Overview

 Propiedades de la radiación electromagnética

Session 3:  Fundamento fisico de la absorción, emisión (y
Introducción a los métodos fluorescencia)
Overview de las técnicas espectroscopicas
espectroscópicos 
 Espectroscopias moleculares
3A: Introducción General  Espectroscopias atomicas
 Tecnicas espectroscopicas de Rayos X
(Ver Skoog Capitulo 6)  Métodos de calibración de instrumentos
 Componentes importantes de los
instrumentos
 Señales y ruido

Radiación electromagnética
Websites para espectroscopia Espectroscopia = Interacción entre la luz y la materia

 http://www.spectroscopynow.com/ E = hn = hc/l (En el vacío)

n = frecuencia; l = Longitud de onda
 http://www.chemguide.co.uk/analysis/uvvisi
blemenu.html
 http://www.cengage.com/chemistry/book_content/049501
2017_skoog/student_website/as_ie3.htmlb
 http://www.shsu.edu/~chm_tgc/sounds/fla
shfiles/ICPwCCD.swf

De: http://www.spectroscopynow.com/coi/cda/detail.cda?id=18411&type=
Revisar las citas presentes en los slides EducationFeature&chId=7&page=1 (No esta activo en el momento, pero en
3 cualquier parte del internet se encuentran graficos parecidos) 4

1
 Emisión atómica: Espectroscopio simple
Espectroscopia de llama
 Espectroscopio: equipo para
Color de la llama: Causado por:
determinaciones cualitativas
Dorado- amarillo persistente Na Litio
de una muestra
Violeta (lila) K , Cs

Rojo carmín Li
 E.g. Análisis de llama
Rojo ladrillo Ca  E.g. Gemología
Carmesí Sr

Amarillo- verdoso Ba, Mo Cesio

Lineas de emisión
Verde B, Cu, Th

Azul Pb, As, Sb, Bi, Cu

Lineas de absorción

Método cualitativo Sodio

5 6

Fundamentos
 La absorción y emisión de luz de los átomos esta
Interacción entre la luz y la materia
asociado con cambios de energía
 Muchas veces asociado con transiciones electronicas
entre los distintos niveles de energía
E2 E2
DE2 Estado excitado DE2 n (Hz) 1021 1017 1013 109

E1 DE = hn = hc/l E1 Rotura de enlace; Vibraciones Transiciones

de espines
DE1 Ionización nucleares
DE1
E0 Estado basal E0 Excitación
Electrónica Rotaciones
Emisión: átomo/molécula (en estado Absorción: átomo/molécula adquiere energía.
exitado) pierde energía en forma de luz. Consume energía de la longitud de onda apropiada.

Espectro atomico: Espectro de línea provee especificidad, cada Energía (kcal/mol)

elemento tiene su propio patron debido a que cada elemento tiene su
propia configuración electrónica.
7 8
http://physics.nist.gov/PhysRefData/ASD/lines_form.html

2
 Espectro... Overview de las técnicas espectroscopicas

Espectroscopias de
Espectroscopias Espectroscopias
rayos X y tecnicas
atómicas moleculares
relacionadas

Eje y : Algún tipo de intensidad

de luz (absorbancia, emisión).
Absorción
Absorción (XANES,
Absorción Emisión
EXAFS)
Fluorescencia
Emisión Emisión (PIXE)
Fluorescencia Fosforescencia
Fluorescencia (XRF)
Luminiscencia
Y otros(XPS/ESCA)
Dispersión

UV
Eje x : Longitud de onda, UV Visible Rayos X
energía, o frecuencia. Visible IR
(Raman)

9 10

Espectroscopia de Absorción:
Absorción Ley de Beer-Lambert

Se mide la ci = concentración de cada especie

intensidad de absorbente i en solución(mol/L) Luz
Io It
Muestra la luz ci
d = ancho de pared de cubeta en cm monocromatica
transmitida A = Absorbancia total de la solución
Radiación d
Io = Intensidad de la luz incidente
incidente It = Intensidad de la luz transmitida
(al detector)

 Base de: Definición de absorbancia A = log10(Io/It)

 Espectroscopia de Absorción atómica(AAS) (para soliciones
Ley Beer-Lambert : A = Sicid = d Sici que contienen
 Absorción molecular (Espectroscopia UV/Vis, varias especies)
Colorimetria, espectroscopia infrarrojo )
A = cd Para especies puras o unicas.
 Absorción de rayos X
 Es la absorptividad molar( anteriormente llamado el coeficiente de
11 extinción molecular 12

3
 Espectro atómico vs Espectro
Relación entre absorbancia (A) y
Porcentage de transmitancia (%T) molecular
 Líneas Bandas
I
Transmitancia: T  t
Io

It
Porcentage de %T   100 %
transmitancia: Io
Por lo tanto:

 Io  100 
A  log 10    log 10    2  log %T 
 It   %T  (nm)

Espectro atómico típico Dos espectros moleculares típicos

Adquirido por AAS Adquirido por Espectroscopia Uv-VIS
Nota: Bajo condiciones ideales la ley de Beer es aplicable para casi
todas las espectroscopias de absorción (Rayos X, IR, UV-Vis,
atómica...) 13 14

Orígen de las bandas en los espectros Fluorescencia y fosforescencia

moleculares (absorción) (ambos son luminiscencia)
 Las moléculas tienen enlaces químicos
 Electrones se encuentran en orbitales moleculares
(MOs)
Luz
 Absorción de la luz provoca una transición entre transmitida
HOMO y LUMO NO es medida
Radiación
 Las moléculas experimentan rotaciones en los elaces
Incidente
y vibraciones: Diferentes sub-estados de energía son
acesibles por absorción: muchas transiciones son
posibles: Medida de luminiscencia: resulta de
Una banda es la sumatoria de muchas líneas la perdida de fotones de los estados
excitados
 Fundamento de:
LUMO
 Espectroscopia de fluorescencia molecular
Vibraciones Rotaciones
 Espectroscopia de fluorescenica de rayos X(XRF)
HOMO
15 16

4
 Interacciones de las moléculas y la luz
UV/VIS utilizadas para análisis
Los procesos
señalados por lineas
rectas pueden ser
explotados en
mediciones analíticas
Flechas onduladas
señalan procesos sin
radiación
example of a
fluorophore (in GFP)
Emisión
Proceso diferente de la
abosrción en el cual
estados excitados son
generados . Ej:
calentamiento,
bombardeo con
electrones o particulas,
potencial eléctrico (alto)
y reacciones químicas
Medición de emisión: resulta de la
pérdida de fotones de los estados
excitados.
e.g.: emisión de líneas de átomos excitados termicamente

Base de:
http://www.olympusfluoview.com/theory/images/fluorescenceintrofigure1.jpg
17
ICP-OES (UV/Vis), PIXE (Rayos X)18

Panorama:
Dispersión
Espectrofotometría cuantitativa:
relación entre la intesidad medida y la
Luz
transmitida
concentración
NO medida
Radiación
incidente

Medicion de radiación dispersa:

Fotones colisionan con las moléculas\átomos de la
muestra. Las colisiones pueden ser elásticas
(difracción de rayos X; no hay pérdida de energía) o
inelasticas (espectroscopia Raman; posible cambio
en energía)
 Relevante para espectroscopia Raman ,
difracción de rayos X, y dispersión
dinámica de la luz 19 20

5
 Resumen
 Muchas posibles interacciones entre la luz y Parte 3:
la materia Introducción a los métodos
 Estas interacciones pueden ser
aprovechadas por la espectroscopia
espectroscopicos
 Muchas espectroscopias son importantes
para los análisis 3B: Instrumentación (1)
 Para responder preguntas cuantitativas
 Para cuantificar (espectrometria) Componentes de los
espectrometros
(See Skoog Chapter 7)
21 22

Componentes de los
instrumentos Espectrofotómetro UV-Vis (doble haz)
Espectrómetro UV-Vis : Monocromador

Fuente Monocrom- Rejilla de rendija

Lectura/
Muestra Detector
radiación adores sistema de data difracción Espejo
rendija
Espectrómetro IR (diseño desactualizado):
Filtro Fuente de radiación
Fuente Monocrom- Lectura/ sistema
Muestra Detector
radiación adores de data

Espectrómetro absorción atómica (AAS)

Referencia
prisma
Fuente Monocrom- Lectura/ sistema Detector
Muestra Detector
radiación adores de data (divisor de
Espejo Muestra
Haz)
Espectrómetro de ICP-OES

Muestra = F Monocrom- Lectura/ sistema http://www.spectroscopynow.com/coi/cda/detail.cda?id=18412&type=EducationFe

Detector
de radiación adores de data
ature&chId=7&page=1 (no longer active, but many other resources on web –
23 including Skoog Companion site) 24

6
 Ejemplo de espectrofotómetro de
doble haz
Un haz

25 26

Fuente de radiación para Ejemplo de fuentes continuas:

espectrofotómetros
Perfil de
emisión
Wavelength(nm) 100 200 400 700 2000 4000 7000 10,000 20,000 40,000

VAC UV Visible Near IR IR Far IR

Spectral region

Ar lamp
Xe lamp
Lámpara de deuterio
Continuas

D2 lamp
Tungsten lamp
Nernst glower (ZrO2 + Y2O3)
Nichrome wire Lámpara de tungsteno es
ampliamente aplicada en
Globar (SiC)
espectrometros de UV-Vis
Línea

Cátodo hueco lamps

Lasers

27 28

7
 Lámpara de cátodo hueco Ejemplo: salida de una lámpara de
 Utilizada en AAS cátodo hueco de hierro
 Se llena con Ne o Ar a una presión de 130-700 Pa (1-
 Porciones pequeñas del
5 Torr).
espectro de hierro del la
 Cuando se aplica un alto voltaje entre el ánodo y
lámpara
cátodo, el gas de relleno se ioniza
 Líneas agudas caracteristicas
 Los iones positivos se aceleran hacía el cátodo
de los átomos gaseosos
 Golpean el cátodo con suficiente energía como para
 Ancho de las líneas estan
desprender átomos de artificialmente ensanchado
metal del cátodo y producir por el monocromador (ancho
una nube de átomos de banda = 0.08 nm)
excitados
• Átomos emiten espectro
• de líneas
29 30

Monocromadores Dispersores
 Está compuesto por  Separa la luz policromatica en sus
 Rendija de entrada componentes
 Lente colimadora  Prisma
 Elemento de dispersión(prisma o red )  Red difractora: Superfices con patrones que
 Lente focalizadora difractan la luz
 Rendija de salida
 Monocromador de red de Czerny-Turner
Mirrors

Común en espectrometros UV-Vis

Re dde escalerilla Red holográfica

Prismas

31 32

8
 Selector de longitud de onda: Red de escalerilla:
elementos dispersivos y filtros
 La distancia extra recorrida por el haz 2
Wavelength(nm) 100 200 400 700 2000 4000 7000 10,000 20,000 40,000
debe ser un multiplo de l para
VAC UV Visible Near IR IR Far IR
interferencia positiva
Spectral region
 nl = d(sin i + sin r)
Prisma de fluorita
Silica fundida o cuarzo
 para UV: 1000-2000 lines/mm: d = 0.5-1
Prisma de vidrio mm
Continuas
Prisma de NaCl
KBr Prisma

3000 lines/mm redes 50 lines/mm

Discontinua Filtros de interferencias

Cuña Interferencia
Filtros de vidrio

33 34

Características del funcionamiento Anchura de banda de un

de un monocromador monocromador
 Pureza espectral
 El haz de salida puede contaminarse por radiación dispersa
o extraviada

 Habilidad de separar diferentes longitudes de

onda:
 Dispersión (de una red)
 Poder de resolución(de un monocromador)
sobremesa UV-Vis
tipicamente, RP = Dl/l = 103-104

 Poder de recolección de radiación

 Depende de la lente o espejo (el diametro del punto focal).
Mientras más alto, mayor sensibilidad 35

Ancho de banda espectral

9
 Anchurade banda de un Anchura de banda de un monocromador
monocromador
Ancho de banda  La anchura de banda
 Rendija de entrada de l2 efectiva se relaciona
 Si el monocromador esta con el poder de
ajustado < l1 or > l3: resolución
ninguna radiacion pasa por  Define la resolución de
la rendija de salida los espectros: 2
 Si las rendijas de entrada y características solo
salida poseen la misma pueden ser
anchura: hay un ancho de diferenciadas si la
banda efectivo= ½ ancho anchura de banda
de banda efectiva es menor que
la mitad de la
differencia entra las l
Ajuste del Monocromadorl
de las características
 También puede afectar la
37 38
intensidad

Efecto de la anchura de la rendija Detectores: transductores de

en la altura de los picos radiación
 Traducen la radiación EM en señales eléctricas
 Tubos fotomultiplicadores: alta sensibilidad, largo
rango dinamico, pero solo trabajan con una longitud
de onda a la vez,
 Fotodiodos en serie(PDAs): equipo multicanal,
menor sensibilidad, rango dinámico, y relación
señal-ruido
 Dispositivos de transferencia de carga: multicanal y
sensibilidad, rango dinámico, y relación señal-ruido
 Dispositivos de inyección de carga

 Dispositivos de acoplamiento de carga

 Rendijas angostas dan mejor resolución

 Pero pueden provocar una perdida de sensibilidad 39 40

10
 Detectores fotomultiplicadores: detectan una
longitud de onda a la vez
Wavelength(nm) 100 200 400 700 2000 4000 7000 10,000 20,000 40,000  Basados en el efecto
VAC UV Visible Near IR IR Far IR
fotoeléctrico
Spectral region

Photographic plate
Photomultiplier
Phototube
Detector
Photocell
De fotones
Silicon diode
Charge-coupled device (170-1000)
 Fotones colisionan con el cátodo y electrones son
Photoconductor
Detectores Thermocouple
emitidos
térmicos Golay pneumatic cell  Los electrones son acelerados hacia una seria de diodos
Pyroelectric cell
por un incremento de voltaje
 Electrones adicionales se generan en cada diodo
41
 La señal amplificada se recolecta en el ánodo
42

Photodiode arrays: measure several

wavelengths at once Charge-coupled device (CCD)
Used e.g. in ICP-OES
p-type Si

n-type Si

 Linear array of discrete photodiodes on an integrated

circuit (IC) chip
 Photodiode: Consists of 2 semiconductors (n-type and
p-type)
 Light promotes electrons into conducting band: generates
electron-hole pair
 “Concentration” of these electron-hole pairs directly
proportional to incident light
 a voltage bias is present and the concentration of light-
induced electron-hole pairs determines the
current through semiconductor
• Also integrated-circuit chip
• Contains an array of capacitors that store charge
when light creates electron-hole pairs
• Accumulated charge is read out at given time
interval
• Each wavelength is detected at a different spot
• Much more sensitive than photodiode array
detectors
http://www.chemistry.adelaide.edu.au/external/soc-rel/content/ccd.htm
43 44

11
 Ruido
Session 3:  Cualquier análisis instrumental se ve
afectado por dos tipos de ruidos
Introducción a los métodos
 Ruido químico
espectroscópicos  Ej: Fluctuaciones en temperatura, presión y humedad
sin detectar,
 Ruido instrumental
 Ruido termico (Johnson Noise)
3C: Señal y ruido  Ruido ambiental
 Ruido de disparo, Flicker Noise
ver Skoog, Capitulo 5
 El ruido contribuye a la incertidumbre
experimental
45 46

Ruido e incertidumbre Sources of Instrumental Noise

experimental
 En la mayoria de las mediciones, el ruido es
 Cada componente del instrumento
constante, independientemente del tamaño de la contribuye al ruido total
señal  Fuentes, transdictores, procesadores de la
 El error relativo incrementa con la disminución de señal…
la señal  Cada uno, puede ser afectado por distintos
 Relación S/N tiene mayor relevancia que solo ruido tipos de ruido
Signal without noise
 El ruido observado es un
 S/N puede ser expresado a conveniencia como
complejo compuesto,
= Señal promedio/desviación estándar, por lo
Generalmente imposible
tanto: S/N = 1/RSD
De caracterizar
 Importante para la sensibilidad (i.e. LOD/LOQ)
 Si S/N < 3: la señal no puede ser detectada con
Con ruido térmico
confianza ( Limit of Detection)
47 48

12
 Thermal Noise (Johnson noise)
 Resultados de una agitación térmica
aleatoria de electrones en dispositivos
electronicos  fluctuaciones del voltaje
lecturas ruidosas
Shot noise
 Asociados con e- (u otras particulas
cargadas ) moviendose en uniones
 e.g. espacio entre cátodo y ánodo
 También depende de Df

n rm s  4kTR Df  Solo puede ser reducido cuando se

disminuye el ancho
 nrms es la raiz promedio cuadrada del ruido de banda
del voltaje
 Depende de:
 Temperatura T
 Resistancia R
 Frequency bandwidth Df - note that the speed
49 50
of response is inversely proportional to this

Flicker Noise Ruido ambiental

 Los ruidos de disparo y térmico son
 Fuentes típicas de ruido en un lab:
independiente de la frecuencia: “Ruido
blanco"
 “Ruido flicker" depende de 1/frecuencia.
Las causas no son bien comprendidas
 Es significante debajo de 100 Hz

51 from: T. Coor, J. Chem. Educ. 1968, 45, 533. 52

13
 Mejora de la relacion señal/ruido Algunos dispositivos de mejora de
S/N
 Muede ser motivada por hardware o
software  Tierra y blindaje
 Reduce el ruido ambiental

 Hardware: filtros, cuchillas  Amplificadores diferenciales e

 Ejemplo: correcciones de fondo en AAS instrumentales
 Filtrado analogico

 Software: usar matemática para extraer  Modulación de la

información de señales ruidosas Señal

 Require que la data sea adquirida de manera
digital

53 54

Reducción de ruido por softwares Ensemble averaging

 Promedio conjunto  Relación S/N es

 Utilizado en RMN, MS, FT-IR proporcional al la raiz
 Promedio por grupos cuadrada del numero
de repeticiones
 Filtrado digital
 Transformada de S  S 
   n 
Fourier  N n  N i
 Suavizado

 Métodos de
correlación From: D. Binkley and R. Dessy, J. Chem.
Educ. 1979, 66,150
55 56

14