El desarrollo Histórico de la

Biología Celular
 Origen del Microscopio
• Los hermanos Janssen (Holanda), construyen el
primer microscopio compuesto (1590).

Origen del concepto Célula

• Robert Hook describe por primera vez una Célula

(1665)
 Desarrollo de la Teoría Celular

• Anton Van Leeuwenhoek –animáculos- (1676)

• Robert Brown (1731)

Botánico Escoses
 Los Padres de la Teoría Celular
Theodor Schwann (Zoologo) y Mathias-Jakob
Schleiden (Botánico) 1838-1839
1. Todos los organismos están conformados por células
2. La célula es la unidad básica de la estructura de
todos los organismos vivos.
(Kart Nágeli, 1855 y el fisiólogo alemán Rudolf
Virchow: omnis cellula e cellula (toda célula
proviene de otra célula))
3. Todas las células se originan a partir de células
preexistentes.
 La Biología
Celular moderna
realmente se
desarrolla a
partir de la
primera mitad
del siglo XX
Fig. 6-2
10 m
Human height
1m
Length of some
nerve and

Unaided eye
muscle cells
0.1 m
Chicken egg

1 cm

Frog egg
1 mm

Light microscope
100 µm
Most plant and
animal cells
10 µm
Nucleus
Most bacteria

Electron microscope
Mitochondrion
1 µm

Smallest bacteria
100 nm
Viruses

Ribosomes
10 nm
Proteins
Lipids
1 nm
Small molecules

0.1 nm Atoms
 Recorrido
de la luz
Aumento Imagen
visualizada
ojo

Lente ocular

Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)

Lente objetivo
Muestra

Ninguno Condensador

Fuente de luz

Microscopio óptico
 Tinción de células para
la observación microscópica

Extensión de una fina capa

de células sobre el porta

Adición del colorante

lavado y secado
Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
Fijación por flameado del porta 100X
 Tinción de Gram
Tinción del frotis
Previamente fijado al calor,
Paso 1 con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.

Añadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen

de color azul-violeta.
Gram +

Decolorar con alcohol

Las células Gram +
Paso 3 siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.

Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las células G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.

Gram -
 Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)

Microscopio de
Fluorescencia

Bacteria filamentosa
Teñida con naranja
de acridina

Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae

Microscopía
Confocal por Láser

Cianobacteria
filamentosa
Microscopio láser
de barrido confocal
Fig. 6-3ab

TECHNIQUE RESULTS

(a) Brightfield (unstained

specimen)

Campo brillante (no teñido)

50 µm
(b) Brightfield (stained
specimen)

Campo brillante (teñido)

Fig. 6-3cd

TECHNIQUE RESULTS
(c) Phase-contrast
Contraste de fase

(d) Differential-interference-
contrast (Nomarski)

Contraste diferencial de interferencia

Fig. 6-3e

TECHNIQUE RESULTS
(e) Fluorescence

50 µm
Fig. 6-3f

TECHNIQUE RESULTS

(f) Confocal
CCD
camera

Laser

Ventajas
Se puede observar tejidos
gruesos o poco traslucidos

Mayor nitidez

Varios cromóforos
simultáneamente
50 µm
 Microscopia confocal

Citosqueleto=fluorescencia amarilla; Cromosomas=fluorescencia azúl

FISH, una aplicación de M. Confocal
 Optica vs electrónica

Ec de Abbé
NA lente en seco=0.94
NA lente Ac. Inmersión=1.4
Fig. 6-4
TECHNIQUE RESULTS
1 µm
(a) Scanning electron Cilia
microscopy (SEM)

(b) Transmission electron Longitudinal Cross section

microscopy (TEM) section of of cilium
cilium 1 µm
 Nuclear
envelope
ENDOPLASMIC RETICULUM (ER)
Nucleolus NUCLEUS
Rough ER Smooth ER
Flagellum Chromatin

Centrosome
Plasma
membrane

CYTOSKELETON:
Microfilaments
Intermediate
filaments
Microtubules
Ribosomes

Microvilli

Golgi
Peroxisome apparatus
Mitochondrion
Lysosome
Fig. 6-9b
Nuclear envelope Rough endoplasmic
reticulum
NUCLEUS Nucleolus
Chromatin
Smooth endoplasmic
reticulum
Ribosomes

Central vacuole
Golgi
apparatus
Microfilaments
Intermediate
filaments CYTO-
SKELETON
Microtubules

Mitochondrion
Peroxisome
Chloroplast
Plasma
membrane

Cell wall
Plasmodesmata
Wall of adjacent cell
Fig. 6-6

Fimbriae

Nucleoid

Ribosomes

Plasma membrane

Bacterial Cell wall

chromosome
Capsule
0.5 µm
(a) A typical Flagella (b) A thin section
rod-shaped through the
bacterium bacterium
Bacillus
coagulans (TEM)
Fig. 6-10

Nucleus
1 µm Nucleolus
Chromatin
Nuclear envelope:
Inner membrane
Outer membrane

Nuclear pore

Pore
complex

Rough ER
Surface of
nuclear envelope
Ribosome 1 µm

0.25 µm

Close-up of nuclear
envelope

Pore complexes (TEM) Nuclear lamina (TEM)

Microscopia Elect de Cryoscaning
Fig. 6-11

Cytosol
Endoplasmic reticulum (ER)

Free ribosomes

Bound ribosomes

Large
subunit

Small
0.5 µm subunit
TEM showing ER and ribosomes Diagram of a ribosome
Fig. 6-12
Smooth ER

Rough ER Nuclear
envelope

ER lumen
Cisternae
Ribosomes Transitional ER
Transport vesicle 200 nm
Smooth ER Rough ER
Fig. 6-13

cis face
(“receiving” side of 0.1 µm
Golgi apparatus) Cisternae

trans face
(“shipping” side of TEM of Golgi apparatus
Golgi apparatus)
Fig. 6-14b
Vesicle containing 1 µm
two damaged organelles

Mitochondrion
fragment

Peroxisome
fragment

Lysosome

Peroxisome

Mitochondrion Digestion
Vesicle

(b) Autophagy
Fig. 6-15

Central vacuole

Cytosol

Nucleus Central
vacuole

Cell wall

Chloroplast

5 µm
Fig. 6-17

Intermembrane space
Outer
membrane

Free
ribosomes
in the
mitochondrial
matrix Inner
membrane
Cristae
Matrix

0.1 µm
Fig. 6-18

Ribosomes
Stroma
Inner and outer
membranes

Granum

1 µm
Thylakoid
Fig. 6-19

Chloroplast
Peroxisome
Mitochondrion

1 µm
Fig. 6-20

Microtubule

Microfilaments
0.25 µm
Fig. 6-22
Centrosome

Microtubule

Centrioles
0.25 µm

Longitudinal section Microtubules Cross section

of one centriole of the other centriole
Fig. 6-28

Secondary
cell wall
Primary
cell wall

Middle
lamella

1 µm
Central vacuole
Cytosol
Plasma membrane

Plant cell walls

Plasmodesmata
Fig. 6-29

RESULTS

10 µm

Distribution of cellulose Distribution of microtubules

synthase over time over time
 Otras metodología clásica en
Biología Celular

Fraccionamiento subcelular

Centrifugación diferencial
Centrifugación al equilibrio (en gradiente de sacarosa)
Fig. 6-5a

TECHNIQUE

Homogenization

Tissue
cells Homogenate

Differential centrifugation
Fig. 6-5b
TECHNIQUE (cont.)

1,000 g
(1,000 times the
force of gravity)
10 min
Supernatant poured
into next tube

20,000 g
20 min

80,000 g
60 min
Pellet rich in
nuclei and
cellular debris
150,000 g
3 hr
Pellet rich in
mitochondria
(and chloro-
plasts if cells
are from a plant) cytosol
Pellet rich in
“microsomes”
(pieces of plasma
membranes and
cells’ internal
membranes) Pellet rich in
ribosomes
Centrifugación en gradiente de
sacarosa
Marcadores subcelulares

¿Qué marcador usarían para cloroplasto?

Inmunohistoquímica
Utilización de anticuerpos
(inmunoglobulinas IgG)

Producidos por animales

Purificados
Diversos tipos de Anticuerpos

Conjugación Directa
Conjugación Indirecta.
Procedimiento de detección conjugación enzimática
Inmunofluorescencia
Inmunolocalización
subcelular
Estudio de sistemas de transporte a nivel de
membrana
Patch Clamp
Mediante el análisis de curvas I vs V

Ex=(RT/zF) Ln ([x]o/[x]c)
Fig. 6-1