RT-PCR. Una modi fi cación "ultrasensible" del

Infección aguda IgM de parvovirus B19
ensayo tiene un límite de detección de 40 copias por ml de plasma. También se Infección crónica Análisis de PCR de suero
Crisis aplástica Análisis de PCR de suero
están desarrollando otros métodos de prueba, incluidos el ADN de cadena
Infección congénita, en el útero Infección Análisis de PCR del anticuerpo IgM del
ramificada y NASBA. Cabe señalar que el ensayo de Roche tiene menor congénita, posparto parvovirus del líquido amniótico
sensibilidad para la detección de algunos subtipos de VIH-1 que ocurren HHV-6; roséola Análisis de PCR de leucocitos en el
ausencia de anticuerpos IgG del herpesvirus
predominantemente fuera de los Estados Unidos y no detecta el VIH-2.
humano 6 detectables
BK; cistitis hemorrágica, Análisis PCR de orina (hemorrágico
nefropatía cistitis) o plasma (nefropatía)
NOTA. HHV-6, virus del herpes humano 6.
Actualmente, la resistencia a los medicamentos contra el VIH se evalúa mediante

métodos genotípicos o fenotípicos. La mayoría de las pruebas genotípicas se realizan
El análisis de PCR realizado en suero se usa para diagnosticar la crisis aplásica causada
mediante la amplificación de los genes RT y proteasa mediante RTPCR, seguida de
por el parvovirus B19. Debido a que esta manifestación ocurre poco después de la
secuenciación de nucleótidos. Se analizan los codones que se han asociado con la
infección, los títulos de IgM de parvovirus pueden no ser positivos en el momento de la
resistencia a los fármacos [86]. Una desventaja de las pruebas genotípicas es que no se
enfermedad, aunque los anticuerpos IgM e IgG de parvovirus serán detectables en unos
detectan poblaciones virales minoritarias, que constituyen entre el 20% y el 30% de la
pocos días. El análisis de PCR en suero también se utiliza para diagnosticar la infección
población total. Además, las posibles interacciones entre múltiples mutaciones diferentes
crónica por parvovirus B19, que puede causar aplasia crónica de glóbulos rojos en
no se comprenden bien.
pacientes inmunodeprimidos [93]. Muchos pacientes con infección crónica por parvovirus
no tienen una respuesta serológica diagnóstica.

La prueba fenotípica se realiza amplificando los genes de RT y proteasa y
transfiriéndolos a un vector retroviral viable, que luego se cultiva en presencia de
El virus BK es un poliomavirus que puede causar cistitis hemorrágica en
concentraciones variables de los fármacos que se van a probar [87, 88]. La ventaja receptores de trasplantes de médula ósea. El virus es difícil de cultivar en el
de las pruebas fenotípicas es que proporciona una vista "in vivo" del comportamiento laboratorio, pero el análisis de PCR realizado en orina permite detectar fácilmente el
del virus del paciente. Esto es particularmente útil cuando hay múltiples mutaciones. virus BK. Un estudio reciente informó de una correlación entre la presencia del virus
Varios estudios han demostrado que las pruebas de susceptibilidad genotípica BK en el plasma de los receptores de trasplante de riñón y la nefropatía clínicamente
mejoran el tratamiento del VIH [89, 90]. Se están realizando estudios para evaluar el significativa [94].
impacto de las pruebas fenotípicas.
El diagnóstico de los tipos 6 a 8 del virus del herpes humano (HHV) sigue siendo
difícil para los laboratorios clínicos. Ninguno de estos virus puede cultivarse en los
Las pruebas de VIH varían en su capacidad para detectar el VIH-2 además del VIH-1. Todos laboratorios de virología diagnóstica típicos de los hospitales. La presencia de
los EIA utilizados por los bancos de sangre detectan el VIH-2, pero algunos otros ensayos anticuerpos IgM específicos del virus se puede utilizar para diagnosticar la infección
comerciales detectan sólo alrededor de dos tercios de las personas con infección por VIH-2 [91]. aguda por HHV-6 o HHV-7 en niños pequeños con roséola. Una alternativa es
La prueba del virus de la leucemia de células T humanas de tipos I y II es análoga a la del VIH. demostrar mediante análisis de PCR la presencia de ADN de HHV-6 o HHV-7 en
Los EIA comerciales están ampliamente disponibles, ya que se requieren pruebas de sangre leucocitos de sangre periférica de un paciente que no tiene anticuerpos específicos
donada. Los ensayos con fi rmatorios están disponibles a través de laboratorios de referencia. del virus [95]. El diagnóstico de infección por HHV-6 y HHV-7 en pacientes
inmunodeprimidos es actualmente problemático porque las pruebas serológicas
pueden no ser específicas en este contexto, y el análisis de PCR de leucocitos de
Infecciones virales diversas. El método de laboratorio para otras infecciones virales se sangre periférica no distingue a los pacientes que tienen una enfermedad
resume en la tabla 11. Ninguna de estas infecciones se diagnostica principalmente por clínicamente significativa atribuible al virus de aquellos que tienen reactivación
cultivo. Los análisis de anticuerpos IgM específicos de virus son el método preferido para el asintomática.
diagnóstico rápido de sarampión, rubéola, paperas y parvovirus B19. Algunos laboratorios
también están capacitados en el uso de inmunofluorescencia de las secreciones
nasofaríngeas para proporcionar un diagnóstico rápido del sarampión [92]. Los ensayos de
anticuerpos IgG específicos del virus se utilizan para determinar infecciones pasadas y el El diagnóstico de infecciones virales inusuales, especialmente las adquiridas en el
estado inmunológico específico. extranjero, requiere la consulta con los laboratorios de salud pública, generalmente a
nivel del departamento de salud estatal.
El diagnóstico de laboratorio de la infección por hantavirus puede lograrse mediante la el resultado de un número limitado de mutaciones en un gen específico designado UL97, y
detección de anticuerpos IgM específicos de hantavirus [96] o mediante la detección de estas mutaciones pueden detectarse mediante un ensayo basado en PCR [102-104]. Este
ARN de hantavirus mediante análisis de RT-PCR realizado en leucocitos de sangre ensayo puede llevarse a cabo en un aislado recuperado de un paciente o directamente en
periférica [97]. Algunos laboratorios estatales de salud pública realizan pruebas de una muestra de paciente si el nivel de virus es lo suficientemente alto como para permitir una
hantavirus y otros envían muestras a los Centros para el Control y la Prevención de amplificación por PCR eficaz.
Enfermedades. El dengue también puede diagnosticarse mediante la detección de

anticuerpos IgM específicos del dengue, que normalmente se vuelven detectables a los La otra fuente de resistencia al ganciclovir son las mutaciones en el gen de la ADN
pocos días de la defervescencia, o mediante la detección del ARN del dengue en polimerasa [104]. El único método disponible actualmente para detectar estas
leucocitos de sangre periférica mediante análisis RTPCR [98]. mutaciones es la secuenciación de nucleótidos. La secuenciación puede realizarse en un

aislado viral o directamente a partir de una muestra clínica con un nivel suficientemente
alto de virus. La detección de la resistencia al CMV se realiza solo en un número limitado
Otras infecciones virales exóticas, incluidas las infecciones por los virus de Lassa, de laboratorios de referencia universitarios y comerciales, que tienen intereses
Marburg y Ébola, la fiebre amarilla, la fiebre hemorrágica de Congo-Crimea y la fiebre del especiales en el CMV.
Valle del Rift también se diagnostican mediante serología IgM, análisis de PCR
(generalmente realizado en sangre) y cultivo. Por lo general, se requieren muestras de
Expresiones de gratitud
suero y sangre completa. Los hisopos de garganta, muestras de orina y muestras de CSF
también pueden ser útiles, según la infección. Se debe consultar a los laboratorios de
Agradezco a Max Arens, Richard Buller, William Mulford y los tecnólogos que trabajan en el
salud pública con respecto a la elección de la muestra, la recolección de la muestra y el
Laboratorio de Virología del St. Louis Children's Hospital por su continua colaboración conmigo
transporte.
en el trabajo diario de la virología diagnóstica.
Prueba de susceptibilidad antiviral Referencias
Con el uso cada vez mayor de medicamentos antivirales, la resistencia a los mismos se ha 1. Ramers C, Billman G, Hartin M, et al. Impacto de una prueba diagnóstica de reacción en cadena de la polimerasa
del enterovirus del líquido cefalorraquídeo en el manejo del paciente. JAMA 2000; 283: 2680–5.
convertido en un problema clínico. Sin embargo, el campo de las pruebas de susceptibilidad a
los antivirales está relativamente poco desarrollado, las pruebas no están ampliamente
2. Adcock PM, Stout GG, Hauck MA, et al. Efecto del diagnóstico viral rápido en el manejo de niños
disponibles y los métodos de prueba no están estandarizados. Los virus distintos del VIH para hospitalizados con infección del tracto respiratorio inferior. Pediatr Infect Dis J 1997; 16: 842–6.
los que las pruebas de susceptibilidad antiviral tienen mayor relevancia clínica son el VHS y el
CMV. Las consideraciones metodológicas para detectar la resistencia son diferentes para estos 3. Krasinski K, LaCouture R, Holzman RS, et al. Detección de virus respiratorio sincitial y asignación a una
cohorte al ingreso para reducir la transmisión nosocomial. J Pediatr 1990; 116: 894–8.
2 virus.
4. Weller RH, Enders JF. Producción de hemaglutinina por mucosidad y virus de la influenza A en cultivos de
Para el VHS, se prefiere la prueba fenotípica con un método basado en cultivo. tejido celular en suspensión. Proc Soc Exp Biol Med
Las razones de esto son que el VHS crece rápidamente en el laboratorio, lo que 1948; 69: 124–8.
hace que las pruebas basadas en cultivos sean prácticas; Además, mientras que la 5. Enders JF, Weller TH, Robbins FC. Cultivo de la cepa Lansing del virus de la poliomielitis en cultivos de
diversos tejidos embrionarios humanos. Ciencias 1949; 109: 85–7.

mayor parte de la resistencia al aciclovir está relacionada con cambios en la timidina
quinasa viral, la base genética de los cambios es diversa, lo que complica la
6. Gleaves CA, Smith TF, Shuster EA, et al. Detección rápida de citomegalovirus en células MRC-5
aplicación de métodos genotípicos [99]. El método basado en cultivo más utilizado inoculadas con muestras de orina mediante centrifugación a baja velocidad y anticuerpo monoclonal
es el ensayo de reducción de placa. Los resultados de este ensayo generalmente se contra un antígeno temprano. J Clin Microbiol 1984; 19: 917–9.
expresan como la concentración inhibidora del 50%, o la concentración de fármaco

7. Griffths PD, Panjwani DD, Stirk PR, et al. Diagnóstico rápido de la infección por citomegalovirus en pacientes
requerida para producir una disminución del 50% en el número de placas que
inmunodeprimidos mediante la detección de focos fluorescentes de antígeno temprano. Lanceta 1984; 2:
aparecen en cultivo, en comparación con el número que aparece en ausencia del
1242–5.
fármaco. Esta prueba requiere de 1 a 2 semanas para realizarse y puede 8. Stabell EC, O'Rourke SR, Storch GA, et al. Evaluación de una línea celular genéticamente modificada y un
proporcionar datos para una variedad de fármacos, incluidos aciclovir, foscarnet y histoquímico segundo- ensayo de galactosidasa para detectar el virus del herpes simple en muestras
cidofovir. clínicas. J Clin Microbiol 1993; 31: 2796–8.
9. Rocancourt D, Bonnerot C, Jouin H, et al. Activación de un segundo- galactosidasa
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11. Gardner PS, McQuillin J. Diagnóstico rápido de virus. Aplicación de inmunofluorescencia. 2d ed. Londres:
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Para el CMV, las pruebas de susceptibilidad fenotípica basadas en cultivos no son
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739

SECCIÓN ESPECIAL: MICROBIOLOGÍA MÉDICA

L. Barth Reller y Melvin P. Weinstein, editores de sección

Gregory A. Storch Departamentos de Pediatría, Medicina y Microbiología Molecular,

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

Métodos utilizados en virología diagnóstica

El aislamiento viral y una serie de métodos para la detección de antígenos, ácidos

Cultivo de células. La era moderna de la virología diagnóstica se remonta a

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

Detección de antígenos. Los métodos de detección de antígenos incluyen ﬂ uo-

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

Infecciones mucocutáneas. Los métodos utilizados para el laboratorio

el Light Cycler se pueden completar en 30 minutos.

humano (HPV; Digene Corporation, Beltsville, MD).

Muchos laboratorios han desarrollado sus propios ensayos de PCR "caseros". La

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

ensayo de captura híbrida como el análisis de PCR tienen esta capacidad.

Infección del SNC. Para fines de diagnóstico, es útil para di-

resultados. Se dispone de procedimientos de detección de antígenos para el VSR, los virus

Enterovirus Análisis de RT-PCR (preferido), cultivo (el LCR es

IgM específica del virus de la fiebre de las garrapatas de Colorado)

no distingue entre la influenza realizan en laboratorios de salud pública.

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

o análisis de PCR realizado en un coágulo de sangre [50].

2, es una causa común de meningitis aséptica. Esta enfermedad se presenta con o

resultado de la inmunización previa a la exposición. Se recomienda consultar con las autoridades

un Todo realizado en heces.

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

lesiones cutáneas (herpete de zóster sinusoidal).

laboratorios clínicos y, en consecuencia, el cultivo viral no tiene ningún papel en la

microscopía electrónica de materia fecal. Aunque la microscopía electrónica de Infección pasada 1 2 2 2 1

Cuadro 9. Pruebas de diagnóstico de hepatitis viral.

Virus, función probada para Significado, uso y comentarios

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

Anticuerpo radioinmunobligación. La presencia de anticuerpos indica una infección actual o pasada.

extinción el genotipo afecta la respuesta a la terapia con interferón

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

los anticuerpos contra EA y persisten de por vida.

Las pruebas rápidas de anticuerpos contra el VIH ya están disponibles y permiten

La serología es mucho menos útil en el diagnóstico de ciertas manifestaciones

temprano del trastorno linfoproliferativo postrasplante, particularmente en pacientes

Respuesta a la terapia de ARN del VIH en plasma

Examen de donantes de sangre EIA / western blot, ensayo de antígeno p24,

Resistencia a los fármacos antirretrovirales Susceptibilidad genotípica o fenotípica

[84]. Sarampión; infección aguda Anticuerpo IgM contra el sarampión, cultivo

Paperas; infección aguda las paperas, cultivo

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

NOTA. HHV-6, virus del herpes humano 6.

Actualmente, la resistencia a los medicamentos contra el VIH se evalúa mediante

no tienen una respuesta serológica diagnóstica.

también están capacitados en el uso de inmunofluorescencia de las secreciones

Enfermedades. El dengue también puede diagnosticarse mediante la detección de

Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

Prueba de susceptibilidad antiviral Referencias

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Descargado de https://academic.oup.com/cid/article-abstract/31/3/739/297506 por invitado el 9 de septiembre de 2019

LCx para la detección de Chlamydia trachomatis y