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Comparación de métodos de recolección para microalgas Chlorella sp. y su uso potencial como
materia prima de biodiésel

Artículo en Tecnología medioambiental · Marzo de 2014

DOI: 10.1080 / 09593330.2014.900117

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Tecnología Ambiental

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Comparación de métodos de recolección para microalgas Chlorella sp.


y su uso potencial como materia prima de biodiésel

AL Ahmad, NH Mat Yasin, CJC Derek y JK Lim

Para citar este artículo: AL Ahmad, NH Mat Yasin, CJC Derek & JK Lim (2014) Comparación de métodos de recolección
para microalgas Chlorella sp. y su uso potencial como materia prima de biodiésel, Tecnología ambiental, 35:17, 2244-2253,
DOI: 10.1080 / 09593330.2014.900117

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Publicado en línea: 29 de marzo de 2014.

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Tecnología Ambiental, 2014
Vol. 35, núm. 17, 2244–2253, http://dx.doi.org/10.1080/09593330.2014.900117

Comparación de métodos de recolección de microalgas Clorella sp. y su uso potencial como


materia prima de biodiesel

AL Ahmad ∗ , NH Mat Yasin, CJC Derek y JK Lim

Escuela de Ingeniería Química, Campus de Ingeniería, Universiti Sains Malaysia, Seri Ampangan, 14300 Nibong Tebal, Seberang
Perai Selatan, Pulau Pinang, Malasia

( Recibido el 3 de diciembre de 2013; aceptado el 27 de febrero de 2014)

Tres métodos de cosecha Clorella sp. La biomasa se analizó en este trabajo - centrifugación, microfiltración con membrana y coagulación: no hubo diferencia significativa
entre la cantidad total de biomasa obtenida por centrifugación y microfiltración con membrana, es decir, 0,1174 ± 0.0308 y 0.1145 ± 0,0268 g, respectivamente. Se obtuvo
casi el mismo contenido de lípidos totales utilizando ambos métodos, es decir, 27,96 ± 0,77 y 26,43 ± 0,67% para centrifugación y microfiltración, respectivamente. Sin
embargo, la recolección por coagulación resultó en el menor contenido de biomasa y lípidos. Se obtuvieron perfiles de ácidos grasos similares para todos los métodos de
recolección, lo que indica que los componentes principales fueron ácido palmítico (C16: 0), ácido oleico (C18: 1) y ácido linoleico (C18: 2). Sin embargo, las cantidades
de los ácidos grasos individuales fueron mayores para la microfiltración que para la centrifugación y la coagulación; la coagulación tuvo el peor desempeño en este
sentido al producir la menor cantidad de ácidos grasos (41.61 ± 6,49 mg / g de peso seco). El método de recolección también debe seleccionarse en función del
costo-beneficio y los requisitos energéticos. El método de filtración por membrana ofrece las ventajas de los costos de capital actualmente decrecientes, una alta
eficiencia y bajos requisitos de mantenimiento y energía y, por lo tanto, es el método más eficiente para la recolección de microalgas.
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Palabras clave: centrifugación; microfiltración; coagulación; biomasa de microalgas; biodiesel

1. Introducción Por ejemplo, la recuperación aguas abajo de la biomasa de microalgas puede


La producción de biodiésel ha recibido una atención considerable en los últimos años ser sustancialmente más cara que el cultivo de algas. Las células de las algas
como una fuerte alternativa potencial al diésel. El biodiésel consiste en ésteres suelen ser muy pequeñas, con diámetros que oscilan entre 3 y 30 μ m, lo que ha
monoalquílicos de ácidos grasos de cadena larga derivados de la reacción química complicado aún más el mecanismo de deshidratación y ha dificultado la
(transesterificación, pirólisis, gasificación, etc.) de materias primas renovables como recuperación de biomasa. Además, los caldos de cultivo generalmente están
aceite vegetal o grasas animales. Aunque el biodiésel se ha convertido en una fuente relativamente diluidos (<0,5 kg / m 3 biomasa seca), lo que requiere que se
de energía alternativa económicamente viable, los costos de producción siguen utilicen grandes volúmenes para cosechar una pequeña cantidad de biomasa.
siendo un obstáculo importante para su aplicación comercial a gran escala. Los costos En ciertos casos, la inversión total dedicada a la recuperación de biomasa de
de las materias primas representan aproximadamente el 75% del costo total de microalgas puede llegar a veces hasta el 60% del coste total de producción,
producción de biodiésel [ 1 ]; por lo tanto, es esencial seleccionar la mejor materia mientras que el cultivo de biomasa solo aporta el 40% restante. [ 4 ] Por lo tanto,
prima para asegurar bajos costos de producción de biodiesel. La materia prima debe las técnicas de recolección universales para recuperar la biomasa de
estar disponible al precio más bajo posible y en abundancia. [ 2 ] La producción de microalgas del caldo de cultivo son muy deseables. Una técnica de recolección
biodiésel también debe utilizar materias primas que no compitan con los cultivos óptima debe ser independiente de las especies cultivadas, consumir poca
alimentarios ni conduzcan al desmonte y reduzcan los gases de efecto invernadero. [ 3 ] energía y pocos productos químicos y no dañar los productos valiosos en el
proceso de extracción. [ 5 ] Debido a todas estas limitaciones, varias técnicas de
recolección, como la filtración por membranas, [ 6 ] Separación magnética,[ 7 ]
centrifugación, [ 8 ] coagulación [ 9 ], etc. han sido desarrollados.
Las microalgas se consideran actualmente una de las materias primas
alternativas más prometedoras para el biodiésel. La conversión de un lípido de
microalgas en biodiesel por transesterificación tiene el potencial de mejorar
dramáticamente nuestro medio ambiente, al mismo tiempo que resulta
económicamente práctico y factible para el cultivo y la cosecha a gran escala. Sin Un desafío importante en el procesamiento posterior de microalgas radica
embargo, todavía existen muchos desafíos, incluidos los costos de recuperación en la recolección de microalgas de su medio de crecimiento, que consiste en
de procesos, que deben abordarse con prudencia: para pequeñas células individuales en un gran volumen del medio de cultivo. [ 10 ]
Centrifugación, filtración

∗ Autor correspondiente. Email: chlatif@eng.usm.my

© 2014 Taylor y Francis


Tecnología Ambiental 2245

Cuadro 1. Resumen de ventajas y desventajas de las técnicas utilizadas para la recolección de biomasa de microalgas. Técnica

Ventajas Desventajas Referencias

Centrifugación Rápido, fácil, e ciente Alto costo, consumo de energía, celda [ 11 - 14 ]


dañar
Fl occulación química Bajo costo, bajo daño celular, facilidad de uso Toxicidad de biomasa, produce un gran volumen [ 4 , 15 , dieciséis ]

de lodos difíciles de deshidratar


Biofloculación Alta eficiencia, sin daño celular Requiere un aporte de energía mayor que otros [ 17 , 18 ]
fl oculantes
Filtración Reutilización de agua a bajo costo Proceso lento, que no se recupera [ 19 ]
organismos que se acercan a bacterias
dimensiones
Filtración por membrana de flujo cruzado Reutilización de agua, menos energía, sin daño celular Ensuciamiento y obstrucción de la membrana [ 12 - 14 , 20 , 21 ]
Filtración de membrana sumergida Bajo costo, esfuerzo cortante reducido, Posibles problemas con la ampliación [ 22 ]
ensuciamiento de la membrana

Filtración por membrana de coagulación Rendimientos de filtración mejorados, sin células La carga de la superficie de la membrana puede ser [ 23 , 24 ]
dañar neutralizado o aumentado por coagulantes

y la coagulación / fl oculación son los métodos de recolección más comunes. A medio. Este estudio también se utilizó para determinar si el coagulante del
continuación, resumimos las ventajas y desventajas de las técnicas método de coagulación interfiere con el proceso de extracción de lípidos y los
convencionales que se utilizan actualmente para la recolección de biomasa de perfiles de ácidos grasos de las microalgas de agua dulce, que son muy
microalgas (Tabla 1 ). La centrifugación es el método más rápido y eficiente importantes para la producción de biodiesel.
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disponible. Se pueden procesar rápidamente grandes volúmenes y la biomasa


puede permanecer completamente contenida durante la recuperación. Sin
embargo, el efecto centrífugo daña las células. [ 10 ] La técnica de recolección no
2. Materiales y métodos
debe cambiar la población de microalgas de manera significativa o afectar la
viabilidad de las microalgas [ 12 ]; por lo tanto, la recuperación centrífuga solo es 2.1. Microalgas
factible si el metabolito objetivo es un producto de alto valor porque el proceso El primer paso crucial en el desarrollo de un proceso de microalgas es seleccionar
consume mucha energía. Además, el uso de esta técnica a gran escala es una especie apropiada. Pulz andGross [ 25 ] afirmó que el éxito de la biotecnología
problemático debido al alto consumo de energía, lo que aumenta los costos de de microalgas depende principalmente de la elección de una microalga con
producción. [ 13 ] Por lo tanto, la centrifugación no se ha implementado a gran condiciones de cultivo y productos específicos. Se deben tener en cuenta varios
escala. [ 14 ] La coagulación / fl oculación es más efectiva que la centrifugación factores al elegir una cepa de microalgas que se pueda utilizar para la producción
porque se pueden tratar grandes volúmenes de cultivo sin un alto consumo de de biodiesel, como las condiciones ambientales, los recursos disponibles y la
energía. [ 20 ] Esta técnica no es cara, el control del proceso es fácil y solo se elección de un sistema de cultivo. [ 26 ] Los
requiere un tanque de sedimentación para una implementación a gran escala. [ 13
] Sin embargo, la técnica puede inducir efectos tóxicos, como la contaminación Clorella sp. es una microalga verde de agua dulce eucariota, unicelular,
química de la biomasa, que puede matar e impedir el crecimiento de microalgas. inmóvil [ 27 ] y es la cepa más favorecida por los investigadores. Clorella sp. las
[ 11 , 13 ] Por estas razones, la filtración por membrana puede representar una células son de forma esférica y poco agregadas [ 28 ] con tamaños de celda
solución alternativa para la concentración de células frágiles. [ 12 , 21 ] Operar bajo que van de 2 a 4 μ my se consideran una forma de fitoplancton. [ 29 ] Elegimos
una presión transmembrana baja (TMP) hace que el proceso consuma menos investigar esta especie en este estudio porque parece ser una buena opción
energía que la centrifugación, y la larga vida útil de la membrana hace que la para la producción de biodiesel [ 19 ] y se cultiva fácilmente en el laboratorio. [ 12
recuperación sea relativamente más rentable a largo plazo. Los procesos de ] Además, como una microalga verde, Clorella sp. tiene una tasa de
separación basados en membranas también plantean varios desafíos, como el crecimiento relativamente alta y un alto contenido de lípidos y es resistente a
ensuciamiento y obstrucción de la membrana y la repulsión electrostática de las las condiciones ambientales. [ 30 , 31 ]
cargas superficiales negativas de la superficie de la membrana y las células de
las algas. [ 4 , 13 , 21 ]

2.2. Condiciones de cultivo y medio


Clorella sp. Las células se cultivaron en medio basal de Bold (BBM)
agregando 10 ml de BBM (I) y 1 ml de BBM (II), BBM (III), BBM (IV) y
BBM (V) a 1 L de agua destilada esterilizada ( DW). BBM (I) contenía lo
Aún no se ha determinado el método de recolección más eficiente para siguiente
la biomasa de microalgas. Por lo tanto, se comparó un método de compuestos por 200 ml de DW: 5,0 g de NaNO 3, 1,5 g de
centrifugación actual con la microfiltración y coagulación de membranas MgSO 4. 7H 2 O, 0,5 g de NaCl, 1,5 g de K 2 HPO 4, 3,5 g de KH 2 correos 4 y 2,28 g
para determinar el método más eficiente para separar la biomasa de de H 3 BO 3. BBM (II) contenía los siguientes
microalgas del cultivo. compuestos reductores por litro de DW: 8,82 g de ZnSO 4. 7H 2 Oh
2246 AL Ahmad et al.

Clorella sp. cultivo

Cosecha

Centrifugación Filtración de membrana Coagulación

Biomasa seca de microalgas

Añada 5,5 ml de agua por cada 30 mg de microalgas.

Sonicación durante 10 min


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Añadir disolvente compuesto por cloroformo: metanol (1: 1, v / v) [35]

Extracción por 24 hrs.

Centrifugar a 3000 rpm durante 2 min.

Capa de metanol + agua Capa de cloroformo + lípido Residuos

Evaporar el solvente para obtener aceite de microalgas (lípido)

Figura 1. El diagrama de flujo que representa el método de recolección y el procedimiento de extracción de lípidos de Clorella sp. cultivo.

1,18 g de MnCl 2. 2H 2 O, 1,193 g de Na 2 Mugir 4. 2H 2 O, 1,0 g la densidad celular alcanzó 4.86 × 10 9 células / mL y las células habían
de CuSO 4 y 0,401 g de CoCl 2. 6H 2 O. BBM (III) contenía los siguientes alcanzado su máxima fuerza electronegativa. [ 10 , 21 ]
compuestos por 100 ml de DW: 5,0 g de
EDTA-Na 2 y 3,1 g de KOH. BBM (IV) contenía los siguientes compuestos
por litro de DW: 4,48 g de FeSO 4. 7H 2 O y 1.0 g de H concentrado 2 ENTONCES2.3. Cosecha
4. BBM (V) contenido Tres métodos de recolección, centrifugación (como control),
0,01 g / L de vitamina B 12 ( cianocabalamina) y 0,2 g / L de microfiltración de membranas y coagulación, para el
Vitamina B 1 ( tiamina-HCl). Clorella sp. se compararon dividiendo 2 L de cultivos de microalgas de modo que
Inóculos de 19 × 10 6 células / ml (aproximadamente 5 ml todos los experimentos se realizaron en los mismos cultivos por lotes (Figura 1 ).
en volumen) se resuspendieron en 2 L de medio de cultivo y se mantuvieron a La centrifugación se llevó a cabo a 4000 rpm durante 10 min usando una
25 ◦ C bajo 2000 lux de iluminación en el laboratorio. La neutralización de la carga centrífuga modelo Megafuge 40 (Thermo Scientific, Alemania) y luego se secó
es la base de la coagulación y la filtración por membrana; por lo tanto, es durante la noche con un liofilizador (modelo 7754030, Labconco, EE. UU.). La
importante determinar el momento óptimo de recolección de microalgas. Por lo filtración de membrana se llevó a cabo en un módulo de configuración de flujo
tanto, la cruzado especialmente fabricado utilizando un
Clorella sp. Las células se recolectaron el noveno día, cuando
Tecnología Ambiental 2247

membrana plana con un área efectiva de 7.07 × 10 - 4 metro 2. de un catalizador alcalino para la transesterificación de microalgas
La membrana utilizada en este estudio fue suministrada por Sterlitech aceite inadecuado. [ 36 ] Zhang y col. [ 37 ] también han informado que
y estaba hecho de acetato de celulosa con un 1,2 μ m nominal el proceso de catalizador alcalino es sensible al agua. La presencia
tamaño de poro y 47 mm de diámetro. El TMP fue constante en de agua en condiciones alcalinas puede causar saponi-
1,5 bar y la velocidad de flujo cruzado (CFV) se mantuvo en fi cación. Una mezcla de reacción estándar que consta de 4,25 ml
0,4 ms - 1. Hemos descrito previamente microfiltros de fl ujo cruzado de metanol, 5 ml de hexano y 215 μ L de HCl (37% vol)
tración en detalle. [ 21 , 28 , 32 ] Al final de la concentración se añadieron al aceite, se mezclaron a 750 rpm y se calentaron a
paso, la biomasa de microalgas que se adhirió a la membrana temperatura de reacción a 80-85 ◦ C. La mezcla de reacción fue
se recuperó eliminando las células de la membrana se calienta durante 2 h, se deja enfriar y luego se centrifuga
superficie con un cepillo adecuado antes del paso de secado. a 3000 rpm durante 2 min, lo que resulta en la separación en dos
El coagulante seleccionado en el método de coagulación fue capas. La capa superior consistió en éster metílico (biodiesel)
quitosano porque es una sustancia no tóxica y no presenta y la capa inferior contenía glicerol, exceso de metanol y
riesgo para el uso del consumidor en aplicaciones posteriores. [ 33 ] Es el catalizador restante. El biodiésel de cada cosecha
bionatural, biodegradable y biocompatible y tiene atractivo El método se analizó individualmente en cinco medidas repetidas.
propiedades de adsorción activa. [ 34 ] El quitosano se obtuvo seguridades para calcular los valores medios para el experimento
de Hunza Pharmaceutical Sdn. Bhd., Malasia como o ff- datos.

polvo fino blanco con un tamaño de malla de menos de 120. El quitosano se disolvió
en una solución de ácido acético diluido al 1% y se mezcló con un agitador magnético
2.6. Análisis de cromatografía de gases
a temperatura ambiente para formar una solución estándar al 1%. El procedimiento de
coagulación siguió nuestro trabajo anterior [ 34 ] con los siguientes parámetros: una Los ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME) se analizaron utilizando un

concentración de quitosano de 10 ppm, un tiempo de mezcla de 20 min, una cromatógrafo de gases Modelo 7890A (Agilent, China) equipado con un detector
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velocidad de mezcla de 150 ppm y un tiempo de sedimentación de 20 min. Después de ionización de llama, un inyector automático splitless y una columna capilar de

del proceso de coagulación, las células fl oculadas en el fondo de un vaso de sílice fundida (30 m ×

precipitados se recuperaron retirando la solución transparente y luego se secaron las 0,25 mm × 0,25 μ m) (Omegawax250, Supelco, EE. UU.). Las temperaturas del

fl oculos durante la noche con un liofilizador. Se realizaron cinco mediciones repetidas inyector y del detector se mantuvieron constantes a 250ºC. ◦ C y 280 ◦ C,

para cada método de recolección. respectivamente. El programa de temperatura del horno se inició a 100 ◦ C durante
1 minuto y luego aumenta a 25 ◦ C / min hasta 190 ◦ C, a la que se mantuvo
constante durante 20 min. Cada uno de los componentes de ácidos grasos se
identificó comparando los tiempos de retención y las áreas de los picos con los de
las soluciones estándar. Se utilizaron seis ácidos grasos (C16: 0, C16: 1, C18: 0,
2.4. Extracción de lípidos totales C18: 1, C18: 2 y C18: 3) como materiales estándar. Se realizaron cinco réplicas
La extracción de lípidos se realizó sobre la biomasa seca. Después de la de cada análisis de ácidos grasos.
recolección, la biomasa se secó durante la noche con un liofilizador modelo
7754030 (Labconco, EE.UU.) para medir el peso seco de las células y el
contenido total de lípidos. Figura 1
muestra que se colocaron aproximadamente 30 mg de la biomasa liofilizada en
2.7. métodos analíticos
tubos de ensayo tapados. Se añadió un volumen de 5,5 ml de DW a los tubos de
ensayo, que luego se sometieron a ultrasonidos usando un sonicador Modelo 8510 En este estudio, se utilizó un microscopio óptico Modelo BX53F (OLYM-PUS,
(Branson, EE.UU.) durante 5 minutos para lisar las células. A continuación, los Japón) para observar la biomasa de microalgas. Se tomaron muestras del
lípidos se extrajeron mezclando 12 ml de cloroformo: metanol (1: 1, v / v) utilizando fondo de los vasos al final del proceso de coagulación, para lo cual se
una versión ligeramente modificada del método de Bligh y Dyer [ 35 ] en 60-65 ◦ C tomaron imágenes microscópicas de los fl ocs formados del Clorella sp. se
durante 24 h. A continuación, la mezcla se centrifugó a 3000 rpm durante 2 min, lo obtuvieron las células.
que dio como resultado la separación en tres capas. Se eliminaron las capas
superior e intermedia (la capa de metanol y los residuos) y se recogió la capa
inferior (la capa de cloroformo que incluía los lípidos). A continuación, el disolvente
3. Resultados y discusión
se evaporó bajo un flujo de gas nitrógeno para obtener el aceite de microalgas (los
3.1. Comparación del contenido de biomasa y lípidos para diferentes
lípidos). El peso del extracto lipídico se determinó gravimétricamente. Todos los
métodos de recolección
productos químicos utilizados fueron de calidad analítica.
El método utilizado para recolectar cultivos de microalgas es un factor importante que
afecta el costo y la calidad de los productos finales. [ 38 ] Sin embargo, el método de
recolección elegido depende tanto del perfil de ácidos grasos como de todo el
proceso de recuperación; por lo tanto, se deben considerar factores como la biomasa
seca de microalgas y el contenido de lípidos. Un alto contenido de lípidos es uno de
2.5. Transesterificación ácida de aceite de microalgas los criterios clave para seleccionar un método de recolección. Por lo tanto, en la
En este estudio se utilizó un catalizador ácido (ácido clorhídrico) porque el alto primera parte de este estudio, la cantidad de
valor ácido del aceite de microalgas hizo que el uso
2248 AL Ahmad et al.

Tabla 2. Lípido contenido (porcentaje de seco peso La centrifugación y la microfiltración exhiben el mayor potencial entre los
biomasa =% dw) en Clorella sp. de diferentes métodos de recolección. Los valores
métodos de recolección actuales porque logran un equilibrio entre una gran
mostrados son la media ± desviación estándar de cinco repeticiones.
biomasa y un alto contenido de lípidos. Se puede ver en la figura 2 que el
contenido de lípidos en 30 mg de biomasa de microalgas para centrifugación y
Cosecha Remoción de agua Peso en seco Lípidos totales microfiltración muestra casi la misma cantidad de lípidos en comparación con el
método (%) biomasa (g) (% dw) contenido de lípidos después del método de coagulación. Los lípidos totales
más bajos (15,38 ± 2.61%) se obtuvieron por coagulación, y este valor parece
Centrifugación 100 0.1174 ± 0,0308 27,96 ± 0,77
Membrana 90 0.1145 ± 0,0268 26,43 ± 0,67
desviarse de la cantidad de biomasa seca que es 0.0943 ± 0,0227 g. Este
microfiltración resultado puede atribuirse a que el peso de la biomasa seca se compone de los
Coagulación 95 0.0943 ± 0,0227 15,38 ± 2,61 pesos de ambos Clorella sp. células y el quitosano. Para confirmar esta
hipótesis, Clorella sp. las células se observaron bajo un microscopio óptico.
Figura 3 muestra las imágenes microscópicas de la Clorella sp. células antes y
después de la coagulación. Las microalgas están presentes como células
individuales y no se observa formación de fl o en la Figura. 3 (una). Las
imágenes microscópicas también muestran que la mayoría de las Clorella

sp. Las células quedaron atrapadas en fl ocs formados por el puente de quitosano
y Chorella sp. células, y solo unas pocas células permanecieron en la suspensión
después de la adición de quitosano (Figura 3 (si)). Este fenómeno ya ha sido
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Figura 2. Contenido de lípidos en 30 mg de biomasa después de la extracción para (a)


centrifugación, (b) microfiltración y (c) métodos de coagulación. observado por Salim et al. [ 39 ] para la recolección de microalgas por bio fl
oculación. Estos autores informaron que los polímeros cargados positivamente se
unen parcial o completamente a células de microalgas cargadas negativamente,
uniendo así las células para producir una red de polímeros y células de
Los lípidos se determinaron después de la extracción de lípidos de la célula. Se
microalgas. Estas observaciones, combinadas con una comparación de las
compararon los resultados de diferentes métodos de recolección para determinar
imágenes en la Figura 3 (a) y
el peso de biomasa seca más alto y el porcentaje de lípidos totales. Mesa 2 muestra
que no hubo diferencia significativa entre las cantidades totales de biomasa de
0.1174 ± 0.0308 y 0.1145 ± 0,0268 g obtenidos por centrifugación y microfiltración
3 (b), confirme que la adición de quitosano como coagulante afectó el peso de

con membrana, respectivamente. Los rendimientos de lípidos fueron 27,96 ± 0,77%


la biomasa seca y, por lo tanto, interfirió con el rendimiento de lípidos de las

y 26,43 ± 0,67% para centrifugación y microfiltración, respectivamente; por lo


células. Una forma de resolver este problema es utilizar un método adicional

tanto, los lípidos totales fueron casi los mismos para ambos métodos y
para romper la unión del quitosano fl occulado al Clorella células. Por lo tanto,

notablemente cerca de los lípidos totales de estudios anteriores. [ 30 ] Los autores


se deben realizar más investigaciones para comprender mejor este fenómeno.

de estos estudios informaron que el contenido de lípidos obtenido después de 20


días de incubación de Chlorella vulgaris
Figura 4 muestra el cultivo de microalgas y las imágenes de microscopio
de la Clorella sp. células antes y después de la microfiltración para 2 L de

fue signi fi cativamente superior (29,53%) a la obtenida tras 15 días de


cultivo de microalgas. Después de 4 h de filtración por membrana, el número

incubación (26,71%). Sin embargo, en nuestro estudio, la carga superficial del Clorella
de Clorella sp. células por mililitro de cultivo bajo un × El aumento de 20

sp. células es un criterio importante para determinar el tiempo óptimo de


aumentos signi fi cativamente y el volumen del cultivo de microalgas en los

recolección, como ya hemos comentado anteriormente. [ 21 , 34 ]


vasos de precipitados se redujo a sólo el 10% del original.

Figura 3. Imagen microscópica de (a) individuo Clorella sp. células antes de la coagulación y (b) fl occuladas Clorella células después de la coagulación.
Tecnología Ambiental 2249

Figura 4. Cultivo de microalgas y fotografía microscópica de Clorella sp. (a) antes y (b) después de la microfiltración.

Tabla 3. Composición de ácidos grasos de Clorella sp. para varios métodos de recolección.

Cantidad de ácido graso (mg / g dw)

Ácido graso Centrifugación Microfiltración Coagulación


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C16: 0 17.17 ± 2.11 (21,72) 20.49 ± 2,43 (22,20) 14,66 ± 2,35 (22,83)
C16: 1 0,51 ± 0,06 (0,95) 0,49 ± 0,03 (0,98) 0.40 ± 0,01 (1,11)
C18: 0 1,97 ± 0,35 (3,00) 2,48 ± 1,74 (3,87) 0,89 ± 0,05 (1,58)
C18: 1 8.13 ± 1,86 (15,68) 11.43 ± 1,75 (15.30) 7.81 ± 2,90 (12,81)
C18: 2 23.55 ± 1,54 (47,28) 24,32 ± 0,93 (45,35) 17.09 ± 1.07 (46,53)
C18: 3 0,74 ± 0,03 (10,87) 0,83 ± 0,02 (11,69) 0,74 ± 0,12 (14,62)
Otros 0,21 ± 0,04 (0,50) 0,23 ± 0,02 (0,50) 0,09 ± 0,01 (0,52)
SFA total 19.15 ± 2,46 (25,22) 22,97 ± 4.17 (26,67) 15,56 ± 2.4 (24,93)
UFA total 32,93 ± 3,49 (74,78) 37.07 ± 2,73 (73,33) 26.05 ± 4.09 (75,07)
FAMA total 52.07 ± 5,95 (100) 60.05 ± 6,90 (100) 41,61 ± 6,49 (100)

Nota: (): Composición de ácidos grasos (% en peso). SFA, ácido graso saturado; UFA, ácido graso insaturado. Los datos expresados como la
media ± desviación estándar para cinco repeticiones.

volumen de la suspensión celular espesa. Estas observaciones muestran que la de los FAME totales se obtuvieron de la centrifugación en comparación con la
filtración por membrana es un método conveniente y eficiente porque puede usarse microfiltración, correspondiente a 52,07 ± 5,95 y
para recolectar una pequeña cantidad de biomasa de los grandes volúmenes de 60.05 ± 6,90 mg / g de peso seco, respectivamente. Las cantidades de cada uno de los

cultivo. El método de microfiltración también resultó en una remoción de agua del componentes de FAME también fueron más altas utilizando microfiltración que

90% (Tabla 2 ), lo que puede considerarse un buen porcentaje de eliminación. Sin centrifugación y coagulación. La coagulación produjo el peor FAME porque resultó en la

embargo, aumentar el tiempo de filtración de la membrana a 6 h podría aumentar la pequeña cantidad de ácidos grasos (41,61 ± 6,49 mg / g de peso seco). Este resultado

eliminación de agua hasta en un 98%. puede deberse a que el contenido de quitosano interfiere con el proceso de extracción de

lípidos, lo que puede haber afectado las mediciones del perfil de ácidos grasos. Por lo

tanto, el quitosano puede interferir con el uso final de la biomasa (por ejemplo, biodiesel)

o con el procesamiento posterior de la biomasa (por ejemplo, extracción de lípidos).

3.2. Perfiles de ácidos grasos de varios métodos de recolección

Gri ffi ths y Harrison [ 26 ] y Knothe [ 41 ] señaló que la longitud de la cadena de


Los per fi les de ácidos grasos para la Clorella sp. estudiados para los diversos
carbono y el grado de insaturación son características importantes de los ácidos
métodos de recolección se determinaron mediante análisis de cromatografía de
grasos para la producción de biodiésel y pueden afectar las propiedades del
gases (Tabla 3 ). Un estudio anterior [ 40 ] mostró que el ácido oleico y el ácido
biodiésel como el índice de cetano, la estabilidad oxidativa y las propiedades de
linoleico eran los ácidos grasos más comunes en el C. vulgaris presion. Sin
flujo en frío. Mesa 3 muestra que los FAME insaturados (C16: 1, C18: 1, C18: 2 y
embargo, en nuestro estudio de biomasa, los componentes principales de Clorella
C18: 3) fueron predominantes en el perfil de ácidos grasos (> 70%) y que también
estaba presente un porcentaje significativo de ácido palmítico (> 20%) . También
sp. fueron ácido palmítico (C16: 0), ácido oleico (C18: 1) y ácido linoleico (C18:
se identificaron otros componentes como el ácido mirístico (C14: 0) y el
2), seguidos por ácido esteárico (C18: 0) y ácido linolénico (C18: 3) y pequeñas
pentadecanoico.
cantidades de ácido palmitoleico (C16 : 0). Mesa 3 muestra que cantidades
ligeramente inferiores
2250 AL Ahmad et al.

Tabla 4. Comparación de métodos de recolección de microalgas.

Cosecha Porcentaje de duración a, b Energía relativa Mantenimiento


método recuperación una (%) (min) exigir Fiabilidad Eficiencia necesario Observaciones Referencias

Centrifugación 99 30 Alto Bueno Alto Alto Cosecha en un solo paso [ 48 ]


Filtración de membrana 90–98 45 Bajo Bueno Alto Bajo Método continuo [ 49 , 50 ]
Coagulación 70–80 40 Muy bajo Pobre Bajo Bajo Requiere coagulante [ 48 ]

una Datos de resultados experimentales.

si Duración por volumen de 600 mL de cultivo de microalgas.

ácido (C15: 0) que representó sólo el 0,5% de las composiciones totales. método (Tabla 4 ), se debe tener en cuenta que se puede incurrir en un alto costo
Tenga en cuenta que un alto contenido de FAME insaturado puede reducir el operativo debido a que los dispositivos deben detenerse y, por lo general, limpiarse
punto de fluidez del biodiésel, lo que permite su uso en países con climas manualmente. [ 51 ] Se puede recuperar hasta el 99% de las células de microalgas
fríos. [ 42 ] Los FAME poliinsaturados (C18: 2 y C18: 3) tienen muy buenas mediante centrifugación con solo 30 minutos de duración utilizando 50 ml de tubos de
propiedades de flujo de frío pero son más susceptibles a la oxidación. [ 43 ] Sin centrífuga; sin embargo, el proceso implica altos costos de energía debido a un
embargo, el alto contenido de ácidos grasos insaturados (UFA) con doble mayor consumo de energía para una producción a gran escala y requisitos de
enlace ≥ 3 es indeseable ya que reduce la estabilidad química y oxidativa del mantenimiento potencialmente más altos debido a las piezas que se mueven
biodiésel resultante. [ 41 ] libremente, lo que hace que este método no sea económico.

A diferencia de los dos principales UFA (C18: 1 y C18: 2), se debe


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prestar especial atención al contenido de ácido linolénico (C18: 3) debido a la La separación de microalgas por coagulación se considera un proceso
normativa europea (EN 14213 y EN económico que requiere solo un coagulante y tiene bajos requisitos de mantenimiento
14214) ha fijado en 12% el contenido máximo permitido de C18: 3 para biodiésel de (Tabla 4 ). En la recolección de biomasa a gran escala, se incurre en costos mínimos
calidad. [ 44 ] Además, se ha informado que los ácidos grasos con alto contenido de por la energía consumida al bombear la suspensión desde la cámara de crecimiento
ácido oleico (C18: 1) tienen un equilibrio razonable de las propiedades del combustible al tanque de sedimentación [ 13 ]; sin embargo, la coagulación tiene una confiabilidad y
debido al aumento de la estabilidad oxidativa para un almacenamiento más prolongado. eficiencia muy bajas. [ 51 ] Para eliminar células grandes de microalgas como Espirulina
[ 41 , 45 ] Como se muestra en la Tabla 3 , se observaron cambios signi fi cativos en la sp., que exhiben una velocidad de sedimentación razonable en una suspensión, la
cantidad de C18: 3 al variar el método de recolección de Clorella sedimentación por gravedad bajo sedimentación libre es satisfactoria. Sin embargo,
para eliminar las células finas con un diámetro de unos pocos micrones, como
sp. El porcentaje de C18: 3 en Clorella sp. por centrifugación y microfiltración
como método de recolección hace que el biodiesel se derive de Clorella sp.
capaz de cumplir con el nivel de la normativa europea para el uso del Scenedesmus y Clorella sp., se puede inducir una operación práctica de
transporte [ 44 ]; así, coagulación agregando sales de metales multivalentes para formar células más
Clorella sp. la biomasa es un buen candidato para la producción de biodiésel. grandes con una velocidad de sedimentación razonable, lo que aumenta el
Sin embargo, el porcentaje de cadenas insaturadas C18: 3 excede el máximo porcentaje de recuperación. Los costos aumentarán si se usa un coagulante de
permitido cuando se aplica coagulación como método de recolección. mayor calidad. La selección del coagulante apropiado es importante para el
proceso de producción de biodiesel. Por lo tanto, el coagulante utilizado debe ser
barato, no tóxico y efectivo en dosis bajas de aplicación. El único coagulante que
cumple estos criterios es el quitosano, que al ser bionatural y respetuoso con el
medio ambiente puede asegurar la supervivencia de las microalgas durante el
3.3. Análisis económico de los métodos de recolección proceso de separación. [ 34 ] Por lo tanto, el porcentaje de recuperación está sólo en
Las consideraciones básicas para seleccionar un método de recolección adecuado el rango del 70 al 80%, que no puede competir con el porcentaje de recuperación
son la estimación de costos y la evaluación de los requisitos energéticos. Los de la centrifugación. Además, después de la coagulación, algunas de las células de
investigadores a menudo olvidan que la comercialización exitosa de una tecnología microalgas permanecen en la superficie superior y tienden a flotar en lugar de
de recolección depende de factores económicos. La técnica de recolección debe, asentarse en la parte inferior, lo que evita la recolección completa. Rashid y col. [ 49 ]
como mínimo, ser comparable en costo total y preferiblemente menor que las han hecho observaciones similares. Estos autores propusieron una mezcla
tecnologías existentes. [ 46 ] En el proceso de centrifugación, el cultivo de adicional para desestabilizar las células flotantes, de modo que puedan depositarse
microalgas se somete a fuerzas centrífugas que impulsan el movimiento celular a en el fondo y ser extraídas con éxito de la solución. Sin embargo, la mezcla
través del líquido. En la literatura se han estudiado varios dispositivos centrífugos adicional representa un costo energético adicional, que es desfavorable desde una
(es decir, dispositivos de pared giratoria) para su uso potencial en procesos de perspectiva económica.
separación o concentración de algas. [ 47 ] Estos dispositivos resultaron ser muy
eficientes en un proceso de recolección de un solo paso. Aunque la centrifugación
es un método altamente confiable y eficiente
Como se presenta en la tabla 2 , el porcentaje de remoción de agua

para el método de coagulación alcanzó el 95%. La coagulación es un


Tecnología Ambiental 2251

proceso de recolección de dos pasos en el que se utiliza la coagulación en el proceso de coagulación afectó el peso del seco
preconcentrar la biomasa antes de que se aplique un método físico biomasa e interfirió con los resultados del contenido de lípidos. Esta
utilizado para la deshidratación final. [ 50 ] La mayor parte del agua puede Los nuevos hallazgos son muy importantes para la producción de biodiésel.

eliminado durante el primer paso; sin embargo, la segunda deshidratación Un análisis cualitativo de FAME mostró que había
Este paso es bastante complicado porque algunas de las células permanecen ligeras diferencias entre los resultados obtenidos por centrifugación
en la superficie superior de la solución, mientras que otras células descansan en gation y microfiltración, es decir 52.07 ± 5,95 y 60,05 ±
El fondo. Por lo tanto, los fl ocs de microalgas deben tener un alto 6,90 mg / g de peso seco, respectivamente. La mayor cantidad de linoleico

velocidad de sedimentación que resulta en un asentamiento rápido. Esta tecnología ácido (a aproximadamente 24 mg / g dw) se encontró en Clorella
ogy requiere una unidad de cosecha adicional y, por lo tanto, puede aumentar sp., y la cantidad de ácido linolénico que alcanza el nivel de
costos de inversion. Tran y col. [ 52 ] informó un agua más alta Reglamento europeo que indica que esta especie de microalgas
contenido de microalgas recolectadas de coagulación que de podría ser una materia prima potencial para biodiesel. La selección final

centrifugación. Este resultado se obtuvo porque centrifugar de un método de recolección de microalgas adecuado para la producción

Puede eliminar tanta agua como sea posible, es decir, hasta el 100%, debe considerar todas las estimaciones de costos y la energía
de la solución. La centrifugación, sin embargo, es demasiado cara requisitos. La filtración por membrana tiene la ventaja de
sive y tiene altos requisitos de energía debido a la gran costos de capital actualmente decrecientes, una mayor eficiencia y
volúmenes de medio de cultivo que necesitan ser procesados. requisitos de energía y mantenimiento comparativamente bajos
Se recomienda la recolección continua por filtración de membrana. activo a otros métodos. Por lo tanto, la filtración por membrana fue
reparado para producir microalgas de alta calidad. llegó a la conclusión de que es el método más eficiente para las microalgas

y ultrafiltración han demostrado ser más eficientes cosecha.


y adecuado para recolectar células de microalgas frágiles. [ 4 , 19 ] Cuanto más
tiempo para cosechar 600 ml de volumen de Clorella sp. se necesitaban
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suspensiones para la filtración de membrana en comparación con los métodos de Fondos


centrifugación y coagulación (Tabla 4 ). Sin embargo, esta desventaja se equilibró Los autores desean agradecer el apoyo financiero para este trabajo de la Beca
con sus beneficios. Sus considerables costos operativos, que incluyen el capital y USM Research University (RU) [Grant No. 1001 / PJKIMIA / 814060], la Beca
los costos de mantenimiento de la instalación de la membrana, así como los USM Postgraduate Research (PRGS) [Grant No. 1001 / PJKIMIA / 8044014] y el
Grupo de Ciencia y Tecnología de Membranas de USM. Adicionalmente,
costos de energía, deben compararse con los beneficios que ofrece el producto
final. En otro lugar se ha presentado una descripción detallada de la estimación
NH Mat Yasin reconoce con gratitud una beca de la Universiti Malaysia Pahang
del costo de la filtración por membranas. [ 48 , 53 ] Schafer y col. [ 48 ] estimó que la (SLAB 2011).
vida de la membrana es del orden de cinco años; por lo tanto, el costo de la
membrana es tanto un costo de mantenimiento como de inversión. Su estudio
también mostró que las membranas ofrecen la ventaja de reducir los costos de
Referencias
capital actualmente y tienen bajos requisitos de mantenimiento. Esta disminución
[1] Meng X, Yang J, Xu X, Zhang L, Nie Q, Xian M. Biodiesel
se debe a la asignación de costos de capital solo al costo inicial de instalación de producción a partir de microorganismos oleaginosos. Renovar Energía. 2009; 34: 1–5.
la membrana y el costo de los patines, la carcasa, las bombas, las válvulas, la
automatización y otros equipos asociados. [ 53 ] Los costos de capital difieren de [2] Lim S, Teong LK. Tendencias, oportunidades y desafíos recientes
lenges del biodiesel en Malasia: una visión general. Renew Sust Energy Rev.
los costos operativos, que aumentan cada año. Los costos de operación se
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calculan sumando los costos de energía, químicos y reemplazo de membranas,
[3] Ahmad AL, Mat Yasin NH, Derek CJC, Lim JK. Microalgas
donde los costos de energía se calculan considerando el TMP aplicado, la como fuente de energía sostenible para la producción de biodiesel: una revisión.
energía requerida para mantener un CFV específico, el tipo de proceso de Renew Sust Energy Rev. 2011; 15 (1): 584–593.

membrana utilizado, etc. [ 53 ] Operar con un TMP bajo parece ser una opción [4] Grima EM, Belarbi EH, Fenandez FGA, Medina AR, Chisti
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