1.

Investigue la clasificación general de los microorganismos anaerobios

son aquellos que no utilizan oxígeno (O 2) en su metabolismo. En general,

hay dos tipos de organismos anaerobios, por un lado están los que utilizan
la respiración anaerobia, es decir, los que usan una cadena de transporte
de electrones en su metabolismo, y por otro lado, los fermentativos que
dependen de la fermentación para la obtención de energía. En la
respiración anaerobia, el aceptor final de electrones es otra sustancia
diferente del dioxígeno.1 Si se utiliza una molécula orgánica
(piruvato, acetaldehído, etc.) se trata de metabolismo fermentativo; si el
aceptor final es una molécula inorgánica distinta del dioxígeno
(sulfato, carbonato, etc.) se trata de respiración anaeróbica

2. Cuáles son los efectos adversos para los anaerobios

Si bien el oxígeno es potencialmente tóxico para cualquier forma de vida,
los anaerobios son intolerantes al mismo aunque en diferentes grados.
Existe un espectro que va desde los extremadamente intolerantes
(aerointolerantes) hasta los aerotolerantes moderados los cuales pueden
sobrevivir a la presencia de O2 durante breves períodos. Esta diferente
relación con el oxígeno parece deberse a varios factores.
 En primer lugar, el oxígeno es un poderoso agente oxidante, es decir, un
ávido receptor de electrones, por lo tanto su presencia en solución es
incompatible con potenciales redox bajos
 En segundo lugar, el oxígeno puede interactuar directamente con enzimas o
cofactores, a través de la oxidación de grupos químicos sensibles (por ej.:
sulfhidrilos), causando inactivaciones irreversibles.
 En tercer lugar y aparentemente, la causa más importante de la oxígeno-
toxicidad, se atribuye a la producción de sustancias tóxicas derivadas de la
reducción parcial de la molécula de O2. Estos productos son el radical
superóxido, peróxido de hidrógeno y radical hidroxilo.

Estos productos son extremadamente tóxicos porque son agentes

oxidantes poderosos y provocan destrucción de constituyentes celulares
rápidamente

3. Cuáles son los factores condicionantes para el desarrollo de las

infecciones anaeróbicas
Las infecciones por bacterias anaerobias, particularmente las producidas
por gram negativos no esporulados, son en general endógenas. Pocas
infecciones son producidas por bacterias anaerobias de origen exógeno. La
 mayoría de las infecciones se desarrollan cercanas a las mucosas, donde
los anaerobios predominan como parte de la microbiota habitual como en
orofaringe, piel, intestino y tracto genital femenino. Se presentan en una
gran variedad de formas clínicas; las más frecuentes son la formación
de abscesos y la necrosis de tejidos.
Las causas predisponentes de las infecciones que involucran anaerobios
son:
 cualquier causa endógena o exógena que produzca una rotura en la
continuidad de los tejidos (accidente automovilístico, extracción
dentaria, cirugía oral, ginecológica o abdominal);
 una colonización primaria que evoluciona a infección y que
incluye microorganismos aerobios, anaerobios y/o aerobios
facultativos;
 la bacteria puede alcanzar el torrente sanguíneo y diseminarse a
múltiples órganos y tejidos, obstruyendo capilares finos y
creando de este modo, condiciones anaeróbicas. Si se forman
trombos infectados en uno o más de estos sitios, se pueden formar
abscesos y complicaciones tales como, hemólisis intravascular,
necrosis de tejidos, toxemia, shock, coagulación intravascular,
colapso vascular y también, la muerte.
 Factores del hospedero como la modificación en la solución de
continuidad de las mucosas (espontánea, accidental o quirúrgica),
tejidos debilitados y cualquier injuria de tejidos que produzca
isquemia, necrosis o disminución del potencial de óxido reducción.
Esto contribuye a que los microorganismos puedan penetrar en los
tejidos profundos y producir infección
 Variación en los mecanismos inmunológicos de defensa del
hospedero. Algunos anaerobios pueden competir con otras
bacterias por opsoninas del suero y en ciertas condiciones in vitro,
pueden deprimir la función de los leucocitos polimorfonucleares, de
los macrófagos y de los linfocitos.
 La habilidad de las bacterias para adherirse o invadir las células
epiteliales para colonizar o infectar

4. Cuáles son los indicios o características clínicas que sugiere una

infección por anaerobios
 Producción de exudados mal olientes
 Infección próximas a superficies mucosas
 Tejido necrótico
 Gas en tejido
 Infecciones relacionadas al uso de aminoglucosidos (anrtibioticos que
requieren mucho oxígeno y que eliminan la flora normal)
 Infecciones correlacionadas con mordeduras de animales o con heridas
sucias
 Tétanos, botulismo, y abscesos cerebrales
 Sinusitis, otitis y abscesos periodontal

5. Cuáles son las muestras adecuadas para el aislamiento de

microorganismos anaerobios.
 Orina – Punción suprapúbica
 Heces
 sangre, LCR y otros líquidos orgánicos
 Tracto respiratorio inferior – Aspiración traslaríngea – Toracocentesis –
Broncoscopia
 Oído – Timpanocentesis
 Cavidad oral y dientes
 Aparato genital – Masculino – Femenino ¾ Hisopado de endocérvix ¾
Bartolinitis
 Pus, exudados y quemaduras
 Muestras de cirugía
6. Cuáles son las muestras que NO deben ser procesadas para el
aislamiento de microorganismos anaerobios.
 Orina de chorro medio
 Esputo expectorado
 Heces (sólo para investigar Clostridium difficile), ni hisopados rectales
 Hisopado faríngeo y nasofaríngeo
 Hisopado de encías
 Hisopado vaginal
 Superficie de úlceras
7. Según la naturaleza de la muestra, ¿Cuáles son las recomendaciones que
se deben seguir con el objetivo de minimizar errores?

R/= Con el fin de minimizar errores, se deben tener en cuenta las siguientes
recomendaciones en torno a las muestras usadas:

 Para todas las muestras en general, se deben tomar de forma que la flora
normal no las contamine. Debido a lo anterior no son aceptadas muestras
como exudado faríngeo, nasofaríngeo o bucal, expectoraciones, contenido
gástrico e intestinal (a menos que se realice para procesos concretos como
por ejemplo el botulismo), materias fecales (salvo para la búsqueda de C.
difficile), exudado rectal, orina obtenida por sonda o por micción, exudados
vaginales y cervicales, exudados uretrales, entre otros.
 Las muestras sanguíneas deberán ser sembradas en frascos de
hemocultivos para anaerobios.
 Las muestras más ideales para el cultivo de anaerobios son la bilis,
muestras sanguíneas, de médula ósea, líquido cefalorraquídeo, fluidos
de sitios normalmente estériles (por ej: líquido articular), muestras de
orina obtenida por punción suprapúbica, líquido pleural obtenido por
toracocentesis, etc.
 Para muestras de abscesos cerrados, empiemas, infecciones de
cavidades cerradas y líquidos habitualmente estériles las muestras se
deben tomar, si es posible, por punción percutánea-aspiración.
 Muestras quirúrgicas y de biopsias también son idóneas para
investigar bacterias anaerobias.
 Para infecciones abiertas, se debe recurrir a muestras tomadas de la parte
profunda, tomadas quirúrgicamente por aspiración percutánea o tras la
eliminación de los tejidos necróticos superficiales por curetaje o por
aspiración.
 Hay que recordar que toda muestra usada para detección de anaerobios
debe ser protegida de los efectos nocivos del oxígeno atmosférico durante
el tiempo transcurrido entre la extracción y la siembra anaeróbica de la
muestra. Por lo cual se recomienda realizar un envío inmediato al
laboratorio. Las muestras, deben ser transportadas en sistemas que
aseguren la atmósfera anaerobia.

8. ¿Qué medios de transporte se deben utilizar para bacterias anaerobias?

R/= En el transporte de una muestra para la búsqueda de bacterias anaerobias se

debe evitar la presencia de oxígeno, aunque estas pueden sobrevivir varias horas,
incluso días, en un medio de transporte adecuado, dependiendo de su naturaleza.
En general, en las muestras purulentas pueden sobrevivir más tiempo que
en los líquidos claros. Para el transporte en anaerobiosis se encuentran
disponibles en el mercado tubos, frascos y viales con una atmósfera anaerobia
que contienen un medio de transporte reducido y resarzurina como indicador de la
presencia de oxígeno. Tubos gaseados con CO2 o N2

9. Cuál es la importancia de realizar un Examen directo de la muestra

(Frotis directo coloreado con Gram) y cuáles son las características
morfológicas de los microorganismos anaerobios

Podemos ver la respuesta polimorfonuclear

10. Mencione los medios de cultivos (Medios selectivos, medios no

selectivos y medios de enriquecimiento) utilizados para el aislamiento
primario de los microorganismos anaerobios.

R/= Para conseguir una recuperación optima de bacterias anaerobias es

fundamental elegir correctamente los medios de cultivo primarios. La mayoría de
estas bacterias requieren para su crecimiento vitamina K1 y hemina. Para su
aislamiento e identificación presuntiva se aconseja utilizar una combinación de
medios enriquecidos no selectivos, selectivos y diferenciales, entre los que se
incluyen:

 Un medio de agar sangre para anaerobios como agar Brucella o agar

Schaedler con un 5% de sangre de carnero, a los que se añaden vitamina
K1 (1 µg/ml) y hemina (5 µg/ml). En estos medios crecen tanto las bacterias
anaerobias facultativas como las anaerobias obligadas.
 Agar Bacteroides bilis esculina con amicacina (BBE). Es un medio
selectivo para Bacteroides del grupo fragilis y Bilophilia spp. Contiene
amicacina (100 µg/ml) que inhibe la mayorÌa de facultativos, bilis (20%) que
con casi exclusividad solo permite el crecimiento de las especies citadas y
esculina que al ser hidrolizada en presencia de un indicador (citrato férrico)
vira el medio a color negro. Permite una fácil detección de las especies de
Bacteroides del grupo fragilis al ser esculina positiva. A veces, pueden
crecer otras especies, como Fusobacterium mortiferum, Fusobacterium
varium, algunas enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa, enterococos,
levaduras, etc., aunque se distinguen de los Bacteroides del grupo fragilis
por el tamaño de sus colonias, que normalmente es inferior a 1 mm de
di·metro.
  Agar con alcohol fenil-etÌlico (PEA) con un 5% de sangre de carnero. El
alcohol inhibe el crecimiento de bacilos gramnegativos facultativos,
principalmente el crecimiento en velo de las especies de Proteus. También
evita el crecimiento en velo de algunas especies de Clostridium como
Clostridium septicum, facilitando de este modo su aislamiento. Se aconseja
sembrar en este medio las muestras purulentas o cuando sea previsible
una infección mixta.
 Un agar sangre selectivo, como agar Schaedler con neomicina (75
µg/ml) y vancomicina (7,5 µg/ml) (SNV) o con kanamicina (75 µg/ml) y
vancomicina (7,5 µg/ml) (SKV) o el cl·sico agar Brucella con kanamicina,
vancomicina y en este caso sangre lacada (ASLKV). Son medios selectivos
para bacilos gramnegativos como el grupo de Bacteroides fragilis y
especies de Prevotella. La presencia de neomicina o de kanamicina inhibe
a la mayor parte de los aerobios facultativos y la presencia de vancomicina
inhibe la mayorÌa de los grampositivos y especies de Porphyromonas. A
veces pueden crecer en estos medios levaduras y anaerobios facultativos
resistentes a estos aminoglicosidos por lo que siempre debe realizarse una
tinción de Gram y un ensayo de aerotolerancia a todos los aislados.
 Agar con yema de huevo (AYE). Cuando se sospecha la presencia de
clostridios, para detectar la producción de lipasa y/o lecitinasa.
 Un agar selectivo para Clostridium difficile, cuando se investigue la
presencia de esta especie, como agar fructosa-cicloserina-cefoxitina
(CCFA) o agar yema de huevo-cicloserina-cefoxitina (CCEY).
 Como medio líquido de enriquecimiento o de mantenimiento se recomienda
usar caldo de tioglicolato sin indicador, suplementado con vitamina K1
(200 µl) y hemina (20 µl). Este medio se utiliza para recuperar las bacterias
anaerobias en caso de que falle la anaerobiosis en la incubación de los
cultivos primarios, haya una inhibición del crecimiento debido a antibióticos
o a otros factores, o bien cuando las bacterias se encuentran en cantidades
muy pequeñas.

11. Cuál es el procedimiento para la inoculación primaria de muestras

líquidas, muestras de tejido, y muestras tomadas con hisopos.

R/= El procedimiento para este tipo de muestras es:

 El procesamiento inicial incluye su preparación, examen directo e

inoculación en los medios de cultivo apropiados.
  Tras el examen inicial, la muestra se procesa con las máximas
precauciones y lo antes posible, siendo aconsejable que no transcurran
más de 15 minutos desde su recepción.
 Si es posible, la preparación se deberá hacer en una cámara de
anaerobiosis para minimizar su oxigenación. El material purulento se
mezcla bien con la ayuda del agitador Vortex.
 Las muestras de tejido o de biopsia se homogeneizan, ya sea con un
bisturí, cortando trozos muy finos hasta obtener una consistencia
homogénea, o en un mortero estéril añadiendo 1 mililitro de caldo.
 En el caso de que la muestra se haya obtenido con torunda, se exprime en
un pequeño volumen de caldo mediante movimientos rotatorios sobre las
paredes del tubo y este caldo se procesa como una muestra líquida.
 Cuando se investiga la presencia de Clostridium se puede realizar un
enriquecimiento, que consiste en eliminar todas las formas vegetativas y
conservar las esporas tratando la muestra con calor o alcohol.
 Inoculación de la muestra. Una vez homogeneizada con la ayuda de una
pipeta Pasteur se deposita una gota, si la muestra es purulenta, o 2- 3
gotas, si no lo es, en cada uno de los medios de cultivo utilizados, una gota
en un portaobjetos para la tinción de Gram y el resto en un medio líquido de
enriquecimiento.

12. Mencione los sistemas de anaerobiosis que se pueden utilizar para el

crecimiento y aislamiento de estos microorganismos.

R/= Los sistemas de anaerobiosis que pueden ser utilizados para el crecimiento y
aislamiento de estos microorganismos son:

 Jarras de anaerobiosis: Se trata del sistema más utilizado para generar una
atmósfera anaeróbica y consiste en una jarra de plástico con una tapa que
cierra de manera hermética La atmósfera anaerobia puede lograrse por dos
métodos diferentes: el más sencillo consta de un sobre comercial generador
de hidrógeno y CO2 que es activado, por medio de la adición de agua o por
la humedad de las placas de agar. El H2 se combina con el O2 del aire para
formar agua generando así la anaerobiosis.
 Bolsas de anaerobiosis: Este sistema consta de una bolsa plástica
transparente con gas impermeable, contiene, además, un indicador de
anaerobiosis (azul de metileno o resarzurina) y un sobre generador de
anaerobiosis igual al utilizado para las jarras. Existe la posibilidad de
introducir una o dos placas de Petri antes de sellar la bolsa.

Por otro lado, se puede hacer uso de un tercer método denominado la cámara de
anaerobiosis o “cámara de guantes”, sin embargo, este es un sistema más
costoso y requiere de equipamiento complejo, además de que es más lento y es
usado en laboratorios altamente especializados para el estudio de flora normal.

13. En qué se basa la identificación final de los microorganismos

anaerobios.

Cada laboratorio debe intentar estudiar tantos caracteres fenotípicos como le sea
posible y que le permitan llegar a una identificación adecuada. Los caracteres
fenotípicos habitualmente estudiados, aparte de los morfológicos y de sensibilidad
citados, son los derivados de la actividad metabólica: producción de indol,
descomposición del H2O2 (catalasa), capacidad sacarolitica y/o proteolítica,
detección de determinadas enzimas y caracterización de productos finales de su
metabolismo.

El estudio de la capacidad de producir indol y de descomponer el H2O2 están

al alcance de cualquier laboratorio de microbiología, por lo que deberían incluirse
en todo esquema de identificación.

El estudio de la capacidad sacarolítica y/o proteolítica ha constituido la base

de la identificación bacteriana desde los tiempos más remotos y aún hoy es el que
se ofrece en todas las descripciones y/o redefiniciones de géneros y especies. La
puesta en práctica de este estudio analizando un gran número de substratos con
métodos clásicos es larga, farragosa y costosa. Una buena alternativa es la
utilización de sistemas comerciales, en los que se ofrecen, en pequeñas cúpulas o
pocillos de plástico, un gran número de substratos liofilizados que se rehidratan
con el propio inóculo. En estos sistemas (por ejemplo, el api 20 A) la bacteria tiene
que crecer y ejercer su actividad metabólica, por lo que tienen que incubarse en
anaerobiosis durante 24 a 48 horas.

La detección de la dotación enzimática de una bacteria puede, igualmente,

hacerse por métodos clásicos o utilizando sistemas comerciales (api ZIM, ID 32A)
similares a los anteriormente descritos, pero con los substratos adecuados. Estos
micro métodos detectan solamente enzimas preformados, por ello no es necesario
que crezca la bacteria, se rehidratan con un inóculo bacteriano muy denso y se
incuban en aerobiosis durante 4 horas. También se dispone de preparados
individuales de algunos substratos. La detección de la lecitinasa y la lipasa se
hace fácilmente observando el crecimiento de las bacterias en medios sólidos que
contengan yema de huevo.

La detección de los productos finales del metabolismo bacteriano mediante

cromatografía gas-líquido solo es asequible para los laboratorios que dispongan
del cromatógrafo adecuado. En estos casos es una técnica de fácil realización y
escaso coste, aunque exige cultivar y obtener un buen crecimiento en un medio
líquido, preferentemente rico en glucosa (como el PRAS PYG).