LÍPIDOS

CONOCIMIENTOS REQUERIDOS

LÍPIDOS

a) Lípidos de reserva: ácidos grasos, triacilglicéridos, ceras.

b) Lípidos estructurales: fosfolípidos, galactolípidos, esfingolípidos, glicolípidos y

esteroles

c) Lípidos como señales intracelulares

d) Eicosanoides

e) Vitaminas A, D, E, K, ubiquinona

f) Métodos de aislamiento e identificación de lípidos

BIBLIOGRAFÍA:

- D. L. Nelson y M. M. Cox. “Lehninger. Principios de Bioquímica” Ed. Omega

SA, 6ª edición (2014).

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 GUÍA DE PROBLEMAS Y DISCUSIÓN

1) Indique cuáles son los diferentes triglicéridos que se podrían formar a partir de
glicerol, ácido esteárico y ácido oléico. Ordénelos según su punto de fusión.
2) Discuta cómo se producen las “grasas trans”.
3) De cada uno de los siguientes lípidos de membrana indique los componentes que
constituyen las unidades hidrofílicas e hidrofóbicas: fosfatidiletanolamina,
esfingomielina, cerebrósido, gangliósido, colesterol. Discuta por qué en la membrana
plasmática predominan los fosfolípidos y no los triacilgliceroles.
4) Cite cinco ejemplos de lípidos que actúan como señales celulares.
5) Dibuje la estructura e indique la función de cada una de las vitaminas liposolubles.
6) Una mezcla de los siguientes lípidos: fosfatidiletanolamina, esfingomielina,
palmitato, un éster de colesterol, un triacilglicerol y colesterol, se aplica a una columna
de gel de sílice y la columna se lava con solventes de polaridad creciente. ¿En qué orden
eluirán de la columna?
7) ¿Qué método (físico, químico o enzimático) utilizaría para distinguir esfingomielina
de un cerebrósido?
8) El estudio de la relación fosfatidilcolina/esfingomielina (PC/E) en el líquido
amniótico se utiliza para conocer la madurez pulmonar fetal. Ambos lípidos forman
parte del surfactante pulmonar, que permite reducir la tensión superficial y es esencial
para el correcto funcionamiento del pulmón maduro. La concentración de
esfingomielina de líquido amniótico no guarda relación con la madurez fetal,
presentando un leve descenso después de la semana 32 de gestación. La fosfatidilcolina
proviene mayormente del pulmón fetal y comienza a aumentar a las 24 semanas de
gestación. Una relación PC/E mayor o igual a 2 indica que el pulmón fetal está
produciendo suficiente cantidad de fosfatidilcolina, que está maduro y que el bebé podrá
respirar por sus propios medios. En el laboratorio de análisis clínicos se realiza una
TLC de lípidos del líquido amniótico que permite conocer la relación PC/E.
En la siguiente figura se muestra una TLC de lípidos provenientes de líquido amniótico
de diferentes pacientes. Indique cuáles son las calles que cree que corresponderían a
pacientes que no presentan madurez pulmonar fetal (la calle 3 corresponde a los
marcadores, PG:fosfatidilglicerol; PE: fosfatidiletanolamina, PI: fosfatidil inositol).

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 PG
PE
PI
Fosfatidilcolina

Esfingomielina

PROBLEMA ADICIONAL

Explique y compare cada uno de los pasos de purificación descriptos en la sección de

materiales y métodos de dos trabajos científicos diferentes que se detallan a
continuación.

Trabajo científico N° 1: Bacterial glycosidases for the production of universal red

blood cells. Qiyong P Liu y col. Nature Biotechnology (2007) 25, 454-464.
Glycolipid analysis. Glycosphingolipids were prepared essentially as previously
described. Briefly, red blood cell membranes were extracted by homogenization in ten
volumes of isopropanol/hexane/water (55:25:20, vol/vol/vol), filtered, evaporated and
partitioned by Folch extraction method. The upper phase was collected, evaporated,
dialyzed and applied to a DEAE Sephadex column. The pass-through fraction contained
the total upper neutral lipids, and the monosialyl fraction was eluted with 0.05 M
ammonium acetate, evaporated and dialyzed against water to remove acetate. Total
upper neutral (UN) and monosialyl (MS) glycolipid fractions were analyzed by high-
performance thin layer chromatography. TLC plates (Merck) were developed using the
solvent system chloroform/methanol/0.5 M CaCl2 in water (50:40:10, vol/vol/vol).
Glycolipids were stained by heating with 0.05% orcinol in 0.5 M H2SO4.

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Trabajo científico N° 2: Environmental hyperosmolality regulates phospholipid
biosynthesis in the renal epithelial cell line MDCK. Cecilia I. Casali , Karen Weber ,
Nicolás O. Favale , and María C. Fernández Tome. Journal of Lipid Research (2013)
54, 677-691.
Lipid extraction
Total lipids were extracted by the method of Bligh and Dyer. Briefly, in the first step,
MDCK cell pellets (4 × 10 6 cells) were resuspended in 800 µl of PBS and mixed with 2
ml of methanol and 1 ml of chloroform, vortexed gently for 30 s, and incubated on ice
for 15 min. To yield two phases, in a second step, 1 ml of chloroform and 1 ml of water
were added to the samples, then vortexed for 30 s and centrifuged at 800 g for 5 min.
The lower organic phase containing total cellular lipids was collected, dried under a
nitrogen stream, and kept at -80°C for further analysis.
Phospholipid separation and quantification
Phospholipid species were separated by TLC using a two-solvent system. First, dried
extracts containing total lipids were resuspended in 40 µl of chloroform and applied
drop by drop onto a 1 cm lane of thin-layer silica gel chromathoplates. Then, plates
were developed in the first solvent mix containing chloroform-methanol-acetic acid-
water (40:10:10:1, v/v), dried, and developed in the second solvent mix containing
chloroformmethanol-acetic acid-water (120:46:19:3, v/v). After chromatography, plates
were exposed to iodine vapors to reveal phospholipid spots. Phospholipids were
identified by comparison with the corresponding standards and the retention factors
(Rfs): 0.20, 0.30, 0.47, 0.55, and 0.70 for sphingomyelin, phosphatidylcholine,
phosphatidylinositol, phosphatidylserine, and phosphatidylethanolamine, respectively.
The quantification of the different phospholipids was carried out by measuring the
quantity of free orthophosphate according to the Bartlett procedure. Briefly, the zones of
the plates containing phospholipid mass were scraped into a Kjeldhal tube, mixed with
600 µl of 70% perchloric acid and one drop of 0.5% ammonium molybdate, and heated
at 200°C for 30 min to complete mineralization. This procedure allows the release of the
phospholipid polar head-bound phosphate. The concentration of free orthophosphate
was determined by using Fiske-Subarrow reagent.
Cuestionario de orientación:
a) ¿Qué tipo de lípidos se purificaron en cada trabajo?
b) ¿Qué métodos de extracción y purificación se emplearon? ¿Por qué?

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c) ¿Para qué se utilizó la columna de DEAE Sephadex en el trabajo N° 1?
d) ¿Cómo se revelaron las placas de TLC?
e) ¿Cómo se cuantificaron los fosfolípidos en el trabajo N° 2?