VALIDACION ANALITICA PARA LA DETERMINACION DE ALUMINIO, BARIO, Y CROMO HEXAVALENTE,

POR ESPECTROFOMETRIA

ARENAS PALACIOS, Carmen Veronica

ASPILCUETA CULQUIMBOS, Brenda Lucia

LINARES CARRION, Carlos Gustavo

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Lima - Perú

VALIDACION ANALITICA PARA LA DETERMINACION DE

ALUMINIO, BARIO, Y CROMO HEXAVALENTE, POR
ESPECTROFOMETRIA
ANALYTICAL VALIDATION FOR THE DETERMINATION OF ALUMINUM, BARIO, AND HEXAVALENTE
CHROME, BY SPECTROPHOMETRY

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniería Química

LIMA-PERU

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 VALIDACION ANALITICA PARA LA DETERMINACION DE ALUMINIO, BARIO, Y CROMO HEXAVALENTE,
POR ESPECTROFOMETRIA

VALIDACION ANALITICA PARA LA DETERMINACION DE

ALUMINIO, BARIO, Y CROMO HEXAVALENTE, POR
ESPECTROFOMETRIA
ANALYTICAL VALIDATION FOR THE DETERMINATION OF ALUMINUM, BARIO, AND
HEXAVALENTE CHROME, BY SPECTROPHOMETRY

ARENAS PALACIOS, Carmen Veronica

krmen.3.20@gmail.com

ASPILCUETA CULQUIMBOS, Brenda Lucia

brelu1220@gmail.com

LINARES CARRION, Carlos Gustavo

c.linarescarrion@gmail.com

RESUMEN

La meta de todo análisis es la validación de un método de ensayo para propiciar una buena
garantía de los resultados a reportar, es por eso de la importancia que tiene sobre el efecto de los
análisis del agua los criterio de recuperación de muestras, exactitud, confiabilidad y precisión
para determinar la presencia de aluminio, bario y cromo hexavalente por el método de
espectrofotometría y absorción atómica con llama óxido nitroso-acetileno. Es por ello que al
tomar estos parámetros podríamos confirmar de manera correcta la aplicación de los métodos
para el análisis de aguadas, siguiendo así los debidos protocolos de verificación.
En el presente trabajo logramos validar que una de las metodologías más propicias y ventajosas
para la cuantificación de metales fueron las estudiadas en el presente trabajo utilizando un
patrón de referencia que al ser contrastado demuestra la exactitud en la determinación al
residual estudiado.

Palabras clave: exactitud, confiabilidad, espectrofotometría, absorción atómica

ABSTRACT

The goal of any analysis is the validation of a test method to provide a good guarantee of the
results to be reported, that is why the importance of the analysis of the water has the criteria of
sample recovery, accuracy, reliability and precision to determine the presence of aluminum,
barium and hexavalent chromium by the method of spectrophotometry and atomic absorption
with flame nitrous oxide-acetylene.
That is why by taking these parameters we could correctly confirm the application of the
methods for the analysis of water samples, thus following the appropriate verification protocols.
In the present work we managed to validate that one of the most favorable and advantageous
methodologies for the quantification of metals were the ones studied in the present work using a
reference standard that, when contrasted, shows the accuracy in the determination of the
residual studied.

Keywords: accuracy, reliability, spectrophotometry, atomic absorption

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I. INTRODUCCION
Estudios recientes se han ocupado de la
repercusión negativa de los metales pesados en
los diversos ecosistemas y la salud del ser
humano. Hoy en día se conoce mucho más
sobre los efectos de estos elementos, cuya
exposición está relacionada con problemas de
salud como retraso en el desarrollo, varios tipos
de cáncer, daños en los riñones, e incluso con
casos de muerte. De ahí, la importancia que
tiene el estudio de los metales pesados en el
medio ambiente, lo cual está dado por su alta
toxicidad, alta persistencia y rápida
acumulación por los organismos vivos. Sus
efectos tóxicos no se detectan fácilmente a corto
plazo, aunque sí puede haber una incidencia
importante a corto y mediano plazo.
El incremento de uso de metales y
sustancias químicas en los procesos industriales
ha resultado en la generación de grandes
cantidades de efluentes acuíferos que contienen
altos niveles de contaminantes orgánicos e
inorgánicos. Se sabe que la presencia de metales
pesados en el ambiente acuático causa severos
daños a la vida acuática, además de que
eliminan microorganismos durante los
tratamientos biológicos de aguas residuales, lo
que ocasiona que el proceso de purificación
decaiga.
En el método espectroscópico por
absorción atómica y llama oxido nitroso-
acetileno, la muestra es aspirada y atomizada en
una llama de óxido nitroso-acetileno, la cual es
atravesada por un haz de luz que contiene las
longitudes de onda específicas del analito. La
disminución en la intensidad de dicho haz es
proporcional a la concentración del analito en la
muestra.
La meta de un análisis químico de
aguas es generar resultados correctos y
confiables; la validación de ensayos es uno de
los aspectos más importantes para conseguir
este propósito; además, constituye un factor
clave para la prestación de servicios analíticos.
En el presente trabajo se llevó a cabo la
evaluación analítica del método espectroscópico
de absorción atómica con llama oxido nitroso
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acetileno, para la determinación de los metales
aluminio, bario y cromo en agua.
II. MATERIALES Y
MÉTODOS
Su utilizó el método 3111 D –incluido en la
edición 22 del Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater– (Rice et
al., 2012), el cual es aplicable a cualquier tipo
de aguas, excepto el agua de mar. Para controlar
las interferencias, se hizo la corrección de fondo
con deuterio, lo cual sirve para contrarrestar la
absorción no atómica, fenómeno importante
cuando el contenido de sólidos disueltos es alto.
Para evitar interferencia por ionización, se
utilizó un buffer de ionización de KCl (Rice et
al., 2012).
 Recolección y preservación:
Las muestras pueden colectarse en frascos
plásticos o de vidrio. En función de lo que se
desee determinar, no pueden colectarse
muestras compuestas. Si se desea la fracción
disuelta, filtrar inmediatamente por membrana
de 0.45 m. Debe analizarse sin dilación pero
en caso de requerirse almacenamiento, éste debe
realizarse a temperatura aproximadamente 4 °C
por no más de 24 horas.
 Soluciones
*Solución stock: Disolver en un matraz aforado
de 100 mL 141,4 mg de dicromato de potasio en
agua y diluir a 100 mL → 1,0 mL= 500 mg de
Cr. *Solución estándar: Diluir 1 mL de la
solución stock un matraz aforado de 100 mL · 1
mL = 5 mg de Cr. *Solución de 1,5-
difenilcarbazida: Disolver en matraz aforado
de 50mL 250 mg de 1,5 difenilcarbazida en
acetona y enrasar.
 Preparación de la curva de
calibración:
1. Se pipetea una alícuota de la solución
estándar 5 mg /L de 0,5; 1, 2, 3 ,4 y 5 mL para
preparar soluciones cuyo intervalo de
concentración va desde 0,1-1,0 mg/L.
2. Se acidifica adicionando 5 gotas (0,25 mL) de
ácido fosfórico y 2 de ácido sulfúrico (conc); se
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utiliza un pH- metro para ajustar el pH de la
solución entre 1,0 ± 0,3 unidades para el
desarrollo óptimo del color; según el Standard
Methods the Examinations of Water and
Wastewaters es entre 1,6-2,2 unidades.
3. Adicionar de 2 mL de solución de 1,5
difenilcarbazida en acetona, y esperar 5-10 min
para el desarrollo del color rojo-violeta.
4. Lectura de la absorbancia a 540 nm en
cubetas de 1 cm; se corrige la lectura de la
absorbancia realizando la diferencia de
absorbancia del agua destilada contra el blanco.
5. Se grafica la absorbancia en función de la
concentración de las soluciones de cromo (VI).
 Verificación de la curva de
calibración:
Cada vez que se analicen muestras, no es
necesario construir una nueva curva de
calibración, sino verificar la validez de la
existente. En este caso, se prepara un patrón de
concentración 0.020 mg/L y se lee como si fuera
muestra. Si el resultado es coincidente 10%, se
considera que la curva es válida y se procede a
preparar y leer las muestras . En caso negativo,
repetir el patrón. Si el problema persiste,
verificar los reactivos, en particular, la solución
madre de cromo y si es necesario prepararlos y
construir una nueva curva de calibración.
 Determinación de cromo
hexavalente en muestras:
1. Transferir 50 mL de muestra (previamente
filtrada si la muestra lo amerita) a un vaso de
precipitados de 100 mL, adicionarle 0.5 mL de
ácido sulfúrico 1:1. Agitar para mezclar bien.
2. Añadir 1 mL de solución de difenilcarbazida,
agitar y dejar reposar 5 a 10 minutos para
desarrollar color.
3. Preparar y analizar un blanco de reactivos con
agua.
4. Leer de 5 a 10 minutos en espectrofotómetro
a 540 nm con celdas de 5 cm de paso óptico
respecto a la curva de calibración de cromo
hexavalente. Si la absorbancia de la muestra
resultase mayor que la del mayor patrón, es
necesario repetir el proceso mediante diluciones
sucesivas de la muestra y posterior lectura en el
equipo. Para esto, debe realizarse como mínimo
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dos diluciones, se calculó el coeficiente de
variación y si éste no supera 10 %, se informó el
valor promedio; en estos casos, es necesario
multiplicar previamente por el factor de
dilución.
El resultado se obtendrá directamente en la
curva de calibración del equipo. Se expresará
con tres cifras decimales. La concentración
mínima a reportar será 0.010 mg/L [13]. Cuando
las características de la muestra respecto al
color, hagan necesario analizar un blanco para
corregirlo, se procederá con base a la siguiente
fórmula:
Ac = Ar – Ab
Dónde:
Ab = Absorbancia de la muestra sin los
reactivos
Ar = Absorbancia de la muestra con los
reactivos
Ac = Absorbancia de la muestra (corregida)
Ac, se introduce en la fórmula de la curva
vigente para calcular la concentración real de la
muestra.
 Parámetros determinados para la
validación del método
Los parámetros de calidad del ensayo utilizados
fueron evaluados según NC "Guía para la
validación de ensayos químicos", y los trabajos
realizados por
Aguilera y col. /11-13/, los cuales se relacionan
a continuación:
Linealidad: Es la capacidad del método
analítico para obtener resultados directamente
proporcionales a la concentración o cantidad del
analito en rango definido. De la solución patrón
de referencia interno de cromo (VI) de 5 mg ·
dm-3 se toman las alícuotas correspondientes
para obtener concentraciones de 0,1; 0,2; 0,4;
0,6; 0,8; 1,0 mg · dm-3, y se realiza el
procedimiento para un tamaño de muestra (n=
10).
Límite de detección: Es la cantidad o el
contenido del analito que corresponde a la señal
de medición más baja que con cierta confianza,
puede ser interpretada estadísticamente. Se
evalúa como tres veces la desviación típica
estándar de veinte muestras blanco.
Límite de cuantificación: Es la cantidad más
baja de analito en una muestra que puede ser
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cuantitativamente determinada con cierta los valores de concentraciones obtenidas y las

confianza. reportadas para el patrón de referencia interno a
Se evalúa como diez veces la desviación típica un 95 % de confiabilidad de la media, al ser en
estándar de veinte muestras blanco.
todos los casos el p- valor mayor que 0,05 ver
Precisión: Se determina mediante el cálculo de
las desviaciones estándar y típica relativa (% de
coeficiente de variación), de los resultados
obtenidos del análisis de las muestras a tres
niveles de concentración, utilizando el programa
Statgraphics Plus 5.1para (n = 10).

Exactitud o veracidad: Se evalúa mediante un

ensayo de recuperación para n= 10, y se realiza
mediante la determinación del analito a una
muestra de concentración conocida a la que se
le ha adicionado una cantidad de patrón interno
que debe corresponder con la cantidad del
analito presente en la muestra. Se calcula el por
ciento de recuperación del analito por la
siguiente ecuación: TABLA 1.

Donde:
CMCA: Cantidad de muestra con analito.
CMSA: Cantidad de muestra sin analito.
CA: Cantidad añadida. A partir de los resultados obtenidos en la
TABLA 2, se establece que el método puede
emplearse en muestras cuya concentración de
cromo (VI) se encuentre por encima de 0,009
mg.dm-3 y cuantifica con exactitud a un 95 %
III. RESULTADOS Y de confiabilidad, para muestras cuya
concentración sea igual o mayor a 0,03 mg.dm-
DISCUSIONES 3.
Son muchos los métodos y técnicas reportadas
para la determinación de iones cromo (VI), pero
dada la sensibilidad y selectividad que tiene el
método colorimétrico Para la evaluación de la
linealidad del método, se determina la recta de
mejor ajuste Y = 0,118 3 – 0,091 2. El
coeficiente de correlación calculado es igual a
0,999 8, demostrando la dependencia lineal que
existe entre la concentración y la señal analítica
en el intervalo evaluado.
Partiendo de los resultados obtenidos
anteriormente, se procedió a la evaluación de la
precisión y exactitud en la determinación de
cromo (VI), con solución patrón interno en tres
niveles de concentración. Los mismos muestran
que existe una buena precisión y exactitud, pues
los valores de los coeficientes de variación (CV)
están por debajo del 10 %, y no se detectan
diferencias significativas entre

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De acuerdo con los protocolos de verificación, referenciado. Este método fue acreditado
se evaluaron, la precisión, la exactitud y la en 2006 por el IDEAM, con base a los
recuperación de adiciones conocidas (exactitud resultados experimentales que se
en matriz) (Cortés & García, 2009; Cortés, presentaron y que resumidamente incluían:
2010). El método de referencia plantea el
empleo de la llama aire-acetileno para la Exactitud:
determinación de cromo, aunque en la literatura Pruebas de añadido-recobrado: con agua
aparecen diversas referencias (incluida la del potable (n=15) y agua cruda (n=16),
fabricante del espectrofotómetro de absorción recobrados de 89.0 y 99.0%,
atómica empleado), donde aconsejan el empleo respectivamente.
de la más energética llama óxido nitroso-
acetileno ya que ésta sí posee la energía Precisión:
suficiente para disociar los compuestos de Muestra de agua tratada con adición
cromo y permitir la liberación de los átomos de (aproximadamente 0.040 mg/L), analizadas
este elemento. 5 réplicas durante el mismo día con dos
diferentes analistas: coeficiente de
Exactitud
La exactitud se midió teniendo en cuenta las
pruebas de evaluación de desempeño del
IDEAM con resultados satisfactorios desde
2007, como se muestra en la Tabla1. Para las
pruebas Mollabs, desempeño satisfactorio para
Cr.

variación 3.6%.

En las tablas 1y 2, se muestran datos de

De acuerdo con los protocolos de
exactitud en patrones de referencia y añadidos
verificación se evaluaron los siguientes
recobrados en muestras respectivamente.
parámetros: límite de cuantificación, límite
de detección, precisión, exactitud, Exactitud:
recuperación de adiciones conocidas Pruebas de añadido-recobrado:
(exactitud en matriz). Por tratarse de un Se realizaron por duplicado a muestras de agua
método estandarizado, no es necesario cruda, tratada y residual con diferentes
evaluar: identificación, selectividad, adiciones.
especificidad ni robustez, ya que estos Con base a:
parámetros no son alterados ni
- El error relativo promedio de los patrones
modificados.
varió entre -6.32 y 5.03%.
A continuación se exponen e interpretan los
- Los recobrados estuvieron entre 82.3 y 101.0 y
resultados obtenidos en los ensayos de
nuestro criterio para recobrados está entre 80 y
verificación del método, que se realizaron
120% .
siguiendo el procedimiento de análisis
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Se observa que el método no presenta tendencia
alguna que indique sesgos ni errores
sistemáticos apreciables, debido a interferencias
presentes en la matriz de las muestras ni al
proceso de análisis mismo. Se considera
satisfactoria la exactitud
Precisión:
Análisis de muestras de diferente procedencia.
Con base a los contenidos de cromo hexavalente
(< 0.2 mg Cr+6/L) y la tabla de Horwitz, puede
considerarse satisfactoria la repetibilidad [18].
Para la reproducibilidad interna, se analizaron
patrones de control interno: Concentración del
patrón (mgCr+6/L)= 0.020; CV%= 5.1; replicas=
18, se considera también satisfactoria.
Curva de calibración:
Intervalo de trabajo: 0.020-0.200 mg/L
Coeficiente de correlación: 0.999957
CV método: 3.57%
Límite de detección (Xbl + 3 Sbl): 0.000966 mg
Cr+6/L
Límite de cuantificación (Xbl + 10 Sbl): 0.003100
mg Cr+6/L Concentración a reportar: 0.01mg
Cr+6/L
IV. CONCLUSIONES
1. En las tres investigaciones realizadas el
procedimiento propuesto presenta muy
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adecuadas características de desempeño tanto en
el uso de la espectrofotometría, en la cual su
coeficiente de variación <10% , teniendo un
límite de detección bastante bajo (0.000966
mg/L) acreditando así el propósito para el cual
fue diseñado que consiste en la determinación
del cromo hexavalente en aguas . Por lo tanto es
posible la determinación del cromo hexavalente.
2. Como también en la absorción atómica
con llama de óxido nitroso-acetileno con
coeficiente de variación <10% y una
concentración mínima a reportar de ( 0.5 ; 0.25 ;
0.08 mg/L)en el aluminio, bario y cromo
respectivamente; no excediendo los límites
permisibles volviendo así este un método de
referencia para otros laboratorios para que
puedan llegar a ser guía a nivel internacional.
V. BIBLIOGRAFIA
 Validación interna del método
espectrofotométrico por adecuación,
para la determinación de cromo (VI) en
aguas residuales.
http://www.redalyc.org/pdf/4435/443
543720002.pdf
 Verificación analítica para las
determinaciones de cromo hexavalente
en aguas por espectrofotometría
https://dialnet.unirioja.es/descarga/a
rticulo/4694625.pdf
 Evaluación analítica para la
determinación de aluminio, bario
cromo en aguas, por espectroscopia de
absorción atómica con llama de óxido
nitroso-acetileno
https://revistas.usc.edu.co/index.php/
Ingenium/article/download/348/307
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