VECTORES VIRALES EN TERAPIA GENICA
VENTAJA DE LOS VECTORES ADENOASOCIADOS
Autores: Ana Soledad Sandoval, Adriana María Salazar, Juan Armendariz
INTRODUCCION
El tratamiento de enfermedades mediante terapia génica, se enfoca
en la búsqueda de vectores que brinden mejores resultados a la
hora de transferir el material génico. Se requiere eficacia en la
tranferencia, persitencia del material transferido, seguridad,
inocuidad y una alta especificidad.
ESPECIES DE VIRUS UTILIZADAS COMO VECTORES
Retrovirus
virus ARN, que se integra aleatoriamente en el huésped. Presenta
riesgo de mutagénesis insercional con posiblidad de alterar un gen
vital supresor del tumor que inhibe su expresión. En el caso de
insertarse en un protooncogén puede activarlo a un oncogén.
Adenoasociados
Virus muy importantes en terapia génica que han dado lugar al
desarrollo de una tecnología de vanguardia en el tratamiento de
enfermedades.
ADENOASOCIADOS AVV
Virus de cadena sencilla de ADN (positiva o negativa), que
surgieron como contaminantes en preparaciones de Adenovirus
(Ad). Son defectusos en replicación y requieren de
un virus colaborador para realizarla.
Su genoma codifica los genes REP y CAP, que pueden ser sustituidos
por un promotor y un tragen en la obtención de un AVV
Recombinante.
CICLO VIRAL
El genoma del virus entra a la celula y se posciona en el Permanece en estado latente hasta que ocuure la
cromosoma 19 coinfección de otro virus.
Respuesta inmune
No se conocen padecimientos en humanos y se considera que entre
un 80-90% de la población adulta mundial es seropositiva a este
tipo de virus. Y un 8% ha desarrollado anticuerpos neutralizantes,
lo que significa que pueden presentarse reinfecciones.
Integració́n
En forma silvestre los AAV gracias a las proteínas REP reconocen
una secuencia sitio-específica del cromosoma 19 en humanos. Pero
los rAAV pierden esta característica de integración, por lo que se
utiliza un promotor P5 que facilita la expresión de proteína REP e
integración en el cromosoma 19.
Transducción
La proteína ssD-BP producida por la célula huésped, bloquea la
replicación del virus. Para evitar el efecto de la proteína, se realiza
coinfección con un adenovirus silvestre o tratamiento con
hidroxiurea; de esta forma se logra un incremento en la expresión
del trasgén e inclusive la replicación autónoma de los AAV
silvestres.
Purificación
La cantidad de partículas infecciosas requieren un proceso de
puriificación. Los métodos son:
Gradientes diferenciales en cloruro de cesio: exposición de las
partículas al CsCl. Presenta desventajas de disminución de
infectividad y contaminación.
Iodixanol/purificación por columna: uso de centrifugación,
iodixanol y columna de heparina.
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC): se producen
partículas con alta pureza y en buena cantidad. Requiere
personal y equipo especializado.
Purificación por columna: es el método más rápido con un alto
índice de puerza y partículas infecciosas. Se fundamenta en la
afinidad de los AAV con le heparina.
Referencias bibliográficas
Novo, F. (s. f.). Virus adeno-asociados como vectores de terapia génica. [Archivo de video]. Obtenido de
https://www.youtube.com/watch?v=SOEr7vYeSgc
Sandoval, A., Salazar, A., & Armendáriz, J. (2005). Vectores virales en terapia génica. Ventajas de los vectores adenoasociados. Revista de
Gastroenterología de México, 70(2), 192.
Lentivirus
Son virus que se integran fácilmente a su huésped; pero al ser
derivados del virus humano VIH, se requieren protocolos
específicos antes de su aplicación.
Adenovirus
virus ADN, derivados de tejidos adenoides de niños. Expresan el
trasgén de forma temporal durante siu estancia en la célula. Son
seguros biológicamante, de fácil reproducción e infectan un
amplio espectro de células eucariotas, principalmente en el
hígado. Tienen la desventaja de producir una respuesta inmune en
el huésped.
REP es el responsable de la transcripción, replicación e integración,
y CAP codifica para proteínas de la cápside. Diferencias antigénicas
en las proteínas capsídicas han dado lugar a varios serotipos de
AAV, de los cuales AAV2, se lo ha hecho recombinante para terapia
génica
Ciclo viral
El virus se puede replicar en dos estados de fase: fase litica o de
replicación y la fase de latencia.
En la fase litica con condiciones favorables como la presencia de
un adenovirus o los mecanismos celulares de reparación del ADN
activados, ocurre la formación de la doble cadena y la replicación
del virus.
En la fase de latencia una vez el ADN del virus se ha integrado en
el huésped, permanece en forma latente, hasta que ocurra la
coinfección de otro virus y dañe el ADN de la célula.
Se replica el genoma dando origen a otros virus
Producción
Clasica: coinfección con Ad o herps virus, transfección con
plásmidos y remoción de contaminantes.
Trasfección triple: uso de tres plásmidos. Uno con secuencias
de replicación del virus colaborador, otro con el vector AAV y
otro que codifica las proteína Rep y Cap necesarias para AAV.
Protocolos exitosos con AAV como vectores:
Hemofilia A: deficiencia del factor VIII de la coagulación de la
sangre. En pruebas con ratones inmunocompetentes la
transducción de hepatocitos conteniendo el gen humano del
factor se detecto a las 4 semanas y se mantuvo la expresión de
la proteína de 1 a 2% hasta por 11 meses.
Hemofilia B: deficiencia del factor IX de la coagulación. La
transducción de un constucto de adenoasociado conteniendo
el factor IX humano mantuvo la expresión de 1 a 2% por un
tiempo de 8 a 10 meses.
Enfermedad: de Fabry: deficiencia de la enzima 𝞪-
galactosidasa A, que produce la acumulación de glicol´ípidos
en vasos sanguíneos, riñon, hígado, corazón, bazo y plasma.
La transducción de la enzima en células hepáticas mediante
rAAV, produjo niveles de 20 a 35% de la proteína hasta por un
periodo de seis meses y se logró la reducción del glicolípido.
Ceguera infantil: acumulación de esteres transretinoicos,
alteración de fotorreceptores, degeneración retinal, causados
por mutación en el gen de la proteína RPE 65. Pruebas en
caninos con la administración del gen RPE 65 silvestre
restauró la visión.
CONCLUSION
Los virus adenoasociados son muy simples, tienen una baja
respuesta inmune y la forma recombinante es muy segura
clinicamente, por lo que se han convertido en vectores con
potencial para la terapia génica.