ACTIVIDAD REMOTA 6

ANÁLISIS QUÍMICO

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Alejandra Castellanos - Microbiología Industrial

Paola Navas - Biología
Diana Sosa - Bacteriología

INTRODUCCION
La cromatografía es una técnica de análisis químico que se utiliza para la identificación de
compuestos de mezclas y su purificación. Existe la técnica clásica o instrumental.
En este caso utilizamos la cromatografía en capa delgada TLC que utiliza el principio de adsorción
por capilaridad, usando una fase móvil y una estacionaria sobre una placa de vidrio o aluminio. La
fase estacionaria puede estar constituida por silica gel o lumina quienes brindan cierta fuerza para
retener sustancias miscibles poco polares de las disoluciones que se arrastran con la fase móvil, la
cual debe aportar una interacción polar fuerte con los analitos para así ver claramente sus
separación a través de la placa.
La retención de los compuestos hacia el punto de partida dependerá la polaridad las moléculas de
sus componentes, la naturaleza del adsorbente y la naturaleza del disolvente, estos factores harán
que se separen formando manchas en el eje de aplicación de cada especie, en este caso, dejando a
los más polares más cerca de la fase estacionaria y a los menos polares más alejados hacia el frente
del disolvente.
Una vez realizado el procedimiento indicado en el linki, se procede a analizar la naturaleza de cada
especie encontrada y analizada, aspectos como el RF, la polaridad y las manchas visibles bajo luz
UV y los vapores de yodo, para así comprender de manera certera el principio de funcionamiento de
la cromatografía en capa fina o delgada TLC.

Diagrama del montaje de un

analisis cromatografidco
en capa delgada:

Imagen http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm
 ANALISIS Y RESULTADOS
Para medir la capacidad de elución que brindan los compuestos de las soluciones usadas en la fase
móvil se tomó en cuenta la separación de los compuestos: fenol, hexano y butil fenil éter, en el
siguiente análisis cromatógrafo.
CROMATOGRAFIA TLC: cromatografía plana liquido – solido.
Fase móvil en solución 1: Hexano al 100%
Fase móvil en solución 2: Hexano 60% Acetato de Etilo 40%
Compuestos: A = Fenol. B = Acido Benzoico. C = Butil Fenil Éter
Agregamos cada fase móvil a un vaso de precipitados independientemente, para así comparar como
la diferencia de sus polaridades influye en la migración de los compuestos.

Cerrar siempre el
Solución 1 Solución 2
vaso al introducir la
placa
100% 60/40 cromatografía y el
La altura de la fase
0 papel filtro
móvil debe ser justo
por debajo de las
marcas iniciales de Fase móvil + polar
los compuestos en la
placa (0,62 – 0.7 cm)
entre 2 y 3 mL. Fase móvil - polar

Es importante reconocer la polaridad del Hexano: poco polar y la del Acetato de Etilo: polaridad
media, para reconocer los resultados de la elución.
Al dejar los recipientes preparados con la fase móvil se procedió a preparar las placas
cromatografías. Las medidas se deben marcar levemente con un lápiz.

100 60/40
% %
Frente del
Con un lápiz, marcar
disolvente
levemente las zonas
donde se aplicaran los
analitos. Que se aleje
Los compuestos se aplican del borde lateral y
con un capilar, el cual es entre ellas al menos
único para cada sln, se debe 0.5 mm.
humectar y aplicar con un
leve toque sobre la marca
Punto de
inicio
1 cm

Placa de vidrio con la fase

No más de 2mm de estacionaria silica gel
diámetro
Se debe agregar el analito con el capilar haciendo dos toques, pero hay que dejar secarlo por cada
vez que se agrega, para que el diámetro no exceda el límite y no se diluya mucho la muestra durante
la adsorción1 del diluyente.

ADSORCION: es un proceso por

el cual átomos, iones o moléculas
de gases, líquidos o sólidos
disueltos son retenidos en una
superficie

Es importante introducir el papel de filtro y la placa de forma nivelada al disolvente para que la
elución sea pareja y pueda arrojar resultados comparables. También es importante tapar los frascos
ya que el punto de ebullición de la fase móvil es demasiado bajo por lo que se evaporara más
rápido. Trascurridos entre 7 a 10 minutos se sacan con pinzas las placas, las cuales se deben dejar
horizontalmente sobre una toalla de papel hasta que estén secas, luego deben observarse bajo luz
UV y a marcar las manchas principales en donde el compuesto se haya desplazado.

Nivel del diluyente en el

El más polar
que se debe retirar la
migra más
placa de vaso

La separación
entre
compuestos:
(0.3 y 0.7) cm

El Apolar
migra menos
60% Hexano
100% Hexano. 40% Acetato
de etilo

Poco polar
Poco polar + medio polar

Como los analitos son incoloros, debe utilizarse una técnica de revelado físico como la luz UV o
químico como en este caso, yodo. Es bueno realizar varias técnicas de revelado para aumentar la
capacidad de resolución de los componentes.

1
Recuperado de
https://es.wikipedia.org/wiki/Adsorci%C3%B3n#:~:text=La%20adsorci%C3%B3n%20es%20un%20proceso,es
%20un%20fen%C3%B3meno%20de%20volumen.
El método físico se logra si se agrega un tipo de indicador fluorescente a la fase estacionaria o a los
analitos y a la longitud de la onda (entre 254 nm y 366nm) en la que los compuestos son capaces
de absorber radiación, lo que hace que aparezcan manchas en la placa en donde se encuentran
los componentes, las cuales se deben marcar para luego calcular el Rf.

La cámara de yodo utiliza sus vapores para colorear los compuestos de tonos amarillos a cafés, a
través de uniones moleculares de tipo dipolo inducido a las zonas donde se encuentran los
compuestos, estos empiezan a desaparecer una vez se saca la placa de la cámara debido a la
volatilización del yodo, por lo que una vez extraídas las placas de la cámara se deben marcar con
un lápiz para asegurar su ubicación.
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
Factor de Retención 𝑅𝑓 = 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒

Caso 1 Caso 2

60% hexano 90% acetato de etilo

100% Hexano 10% hexano

40% acetato de etilo
Y

XD
XC

XC
XB

XB
XC

XA
XA
XB
XA

Ácido Benzoico: es el menos polar, por lo tanto
En ambos casos migra primero hacia el frente
Del disolvente.
Fenol: Polaridad media.
Butil Metil Éter: El más polar, por lo que es mas
Afín con la fase móvil.
Se obtuvieron los siguientes Rf:
En este caso se quiere conocer la
composición de la muestra desconocida,
para ello se realizó un análisis
cromatógrafico en capa delgada o TLC
bajo los mismos criterios del anterior.
Las características de esta prueba fueron:
-Fase estacionaria: silica gel
-Fase móvil: Acetato de Etilo y hexano 9:1
-Compuestos:
Aspirina
Acetaminofén
Cafeína
Desconocido
 Al terminar el procedimiento, los
resultados indican los siguientes Rf:
𝑋𝐴
𝑅𝑓𝐴 =
𝑌 𝑋𝐷
𝑅𝑓𝐷 =
𝑋𝐵 𝑌
𝑅𝑓𝐵 = 𝑋𝐶
𝑌
𝑅𝑓𝐶 =
𝑋𝐶 𝑌
𝑅𝑓𝐶 = 𝑋𝐵
𝑌 𝑅𝑓𝐵 =
𝑌
𝑅𝑓𝐴 > 𝑅𝑓𝐵 > 𝑅𝑓𝐶
𝑋𝐴
C más polar que B y A. 𝑅𝑓𝐴 =
𝑌
𝑅𝑓𝐷 > 𝑅𝑓𝑐 > 𝑅𝑓𝐵 > 𝑅𝑓𝐴

B más polar que C y D. si la muestra desconocida

casi no migra se consideraría A más polar que B.

Para el caso 2, debemos tener él cuenta que la fase móvil está compuesta en un 90% por acetato
de etilo, quien tiene una polaridad mayor al hexano, lo que hace que esta fase sea más polar con
respecto al caso 1. La polaridad de la fase móvil hace que sea más a fin con la sustancia más polar,
es decir con la cafeína por ello se alejan más los compuestos menos polares como el acetaminofén
y la aspirina.

Pasado el proceso con luz UV y con yodo, durante la parte 2, se estandarizan los resultados de los
analitos y se podrá definir que compuestos hacen parte de la solución desconocida.

Referencias

Recuperado de: https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/procedimientos-basicos-de-

laboratorio/que-es-la-cromatografia.html
Recuperado de: https://www.jove.com/science-education/11207/thin-layer-chromatography
Recuperado de: http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm