Sitio Argentino de Producción Animal

AVANCES EN TRANSGÉNESIS
ANIMAL

Dr. Pablo Bosch

Laboratorio de Reprogramación Celular e
Ingeniería Genética
Departamento de Biología Molecular
FCEFQyN, UNRC

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Estructura de la presentación
 Definición de transgénesis animal

 Aplicaciones de los animales transgénicos

 Métodos transgénicos

 Clonación por transferencia nuclear de

células somáticas (TNCS)

 Uso de la clonación por TNCS para

generar animales transgénicos

 Conclusiones
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Transgénesis – Modificación genética

Introducción, eliminación o modificación
deliberada de información genética en la línea
germinal de un animal – Edición de genomas

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Modificación del genoma ¿Para qué?

TERAPIA GÉNICA ANIMAL TRANSGÉNICO

Modificación Modificación del

del genoma genoma de todas las
en células células incluyendo
somáticas las gametas

Corrección de Investigación Biomedicina

defecto genético
Biotecnología
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Transgénesis – Modificación genética

•Farmacéuticos

•Producción animal

•Modelos animales

•Xenotransplante

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El método transgénico ideal

 Alta precisión

 Versátil

 Alta eficiencia

 Alta especificidad

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Línea de tiempo de la transgénesis

en animales domésticos
Microinyección Transgénesis
pronuclear Activa

1980 1990 2000 2010 2014

Transferencia Nucleasas
Nuclear de Sitio específicas
Células
Somáticas

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Métodos Transgénicos
 Micronyección de
embriones
 Transgénesis
mediada por Virus
 Células madre embrionarias

 Transferencia Nuclear de Células

Somáticas (TNCS, clonado)
 Transferencia génica mediada por
espermatozoides

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Métodos Transgénicos
TRANSGÉN
(ADN)

Modificación Microinyección del

genética de células embrión
in vitro

Transferencia a
Creación de embrión hembra receptora
por transferencia
nuclear (CLONADO)
ANIMAL
TRANSGÉNICO
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Métodos Transgénicos

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¿Cómo ingresa el ADN (transgén)?

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¿Cómo ingresa el ADN (transgén)?

Métodos:
Liposomas
Químicos:
Moléculas Policatiónicas

Electroporación
Físicos:
Microinyección
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Integración no facilitada Integración facilitada

(PASIVA) (ACTIVA)

Mutágeno químico o físico

Luz UV, radicales libres, irradiación Proteína exógena:
Transposasa, ZFNs, TALEN,
Ruptura en la doble hebra
¿Cómo se integra el ADN
integrasa viral
(DSB)

(transgén) al genoma huésped? Integración

mediada por
ADN foráneo Reparación ADN foráneo enzima/s
celular y
Recombinació
n ilegítima

Concatémeros, silenciamiento Copias monoméricas del transgén

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¿Cómo se integra el ADN

(transgén) al genoma huésped?

Integración no Nucleasas
facilitada Recombinantes
(PASIVA) (ACTIVA)

 Al azar  Dirigida
 Expresión variable  Expresión predecible
 Solo permite adición  Adición y eliminación
 Baja eficiencia  Alta eficiencia
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Nucleasas Recombinantes

CORTE de ADN

EDICIÓN del GENOMA

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Métodos transgénicos:
Inyección Pronuclear
Desventajas:
Expresión transgén variable
Baja eficiencia
Solo permite adición génica

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Métodos transgénicos:
Inyección Pronuclear

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¿Qué se entiende por clon?

 Producción de múltiples copias

IDENTICAS de una molécula u
organismo unicelular

 Conjunto de células u organismos

genéticamente idénticos, originado por
reproducción asexual a partir de una única
célula u organismo

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Toro Gran Campeón

Aberdeen Angus

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Clonación: Obtención del

material genético

Toro a clonar

Células en cultivo

N2 Líquido Estufa de cultivo

-192 C 20 de 33
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Obtención de los Ovocito

ovocitos
DNA
materno

Maduración
Ovario de ovocitos in
vitro

CLONADO

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Equipamiento específico
Microscopio
Micromanipuladores
Microinyectores

Electrofusor
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Transferencia Nuclear:
Técnica
Ovocito Célula donante de núcleo

Enucleación del ovocito Transferencia de la célula donante

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Transferencia Nuclear:
Técnica (Cont.)
Ovocito
Activación
química

Fusión
Célula del animal
a clonar

Cultivo in vitro de embriones (7 días)

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Transferencia de
embriones
Embriones
clonados

Hembras
receptoras

Toros
clonados

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Métodos transgénicos:
Clonado por Transferencia Nuclear
Fibroblastos Enucleación

Transgén
Animal
Donante Transferencia
Nuclear

Células
genéticamente
modificadas Clones
transgénico

N2 Líquido
-192 C
Embriones
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Embriones bovinos TRANSPOSONES

transgénicos
generados por SCNT

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Conclusiones
 Métodos transgénicos están en constante evolución

 Modificación del genoma de células en cultivo

asociado a TNCS representa un método transgénico
con mucha potencialidad en grandes animales

 Los animales transgénicos ocuparán un lugar muy

importante como modelo de enfermedades
humanas y como biorreactores

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Conclusiones
 Producción animal:
• Complemento de programas de selección por
apareamiento
• Introducción de nuevas características (ej.
carácter mocho)
• Incorporación de genes de resistencia a
enfermedades
• Mejoras en la producción (mutación del gen de
la miostatina)

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Laboratorio de Reprogramación Celular e

Ingeniería Genética, UNRC

INTEGANTES
Dr. Pablo Bosch
Dra. Nancy Rodríguez
Dr. Diego Forcato
Dr. Fabrisio Alustiza
Dr. Cecilia Liaudat
Lic. Florencia Olmos
Mic. Ana Alessio
Mic. Alejandro Fili
Est. Virginia Capella

COLABORADORES SUBSIDIOS
Dr. Wilfried Kues, GERMANY MINCyT
CONICET
Dr. Stefan Moisyadi USA
UNRC
Dr. Daniel Salamone Bs.As. MINCyT, Córdoba
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Genoma animal
Tamaño del genoma
bovino:

3.000.000.000 pb

22.000 genes

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Tipo de modificación
 Adicionar CAG
GEN
CAG

GEN

 Suprimir

GEN

 Modificar

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Green Fluorescent Protein

Luz
UV

GFP
ADN

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