Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga

Facultad de Ciencias Biológicas

Escuela Profesional de Biología

BIOTECNOLOGÍA GENERAL
(BI-441)

Blgo. FIDEL R. MUJICA LENGUA

PROFESOR PRINCIPAL

Ayacucho, 24 de agosto del 2020

 UNIDAD II
EXPRESIÓN GÉNICA

Clase 2
Transcripción y traducción
 TRANSCRIPCIÓN
Es la síntesis de una molécula de ARNm complementaria a una de
las dos hebras del ADN molde, catalizada por la ARN polimerasa
(3’5’), que tiene alta afinidad por un promotor.

Complementariedad : ADN/ARN (A+U, G+C, C+G y T+A)

Dirección : 3’5’
Asimetría : solo se transcribe una hebra del ADN
Transcripción
 ARN polimerasa
de Escherichia coli:

Es una proteína multimérica

compuesta por cinco
sub-unidades de cuatro
diferentes tipos (a2bb’s);
el factor sigma puede
disociarse reversiblemente
del núcleo de la enzima; y
no tiene actividad de
corrección de errores como
la DNA polimerasa
Promotores
 Son secuencias precisas ubicadas en el ADN, donde la ARN polimerasa
se une para iniciar la transcripción.

 Se encuentran frecuentemente muy cerca y hacia arriba (upstream) del

punto en que se inicia la transcripción, en el extremo 3’ de la hélice
codificadora del ADN.

 Son más de 100 los promotores identificados y secuenciados en

Escherichia coli.

 Un promotor procariota estándar tiene tres partes:

(a) El punto de inicio (starpoint) de la transcripción de la

secuencia de ADN, que se representa como +1 y casi
siempre es una G o una A.
(b) Una secuencia consenso cercana al punto de inicio.
(c) Otra secuencia consenso más alejada del punto de inicio.
Partes de un promotor
 El enlazamiento de la ARNA polimerasa provoca una “fusión” de la doble hélice
del ADN, lo que a su vez induce la ruptura de los puentes de hidrógeno entre los
pares de bases formándose la llamada “burbuja de transcripción” que tiene una
longitud de 17 pb.

 Los sustratos para la ARNA polimerasa son los 5’-trifosfatos de ribonucleótido:

ATP, GTP, CTP y UTP; se requiere la presencia de un ión metálico, ya sea Mg2+
o Mn2+, como cofactor; la reacción está impulsada por la hidrólisis del pirofosfato
que se libera.

 La cadena de ARNm crece en dirección 5’3’.

 Cuando la longitud del tramo híbrido ADN/ARN se aproxima a 12 pb, el extremo 5’

de la cadena de ARN creciente se disocia de su hebra de ADN molde y vuelve
a formarse el ADN doble, liberándose el factor sigma.

 La ARN polimerasa continúa a lo largo del molde de ADN hasta que encuentra
una señal de terminación, lo que hace que el ARN se disocie del ADN molde.
Unidad transcripcional
Secuencia del ADN transcrita como ARN; el producto de ARN es el tránscrito primario.
En E. coli, la mayoría de los 3,000 genes sólo se encuentran presentes en una copia
y están distribuidos en cerca de 1,000 unidades transcripcionales.

Marco abierto de lectura

Secuencia del ARN comprendida entre un codón de inicio (AUG) de la traducción y un
codón de terminación, descontando las secuencias que corresponden a los intrones,
en caso de haberlas. Está delimitado por las UTR.

ORF : Open Reading Frame o Marco Abierto de Lectura

UTR : Untranslated Region o Región No Traducida
Unidad transcripcional Marco abierto de lectura
Secuencia SD (Shine-Dalgarmo)

Es una secuencia corta y rica en purinas, que se encuentra en el

extremo 5’ del ARNm procariota, la cual resulta ser complementaria
a una secuencia rica en pirimidinas, que se encuentra en el extremo
3’ del ARNr 16S.
Esta secuencia es responsable, por lo tanto, de la unión del ribosoma
al ARNm y se encuentra antes del codón de
iniciación (AUG).
Transcripción: síntesis de ARNm
1. INICIACIÓN: Una ARN polimerasa comienza la síntesis del ARN
precursor a partir del promotor que se encuentra en el ADN
2. ALARGAMIENTO: La síntesis de la cadena de ARNm continúa en
dirección 5’3’. Después de 30 nucleótidos se le añade al ARNm una
cabeza (caperuza o líder) de metil-GTP en el extremo 5’ con función
protectora (eucariotas)
3. FINALIZACIÓN: Una vez que la RNA polimerasa llega al codón de
terminación, termina la trascripción. Entonces, una poliA-polimerasa
añade en el extremo 3’ del ARNm precursor unas 20-25 adeninas y
luego se libera (eucariotas)
 Splicing o empalme

4. MADURACIÓN: El ARNm precursor contiene tanto exones como

intrones; para que pueda traducirse correctamente en una proteína
funcional, un sistema enzimático reconoce, corta y retira los intrones y
las ARN-ligasas unen los exones, formándose así el ARNm maduro
Topología típica de una molécula
de ARNm eucariota

1) Región no traducida 5’ (extremo protegido con

una 7-metil guanosina).
2) Codón de iniciación (AUG).
3) Región codificadora (codones para los Aas).
4) Codón de terminación (UAA, UGA o UAG).
5) Región no traducida 3’ (con una cola de 20-25 nucleótidos de
adenina, poliadenilación).
 TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN EN PROCARIOTAS
1) ADN, 2) ARNm, 3) Subunidad menor del ribosoma, 4) Subunidad mayor del ribosoma,
5) Polipéptido, a) Eliminación de la fMet, b) ARN polimerasa, c) Extremo amino del polipéptido,
d) Extremo carboxilo del polipéptido
 1 2 3 4 ...

Extremo amino-terminal y extremo carboxilo-terminal

de un polipéptido o proteína
 TRADUCCIÓN
Es el proceso que tiene lugar en los ribosomas, mediante el cual los
codones o tripletes del ARNm, que son “palabras” en un lenguaje de
secuencia de nucleótidos se convierten o “traducen” por medio del
ARNt, que tiene función de un intérprete, a otro lenguaje de secuencia
de aminoácidos, conservando el mismo significado.

El código genético actúa como un diccionario y los codones de inicio y

terminación son los signos de puntuación.

(ribosomas)
NUCLEÓTIDOS AMINOÁCIDOS
(ARNt)
El Código Genético

Es una tabla que establece todas las combinaciones de tres

bases nitrogenadas del ARNm (tripletes o codones) que
codifican para los Aas comunes presentes en la estructura
primaria de una proteína, después de la traducción.

Comprende 64 codones; de ellos, 61 tripletes corresponden

a los Aas comunes, mientras que 03 tripletes codifican para
la terminación de la cadena.

Puesto que hay 20 Aas y 61 tripletes que los codifican, es

evidente que el código genético es muy degenerado.
Solamente el triptófano y la metionina están codificados por
un solo triplete.

Los otros 18 Aas vienen codificados por dos o más tripletes.

La leucina, arginina y serina son codificados por 06
codones cada uno.

El número de codones para un Aa determinado está

correlacionado con su frecuencia de aparición en las
proteínas.
ARN de transferencia

* Cada ARNt es específico para un sólo aminoácido, aunque

puede descodificar más de un codón.
* Un aminoácido se une a su ARNt correspondiente por
medio de la enzima aminoacil-ARNt sintetasa.
* Esta enzima cataliza la reacción de aminoacilación, que es
importante porque:

(a) Forma el enlace aminoacil-éster entre el aminoácido

y su ARNt; y
(b) Al hidrolizarse este enlace, proporciona la energía que
se requiere para formar el enlace peptídico.
Etapas de la Traducción
(Ciclo del Ribosoma)

* Las etapas fundamentales son tres:

1) Iniciación
2) Alargamiento o elongación
3) Terminación
* Todas las etapas requieren energía metabólica que
proviene de la hidrólisis del ATP o GTP.
* Todos los componentes pueden reciclarse.
Ciclo del ribosoma
1)Iniciación

- Hay mecanismos para diferenciar un codón AUG “iniciador”

de otro AUG “interno”: en bacterias, el ARNt “iniciador”
transporta una metionina formilada (fMet); en eucariotas
sólo transporta una metionina.

- Otro detalle es que en bacterias el codón AUG “iniciador”

está precedido por la Secuencia SD (extremo 5’ del ARNm,
rico en purinas; y complementario al extremo 3’ del ARNr
16S); mientras que en eucariotas, el codón AUG “iniciador”
está casi siempre dentro de una secuencia contexto
(5’…CCA/GCCAUGG…3’).

- Los factores de iniciación de procariotas (IF, de 03 tipos),

son diferentes a los de eucariotas (IF, de 10 tipos).
2) Alargamiento
- El ribosoma se mueve a lo largo del ARNm en dirección 5’3’, descodificando cada
triplete y ensamblando la cadena del polipéptido en la secuencia correcta.
- Es un proceso cíclico: se descodifica un codón o triplete y se adiciona un aminoácido
al polipéptido creciente.
- Se requieren factores de alargamiento (EF), proteínas específicas bastante similares
entre procariotas y eucariotas.
- La subunidad menor del ribosoma tiene dos sitios de unión para los aminoacil-ARNt:
el sitio P (peptidilo) y el sitio A (aminoacilo); además tiene actividad peptidil
transferasa.
- Al comienzo sólo se ocupa el sitio P con un peptidil-ARNt; a continuación el sitio A se
alinea con el siguiente codón del ARNm, para luego aparearse con el anticodón del
aminoacil-ARNt correcto.
- La peptidil transferasa permite la formación del enlace peptídico en el sitio A, dejando
vacío el sitio P; pero finalmente el péptido es traslocado al sitio P, lo que permite que el
ribosoma avance un codón.
- Varios ribosomas pueden enlazarse a la misma molécula de ARNm (polirribosoma o
polisoma).
3) Terminación

- Cuando el ribosoma encuentra un codón de terminación en

el extremo 3’ del ARNm, se suspende el alargamiento.
- La cadena completa del polipéptido se desprende junto con
el último ARNt y las subunidades ribosómicas.
- Participan factores de terminación (RF), que son diferentes
en procariotas y eucariotas.
Traducción en procariotas
Esquema del proceso de traducción en procariotas
 MODIFICACIONES
POST-TRADUCCIONALES
La sola secuencia lineal de aminoácidos no garantiza la
funcionalidad de la proteína; deben ocurrir varios tipos de
modificaciones covalentes.

a) Proteólisis limitada

* Eliminación del primer residuo del extremo amino (metionina o

formilmetionina).
* Activación de zimógenos (precursores de enzimas) y hormonas.
* Eliminación de péptidos señal (una secuencia de 15-20 Aas en el
extremo N-terminal) en proteínas de secreción: periplasma,
membrana externa, medio de cultivo.
 ACTIVACIÓN DE ZIMÓGENOS

• Enzimas digestivas
• Coagulación sanguínea
• Hormonas

Órgano/Tejido Proteína inactiva Proteína activa

Páncreas Quimotripsinógeno Quimotripsina
Estómago Pepsinógeno Pepsina
Páncreas Tripsinógeno Tripsina
Sangre Fibrinógeno Fibrina
Páncreas Preproinsulina Insulina
Transporte de proteínas de secreción en bacterias
b) Plegamiento

Se refiere a la obtención de la configuración 3D correcta de

la proteína. En muchos casos la estabilidad de debe a la
formación de enlaces disulfuro entre dos cisteínas, catalizado
por la enzima disulfuro isomerasa.
c) Modificaciones químicas

GLICOSILACIÓN
Unión de un monosacárido u oligosacárido a un polipéptido
para formar una glicoproteína (glicosiltransferasas). Importante
para conferir propiedades especiales a las proteínas.
O-glicosilación: cuando el carbohidrato se une al oxígeno
de una treonina o serina.
N-glicosilación: cuando el carbohidrato se une al nitrógeno
de la amida de una asparagina.
ACILACIÓN
Unión de ácidos grasos a las proteínas, por enlace éster con una
treonina o una serina; o bien por enlace tioéster con una cisteína.
Importante para la formación de la bicapa lipídica.
ADICIÓN DE GRUPOS PROSTÉTICOS
Por ejemplo, la mioglobina y su grupo prostético hemo.
Glicosilación de proteínas
(Aparato de Golgi)
CONTROL GENÉTICO EN PROCARIOTAS
El sistema de control genético mejor conocido es el
“modelo del operón de la expresión genética”
propuesto originalmente por Jacob y Monod en 1961.

Un operón viene a ser un grupo de genes contigüos

en el genoma bacteriano, que se transcriben regulados
por un solo promotor dando origen a un
ARNm policistrónico.
Los elementos de un operón son:
3’… ADN 5’…
Regulador Promotor Operador Gen 1 Gen 2 Gen 3

a) El gen regulador, que codifica al represor (una proteína

interna) y tiene su propio promotor.
b) Una secuencia de nucleótidos denominada promotor
la cual es el punto de unión de la ARN polimerasa,
con los siguientes elementos:

Secuencia –35 Secuencia –10 +1

______ TTGACA _______TATAAT ______ Inicio
Una secuencia de nucleótidos denominada operador, la
cual es el punto de unión de la proteína represora.
Los genes estructurales, que codifican para proteínas
específicas, las cuales normalmente se transcriben una a
continuación de la otra dentro de la misma unidad de
transcripción.
Aparentemente hay una sola ARN polimerasa.
La Secuencia SD (Shine-Dalgarmo), ubicada en el ARNm
es propia de procariotas y ayuda en la unión a los
ribosomas.
La transcripción es un proceso que está acoplado a la
traducción.
 Modelo de Represión

(Lactosa)
Modelo de Inducción

Los operones regulan la transcripción de procariotas

CONTROL GENÉTICO EN EUCARIOTAS

No ha sido hallado un equivalente directo al modelo del

operón; tampoco parece existir una región equivalente al
operador.
La unión de la ARN polimerasa está influida por la presencia
de elementos intensificadores o activadores (enhancers), que
aumentan la tasa de transcripción.

Cada gen estructural es transcrito de manera independiente,

lo cual da lugar normalmente a un ARNm monocistrónico.
Los intensificadores aumentan la tasa
transcripcional en eucariotas
Hay tres tipos de ARN polimerasa, siendo la de Tipo II
la equivalente a la ARN polimerasa de procariotas.

Los promotores son de mayor tamaño:

Secuencia -80 Secuencia -25 +1

__ CAAT __ GGGCCGGG __GGGCCGGG __TATA __ Inicio

El gen estructural comprendido en la unidad

transcripcional es discontinuo; por ello debe ser
entrecortado y empalmado (splicing) a partir del tránscrito
primario.
Maduración del ARNm eucariota