TÉCNICA DE MALDING-IMAGINING PARA

LA PREDICCIÓN DE
ENFERMEDADES:
INVESTIGACIÓN Y PRÁCTICA DE
LA PATOLOGÍA
Reyes Fernández, Leonardo Steyman1; Ruidiaz Gómez, Roiner Enrique1
Curso Biología Básica, Grupo A, Departamento de Ciencias Básicas, Universidad de
Pamplona

RESUMEN: En el estudio de diversa patología se hace muy a menudo aplicada a diversos campos de la
ciencia, pero una de las usadas es en el campo de la medicina, la cual estudia dichos patrones para lograr
contrarrestar los daños y tratar de reducir sus efectos; en el presente escrito se trata de estudiar la
espectrometría MALDING-IMAGINING, para dar una idea de su técnica, al igual que su campo de
aplicación, la investigación y predicción de patologías.
Palabras claves: Espectrometría de masas, patología, proteínas, péptidos.

ABSTRACT: In the study of various pathologies, it is very often applied to various fields of science, but
one of the used is in the field of medicine, which studies these patterns to counteract the damage and try to
reduce its effects; In this writing it is about studying MALDING-IMAGINING spectrometry, to give an idea
of its technique, as well as its field of application, the investigation and prediction of pathologies.

Keywords: Mass spectrometry, pathology, proteins, peptides.

Introducción
La maldi imagining es una técnica poderosa que combina el multicanal (m / z) capacidad de
medición de un espectrómetro de masas con un proceso de muestreo de superficie que
permite sondear y analizar la disposición espacial de una amplia gama de moléculas
incluyendo proteínas, péptidos, tanto endógenos como producidos enzimáticamente,
lípidos, fármacos y metabolitos., Eestá técnica es cada vez más reconocidao como un
enfoque poderoso en proteómica clínica, particularmente en la investigación del cáncer, la
tecnología tiene un alto potencial para el descubrimiento de nuevos candidatos a
biomarcadores de tejidos, para la clasificación de tumores, diagnóstico precoz o
pronóstico; t, sino que también, para dilucidar las vías de patogenia y para el seguimiento
de la terapia,  dicha tecnología ha experimentado un enorme crecimiento en utilidad, y se
ha utilizado para analizar sustratos biológicos que van desde plantas e insectos hasta
muestras de tejidos de mamíferos., Mmalding-imagining (MALDI IMS) permite el análisis
multiplex sin marcaje, de miles de analitos a través de una superficie de muestras
produciendo mapas moleculares bidimensionales que aclaran tanto la localización como la
abundancia relativa de especies endógenas.; Lla tecnología se ha utilizado para estudiar una
amplia gama de clases de analitos la técnica de MALDI (Desorción-ionización por láser

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asistido por una matriz), permitiendo medir un gran margen de analitos (sin la destrucción
la muestra).

Los materiales son las secciones de tejido que se cubren con una matriz para extraer
moléculas de la muestra de tejidos, lo que permite la ionización para un mejor análisis en el
espectrómetro de masas. En el proceso de ionización, el láser dispara en la capa de la matriz
(permaneciendo el tejido intacto). La matriz absorbe la energía y transfiere los analitos de
fase gaseosa y a su vez promoviendo promove la ionización. Luego la muestra es escaneada
por barridos de trama (resolución de 200mm-20mm), generando un espectro de masa para
cada punto de medición, el rango molecular de las muestras biológicas y farmacéuticas
depende de la técnica que pueda complementarse con MALDI imaging, por ejemplo,
MALDI-FT-ICR que permite que las imágenes salgan en alta resolución, otro ejemplo
sería la técnica el MALDI-TOF para el análisis de péptidos y pequeñas proteínas (25kDa).
Una vez ya hecho la medición de la imagen, la sección de tejidos se tiñe y se analiza por
espectrometría de masas, las señales de masa (m/z) se visualiza como mapas de intensidad
de color, las señales de color representan la distribución en el tejido de las moléculas que se
quieren analizar.
Introducción de la Técnica y Fundamento Físico
La ionización de láser asistida por matriz MALDI( desorción/ionización), es una técnica de
ionización suave que sirve para producir iones de moléculas pequeñas y grandes. Es una
técnica relativamente nueva emergente y prometedora para el análisis de proteínas y tejidos
biológicos, introducida en 1997. Esta tecnología permite el análisis espectrómetrico de
masas directos de secciones de tejido, la abundancia relativa y la distribución espacial de
proteínas y péptidos a lo largo de una sección de tejido inclusive con una resolución de
10mm.
La solución de un analito se cocristaliza con una molécula de matriz en una placa de
muestra. Generalmente se utiliza con mayor frecuencia con una solución que contiene tanto
la matriz como el analito, y la mancha en la placa, con facilidad el solvente se evapore.
Entre sus técnicas de deposición se encuentran: deposición de gota seca, airspray e
inyección por impresión de tinta.
El material de la matriz en MALDI se utiliza para proteger las moléculas del analito de la
energía generada por el láser pulsado; típicamente la molécula de la matriz utilizada tiene
un máximo de absorción (o cerca del máximo de absorción) que coincide con la longitud de
onda láser en funcionamiento. Esto protege al analito de la degradación térmica
principalmente, ya que los fotones son absorbidos por la matriz y transferidos de manera
controlada al analito. Otras propiedades deseables de una matriz incluyen una masa
molecular baja (particularmente para mediciones de Mw altos) para no interferir con las
señales de los analitos de Mw más grandes; no volatilidad a bajas presiones; la capacidad
de solubilizar una gama de compuestos de todas las polaridades y la inercia química.
La longitud de onda del láser no necesita ser ajustada al espectro de absorción del analito,
ya que la matriz desempeña este papel. Dado que el analito no necesita absorberse a una

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determinada longitud de onda, puede ionizarse una serie de tipos de muestra, diversificando
así el uso de la técnica. Los analitos se ionizan con gran eficiencia y la sensibilidad de la
técnica aumenta considerablemente; esto se aplica tanto a las moléculas grandes como a las
proteínas y biopolímeros como a las pequeñas. La ionización es independiente de la masa
molecular (y por lo tanto el tamaño de la molécula en general) hasta cierto punto.
MALDI imaginig generalmente se pueden realizar en dos modos relacionados, imágenes
y. El perfil representa un enfoque de análisis dirigido por el cual se analizan
individualmente pequeñas áreas de interés que han sido seleccionadas antes del análisis de
MALDI imaginig. Por ejemplo, grupos de células (por ejemplo, cáncer y normal) se
pueden identificar en una sección serial y estos pueden ser analizados selectivamente. El
perfil se utiliza típicamente en estudios que analizan tejidos heterogéneos donde sólo una
población de células seleccionada o áreas seleccionadas del tejido son de interés primordial.
Los experimentos de imagen, por otro lado, miden la distribución general de los analitos a
través de toda la sección de tejido o región específica de interés. Los mapas de distribución
iónica de cada señal en los espectros de masas se pueden mostrar y correlacionar con
características histológicas. Las imágenes y el perfilado son complementarios en que las
secciones pueden ser fotografiadas a alta resolución después del descubrimiento molecular
inicial de un experimento de perfilado, para más información ver el diagrama de flujo
(Figura 1.)

Figura 1 Esquema traducido

de Turker et al 2016 de un flujo de trabajo típico para un experimento del MALDI
imaginig.
Aplicaciones

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Predicción y pronóstico de la respuesta terapéutica: Se utiliza la espectrometría de
masas MALDI imaginig para la predicción de resultados terapéuticos, ya que los perfiles
moleculares que se presentan son de gran interés, porque las proteínas asociadas
representan predicciones de los resultados. Una de estas aplicaciones fue hecha a un
paciente que fue tratado con quimioterapia a base de cisplatino en adenocarcinoma
avanzado del esófago, en donde se detectó modificaciones de defectos no reconocidos
previamente en la cadena respiratoria mitocondrial, un ejemplo reciente de esta técnica en
auge.
Clasificación de enfermedades basada en tejidos con MALDI Imaging: Para esta
aplicación se trata de diferenciar entre tumores de subtipo, variable, estado tumoral o grado
de metástasis, para esto MALDI imaging permite la identificación del tejido molecular,
clasificándolo y generando un conjunto de parámetros que conducen a la diferenciación de
los diferentes tejidos, también permite detectar firma de proteínas que a su vez reflejan
Marcadores moleculares, permitiendo hacer predicciones. Ejemplo de esto es: Un estudio
publicado recientemente demostró la clasificación correcta de las metástasis de cáncer de
mama y de páncreas según los perfiles de MALDI Imaging.
Potenciales de la espectrometría de masas con MALDI Imaginig en patología: MALDI
es una herramienta muy útil, ya que permite la compresión de la complejidad de los tejidos
y las enfermedades, MALDI imaging con su alto nivel tecnológico promueve en gran
medida la precisión de masa o una resolución espacial alta, permitiendo al patólogo evaluar
con precisión la información molecular de los tejidos de la enfermedad del paciente, lo que
lleva a la investigación basada en tejidos a estudios clínicamente relevantes.

La complejidad molecular del tejido biológico y la variación espacial y temporal en los

procesos biológicos implicados en las enfermedades humanas que requieren nuevas
tecnologías y nuevos enfoques para proporcionar información sobre los procesos
patológicos, la espectrometría de masa es una herramienta eficaz que proporciona imágenes
moleculares de tejidos en el proceso de descubrimiento molecular, el análisis de tejidos
humanos presenta desafíos y limitaciones especiales porque la heterogeneidad entre los
tejidos humanos y las enfermedades es mucho mayor que la observada en modelos
animales, y los descubrimientos realizados en tejidos animales podrían no traducirse bien
en su homólogos humanos.

 La formación de imágenes de proteínas ha recibido especial atención debido al papel que
desempeñan las proteínas en los procesos celulares, y porque MALDI IMS permite la
visualización de una proteína y sus diversas proteoformas (es decir, modificaciones
postraduccionales variables) en un único experimento de imagen.

Las proteínas se encuentran en todas las células del cuerpo, y en distintos líquidos
corporales, estas son de vital importancia para el correcto funcionamiento, las células de
nuestro cuerpo usan aminoácidos para la formación de proteínas que ayudan a la formación
de tejidos, enzimas, hormonas, anticuerpos, y algunos neurotransmisores, dicho de otra
forma, las proteínas son indispensables para la formación y reparación de músculos, huesos
u otros tejidos.
La identificación de proteínas en malding imagining es muy importante para ayudar a
comprender el papel filológico de los sistemas biomoleculares y celulares.; Los métodos de

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identificación de proteínas de abajo hacia arriba se basan en la digestión enzimática
para hidrolizar proteínas más grandes en péptidos más pequeños que son más fáciles de
fragmentar, lo que da como resultado una mayor cobertura de secuencia, en los métodos de
arriba hacia abajo, las proteínas intactas se inyectan en el espectrómetro de masas y se
someten a fragmentación sin digestión previa, son muchos los estudios realizado bajo esta
técnica logrando hacer un mapeo de un amplia gama de proteínas, péptidos, y
modificaciones postraduccionales en una amplia variedad de tejidos, incluso en órganos
como riñón, cerebro, hígado y pulmones.
El accidente cerebrovascular isquémico es uno de los trastornos neurológicos más
importantes y causa de discapacidad en todo el mundo, la isquemia cerebral se origina por
la alteración del suministro de sangre al parénquima cerebral debido a una oclusión
arterial. Este proceso abarca una cascada compleja de eventos que afectan tanto a los
componentes de la matriz celular como extracelular, incluida la respuesta inflamatoria, la
extravasación de células inmunes, el desarrollo de edema o la alteración de la barrera
hematoencefálica, finalmente, conduce a la muerte celular y daño tisular que se traduce en
una pérdida de funciones neurológicas, un estudio realizado en ratón busco la forma de
estudiar la  distribución de proteínas dentro del cerebro de ratón después de una lesión
isquémica utilizando espectrometría de masas de imágenes MALDI e identificar proteínas
relevantes involucradas en el daño cerebral.
Durante la isquemia cerebral, la producción de energía celular se ve afectada y la
concentración de ATP disminuye, lo que promueve la despolarización de las membranas
neuronales y provoca un desequilibrio de Na + , K + y Ca 2  +  . Esta alteración de
la homeostasis iónica induce la liberación de neurotransmisores , inhibe aún más la
producción de ATP y activa proteasas endógenas que aumentan la respuesta citotóxica a la
isquemia. La lesión isquémica también aumenta la cantidad de especies reactivas de
oxígeno que atacan componentes celulares clave, especialmente en las regiones
reperfundidas , en dicho estudio se identificó dos proteínas, ATP5i y COX6C, que están
aumentadas en el tejido isquémico en comparación con el área contralateral sana del
cerebro.
Otro estudio reveló información de la proteína MALDI IMS y destacar las estrategias con
datos sobre el tejido cardíaco, las enfermedades que afectan la composición molecular
tienen un efecto de retroalimentación sobre la hemodinámica y la función cardíaca. Una
comprensión completa de la interacción compleja entre el cambio bioquímico y la función
de los tejidos requiere un enfoque como la formación de imágenes de proteínas, donde la
expresión altamente multiplexada se puede asignar a características histológicas e integrar
con otras modalidades de imagen.
 Los colágenos son un componente principal de la ECM, que desde el tejido fetal hasta el
adulto evolucionan desde una red suelta de hebras de colágeno hasta haces
de poliprolina fuertemente unidos con múltiples enlaces disulfuro . Los colágenos están
glicosilados e hidroxilados para la estabilización, y esto puede limitar la detectabilidad a
través de imágenes de proteínas intactas o mediante la producción de péptidos trípticos.… 

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Y qué más? Qué discuten, cual problema querían solucionar, lo hicieron?
Conclusiones
1. En estudio de realizado por varios autores demostró que la técnica espectrometría
MALDI imagining es muy prometedora en el estudio y análisis de proteínas.
2. La identificación de diversas patologías por la técnica maldi-imagining es muy
eficiente, ya que permite identificar el tejido molecular clasificándolo y generando
un conjunto de parámetros que conlleva a la diferenciación del mismo.
3. La técnica maldi-imagining se ha convertido en una herramienta muy útil
permitiendo la compresión de tejidos y patologías ya que con su gran poder
tecnológica hace que el patólogo evalué con gran precisión la información
molecular de los tejidos moleculares de los pacientes.
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