Instituto Tecnológico Nacional de México

Campus Morelia

Ingeniería bioquímica

Reporte de laboratorio
Práctica 5: “IDENTIFICACION DE
CARBOHIDRATOS”

Dr. Juan Carlos Gonzales Hernández

Diego López Padilla 18121290

Morelia, Michoacán a 26 de Octubre del 2020

INTRODUCCION
Forman un grupo de compuestos que contienen carbono (C), hidrógeno (H) y oxígeno
(O). Son los compuestos orgánicos más abundantes en la naturaleza. Las plantas verdes y las
bacterias fotosintetizadoras los producen en el proceso conocido como fotosíntesis, durante el
cual absorben el dióxido de carbono del aire y, por acción de la energía solar, producen glucosa y
otros compuestos químicos necesarios para que los organismos sobrevivan y crezcan. De los
glúcidos más sencillos, monosacáridos, el más importante es la glucosa. Dos monosacáridos
unidos producen un "disacárido", cuyo ejemplo más importante encontramos en la sacarosa, la
lactosa y la maltosa. Los polisacáridos son enormes moléculas formadas por uno o varios tipos
de unidades de monosacáridos.

En los organismos vivos los hidratos de carbono tienen funciones estructurales y de

almacenamiento de energía. En la función estructural tenemos como ejemplo: la celulosa que es
el principal glúcido estructural en las plantas, hasta un 40% en las paredes celulares, mientras
que en los animales invertebrados el polisacárido quitina es un componente básico del
exoesqueleto de los artrópodos y en los cordados las capas celulares de los tejidos conectivos
contienen hidratos de carbono. Entre los glúcidos de almacenamiento de energía las plantas usan
al almidón y los animales al glucógeno; (cuando se necesita la energía, las enzimas los
descomponen en glucosa).

Los principales puntos a recordar y comprender respecto a los azúcares son:

· Son importantes metabólicamente.
· Son la mayor fuente de energía almacenada de los seres vivos.
· Sus anillos de carbono contienen grandes cantidades de energía. Por ejemplo, la glucosa
completamente metabolizada:  Libera 686 kcal/mol.

1
Ensayo de Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en
el que los polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico concentrado hasta
monosacáridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales
reaccionan con α-naftol formando un color púrpura violeta.
Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos
reductores, al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict contiene ion cúprico en medio
alcalino que se reduce hasta óxido cuproso en presencia de azúcares con el hidroxilo
hemiacetálico libre.
Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacáridos y disacáridos
reductores, también contiene ion cúprico que se reduce hasta óxido cuproso más rápidamente
con los monosacáridos que con los disacáridos.
Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite
reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la formación de una coloración
azúlvioleta intensa y el glicógeno y las dextrinas por formación de coloración roja.
Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión de la
cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación con resorcinol formando así
complejos coloreados.
OBJETIVO
Determinar el comportamiento visual (la evidencia), de las cuatro muestras de azúcares
(glucosa, fructosa, maltosa y sacarosa) , trabajadas en la experiencia, al emplear el reactivo de
Benedict.
Comprobar mediante la prueba de coloración de Molish, la presencia de carbohidratos, sean
estos reductores o no reductores, en las diferentes muestras.
Determinar si la glucosa, fructosa, maltosa, lactosa y sacarosa son azúcares reductores o no
mediante la reacción de Fehling.

HIPÓTESIS
A través del Método de Lowry y con espectrometría, se podrá realizar una curva cuantitativa de
la concentración proteica de una serie de muestras y así poder identificar la concentración de la
muestra problema al compararla con las otras conocidas.

MATERIALES Y EQUIPOS
• 16 tubos de ensayo • Una gradilla para tubos de ensayo
• Una pipeta graduada de 1 ml • Una pinza metálica para tubo de
ensayo
• Una pipeta graduada de 5 m
• Un aro con nuez
• Un vaso de precipitados de 500 ml
• Una espátula Perlas de vidrio
• Una varilla de vidrio
• Alfa-naftol al 10%
• Una placa de calentamiento
• Ácido clorhídrico concentrado

2
• Ácido sulfúrico concentrado
• reactivo de Felhing A
• Reactivo de Felhing B
• Reactivo de Tollens
• Reactivo de Seliwanoff
• Reactivo de Bial
• Lugol
RESULTADOS
Reaccion de Barfoed
• Soluciones acuosas al 1% de: almidón,
glicógeno, sacarosa, maltosa, glucosa,
galactosa,fructosa, ribosa, arabinosa.
• Solución de glucosa al 10%.
• Solución de sacarosa al 10%.
• Solución fructosa al 10%.
• Solución de sacarosa al 10% en ácido
clorhídrico 0.5M
REACCION DE MOLISH
Reaccion Benedict
reacción Fehling
3
La glucosa presenta el precipitado color rojo característico de esta reacción de (0-5 min), lo que
nos evidencia que es un azúcar reductor monosacárido.
La maltosa no presenta reacción en un tiempo de 0 a 5 minutos, pero si un precipitado color rojo
o anaranjado de (5- 30 min), por lo que se considera es un disacárido, por su tiempo de reacción.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La sacarosa, maltosa, fructosa y glucosa que fueron los azúcares usados dieron un resultado
positivo con el reactivo de Molish, a pesar de que la glucosa y la fructosa son monosacáridos y
de que la sacarosa y la maltosa son disacáridos, esto hace que dicha clasificación se deba al
tiempo que tarda en formarse el anillo color rojo violeta ya que el el ácido sulfúrico concentrado
[H2SO4] permite que los glúcidos se deshidraten formando compuestos furfúricos por tanto
diremos que como en nuestro caso las hexosas dan HMF (hidroximetilfurfural).
La glucosa y la fructosa presentaron la formación de un anillo de color rojo violeta en interfase
inmediatamente. Lo que nos indica que corresponde a un carbohidrato (monosacárido).
La sacarosa y la maltosa presentó en interfase la formación de un anillo de color rojo violeta
después de un tiempo. Lo que nos indica que corresponde a un carbohidrato (disacárido).
La glucosa, la fructosa y la maltosa al someterse a la Reacción de Benedict dan un resultado
positivo debido a que presentan un precipitado de color rojo ladrillo o anaranjado (óxido
cuproso) lo cual es la evidencia de un azúcar reductor.
En las muestras de glucosa, fructosa y la maltosa en la reacción de Benedict tienen la capacidad
de reducir al cobre y formar un precipitado de color anaranjado o rojizo por lo que podemos
afirmar que son azúcares reductores.
La sacarosa al someterse a la reacción de Benedict nos proporciona un resultado negativo como
se observa en las imágenes, ya que no presentó el precipitado rojo ladrillo característico de un
azúcar reductor, debido a que es un disacárido formado por glucosa y fructosa, que se une por
medio de sus carbonos anoméricos, es decir nos poseen sus carbonos anoméricos libres.
Se comprueba de una forma práctica, que la sacarosa, es un disacárido que en reacciones de
oxidación como la reacción de Benedict, no presenta evidencia de un precipitado con coloración
rojo ladrillo, y no es un azúcar reductor, por las razones ya manifestadas en la presente discusión.
El resultado de la práctica es óptimo, conocemos que la experiencia con el reactivo de Fehling se
fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo en las aldosas, pues tienen la estructura
química abierta necesaria para actuar como agentes reductores, y en algunas cetosas
(generalmente positiva en fructosa), lo que se evidencia con la formación de un precipitado rojo
ladrillo (óxido cuproso).

Vemos que la coloración que toman los precipitados dependen de la cantidad de reactivo que se
use y por tanto dan un aspecto de buena o baja concentración, según las imágenes, por lo que
hablamos de una cantidad muy buena de azúcar.

4
Discutiendo los resultados positivos, que se dio en la glucosa, maltosa, lactosa este reactivo,
reacciona principalmente con los aldehídos porque tienen un grupo carbonilo más expuesto, que
le da el carácter reductor, y existe la presencia del precipitado rojo ladrillo (óxido cuproso).
Interesante es discutir el resultado de la fructosa, cuya estructura es una cetosa característica alfa-
hidroxi-cetónicos, que al reaccionar con Fehling da un resultado positivo.
Por otro lado, y refiriéndonos a la imagen de la sacarosa (que no nos dió coloración), esto se da
porque es un azúcar constituida por una molécula de glucosa y de fructosa, tiene un enlace entre
el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono de la fructosa, y no queda grupos
reductores disponibles. Al no ser reductor, la prueba de Fehling es negativa, y por lo que se
intuye, no posee el grupo carbonilo apto y libre, necesario como para reaccionar con el reactivo
Fehling, y a ebullición, no se observó ningún cambio.
En seliwanoff la fructosa y sacarosa nos dan un cambio de color a rojo por lo tanto se puede
concluir que son cetosas.
En la glucosa y la lactosa no observamos ningún cambio por lo tanto no son cetosas
La glucosa al ser un monosacárido obtuvimos un resultado positivo, es decir, la presencia de un
precipitado leve de color rojo de óxido cuproso, lo cual podemos evidenciar en la imagen.
Sabiendo que la maltosa es un disacárido puede dar o no un resultado positivo considerando que
si es positivo, entonces su proceso o reacción es lento, en nuestra experiencia práctica fue
positiva ya que en el tiempo determinado que lo observamos hubo un cambio mínimo de
coloración (5-10 minutos) es decir que nos presentó un precipitado rojo característico del óxido
cuproso (Cu2O).

CUESTIONARIO
I. Explique brevemente qué función tienen los siguientes compuestos: Citrato sódico, Cu2+,
H2SO4, ácido pícrico, Ag+, tartrato sódico potásico.

CITRATO DE SODIO hace que la sangre y la orina sea más alcalina o menos ácida. Esto ayuda
a prevenir la formación de algunos tipos de cálculos renales. Se utiliza también para tratar
la acidosis metabólica, un problema que se puede presentar en personas con problemas
renales.

El cobre trabaja con el hierro para ayudarle al cuerpo a la formación de los glóbulos rojos.
También ayuda a mantener saludables los vasos sanguíneos, los nervios, el sistema
inmunitario y los huesos. El cobre también ayuda a la absorción del hierro.

5
H2SO4:Es oxidante: Actúa como tal, reduciéndose a dióxido de azufre. De este modo puede
disolver metales como el cobre, plomo, etc

El Ácido Pícrico es un sólido cristalino amarillo. Se utiliza como explosivo potente y oxidante
fuerte en los combustibles de cohetes, cerillas, técnicas de tratamiento del cuero, en los
métodos de grabado de metales, las baterías. Puede servir también de tinte para tejidos o
para tintar el vidrio.

Ag+ Son utilizados para la identificación de plata(I) en muestras complejas. Su utilización

requiere, frecuentemente, un tratamiento previo y cumplimiento de un protocolo
experimental en forma rigurosa, de modo tal de evitar interferencias provenientes de
otros cationes que pudieran existir en la muestra.

El tartrato sódico potásico actúa como regulador de la acidez y como antioxidante. También es
utilizado como estabilizante y emulsificante. Se usa principalmente en los quesos y
carnes, así como sus derivados.

II. ¿Cuáles son las propiedades más importantes que se tienen que tomar en cuenta de los
carbohidratos?

No se pueden descomponer en otros tipos de hidratos de carbono

Son solubles en agua

Se absorben directamente en el tubo digestivo

El calor los funde y luego los trasforma en caramelo

Son susceptibles de fermentar en particular con la levadura de cerveza y producen alcohol. Y con
otros fermentos dan gas carbónico

III. ¿Qué es un azúcar reductor? ¿Qué característica debe tener un azúcar para ser
reductor o no reductor?

Los carbohidratos que solo contienen grupos acetal o cetal no dan pruebas positivas con estas
soluciones y se llaman azúcares no reductores.

Los azúcares reductores provocan la alteración de las proteínas mediante la reacción de

glucosilación no enzimática también denominada reacción de Maillard o glicación.

6
IV. ¿Qué es un monosacárido? ¿Qué es un polisacárido?

Los monosacáridos son los azúcares que no se puedenhidrolizar hacia carbohidratos más
simples.Pueden clasificarse como triosas, tetrosas, pentosas, hexosas o heptosas,
dependiendo del número de átomos de carbono (37), y como aldosas o cetosas,
dependiendo de si tienen un grupo aldehído o cetona. Además de aldehídos y cetonas, los
alcoholes polihídricos (alcoholes azúcar o polioles), en los cuales el grupo aldehído o
cetona se ha reducido a un grupo alcohol, también se encuentran de modo natural en los
alimentos. Son sintetizados por medio de reducción de monosacáridos para uso en la
manufactura de alimentos Para reducción de peso, y para pacientes con diabetes. Se
absorben poco y tienen alrededor de la mitad del rendimiento de energía de los azúcares.

Los polisacáridos son productos de condensación de más de 10 unidades de monosacáridos; los

ejemplos son los almidones y las dextrinas, que pueden ser polímeros lineales o
ramificados. Los polisacáridos a veces se clasifican como hexosanos o pentosanos,
dependiendo de la identidad de los monosacáridos que los constituyen (hexosas y
pentosas, respectivamente). Además de almidones y dextrinas, los alimentos contienen
una amplia variedad de otros polisacáridos que se conocen en conjunto como
polisacáridos no almidón; las enzimas de ser humano no los digieren, y son el principal
componente de la fibra en la dieta. Los ejemplos son celulosa (un polímero de glucosa)
de paredes de células vegetales, e inulina (un polímero de fructosa), el carbohidrato de
almacenamiento en algunos vegetales.

V. Investigue dos ejemplos de oligosacáridos.

La rafinosa (glucosa + fructosa + galactosa), Se encuentra, principalmente, en las leguminosas:

soya, frijoles, garbanzos, cacahuates, chícharos, alubias, etc.

La sacarosa o azúcar de mesa (glucosa + fructosa) que aparece en los productos azucarados,
como la remolacha y la caña.

VI. Investigue la diferencia fundamental entre las determinaciones de Tollens y de Fehling.

Al oxidar un Aldehído con el reactivo de Tollens, se produce el correspondiente Ácido

Carboxílico y los iones de Plata se reducen simultáneamente a Plata metálica.

7
Cuando se oxida un Aldehído con el reactivo de Fehling, se obtiene un precipitado rojo brillante
de Óxido Cuproso (Cu2O).

VII. ¿Por qué era necesario calentar las muestras con los reactivos correspondientes?

Para acelerar el preceso

VIII. ¿Cuál es la importancia fundamental de la presente práctica?

La función principal de los carbohidratos es el aporte energético. Son una de las sustancias
principales que necesita nuestro organismo, junto a las grasas y las proteínas.

Su principal función es suministrarle energía al cuerpo, una enzima llamada amilasa ayuda a
descomponer los carbohidratos en glucosa (azúcar en la sangre), la cual se usa como
fuente de energía por parte del cuerpo.

XIX. Cuál es el fundamento de Identificación Carbohidratos por reacción de Molish.

Es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacáridos y

disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico concentrado hasta monosacáridos y se
convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con α-
naftol formando un color púrpura violeta.

X. Cuál es el fundamento de Identificación Carbohidratos por reacción de Benedict.

Permite el reconocimiento de carbohidratos reductores, al igual que el reactivo de Felhing, el de

Benedict contiene ion cúprico en medio alcalino que se reduce hasta óxido cuproso en
presencia de azúcares con el hidroxilo hemiacetálico libre.

XI. Cuál es el fundamento de Identificación Carbohidratos por reacción de Fehling.

plantea la reacción de identificación de azucares reductores. Se fundamentaen el poder reductor

del grupo carbonilo de un aldehído. Este se oxida a un ácido carboxílico y reduce el
Sulfato de Cobre en medio alcalino a óxido cuproso, que forma un precipitado de color
rojo. Lo importante de la reacción es que el aldehído del carbohidrato puede detectarse
fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad.

XII. Cuál es el fundamento de Identificación Carbohidratos por reacción de Seliwanoff.

8
Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-
furfural y su posterior condensación con resorcinol formando así complejos coloreados.
XIII. Cuál es el fundamento de Identificación Carbohidratos por reacción de Barfoed.

Esta prueba permite diferenciar entre monosacáridos y disacáridos reductores, también contiene ion
cúprico que se reduce hasta óxido cuproso más rápidamente con los monosacáridos que con los
disacáridos.
CONCLUSIONES
Mediante la reacción de Benedict podemos identificar azúcares reductores y comprobar que la
reducción que se lleva a cabo es por el efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) en forma de
Cu+ y el nuevo ión se observa a modo de precipitado de color rojo anaranjado o amarillo ladrillo
que corresponde al óxido cuproso(Cu2O).

Gracias a la reacción de benedict hemos podido comprobar que la glucosa fructosa y maltosa
son azúcares reductores ya que en estas muestras se produjo la formación del precipitado de
óxido cuproso de color rojo anaranjado o amarillo , lo que se evidenció en los resultados.
En la muestra de sacarosa, el compuesto que actúa como oxidante es el Cu+2 y por ende no se
forma un precipitado, por lo que se deduce en base a la evidencia de una coloración azul, lo cual
significa que se trata de un azúcar no reductor.
La reacción de Molish es un método cualitativo la cual se utiliza para poder observar la presencia
de carbohidratos en una muestra desconocida y a su vez poder determinar si en la muestra se
forma de manera inmediata el precipitado con el óxido cúprico (Cu2O) tendríamos un
monosacárido y si se tarda un tiempo más prolongado en formar el precipitado se trataría de un
disacárido.
En las dos muestras que son de sacarosa y maltosa precipita de forma más lenta con el óxido
cuproso (Cu2O) la cual nos indica que estamos en presencia de disacáridos, después con la
adición de una cierta cantidad de ácido sulfúrico (H2SO4) en un tiempo prolongado se dio la
formación de anillo rojo-violeta en la interfase, la cual nos indica la presencia de un
carbohidrato.
Por acción del ácido sulfúrico concentrado todos los carbohidratos se deshidratan y forman
compuestos furfúricos (hidroximetilfurfural) que reaccionan positivamente con el reactivo de
Molish (α- naftol).
En las muestras de los azúcares de la Glucosa y Fructosa, nos da una reacción positiva, debido a
que las muestras de los azúcares están en forma deshidratada, y al reaccionar con el ácido
sulfúrico (H2SO4) se dio la formación del anillo rojo - violeta en la interfase de manera
inmediata la cual nos indica la presencia de un carbohidrato. (Que identificamos con el reactivo
de Molish)
La prueba de Fehling nos permite identificar cual es un azúcar reductor.
La mayoría de los monosacáridos y algunos disacáridos poseen poder reductor.
Un azúcar es reductor por la formación de un precipitado de color rojo ladrillo (óxido cuproso) y
la decoloración de la solución.

9
Podemos concluir que las muestras de glucosa, fructosa, maltosa y galactosa son azúcares
reductores, ya que se formó un precipitado de color rojo ladrillo (óxido cuproso).
En cambio la sacarosa es un azúcar no reductor, debido a que no se formó un precipitado de
color rojo ladrillo.
Mediante la reacción de Seliwanoff se identificó los diferentes azúcares dándonos una reacción
positiva la fructosa ya que es una cetosa y la sacarosa, esta ultima esta formada por un
monosacarido fructuosa que es una cetosa, mientras que obtuvimos una reacción negativa en la
glucosa y lactosa lo que nos da a identificar que estos azúcares son aldosas.
Se analizó e identificó las características de la reacción de Seliwanoff, ya que esta reacción sólo
reconoce cetosas y se produce una coloración dependiendo de la cantidad de concentración del
azúcar.
Comparamos las características obtenidas con la teoría establecida, ya que si se obtuvo el color
rojo como indica la teoría,lo que pudimos comprobar que la sacarosa al igual que la fructosa
tiene el grupo carbonilo no se encuentra libre, sino en un carbono secundario.
A través del reactivo de Barfoed principalmente podemos identificar azúcares reductores y
también poder diferenciar si la muestra de azúcar analizada es un monosacárido o disacárido esto
se debe al tiempo que se tarda la reacción.
En la práctica realizada hubo la presencia del precipitado rojo (Cu2O) por tanto se los considera
como azúcares reductores.
La glucosa al presentar un resultado positivo se trata de un azúcar reductor debido al leve
precipitado de color rojo formado en el interior del tubo, como este resultado apareció en un
lapso de tiempo (0-5 min) se trata de un monosacárido.

FUENTES BIBLIOGRÁFICAS
Nelson, D. L., Cuchillo Foix, C. M., Lehninger, A. L., & Cox, M. M. (2005). Lehninger:
Principios de Bioquímica (4a. ed.). Cap. 3.
Mathews, C. k. Van Holde, K. E. Ahern, K. G. Bioquímica. (Reimpresión de la 4ta
edición). España: Pearson Educación, S.A., 2013., Cap. 2.
McMurry, J. Química orgánica (Séptima Edición). Cengage Learning Latin America:
México. 2008.
Maniatis T, Fritsch EF, Sambrook J. 1982. Molecular cloning a laboratory manual. Cold
Spring Harbor Laboratory, Cold Springs Harbor, NY.
Técnicas Instrumentales de Análisis en Bioquímica. J.M. García-Segura.Editorial Síntesis, 1996
http://bdigital.unal.edu.co/55024/7/TatianaAlejandraHuertasN.2016.pdf

10
https://www.ecured.cu/Az%C3%BAcares_reductores#:~:text=Los%20carbohidratos%20que
%20solo%20contienen,reacci%C3%B3n%20de%20Maillard%20o%20glicaci%C3%B3n.
https://es.slideshare.net/andreavazquezcelio/prctica-identificacin-de-carbohidratos
https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos/reaccion-de-
barfoed#:~:text=%2DLa%20Reacci%C3%B3n%20de%20Barfoed%20es,ladrillo%20(Cu2O).

11