Journal Pone 0213945 en Es

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
Mecanismo específico de Acidithiobacillus caldus

Sustancias poliméricas extracelulares en la
biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre.
Shoushuai Feng 1,2,3, Kaijun Li 1,2,3, Zhuangzhuang Huang 1,2,3, Yanjun Tong 4,5 *,
Hailin Yang 1,2,3 *
1 Escuela de Biotecnología, Universidad de Jiangnan, Wuxi, República Popular de China, 2 El Laboratorio Clave de Biotecnología Industrial, Ministerio
de Educación; Wuxi, República Popular de China, 3 Laboratorio clave de química y biotecnología de carbohidratos (Universidad de Jiangnan)
Ministerio de Educación; Wuxi, República Popular de China, 4 Laboratorio estatal clave de ciencia y tecnología de los alimentos, Universidad de
a1111111111 Jiangnan, Wuxi, República Popular de China, 5 Escuela de Ciencia y Tecnología de los Alimentos, Universidad de Jiangnan, Wuxi, República Popular
a1111111111 de China
a1111111111
a1111111111
a1111111111 * tongyanjun@jiangnan.edu.cn (YT); bioprocessor123@aliyun.com (HY)
Resumen
ACCESO ABIERTO Este estudio tuvo como objetivo revelar el mecanismo específico de las sustancias poliméricas extracelulares (EPS) en la
Citación: Feng S, Li K, Huang Z, Tong Y, Yang H (2019) biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre por una bacteria moderadamente termófila.
Mecanismo específico de Acidithiobacillus caldus sustancias Acidithiobacillus caldus. Se comparó el rendimiento de biolixiviación de los sistemas de control en blanco (BC), células
poliméricas extracelulares en la biolixiviación de minerales de
planctónicas deficientes (PD), células adheridas deficientes (AD) y EPS deficientes (ED), para investigar las funciones
sulfuro de cobre. PLoS ONE 14 (4): e0213945. https://doi.org/10.1371/
journal.pone.0213945
específicas de "sin contacto" y "contacto" ( incluidos los mecanismos de contacto directo y de contacto mediado por EPS). La
mecánica detallada de la biolixiviación.
fueron estudiados usando μ X del crecimiento celular, microscopía electrónica de barrido (SEM), difracción de rayos X
Editor: Yogendra Kumar Mishra, Instituto de Ciencia de
Materiales, ALEMANIA (XRD) y espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR). los μ X del crecimiento celular demostró que EPS favorece el
Recibido: 26 de diciembre de 2018

crecimiento celular planctónico y adherido. La observación SEM reveló que
los microporos intensivos en la escoria se beneficiaron del mecanismo de “contacto mediado por EPS”. La identificación XRD
Aceptado: 4 de marzo de 2019
indicó que se produjeron derivados químicos adicionales a través del mecanismo de "contacto mediado por EPS", debido al
Publicado: 12 de abril de 2019
metabolismo activo del hierro / azufre. El análisis FTIR reveló que los picos de absorción de COS, sulfato y S = O, que están
Derechos de autor: © 2019 Feng et al. Este es un artículo de acceso estrechamente asociados con el metabolismo del azufre, tienen una influencia significativa en la secreción de EPS. En conjunto,
abierto distribuido bajo los términos del
el mecanismo de "contacto mediado por EPS" contribuyó a casi la mitad de la eficiencia del mecanismo de "contacto" y una
Licencia de atribución Creative Commons , que permite el uso, la
distribución y la reproducción sin restricciones en cualquier medio,

cuarta parte de la eficiencia total de la biolixiviación. El mecanismo específico propuesto de EPS puede profundizar nuestra
siempre que se acredite el autor y la fuente originales. comprensión de procesos de biolixiviación similares.
Declaración de disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están
dentro del manuscrito y sus archivos de información de respaldo.
Fondos: Este estudio fue apoyado por subvenciones de la Fundación
Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 21606110; 21878128;
21776113; 31530056), la Fundación de Ciencias Naturales de la Introducción

Provincia de Jiangsu (No. BK20150133), la financiación del
Con la continua disminución de las reservas de minerales ricos en cobre, el reprocesamiento de minerales de sulfuro de cobre de baja ley,
Laboratorio Clave de Biotecnología Industrial, Ministerio de Educación
que representan> 70% de las reservas mundiales de cobre, se ha vuelto inevitable [ 1 - 3 ]. Sin embargo, la extracción de metales de estos
(KLIB-KF201504), la financiación del Laboratorio clave de química de
carbohidratos y minerales de baja ley utilizando técnicas tradicionales de fundición no es rentable. Por lo tanto, la mayoría de los minerales de baja ley se han
descartado [ 4 - 6 ]. Recientemente, debido a
PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213945 12 de abril de 2019 1/18

Mecanismo específico de EPS en biolixiviación
Biotecnología, Ministerio de Educación (KLCCBKF201601), el Desarrollo ventajas tales como operación simple, baja inversión en infraestructura y reducción de la contaminación ambiental, la biolixiviación se ha
del Programa Académico Prioritario de las Instituciones de Educación
convertido en una tecnología dominante para reciclar los recursos metálicos de los minerales descartados, en comparación con la
Superior de Jiangsu y el Programa de Introducción de Talentos de
pirometalurgia convencional [ 7 - 12 ]. Sin embargo, como mineral de sulfuro primario, el mineral de sulfuro que contiene cobre es difícil de
Disciplina a las Universidades (No. 111-2-06) y el programa nacional de
disolver mediante el proceso de biolixiviación, debido a su composición complicada, efecto de pasivación y alta energía reticular (estructura
disciplina de primera clase de Tecnología e Ingeniería de la Industria
Ligera ( LITE2018- cristalina tetraédrica) [ 2 , 5 ]. Por lo tanto, la mejora de la eficiencia de los procesos de biolixiviación de minerales de sulfuro de cobre ha
atraído una atención creciente en los últimos años.

23).
Conflicto de intereses: Los autores han declarado que no existen Para mejorar la velocidad de disolución del cobre durante la biolixiviación, es necesario obtener una mayor comprensión de los
intereses en competencia. mecanismos de biolixiviación. Varias investigaciones de los procesos involucrados en los mecanismos de biolixiviación de "contacto"
y "sin contacto" han propuesto modelos para explicar varios aspectos del proceso de biolixiviación, incluido el comportamiento de
adsorción y la cinética de disolución durante la biolixiviación de minerales de sulfuro [ 13 - dieciséis ]. El mecanismo de "contacto",
derivado del comportamiento de adsorción de las células adheridas y los lixiviados, es un requisito previo para iniciar la adhesión y el
posterior metabolismo del hierro / azufre [ 17 - 19 ]. El mecanismo de “no contacto”, en cambio, opera mediante la acción química de
soluciones ácidas de sulfato férrico producidas por la oxidación bacteriana del hierro ferroso, que normalmente está presente en
estos ambientes [ 20 ]. Estudios recientes han reconocido el importante papel de las sustancias poliméricas extracelulares (EPS) en la
biolixiviación, especialmente en la interfaz de la solución mineral. Es bien sabido que los EPS bacterianos se secretan en la
envoltura celular. Estos EPS contienen polisacáridos, proteínas y lípidos, que son beneficiosos para la formación de biopelículas [ 21 ,
22 ]. Se ha sugerido previamente que el EPS del oxidante de hierro Acidithiobacillus ferrooxidans podría combinarse con Fe 3+ y forman
el complejo EPS-Fe 3+ compuestos [ 23 ]. El EPS sintetizado y secretado del mesófilo A. tiooxidans favorecer una interacción
hidrofóbica más fuerte en la adhesión celular durante los procesos de bio-oxidación / biolixiviación [ 24 ]. EPS fue reconocido como la
evidencia directa de la colonización y formación de biopelículas de la arqueona extremadamente acidófila Ferroplasma acidiphilum Biopelículas
BRGM4 durante la fijación a las grietas / defectos de las superficies de pirita [ 25 ]. Sin embargo, el mecanismo "mediado por EPS"
para acoplarse con el oxidante de azufre moderadamente termofílico A. caldus, que es ampliamente reconocida como la cepa
dominante en la mayoría de los procesos de biolixiviación, es sofisticada y no ha sido completamente aclarada hasta ahora.
En el estudio anterior de los autores, A. tiooxidans ZJJN-3 secretó una cápsula gruesa y un complejo similar al EPS, que
exhibió un buen potencial para el comportamiento de adsorción [ 26 ]. El mecanismo de "contacto" fue reforzado por el
comportamiento de adsorción adaptado en la biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre por A. tiooxidans y A. ferrooxidans [ 27 ].
Los efectos del mecanismo de "no contacto" en la estructura de la comunidad durante la biolixiviación de calcopirita por Acidithiobacillus
sp. también se han estudiado [ 28 ].
En este estudio, la típica cepa moderadamente termofílica- A. caldus se utilizó para investigar los mecanismos específicos
que sustentan el "contacto mediado por EPS" en la biolixiviación de cobre
teniendo mineral de sulfuro. Primero, los efectos del EPS sobre el metabolismo del azufre / hierro y la μ X del crecimiento celular se
compararon. Los efectos del mecanismo de "contacto mediado por EPS" sobre las características del mineral,
tales como la morfología de la escoria, la composición y su composición compleja y las diferencias de los grupos funcionales se
investigaron utilizando microscopía electrónica de barrido (SEM), difracción de rayos X (XRD) y espectroscopía infrarroja por
transformada de Fourier (FTIR), respectivamente. Finalmente, se determinó la contribución de los procesos “mediados por EPS” a los
mecanismos de biolixiviación.
Materiales y métodos
Condiciones de cepa y crecimiento
El típico oxidante de azufre moderadamente termofílico A. caldus CCTCCM2018054 (número de GenBank del gen de
ARNr 16S: Z29975 ) se aisló del lixiviado de la biolixiviación de

sulfuro de cobre, en Fujian, China. A. caldus se cultivó en medios modificados de Deutsche Sammlung von
Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH. Las sales basales del
Los medios modificados se enumeraron de la siguiente manera (en g / L): (NH 4) 2 ENTONCES 4: 3,0; KH 2 correos 4: 3,0; K 2 HPO 4 3H 2 0:
0,5; MgSO 4 7H 2 O: 0,5; KCl: 0,1; Ca (NO 3) 2: 0,01. El sustrato energético consistió en 12,5 g / LS 0.
Los oligoelementos se enumeraron de la siguiente manera (en mg / L): Na 2 ENTONCES 4: 50,0; FeCl 3 6H 2 O: 11,0; H 3 BO 3: 2,0; MnSO 4 H 2 O:
2,0; ZnSO 4 7H 2 O: 0,9; N / A 2 Mugir 4 2H 2 O: 0,8; CoCl 2 6H 2 O: 0,6; CuSO 4: 0,5;
N / A 2 SeO 4: 0,1. Los productos químicos anteriores se compraron a SinopharmGroup (Shanghai, China). El pH inicial
del medio se ajustó a 2,0. Las cepas se adaptaron en un 2,0% p / v
calcopirita de bajo grado a 45 ° C y 170 rpm y se incubaron en medio fresco una vez al mes.
Composición y pretratamiento de la muestra de mineral
El mineral de sulfuro de cobre de baja ley se extrajo de la mina de cobre Dongguashan, Tongling, Anhui, China. La estructura
detallada y la composición de la muestra de mineral se analizaron mediante espectrometría de absorción atómica (Spectr
AA-220, Varian, EE. UU.), Y los resultados se dan en
tabla 1 . La muestra de mineral se trituró en un molino (Raymond 3R1410, Jinghua, Weifang, China). El mineral molido se tamizó a
través de una rejilla de malla 300, con un diámetro de partícula de control de <48 µm. La muestra de mineral tamizada se lavó
suavemente en una solución de 2 MHCl, agua destilada y etanol puro para eliminar el polvo de la superficie. Finalmente, la muestra de
mineral se secó a temperatura ambiente y se almacenó en un desecador de vacío.
Procedimiento experimental
Procedimiento para sistemas PD, AD y ED. Se diseñaron cuatro experimentos de biolixiviación relacionados, de la siguiente manera: A.
caldus sistema de control en blanco (BC); un A. caldus sistema deficiente en células planctónicas (PD); un A. caldus sistema deficiente de
células adheridas (AD); y un A. caldus EPS / sistema deficiente de células adheridas (ED). Para el sistema de DP, el lixiviado se dejó reposar
sin agitación durante 1 hora y luego la muestra de mineral se cosechó mediante centrifugación a 380 × gramo durante 2 min. Las células
planctónicas se recolectaron luego mediante centrifugación a 6000 × gramo durante 2 min y se desecha. Las muestras de mineral se
combinaron de nuevo con el sobrenadante de biolixiviación original libre
Tabla 1. Principales características de la muestra de mineral utilizada en el estudio a.
Parámetro y unidad Valor y descripción
Cu (%) 1,01 ± 0,02
S (%) 12,8 ± 0,21
Fe (%) 32,5 ± 0,50
Ca (%) 3,70 ± 0,23
Mg (%) 3,73 ± 0,21
Al (%) 1,40 ± 0,12
Zn (%) 0,054 ± 0,01
Mn (%) 0,047 ± 0,01
Ni (%) 0,028 ± 0,005
Pb (%) 0,026 ± 0,005
Como (%) 0,0042 ± 0,001
Diámetro de partícula (μm) < 48 segundo
Tipo de mineral Sulfuro de cobre pobre
una La muestra de mineral se tomó de la mina de cobre Dongguashan, Tongling, Anhui, China; los valores de Ag, Au, Co, Cd y Hg estaban todos por
debajo del límite de detección (<0,0002).

segundo La muestra de mineral se molió y se tamizó a través de una rejilla de malla 300, que controlaba el diámetro de partícula <48 μm.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213945.t001

de células planctónicas (PD). Siguiendo los procedimientos anteriores, no se contaron células por microscopía después de una
centrifugación adicional (6000 × gramo durante 2 min), lo que indica que se habían eliminado todas las células libres del sobrenadante.
Para el experimento de AD, la muestra de mineral se cosechó mediante centrifugación a 380 × gramo durante 2 min. A continuación, el
mineral recogido se esterilizó matando las células unidas con luz ultravioleta durante 1 h. La muestra de mineral esterilizada sin células
adheridas se transfirió luego a su sistema original. Para el experimento de ED, la muestra de mineral lixiviado se esterilizó con luz
ultravioleta para matar completamente las células adheridas, de manera similar al experimento de AD. Después, la muestra de mineral
se suspendió en 50 ml de medio fresco y se añadió 1,0 g de perlas de vidrio de 0,2 mm y se agitó con un vórtice (lab-dancer, IKA,
Alemania) durante 5 min. Se repitieron los procedimientos de centrifugación y agitación anteriores. Casi no queda ADN disociativo en el
sobrenadante después de estos procedimientos, según informes anteriores sobre este método, lo que implica que se eliminan todos los
EPS y las células adheridas [ 29 ]. La muestra de mineral se devolvió luego a su sobrenadante de biolixiviación original. El EPS y las
células adheridas a la superficie del mineral se eliminaron por completo. La configuración experimental de los cuatro sistemas de
biolixiviación se presenta en Figura 1 . El procedimiento descrito anteriormente se realizó cada dos días.
Experimento de biolixiviación. Los experimentos de biolixiviación se llevaron a cabo en matraces agitadores de 500 mL con medio de
sales basales de 100 mL. Se agregaron 2.0 g de calcopirita de bajo grado a cada matraz de arriba
Fig 1. La configuración experimental de los diferentes procedimientos de biolixiviación diseñados para este estudio: A. caldus sistema de control en blanco (BC);
A. caldus sistema deficiente en células planctónicas (PD); A. caldus sistema deficiente de células adheridas (AD); A. caldus EPS / sistema deficiente de células adheridas (ED).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213945.g001

el medio de crecimiento modificado (con 12,5 g / LS 0 como sustrato energético adicional). La biomasa inicial en cada sistema se
controló a 5.0 × 10 7 células / mL después de la inoculación. El pH se mantuvo en 1,5 para mantener las condiciones estables de
crecimiento celular, y se mantuvo en 1,5 mediante el uso de 6 MHCl cada dos días. Considerando que los iones sulfato excesivos
pueden participar en la formación de precipitado de jarosita (que influye en la biolixiviación posterior y el análisis de parámetros clave),
se utilizó HCl 6M para ajustar las condiciones de pH. Los experimentos de biolixiviación se llevaron a cabo a 45ºC y 170 rpm. Para
compensar la pérdida por evaporación diaria del lixiviado, se suplementaron 2.0 mL de agua esterilizada en cada sistema una vez al
día. La duración de todo el ciclo de biolixiviación fue de 30 días.
métodos analíticos
Medición de parámetros químicos clave. El valor de pH se midió usando un pHmetro (FE28, Mettler, Suiza). El valor
de Eh se controló mediante un electrodo de Pt (E-431Q, ASI, EE. UU.)
con un electrodo de calomelanos (Hg / Hg 2 Cl 2) como una referencia. La concentración de iones sulfato se determinó según el
ensayo colorimétrico ácido crómico-bario utilizando un espectrofotómetro (IV-
1100D, Meipuda, China). La concentración de iones de cobre se midió usando un espectrofotómetro de absorción atómica de llama
(Spectr AA-220, Varian, EE. UU.). La muestra de mineral se secó en un desecador de vacío a 25 ° C y luego se colocó sobre una cinta
de caucho aislada para la observación SEM (Quanta-200, FEI, Países Bajos) de la morfología mineralógica de la superficie del
residuo, con una velocidad de escaneo de 300 ns. a 30 ns. El residuo de mineral lixiviado se lavó suavemente con agua desionizada,
se secó a temperatura ambiente y el residuo de mineral seco se colocó en el hueco central de la placa de detección. La muestra de
mineral se escaneó de 3 a 90̊ con una velocidad de 4˚ / ̊min utilizando un XRD (D8, AXS, Alemania). Los datos detallados fueron luego
analizados por el software MDI Jade 6.0 (Materials Data Ltd., EE.UU.) con la biblioteca de tarjetas PDF. Aproximadamente 2 mg de
muestra de mineral seco y 200 mg de KBr se molieron en un mortero de ágata. Se recogió una pequeña muestra y se le dio forma de
cilindro delgado mediante un exprimidor. El cilindro se midió con un espectrómetro FTIR (NEXUS, Thermo, EE. UU.), Con longitudes
de onda de 400 a 4000 cm 1 y una precisión de 0,01 cm- 1.
La concentración de iones sulfato (en mg / L) se calculó como = 201,6 × OD 420 nm - 26.029 (r 2 =

0,998). Las concentraciones de iones ferrosos y férricos se midieron de acuerdo con la o- fenan-
ensayo de espectrofotometría de trolina usando un espectrofotómetro. La concentración de iones ferrosos.
(en mg / L) se calculó como = 5.077 × OD 508 nm - 0.0765 (r 2 = 0.999), la concentración de iones férricos (en mg / L) se
calculó como = 5.102 × DO 508 nm - 0,143 (r 2 = 0,998) y la concentración de
iones de cobre (en mg / L) se calculó como = 6.852 × λ 325 nm - 0.0301 (r 2 = 0,999).
Cuantificación de biomasa planctónica, adherida y total. Un mililitro de lixiviado
del proceso de biolixiviación se tomaron muestras y se centrifugaron a 380 × gramo durante 2 min. Se recogió el sobrenadante y se
midió la cantidad de biomasa planctónica utilizando un microscopio óptico a 640 X magnificación (Leica, Alemania). Mientras tanto,
se agregaron 5,0 ml de medio basal fresco para volver a suspender la muestra de mineral del fondo. A continuación, se añadieron
0,2 g de perlas de vidrio de 0,2 mm y la mezcla se agitó mediante un vórtice durante 5 min. Los procesos de mezcla y centrifugación
se repitieron una vez para separar las células adheridas de la superficie del mineral. Las células en el sobrenadante se contaron
como biomasa unida usando un microscopio de un solo tramo y la biomasa total se calculó como la suma de las células planctónicas
y la biomasa unida.
Resultados y discusión
Efectos del mecanismo de "contacto mediado por EPS" sobre el metabolismo de azufre / hierro y el
crecimiento celular ( μ X)
Metabolismos de azufre / hierro. Los cambios en los parámetros químicos debidos al metabolismo del hierro / azufre, como los
cambios en los iones sulfato, ferrosos y férricos, se muestran en Figura 2 . El principal

Fig 2. Cambios en parámetros químicos clave en diferentes sistemas de biolixiviación deficientes. ( A): pH; (B): Eh; (C): sulfato
iones (D): iones ferrosos; (E): iones férricos; (F) Biomasa planctónica y adherida; (GRAMO) μ X de células planctónicas y adheridas. Nota: el pH del
lixiviado durante la biolixiviación se midió antes del ajuste de pH-1,5 en 6 MHCl cada dos días.
Las reacciones bioquímicas en la biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre se resumen en las ecuaciones (Eq) ( 1 ) - ( 6 ). Después
de la fase adaptativa, el azufre granular acumulado en la superficie del mineral comenzó a oxidarse por el crecimiento de células
adheridas, como se muestra en las ecuaciones ( 4 ) y ( 5 ). Por tanto, el pH disminuyó y el contenido de iones sulfato aumentó
gradualmente. En el sistema BC, el metabolismo del azufre estaba activo con un mecanismo de biolixiviación integral mejor y el valor
del pH se mantuvo en aproximadamente 1,50 en la fase inicial. Mientras tanto, los valores en los sistemas deficientes fluctuaron
enormemente debido a la liberación de sustancias alcalinas del mineral y el azufre pobre.

eficiencia de oxidación. Los valores finales de pH en los diferentes sistemas fueron 1.02 (BC), 1.22 (PD),
1.12 (AD) y 1.40 (ED). Estos resultados demuestran la importancia del EPS para la oxidación del azufre. El valor más alto de
concentración de iones sulfato se determinó en el sistema ED (16,40 g /
L), en comparación con 28,60 g / L (BC), 19,46 g / L (PD) y 18,70 g / L (AD) en los otros sistemas. Los exopolisacáridos han sido
reconocidos como esenciales para el proceso de oxidación de azufre granular por
A. thiooxidans [ 30 ]. Estos EPS pasaron de fases pasivas o inactivas (que contienen CuS
y S 2− n) a fases activas (que contienen cantidades crecientes de S 0) sobre superficies de calcopirita. En
el sistema de DP, debido a la falta de células planctónicas, el azufre intermedio soluble (S X O norte y)
no se pudo oxidar, lo que resultó en un metabolismo inactivo del azufre. En el sistema AD, el
El azufre granular en la superficie del mineral no podía ser utilizado por las células adheridas y, por lo tanto, formó el S 0 capa de
pasivación, inhibiendo la posterior oxidación del azufre. Además, los valores finales de Eh en sistemas deficientes (485-501 mV) con
un nivel inactivo de iones de hierro / azufre fueron ligeramente más bajos que los del sistema BC (523 mV). La eficacia de la
biolixiviación de la calcopirita por termo-
los philes Acidianus brierleyi, Sulfolobus metallicus y Metallosphaera sedula) está estrechamente asociado
atado con la fluctuación del estado redox [ 31 ].

El metabolismo del azufre y el metabolismo del hierro interactuaron entre sí, como se muestra en las ecuaciones ( 1 ) - ( 4 ). Las
concentraciones más altas de iones ferrosos en cada sistema (en g / L) fueron 1.20 (BC),
0,35 (PD), 0,30 (AD) y 0,27 (ED). Se ha informado que el comportamiento de adsorción de las células adheridas en la etapa temprana es
beneficioso para concentrar aún más los iones férricos y atacar el mineral de sulfuro, como se muestra en la ecuación ( 1 ) [ 20 ]. La
concentración de iones ferrosos mostró la mayor reducción, alcanzando el 77,5%, en las células adheridas / sistema deficiente en EPS.
De manera similar, el metabolismo del azufre de otro oxidante de azufre mesófilo, A. tiooxidans, fue más significativamente influenciado
por las células adheridas, en comparación con el oxidante de hierro / azufre, A. ferrooxidans [ 27 ]. Los iones férricos mostraron una
tendencia similar a la de los iones ferrosos. Las concentraciones más altas de iones férricos (en g / L) en cada sistema alcanzaron 0,97
(BC), 0,70 (PD), 0,56 (AD) y 0,35 (ED). Se ha observado que los iones férricos adicionales aceleran el proceso de adhesión de EPS
debido a la interacción electrostática más fuerte por parte del mesófilo. A. ferrooxidans [ 32 ]. Estos resultados indican que el "mecanismo
regulado por EPS" del comportamiento de adsorción fue favorable para mejorar el metabolismo del hierro. Una comparación detallada de
los parámetros bioquímicos clave entre los diferentes sistemas se presenta en
Tabla 2 .
CuFeS 2 þ 4 Fe 3 þ ¼ Cu 2 þ þ 2 S 0 þ 5 Fe 2 þ re 1 Þ
CuFeS 2 þ 4 H þ þ O 2 ¼ Cu 2 þ þ 2 S 0 þ Fe 2 þ þ 2 H 2 O re 2 Þ
4 Fe 2 þ þ 4 H þ þ O 2 ¼ 4 Fe 3 þ þ 2 H 2 O re 3 Þ
2 S 0 þ 3 O 2 þ 2 H 2 O ¼ 2 ENTONCES 2 þ 44 H þ re 4 Þ
S X O norte
y þ O 2 þ H 2 ¡Oh! ENTONCES 2 þ H
4þ
re 5 Þ
þ þ
3 Fe 3 þ þ 2 ENTONCES
4
2þ 6 H
2 O þ K ¼ KFe 3 re ENTONCES 4 Þ 2ð OH Þ þ 66 H re 6 Þ
Biomasa y μ X de crecimiento celular. Una deficiencia en las células planctónicas, células adheridas o EPS, influye significativamente
en la biomasa planctónica y adherida ( Figura 2D ). Comparado con 4,36 × 10 8
células / mL de biomasa planctónica medida en el sistema BC, la biomasa planctónica en los sistemas AD y ED se
redujo en gran medida a 3,48 × 10 8 y 2.02 × 10 8 células / mL, respectivamente, lo que indica la fuerte cooperación
microbiana entre la población planctónica y el adjunto

Tabla 2. Comparación de parámetros químicos y biológicos clave entre pre-lixiviación y post-lixiviación en sistemas BC, PD, ED y AD.
Parámetro y unidad Pre- Después de la lixiviación
lixiviación
antes de Cristo PD ANUNCIO ED
Ión sulfato (g / L) 0,42 ± 0,05 28,6 ± 1,2 16,7 ± 1,1 16,5 ± 0,8 15,7 ± 1,3
Químico
Relación de conversión de ion sulfato% una Ninguna 63,3 ± 2,7 37,0 ± 2,4 36,5 ± 1,8 34,7 ± 2,9
índices
Iones ferrosos (mg / L) Ninguna 162,5 ± 12,5 312,5 ± 21,2 356,3 ± 26,2 65,4 ± 4,5
Relación de conversión de iones ferrosos% una Ninguna 2,17 ± 0,17 4,17 ± 0,28 4,75 ± 0,35 0,87 ± 0,06
Ión férrico (mg / L) Ninguna 199,8 ± 12,2 670,2 ± 23,5 370,3 ± 21,2 141,2 ± 12,6
Relación de conversión de ion férrico% una Ninguna 2,66 ± 0,16 8,94 ± 0,31 4,94 ± 0,28 1,88 ± 0,16
Hierro total (mg / L) Ninguna 362,3 ± 21,2 982,7 ± 32,3 726,6 ± 34,2 206,6 ± 17,2
Relación de conversión del hierro total% una Ninguna 4,83 ± 0,28 13,11 ± 0,43 9,69 ± 0,46 2,75 ± 0,23
Cobre total (mg / L) Ninguna 60,72 ± 3,0 40,20 ± 1,6 42,72 ± 1,7 28,20 ± 0,8
Productividad diaria Ninguna 1,52 ± 0,08 1,01 ± 0,04 1,67 ± 0,07 0,71 ± 0,02
Color mineral Negro Leonado gris gris gris
Biomasa planctónica (10 7 células / mL) 5,0 38,1 ± 1,0 Ninguna 30,0 ± 1,2 17,1 ± 0,8
Índices biológicos
μ max Ninguna 0,52 Ninguna 0,37 0,32
μ max fecha Ninguna 7,67 Ninguna 7.14 8,91
Biomasa adjunta (10 7 células / mL) Ninguna 4.09 ± 0.3 3,76 ± 0,3 Ninguna Ninguna
μ max Ninguna 0,51 0,23 Ninguna Ninguna
μ max fecha Ninguna 12.10 11,87 Ninguna Ninguna
Proporción adjunta (%) Ninguna 9,7 ± 0,9 100,0 ± 0,3 Ninguna Ninguna
Biomasa total (10 7 células / mL) Productividad 5,0 42,19 ± 0,6 3,76 ± 0,3 30,0 ± 1,2 17,1 ± 0,8
diaria (10 7 células / mL) Ninguna 1,05 ± 0,15 0,09 ± 0,01 0,75 ± 0,03 0,43 ± 0,02
una Representa iones solubles (sulfato, ferroso, férrico y iones de hierro total) en el sistema de biolixiviación.
población. El mecanismo de "contacto" se inhibió y se liberaron menos sustratos energéticos y nutrientes, necesarios para el
crecimiento celular. Los gránulos de azufre se oxidaron principalmente a un
forma intermedia, como S 4 O 2 o S 4 O 2, con

6
la ayuda 5del comportamiento de adsorción [ 2 , 17 ]. El azufre reducido y soluble se
consumió por completo a través de un mecanismo de "no contacto".
Por el contrario, la biomasa adherida medida en el sistema PD fue 0,58 × 10 8 células / mL, incluso más alto que el del sistema BC
(0.51 × 10 8 células / mL). Se cree que la razón de esto es que las células adheridas pueden obtener directamente sustrato
energético y nutrientes del mineral. Además, sin la competencia de las células planctónicas, todo el sustrato energético o los
nutrientes liberados del mecanismo de "contacto" estaban disponibles para el crecimiento de las células adheridas. Estos datos son
consistentes con los cambios en los parámetros químicos, que también indicaron un mayor requerimiento de EPS y células
adheridas por A. caldus.
los μ X de células adheridas y planctónicas fueron significativamente influenciadas por la ausencia de
células planctónicas, células adheridas y EPS ( Figura 2D ). los μ max de células planctónicas en el sistema de DE se redujo de 0,52
d- 1 a 0.37 d- 1 ( AD) y 0,32 d- 1 ( ED), mientras que μmáx de células adjuntas
también se redujo de 0,51 d- 1 hasta 0,23 d- 1 ( PD). Más células adsorbidas a la superficie del mineral con un rendimiento de adsorción
más fuerte debido al papel mediador del EPS, lo que resulta en abundancia.
nutrientes dant disponibles para el crecimiento celular. Además, el momento del pico μ max estaba
claramente retrasado en ausencia de EPS. los μ max de células planctónicas se probó después de 7,67 días en el sistema BC y 8,91 días
en el sistema ED. El tiempo máximo para las células adheridas fue de 12,10 días.
en el sistema BC, que fue similar al del sistema PD (11,87 d). Los datos cinéticos fueron consistentes con los resultados
anteriores para la biomasa adherida, y todos los resultados respaldan la importancia del papel de EPS en la mejora del
crecimiento celular planctónico y adherido de A.
caldus.

Efectos del mecanismo de "contacto mediado por EPS" sobre la morfología del mineral
Para comprender mejor el efecto mineralógico del EPS, se observaron mediante SEM las morfologías de los residuos en los diferentes
sistemas de biolixiviación ( Fig. 3 ). Se encontró que las diferencias morfológicas en los residuos minerales entre los sistemas normales y
deficientes eran significativas. En el sistema BC, aparecieron sitios de adsorción intensiva como arroyos y microporos en la superficie
del mineral, lo que implica un mecanismo de "contacto" más fuerte. Oxidantes de azufre como el mesófilo A. tiooxidans generalmente
muestran una mayor dependencia de estos para su comportamiento de adsorción, ya que la mayor parte de su principal fuente de
energía (S 0) se genera en la superficie del mineral [ 28 ]. Curiosamente, se encontró que el tamaño de los microporos era similar al
tamaño celular de A. caldus cuando se observa mediante técnicas de microscopía electrónica transmitida (TEM) (1,8–2,0 μm de longitud
y 0,5–
0,7 μm de ancho). Además, la observación de TEM indicó que había una capa de EPS transparente envuelta alrededor del A. caldus células,
lo que indica un efecto más fuerte del mecanismo de "contacto mediado por EPS". Se ha informado que la acumulación de EPS viscoso
y blando en Sulfobacillus thermosulfidooxidans las biopelículas estimularon el comportamiento de adsorción en superficies de pirita [ 33 ].
Además, debido al estado de iones químicos activos, también se produjeron y se esparcieron por la superficie del mineral derivados
desconocidos adicionales. En el sistema de DP, debido a la ausencia de células planctónicas, la
Fig 3. Diferencias morfológicas superficiales de las muestras de mineral entre los diferentes sistemas de biolixiviación: ( A B C; (B): PD; (C): AD; (D) ED. La escoria se secó a temperatura ambiente en un
desecador de vacío y se observó mediante microscopía electrónica de barrido con un aumento de 10 × k (bar, 5 μm, 10 × k).

crecimiento celular de A. caldus solo dependía del comportamiento de adsorción de las células adheridas. El azufre granular, que no
podría utilizarse por completo sin las células adheridas, se acumuló gradualmente en la superficie del mineral. Esta conclusión fue
apoyada por el examen de los patrones XRD de los residuos. En el sistema AD, la superficie del mineral era más suave y la
precipitación de jarosita era menor. Debido a la ausencia de células adheridas, el mecanismo de "contacto" se inhibió en gran medida
y no hubo suficiente sustrato energético (iones ferrosos) liberado del mineral para el crecimiento celular. La precipitación de jarosita
ha sido reconocida como un importante cuello de botella en la última etapa de la biolixiviación de sulfuros que contienen cobre [ 23 , 34 ].
La morfología más limpia se observó en el sistema de DE, lo que indica desde una perspectiva diferente, la importancia del EPS para
el comportamiento de adsorción.
Efectos del mecanismo de "contacto mediado por EPS" en los componentes del mineral
Se realizaron análisis XRD para investigar la composición de muestras de mineral en los diferentes sistemas de biolixiviación ( Figura
4 ). Según los patrones de XRD, los componentes principales fueron
CuFeS 2, KFe 3 ( ENTONCES 4) 2 ( OH) 6, S, Fe 7 S 8, Fe 3 O 4, FeS 2, y CaSO 4 2H 2 O. En el sistema BC, el

CuFeS 2 los picos eran anchos, lo que indica la probable deformación de la estructura cristalina durante la biolixiviación. La
asistencia del mecanismo de "contacto mediado por EPS" aceleró hierro / azufre
metabolismo y produjo más formas cristalinas [ 1 , 23 ]. En conjunto, grandes cantidades de azufre granular no fueron evidentes en los
patrones de XRD, lo que indica una utilización completa por las células adheridas. Las temperaturas más altas aumentaron la tasa
de transferencia de masa durante la biolixiviación por el moderadamente termofílico A. caldus, que apoya la eficiencia mejorada en
oxidar S 0 mem-
branas [ 1 , 12 ]. En el sistema de DP, el CuFeS 2 pico se mantuvo alto, lo que podría interpretarse
como disolución incompleta del mineral durante este bioproceso. En el sistema AD, el FeS 2 El pico fue significativo, lo que indica
un metabolismo de hierro / azufre menos activo debido a la deficiencia de
células adjuntas. En contraste, hubo cantidades relativamente grandes de precipitados como jarosita y S 0 en los residuos
de los sistemas deficientes. Se ha informado de que, hasta cierto punto, el azufre elemental generalmente se acopla con
hierro amorfo u otros oxihidróxidos [ 23 ]. Media-
mientras, el CaSO 4 2H 2 El pico O fue significativo en los sistemas PD y AD. Además, se especuló la presencia de otros
picos menores desconocidos en los análisis de estos precipitados.
debido a lavados previos con agua desionizada antes de la detección de XRD. Se puede interpretar que los patrones de
DRX de los residuos sólidos indican que los abundantes iones inorgánicos y complejos orgánicos microbianos en los
sistemas de biolixiviación contribuyeron a derivados más complicados [ 27 ]. El análisis XRD de los residuos fue consistente
con los análisis bioquímicos y de microfotografía descritos anteriormente.
Efectos del mecanismo de "contacto mediado por EPS" en los grupos funcionales
Los grupos funcionales del mineral en la región del espectro infrarrojo se analizaron mediante análisis FTIR ( Figura 5 ). Las
principales bandas de absorción fueron 500, 680, 830, 1,000, 1,200, 1,600, 2,300 y 3,400 cm- 1. En el sistema BC, la banda de
absorción era compleja debido a la presencia de derivados adicionales. Se ha informado que los grupos funcionales de A.
caldus, como S = O, -OH,
- NH 2, C = O, CO y -CONH 2, están estrechamente asociados con el proceso de comportamiento de adsorción [ 21 ]. El pico de absorción a
aproximadamente 680 cm −1 fue especialmente evidente, mientras que el pecado
pico de absorción gle alrededor de 1000-1,100 cm −1 se dividió en dos picos. Estos picos de absorción están muy
influenciados por variaciones en el rendimiento del ion sulfato o S = O.
Se ha informado que varios metabolitos intermedios, como S 4 O 2 o S 4 O 2 fueron pro
6
ducida durante el proceso de oxidación de los gránulos de azufre [ 6 , 17 ]. Además, una banda única
estaba ubicado a 830 cm- 1, que fue causado por las vibraciones de estiramiento COS. Se ha informado que se cree que el
polisacárido sulfato, otro componente único de la biopelícula bacteriana EPS,

Fig 4. Análisis XRD de las muestras de mineral en diferentes sistemas de biolixiviación. C: CuFeS 2; S: azufre; H: Fe 2 O 3; Yo: Fe (OH) 3; K: Fe 3 ( ENTONCES 4) 4; R: FeSO 44; J: KFe 3 ( ENTONCES 4) 2 ( OH) 6; M: H: Fe 3 O 4.
estar estrechamente asociado con las vibraciones de estiramiento COS [ 33 ]. Además, la vibración de estiramiento asimétrico de CH y la
banda del grupo NH también podrían causar el cambio máximo alrededor de 1600 y 3400 cm- 1 [ 24 ]. En el sistema de DE, la absorción
alcanza un máximo de alrededor de 680 cm- 1
y 1.000-1.100 cm- 1 se hizo más pequeño, debido a la oxidación ineficiente del azufre causada por la ausencia del mecanismo de
"contacto". Se ha sugerido que varias proteínas extracelulares con abundantes grupos tiol (Pr-SH) pueden estar directamente
involucradas en la activación del azufre en A. ferrooxidans uniéndose al azufre elemental y formando complejos Pr-Sn-SH [ 32 ]. El pico
de absorción faltante a 830 cm- 1 en el sistema de DE implica que la formación de derivados relacionados con el azufre, como el
polisacárido de sulfato (identificado por la vibración de estiramiento COS) se inhibió en gran medida debido a la deficiencia de EPS y
al metabolismo inactivo del azufre. Además, la absorción alcanza un máximo de alrededor de 1600 cm- 1 y 3400 cm- 1, que están
estrechamente relacionados con el metabolismo orgánico, se observó que se han vuelto menos distintos debido al menor contenido
orgánico asociado con un crecimiento celular deficiente.

Fig 5. Análisis FTIR de las muestras de mineral en los diferentes sistemas de biolixiviación deficientes.
Eficacia del mecanismo de “contacto mediado por EPS” para mejorar la recuperación de cobre.
Los cambios en los iones de cobre en los diferentes sistemas se muestran en Figura 6A . Los iones de cobre se liberaron
gradualmente en el lixiviado, al mismo tiempo que se oxidaba el hierro mineral y el azufre elemental durante la biolixiviación. La
concentración final de iones de cobre en los sistemas deficientes se redujo considerablemente debido a la ausencia del
mecanismo de "no contacto" o mecanismo de "contacto" (incluido el mecanismo de "contacto directo" y "contacto mediado por
EPS"). La tendencia del cambio fue muy consistente con los parámetros bioquímicos descritos anteriormente, lo que demuestra
directamente la función de EPS desde la perspectiva de la eficiencia de la biolixiviación. Por primera vez, la contribución
detallada del mecanismo de "contacto mediado por EPS" a la biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre utilizando el
moderadamente termofílico A. caldus se han revelado comparando sistemáticamente las diferencias de rendimiento de la
biolixiviación entre los sistemas BC, PD, AD y ED. Hemos demostrado que el 23,91% de la eficiencia de la biolixiviación fue

Fig. 6. Cambios en los iones de cobre en diferentes sistemas y eficiencias relativas de biolixiviación de diferentes mecanismos. ( A): ion cobre; (B): Eficiencias relativas de biolixiviación de diferentes mecanismos.
contribuido por EPS (mecanismo de "contacto mediado por EPS"), mientras que el 29,64% y el 33,79% de la eficiencia de la
biolixiviación fueron aportados por las células adheridas (a través del mecanismo de "contacto directo") y las células planctónicas (a
través del mecanismo de "sin contacto"), respectivamente ( Figura 6B ). El mecanismo de “contacto mediado por EPS” fue responsable
del 44,65% de la eficiencia total de los mecanismos de “contacto”. Tomados en conjunto, hubo una estrecha consistencia de las tasas
de extracción de iones de cobre mostradas por los parámetros bioquímicos y mineralógicos, lo que respalda la hipótesis de que el EPS
jugó un papel importante en la biolixiviación de mineral de sulfuro de cobre por el moderadamente termofílico A. caldus.
Evaluación general del mecanismo de "contacto mediado por EPS" en la biolixiviación de sulfuro
de cobre
Los microambientes involucrados en la biolixiviación de sulfuro de cobre pueden dividirse en la interfaz sólido-líquido y los
microambientes líquidos, según el sitio de reacción bioquímica. Las células adheridas y los complejos de EPS son
aparentemente activos principalmente en la interfaz sólido-líquido, mientras que las células planctónicas sobreviven en el
microambiente líquido, que está muy influenciado por el proceso anterior. Los mecanismos de "contacto directo" "sin contacto" y
"contacto mediado por EPS" se derivaron de estos tres microambientes diferentes para la biolixiviación de minerales de sulfuro
de cobre ( Figura 7 ). La comparación de células adheridas / EPS en la superficie mineral entre el sistema BC y ED a través del
análisis de microscopio de barrido láser confocal (CLSM) se presentó en Información de apoyo.
El mecanismo de "no contacto" fue realizado por plancton A. caldus células. Células planctónicas
oxidado S 4 O 2 o S 4 6O 2 en solución5 y liberaron protones, como se muestra en la ecuación ( 5 ). Los protones (H +) son esenciales para el
metabolismo del azufre y del hierro, ya que atacan la superficie de los gránulos de mineral.
enfrentan irregularidades y liberan azufre granular, como se muestra en la ecuación ( 2 ) [ 1 , 6 ]. Los protones también oxidan los iones ferrosos
a iones férricos, como se muestra en Ecuación 3 , y los iones férricos atacaron aún más el mineral, como se muestra en Eq ( 1 ). Por tanto, la
disolución de los sulfuros metálicos se consiguió mediante una combinación de procesos de ataque de protones y oxidación de iones
férricos.
El mecanismo de "contacto directo" fue realizado por las células adjuntas. Durante el proceso de oxidación del azufre, los
coloides de azufre se oxidaron a varios compuestos intermedios como

Fig 7. Descripción general de la función específica del mecanismo de "contacto mediado por EPS" en la biolixiviación de mineral de sulfuro que contiene cobre por el moderadamente
termofílico Acidithiobacillus caldus.
S 4 O 2 6más o menos
4 5
2 [, 15 9
. yo ] Además, el azufre redundante reunido como micropartículas (S 8) y
formó una capa de barrera sobre el mineral, bloqueando el acceso a su superficie. Este azufre reducido se disolvió en el
microambiente líquido y se oxidó, como se muestra en la ecuación ( 5 ). Los iones de hidrógeno luego entraron en el
microambiente sólido-líquido y facilitaron el mecanismo de "no contacto". Los iones de azufre e hidrógeno reducidos en el
microambiente líquido gradualmente

inició y mejoró el mecanismo de "t sin contacto" [ 6 , 35 ]. Con la ayuda del comportamiento de adsorción, se generaron más
iones de hidrógeno, iones ferrosos, iones férricos, compuestos de azufre y biomasa planctónica en el sistema de biolixiviación.
La actividad bioquímica del sistema de biolixiviación se vio afectada directa o indirectamente por estos agentes oxidantes y
reductores. Por tanto, hasta cierto punto, el comportamiento de adsorción de las células adheridas actuó como iniciador y
acelerador del metabolismo del hierro o del azufre.
En el mecanismo de “contacto mediado por EPS”, el acoplamiento con EPS se evaluó primero a partir de diferentes aspectos
mineralógicos. Este mecanismo contribuyó con casi la mitad de la eficiencia del mecanismo de "contacto" y una cuarta parte de la
eficiencia total de la biolixiviación, lo que indica su papel vital en la biolixiviación. EPS, que consta de polisacáridos, proteínas y ácidos
nucleicos, generalmente sirve como sitios de reacción en la interfaz [ 14 , dieciséis ]. El EPS puede ayudar a formar biopelículas con
células adheridas y también puede concentrar iones férricos y protones. El espesor y la estructura del EPS regulan el proceso del
mecanismo de "contacto". En general, el proceso de disolución del cobre tiene lugar en la interfaz entre el EPS y la superficie del
mineral. Los iones ferrosos liberados se disuelven y vuelven a participar en el ciclo iónico, y los precipitados de jarosita o hierro se
combinan con la capa de EPS y actúan como barreras de difusión débiles, lo que interfiere con el rendimiento de difusión de iones de
la capa de EPS [ 34 ]. En nuestro estudio anterior, con otras dos especies de Acidithiobacillus, A. ferrooxidans
y A. tiooxidans d como modelo, la tasa de establecimiento de biopelículas mediadas por EPS se mejoró continuamente durante
un proceso de evolución directamente adaptado, y A. tiooxidans mostró una mayor dependencia del "mecanismo de contacto"
mediado por el biofilm adjunto (EPS contenido) que el de A. ferrooxidans [ 27 ]. Se demostró que la fuerza de adhesión disminuyó
en caso de que se hubieran eliminado las sustancias poliméricas extracelulares (EPS). L. ferrooxidans exhibe la fuerza de
adhesión más fuerte a la calcopirita y el ángulo de contacto más grande, en comparación con el de
Tabla 3. Comparación entre nuestro estudio y otras literaturas anteriores relacionadas.
Tipo de mineral Cepas dominantes Condiciones de operación Énfasis en la investigación / rasgo de adhesión Árbitro.
Pirita A. ferrooxidans NR una Una biopelícula de varias capas con EPS fue fundamental en los mecanismos de "contacto". [9]
Pirita Sulfobacillus pH 2,5 100–200 μm, 2,0% PD segundo, 45˚C. EPS viscoso y suave acumulado en las biopelículas y en la superficie de la pirita para inducir el [ 33 ]
termosulfidooxidanos proceso de adhesión.
Calcopirita, azufre y pirita A. ferrooxidans pH 2,3, 420–500 μm, 4,0% PD, Orden de adsorción: célula de cultivo mineral> célula de crecimiento iónico ferroso / tiosulfato. [ 38 ]
30˚C.
Calcopirita concentrada A. caldus, L. pH 2.0, <75 μm, 6.0% PD, 45 ° C. Los componentes crudos de EPS se identificaron como azúcares, lípidos e ion férrico complejo de ácido [ 39 ]
ferriphilum, urónico.
Calcopirita A. ferrooxidans, pH 2,0, <75 μm, 30˚C, 170 rpm. L. ferrooxidans> A. ferrooxidanos o [ 40 ]
A. tiooxdianos y A. tiooxdianos; La fuerza de adhesión se redujo en gran medida al eliminar el EPS.
L. ferrooxidans
Calcopirita, pirita y A. ferrooxidans, 50–100 μm, 20,0% PD, 28˚C. Selección de minerales con las mismas cepas; EPS fue un mediador clave. [ 36 ]
esfalerita A. tiooxdianos y
L. ferrooxidans
Calcopirita de desecho, de baja calidad A. ferrooxidans y pH 2,0, <75 μm, 0,5–2,0% PD, 0 K Diversidad del “mecanismo de contacto” entre diferentes minerales como pirita> [ 35 ]
mineral, pirita y cuarzo L. ferriphilum medio, 30˚C. calcopirita.
Calcopirita A. ferrooxidans < 75 μm, 7,5% PD, 30 ° C. EPS con Fe adicional 3+ aumentó la interacción electrostática e inició el "mecanismo de [ 34 ]
contacto"
de cobre de baja calidad A. ferrooxidans y pH 2,2, <48 μm, 3,0% PD, 30 ° C, Una evolución directamente adaptada aumentó la contribución del “mecanismo de contacto” [ 27 ]
mineral de sulfuro A. tiooxdianos 40 d. (22,8% de A. ferrooxidans; 28,9% de A. tiooxidans).
de cobre de baja calidad A. caldus pH 2,2, <48 μm, 2,0% PD, 45 ° C, Evaluación de la función / rol específico del mecanismo de “contacto mediado por EPS” Esta
mineral de sulfuro 40 d. (23,9% de la eficiencia total). estudiar
una NR: no informado;
segundo PD: densidad pulpar.

A. ferrooxidans y A. thiooxidans [ 36 ]. También se indicó que EPS de otro microorganismo de biolixiviación- Acidianus sp. El
DSM 29099 contiene principalmente proteínas y carbohidratos asociados con superficies de células planctónicas o asociados
con biopelículas en superficies minerales, parece mediar en las interacciones célula-célula y pirita celular durante la
biolixiviación [ 37 ]. La comparación entre nuestro estudio y otros estudios previos se da en Tabla 3 .
Conclusiones
El mecanismo específico de "contacto mediado por EPS" en la biolixiviación de minerales de sulfuro de cobre
por el moderadamente termofílico A. caldus fue evaluado sistemáticamente. Se ha demostrado que el
mecanismo de “contacto mediado por EPS” juega un papel vital en la biolixiviación y es responsable de casi la
mitad de la eficiencia del mecanismo de “contacto” y de una cuarta parte de la eficiencia total de la
biolixiviación. La observación SEM reveló microporos de un tamaño similar al tamaño de las células en la
superficie del mineral, lo que se considera que ha fomentado un mecanismo de "contacto mediado por EPS"
más fuerte. El análisis XRD implicó que se produjeran derivados químicos adicionales con la ayuda del
mecanismo de “contacto mediado por EPS”. El análisis FTIR indicó que los picos de absorción del sulfato, COS
y S = O, que están estrechamente asociados con el metabolismo del azufre, fueron influenciados
significativamente por la presencia de EPS. Tomados en conjunto, A. caldus.
El trabajo que se informa aquí puede proporcionar la base para una mejor comprensión de la biolixiviación de minerales de sulfuro y
bioprocesos similares para futuras investigaciones.
Información de soporte
S1 Fig. Análisis CLSM de células adheridas y EPS en la superficie mineral bajo diferentes sistemas. Sistema de control de
blancos BC; Sistema deficiente ED EPS. Las muestras de mineral lixiviado se recolectaron en diferentes períodos de biolixiviación. Se
mezcló SYTO 9 de 20 μM (L13152, Invitrogen, EE. UU.)
con la muestra λ ex: 485 nm y λ em: 498 nm) con 200 μg / ml Alexa Fluor 594 ConA
(C11253, Invitrogen, EE. UU.) ( λ ex: 590 nm y λ em: 617 nm). Después de la incubación en la oscuridad durante 30 min, la muestra de mineral
se recogió por centrifugación, se lavó con 1 mL de solución de PBS durante 30 minutos.
min. Luego, la muestra de mineral tratada se incubó con solución de PBS durante 30 min y se observó mediante CLSM (TSC SP8,
Leica, Alemania).
(DOCX)
Contribuciones de autor
Conservación de datos: Shoushuai Feng, Kaijun Li, Zhuangzhuang Huang.
Análisis formal: Shoushuai Feng, Kaijun Li, Zhuangzhuang Huang.
Investigación: Shoushuai Feng, Kaijun Li, Zhuangzhuang Huang.
Software: Shoushuai Feng, Kaijun Li, Zhuangzhuang Huang.
Redacción - borrador original: Shoushuai Feng.
Escritura - revisión y edición: Yanjun Tong, Hailin Yang.
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ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

Mecanismo específico de Acidithiobacillus caldus

mecánica detallada de la biolixiviación.

Recibido: 26 de diciembre de 2018

distribución y la reproducción sin restricciones en cualquier medio,

Declaración de disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están

dentro del manuscrito y sus archivos de información de respaldo.

Fondos: Este estudio fue apoyado por subvenciones de la Fundación

Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 21606110; 21878128;

21776113; 31530056), la Fundación de Ciencias Naturales de la Introducción

descartado [ 4 - 6 ]. Recientemente, debido a

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atraído una atención creciente en los últimos años.

sp. también se han estudiado [ 28 ].

Condiciones de cepa y crecimiento

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2,0; ZnSO 4 7H 2 O: 0,9; N / A 2 Mugir 4 2H 2 O: 0,8; CoCl 2 6H 2 O: 0,6; CuSO 4: 0,5;

Composición y pretratamiento de la muestra de mineral

mineral se secó a temperatura ambiente y se almacenó en un desecador de vacío.

combinaron de nuevo con el sobrenadante de biolixiviación original libre

Tabla 1. Principales características de la muestra de mineral utilizada en el estudio a.

Parámetro y unidad Valor y descripción

Cu (%) 1,01 ± 0,02

S (%) 12,8 ± 0,21

Fe (%) 32,5 ± 0,50

Ca (%) 3,70 ± 0,23

Mg (%) 3,73 ± 0,21

Al (%) 1,40 ± 0,12

Zn (%) 0,054 ± 0,01

Mn (%) 0,047 ± 0,01

Ni (%) 0,028 ± 0,005

Pb (%) 0,026 ± 0,005

Como (%) 0,0042 ± 0,001

Diámetro de partícula (μm) < 48 segundo

Tipo de mineral Sulfuro de cobre pobre

debajo del límite de detección (<0,0002).

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día. La duración de todo el ciclo de biolixiviación fue de 30 días.

de onda de 400 a 4000 cm 1 y una precisión de 0,01 cm- 1.

La concentración de iones sulfato (en mg / L) se calculó como = 201,6 × OD 420 nm - 26.029 (r 2 =

cambios en los iones sulfato, ferrosos y férricos, se muestran en Figura 2 . El principal

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enormemente debido a la liberación de sustancias alcalinas del mineral y el azufre pobre.

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reconocidos como esenciales para el proceso de oxidación de azufre granular por

biolixiviación de la calcopirita por termo-

atado con la fluctuación del estado redox [ 31 ].

los parámetros bioquímicos clave entre los diferentes sistemas se presenta en

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Parámetro y unidad Pre- Después de la lixiviación

Color mineral Negro Leonado gris gris gris

μ max fecha Ninguna 7,67 Ninguna 7.14 8,91

μ max Ninguna 0,51 0,23 Ninguna Ninguna

μ max fecha Ninguna 12.10 11,87 Ninguna Ninguna

forma intermedia, como S 4 O 2 o S 4 O 2, con

adheridas por A. caldus.

los μ X de células adheridas y planctónicas fueron significativamente influenciadas por la ausencia de

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desconocidos adicionales. En el sistema de DP, debido a la ausencia de células planctónicas, la

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4 ). Según los patrones de XRD, los componentes principales fueron

CuFeS 2, KFe 3 ( ENTONCES 4) 2 ( OH) 6, S, Fe 7 S 8, Fe 3 O 4, FeS 2, y CaSO 4 2H 2 O. En el sistema BC, el