En amarillo las enzimas de restricción que se utilizaron:

EcoRI
XbaI

Información acerca del gen aroE

Shikimate deshidrogenasa (AroE) cataliza la reducción ligada a NADPH de 3-deshidroshikimate a shikimate. La reacción
es parte de la ruta de ​biosíntesis de corismato I , que proporciona el precursor común para la biosíntesis de aminoácidos
aromáticos, ácido fólico, quinonas y enteroquelina.
El análisis filogenómico de la familia shikimate deshidrogenasa mostró que las dos enzimas codificadas en ​E. coli , AroE e
YdiB , pertenecen a diferentes subclases; Los autores sugirieron que YdiB fue adquirido por transferencia horizontal de
genes. Se identificaron residuos catalíticos comunes y de subclase y motivos de unión al sustrato. AroE es específico de
NADP +​ y tiene una eficiencia catalítica mucho mayor que YdiB, que tiene una especificidad de sustrato más amplia y
puede usar NADP +​ o NAD +​ como co-sustrato. Los datos mutantes y los resultados de los experimentos de ingeniería
metabólica sugieren fuertemente que YdiB no puede reemplazar AroE en condiciones fisiológicas normales.
AroE transfiere hidrógeno estereo específicamente desde el lado A de NADPH. La estructura de AroE con NADP +​ unido
se determinó a una resolución de 1,5 Å. Aunque AroE e YdiB tienen baja similitud de secuencia, tienen alta similitud
estructural con dos dominios α / β separados por una hendidura ancha.
La especificidad del co-sustrato de AroE se cambió de NADP +​ a NAD +​ diseñando primero un dominio de unión al
nucleótido de consenso de Rossmann seguido de un diseño racional hacia el dominio de unión al consenso de NAD​+​. Una
variante con cuatro mutaciones específicas, S131A, L135A, N149D y V152F, muestra una preferencia de cinco veces por
NAD +​​ sobre NADP.
En la dirección "inversa", AroE parece ser capaz de deshidrogenar aún más 3-deshidroshikimate a 3,5-deshydroshikimate,
que puede convertirse espontáneamente en ácido gálico. La relevancia fisiológica no está clara.