Råsbäck et al.

Acta Vet Scand (2018) 60:39

https://doi.org/10.1186/s13028-018-0393-5 ActaVeterinariaScandinavica

INVESTIGACIÓN Acceso abierto

Prevalencia de patógenos humanos Yersinia enterocolitica en

granjas porcinas suecas
Therese Råsbäck 1, Thomas Rosendal 2, Michael Stampe 3, Axel Sannö 4, Anna Aspán 1,4, Katarina Järnevi 1
y Elina Tast Lahti 2 *

Resumen

Antecedentes: Los cerdos son el reservorio más importante de patógenos humanos Yersinia enterocolitica. Investigamos la prevalencia en rebaños de patógenos
humanos Y. enterocolitica en granjas de cerdos suecos mediante el análisis de muestras fecales de corrales utilizando un enriquecimiento en frío de 1 semana y
posteriormente sembrado en placa cromogénica selectiva (agar CAY).

Resultados: Patógeno Y. enterocolitica se encontró en 32 (30,5%) de las 105 granjas muestreadas con cerdos de engorde. El bioserotipo 4 / O: 3 se identificó en todas las
fincas menos una, donde se identificó 2 / O: 9. La prevalencia de corrales dentro de los rebaños positivos varió de 1/4 a 4/4 corrales. El coeficiente de correlación intraclase
calculado ICC (0,89) de un modelo con un efecto aleatorio para la agrupación dentro del rebaño indicó un grado muy alto de agrupación por rebaño. Ninguno de los factores
de riesgo explorados, incluido el tamaño de la manada, el tipo de manada, el flujo de cerdos, el tipo de alimento, el acceso al aire libre, la evidencia de aves y roedores en la
manada, el uso de paja, el número de cerdos en el corral muestreado y la edad de los cerdos en el corral, fueron significativamente asociado con Y. enterocolitica estado de
la pluma. El uso de lavado a alta presión con agua fría se asoció significativamente con Y. enterocolitica en la pluma (OR = 84,77, 4,05–1772). Se evaluaron dos métodos de
cultivo para la detección de Y. enterocolitica, uno de los cuales incluía el uso de un agar cromogénico (agar CAY) destinado a la detección de patógenos humanos Y.
enterocolitica. El medio cromogénico se encontró igual o superior a los métodos tradicionales y se utilizó en este estudio. Los aislamientos obtenidos se caracterizaron
mediante biotipificación, serotipificación, espectrometría de masas (MALDI-TOF) y PCR. La caracterización por MALDI-TOF dio resultados idénticos a los del bioserotipado
convencional. Todos los aislados porcinos fueron positivos para el afligir y inv genes por PCR, lo que indica que los aislados eran probablemente patógenos para los seres
humanos.

Conclusiones: Patógeno humano Y. enterocolitica se encontró en casi un tercio de las granjas de cerdos suecas con cerdos de engorde. El uso de lavado a alta
presión con agua fría se asoció con la presencia de Y. enterocolitica en la pluma. Un método de cultivo modificado con agar cromogénico resultó eficaz para la
detección de patógenos. Y. enterocolitica en heces de cerdo. El uso de la espectrometría de masas para la identificación y subtipificación estuvo de acuerdo con
los métodos convencionales de biotipificación y serotipificación.

Palabras clave: Biotipado, Granja, Espectrometría de masas, Porcino, Prevalencia, Factores de riesgo, Serotipificación, Yersinia enterocolitica,

Zoonosis

* Correspondencia: elina.lahti@sva.se
2 Departamento de Control de Enfermedades y Epidemiología, Instituto Nacional Veterinario (SVA),

751 89 Uppsala, Suecia

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© The Author (s) 2018. Este artículo se distribuye bajo los términos de la Licencia Internacional Creative Commons Attribution 4.0 ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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Antecedentes
Yersiniosis causada por Yersinia enterocolitica es una de las zoonosis más
notificadas en la UE [ 1 ] siendo los cerdos el reservorio más importante [ 2 - 4 ].
Inhumanos, Y. enterocolítica causa gastroenteritis mientras que la infección en
los cerdos es asintomática [ 3 , 5 , 6 ]. La mayoría de los pacientes se recupera
por completo, pero la infección puede provocar complicaciones, como
septicemia, artritis reactiva o eritema nudoso [ 5 - 8 ].
La incidencia de yersiniosis es mayor en el noreste de Europa [ 1 ] en
comparación con el resto del continente europeo. En Suecia, la tasa de
incidencia es de 2,27 a 6,18 casos por 100.000 habitantes [ 9 ]. Sin
embargo, se estima que la verdadera incidencia en Suecia es 7.7 veces
mayor [ 10 ]. En Suecia, patógeno Y. enterocolitica se ha detectado
previamente en cerdos de engorde [ 11 ], en cerdos al sacrificio [ 12 ], y en
jabalíes [ 13 ], pero no se ha investigado la prevalencia en las granjas de
cerdos.
Yersinia enterocolitica es una especie heterogénea dividida en seis
biotipos y varios serotipos [ 14 ]. El bioserotipo 4 / O: 3 es el bioserotipo más
frecuente en cerdos y humanos [ 3 , 4 ], mientras que el biotipo 1A se
considera no patógeno [ 15 ]. Detección de patógenos Y. enterocolitica en
muestras no humanas requiere mucho tiempo y es laborioso; se necesita
un paso de enriquecimiento en frío [ dieciséis ]. Un medio de cultivo
cromogénico, CHROMagar ™ Y. enterocolitica,
se ha sugerido para reducir la carga de trabajo y el costo en la detección [ 17 - 19 ].
Los cerdos adquieren la infección en las granjas, ya sea del medio ambiente o a
través de las cerdas, y comienzan a eliminar el organismo en las heces a partir de
las 14 semanas [ 20 - 22 ]. Sin embargo, a la edad del sacrificio, la mayoría de los
cerdos ya no eliminan la bacteria en las heces sino Y. enterocolitica puede aislarse
con frecuencia en las amígdalas [ 23 , 24 ]. Las canales de cerdo y, por tanto, la carne
de cerdo se contaminan en los mataderos por contaminación de la cavidad bucal y
el contenido intestinal [ 5 , 20 ].
El objetivo de este estudio fue estimar la prevalencia de patógenos Y.
enterocolitica en granjas porcinas suecas. Además, evaluamos un método de
detección y comparamos la caracterización por MALDI-TOF con la
biotipificación y serotipificación convencionales.
Métodos
Evaluación del método de cultivo para la detección de Yersinia enterocolitica en
heces de cerdo
Para la enumeración, se utilizaron dos caldos preparados internamente:
solución salina tamponada con fosfato que contiene 2% de sorbitol y sales
biliares al 0,15% (PSB) y solución salina tamponada con fosfato con peptona al
0,5%, manitol al 1% y sales biliares al 0,15% (PMB). Se recogieron cinco
microlitros de material de colonia de un Y. enterocolitica del bioserotipo 2 / O: 9
(Colección de cultivos de la Universidad de Göteborg, Suecia, CCUG 8239) y un
Y. enterocolitica de bioserotipo 4 / O: 3 (Agencia Nacional de Alimentos,
Uppsala, Suecia, SLV412) cultivado
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durante la noche en placa de agar sangre (Blood agar Base no2, Oxoid) con
5% de sangre de caballo, inoculados en 5 mL de caldo, PSB y PMB,
respectivamente, y cuidadosamente mezclados. Se realizó una dilución en
serie transfiriendo 0.5 mL de caldo inoculado de PSB y PMB,
respectivamente, en
4.5 mL de caldo no inoculado hasta una dilución final de 10 - 9.
El recuento de colonias se evaluó colocando 100 µL de caldo de todas las
diluciones con Cefsulodin Irgasan Novobiocin (CIN) (Oxoid, Basingstoke,
Reino Unido) y placas CAY (CHRO-Magar ™ Y. enterocolitica, CHROMagar,
París) en paralelo; las placas se incubaron a 37 ° C durante 24 a 48 h.
Materia fecal de cerdos en fase final de fase final con pruebas negativas de
Y. enterocolitica por cultura fue enriquecido con Y. enterocolitica CCUG 8239
y SLV412. Este experimento se completó, en paralelo, mezclando 3 g de
heces con 3 ml de caldo de PSB inoculado y PMB de una dilución de caldo
inoculado en serie, y diluyendo adicionalmente las mezclas 1:10 en PSB y
PMB respectivamente. A continuación, los cultivos de caldo inoculados y las
mezclas de heces se incubaron a 4 ° C durante 7-8 días. Las mezclas de PSB
se cultivaron de acuerdo con un método modificado del Comité Nórdico de
Análisis de Alimentos (NMKL) núm. 117 [ 25 ] y las mezclas de PMB utilizando
un método comparativo [ 21 ].
En el método NMKL modificado, después del enriquecimiento en frío,
Se transfirieron 0,1 ml de la mezcla de PSB a 10 ml de caldo Rappaport
modificado (MRB) preparado internamente y se incubaron a 22 ° C durante
4 días. Se esparció un asa (10 \ mu l) del caldo enriquecido sobre placas de
agar CIN y CAY, en paralelo. Las placas se incubaron adicionalmente a 30 °
C durante 24 a 48 h.
En el método comparativo, se esparcieron 10 µl de la mezcla de PMB sobre
placas de agar CIN y CAY. Las placas se incubaron a 25 ° C durante 24 a 48 h [ 17
, 21 ]. Sospechado Y. enterocolitica Las colonias se sembraron en una placa de
agar sangre, se incubaron a 25 ° C durante 24 horas y se confirmaron como Y.
enterocolitica utilizando espectrometría de masas de tiempo de vuelo de
ionización por desorción láser asistida por matriz, MALDI-TOF (Bruker
Daltonics, Bremen, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Un total de 82 cepas de Y. enterocolitica se esparcieron en placas de agar
CAY y se incubaron a 25 ° C durante 24 a 48 h (Tabla 1 ). Cincuenta de estas
cepas fueron amablemente proporcionadas por la Agencia de Salud Pública
de Suecia, originalmente aisladas en placas de agar CIN y descritas
anteriormente [ 26 ], dos eran del bioserotipo 4 / O: 3 (SLV412 y SLV413) y se
obtuvieron de la Agencia Nacional de Alimentos de Suecia y una fue una cepa
de referencia (CCUG 8239). Las placas con morfología de colonia inusual se
subcultivaron adicionalmente a 28 y 30 ° C, respectivamente, durante 24 a 48
h. Todas las cepas, excepto las del biotipo 1A, se cultivaron posteriormente en
agar triptona de soja (TSA, Oxoid) y se incubaron a 22 ° C durante 48 h antes
de la bioserotipificación por MALDI-TOF [ 26 ].
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Tabla 1 Caracterización fenotípica de Yersinia enterocolitica aislados obtenidos de pacientes diarreicos (n = 50) y granjas de cerdos de engorde (n = 32)

Origen Granjas (no.) / Bioserotipo Color de colonia en CAY Bioserotipo Prueba de esculina
pacientes (no.) según lo determinado por MALDI- TOF
Después de 24 h Después de 48 h

Porcino 31 4 / O: 3 Blanco / malva Color de malva 4 / O: 3 N/A

Porcino 1 2 / O: 9 Blanco / malva Color de malva 2 / O: 9 N/A

Humano 12 O: 3 Blanco / malva Color de malva 4 / O: 3 N/A

Humano 9 1A Azul Azul opaco N/A N/A

Humano 7 O: 3 Blanco Color de malva 4 / O: 3 N/A

Humano 7 O: 9 Blanco / malva Color de malva 2 / O: 9 N/A

Humano 4 O: 8 Azul Azul opaco Biotipo 1A * +

Humano 4 O: 21 Azul Azul opaco 1A / O: 21 N/A

Humano 3 O: 3 Blanco Blanco 4 / O: 3 -

Humano 2 O: 8 Crecimiento blanco / pobre Color de malva Biotipo 1B * -
Humano 2 O: 27/5 Blanco / malva Color de malva 2 / O: 27 N/A

La Agencia Nacional de Alimentos de Suecia proporcionó bioserotipos para cepas humanas. N / A, no disponible;

+, positivo; -, negativo

* Se utilizó la prueba de esculina para diferenciar entre el biotipo 1A y 1B, si no se podía obtener el subtipo con MALDI-TOF solo

Selección de rebaños
En 2014-2015, el número total de piaras de cerdos en Suecia fue de 1228 [ 27 ]. La
empresa de servicios veterinarios, Swedish Farm and Animal Health, proporciona
servicios de salud animal a la mayoría de estos rebaños. Las manadas de cerdos
que sacrifican más de 1300 cerdos al año y que reciben servicios de Farm and
Animal Health fueron elegibles para su inclusión en el estudio. Se seleccionaron un
total de 105 hatos de cerdos mediante muestreo aleatorio simple. El tamaño de la
muestra se calculó sobre la base de estimaciones de la prevalencia del rebaño
esperada del 40% (IC del 95%), la prevalencia dentro del rebaño del 50% (IC del
95%), así como una sensibilidad de prueba esperada del 80% (IC del 95%). . El
muestreo tuvo como objetivo estimar la prevalencia a nivel de rebaño dentro del
10% de la prevalencia real. Con base en estos supuestos, y ajustando para una
población finita de 1000 rebaños, el tamaño de muestra objetivo fue de 103 hatos
utilizando métodos previamente presentados [ 28 ].
rango de edad, se eligió una unidad con cerdos más cercanos a la edad de 24
semanas. Se recogió una muestra combinada de heces del suelo de cada uno
de los cuatro corrales por granja. Durante la visita, el veterinario llenó un
cuestionario sobre el sistema de producción agrícola. El cuestionario se
administró mediante el sdaps marco de referencia ( http://sdaps.org/ ) y consistió
en preguntas sobre el flujo de animales, limpieza, alimentación, control de
roedores y aves, tipos de pisos y uso de paja. Los cuestionarios se adjuntan
como archivos adicionales 1 y
2 . Para cada uno de los cuatro corrales muestreados, también se registró el
número de cerdos, la edad en semanas y una indicación de la cantidad de
paja utilizada en el corral. Las muestras, junto con el cuestionario, se
enviaron por correo y en un plazo de 3 días al Instituto Nacional Veterinario
(SVA), Uppsala, Suecia.

Detección de Y. enterocolitica en muestras recogidas de granjas porcinas

El análisis de las muestras se inició a las 8 h de su llegada al laboratorio. Se

Muestreo de manadas de cerdos
Se muestrearon un total de 105 granjas con cerdos de engorde entre septiembre
de 2014 y enero de 2015. El muestreo se completó de lunes a jueves. Las
granjas fueron visitadas por un veterinario porcino de Farm and Animal Health.
En cada granja, se seleccionó una unidad con cerdos de engorde para el
muestreo, preferiblemente con cerdos de 16-24 semanas de edad. Una unidad
se definió como un grupo de cerdos mantenidos dentro de un edificio y
destinados a ser sacrificados al mismo tiempo. Dentro de una unidad, los cerdos
se mantuvieron en corrales con 8-12 cerdos por corral. Sin embargo, en las
granjas donde los cerdos tenían acceso al aire libre, el tamaño del grupo variaba
de 10 a 30 cerdos. En granjas con varias unidades de cerdos dentro de este
mezcló una muestra fecal homogeneizada (5 g) con 50 ml de caldo PMB y
se incubó a 4 ° C durante 7-8 días. Se esparció un asa (10 µl) de la capa
superior del homogeneizado en una placa CAY y se incubó a 25 ° C durante
24 a 48 h. Las colonias típicas (colonias blancas, húmedas, lisas, redondas
de 1 a 2 mm con o con una tendencia de "ojo de buey" rodeadas por un
área transparente) se recogieron después de 1 día de incubación y se
subcultivaron en agar sangre durante 24 ha 30 ° C . Colonias blancas en
CAY después de 48 h y probadas positivamente con oxidasa (Bactidrop ™,
Oxoid) se descartaron. Colonias que cambian de color de blanco a malva
(rosa / lila) en placas CAY después de una incubación de 48 hy no
hemolíticas en agar sangre de caballo
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fueron analizados a nivel de especie por MALDI-TOF. Aislamientos confirmados como Y.
enterocolitica fueron almacenados en - 70 ° C.
Caracterización mediante subtipificación MALDI-TOF y
biotipificación y serotipificación convencionales
Para subtipificar con MALDI-TOF, aislamientos de Y. enterocolítica se
esparcieron sobre placas de triptona-soja-agar (TSA) sin sangre y se
incubaron a 22 ° C durante 24 h. Posteriormente, se siguió un protocolo para
la subtipificación MALDI-TOF [ 26 ]. Para la biotipificación y serotipificación
convencionales, estas placas se incubaron durante 48 h. El biotipado se
realizó de acuerdo con ISO / TC 34 / SC 9 N donde se ensayaron la
hidrolización de la esculina así como la producción de xilosa, pirazinamidasa,
lipasa, trehalosa e indol. Se realizó la serotipificación y de acuerdo con las
instrucciones del fabricante como aglutinación en portaobjetos utilizando Y.
enterocolit- ica antisueros O3 y O9 (Reagensia AB, Solna, Suecia). Se utilizó
una solución de cloruro de sodio como control negativo.
Análisis de PCR
Un objetivo de PCR en tiempo real para el apego y la invasión
codificados cromosómicamente ( afligir) se utilizó el gen [ 29 ]. Se
adquirieron cebadores y una sonda TaqMan MGB de Eurofins MWG
Operon, Alemania (Tabla 2 ). El protocolo [ 29 ] se utilizó con las siguientes
modificaciones: la PCR se realizó en volúmenes de reacción de 15 µL
que contenían 2 × PerfeCTa qPCR Toughmix con bajo ROX (Quanta
Biosciences, Gaithersburg, MD), 500 nM de cada cebador, 100 nM de
sonda y 2 µL de plantilla. La PCR se realizó en un termociclador ABI
7500 Fast (Applied Biosystems, Foster City, CA) con el siguiente perfil de
temperatura: 95 ° C durante 3 min seguido de 40 ciclos de 95 ° C durante
3 sy 60 ° C durante 30 s en los que se midió la fluorescencia. Se añadió
un control positivo interno (IPC) a cada PCR utilizando un kit de IPC
exógeno TaqMan disponible comercialmente (Life Technologies, EE.
UU.). El kit de reactivos incluía cebadores, una sonda VIC, ADN diana de
IPC y solución de bloqueo. El ADN diana de IPC se diluyó × 50 para
habilitar un umbral de ciclo esperado (Ct) para el IPC dentro del rango
35–38. Al reactivo del kit diluido, 6 μL
ddH 2 Se añadió O y 5 μl de plantilla. Si el Ct de IPC fue> 38 y no se
detectó Ct para la diana bacteriana
Tabla 2 Secuencias de cebadores
qPCR Nombre de la cartilla
Y. enterocolitica, enfermo gen [ 29 ] Imprimación directa:
Imprimación inversa:
Sonda: (problema FAM-MGB)
Género Yersinia, inv- gen [ 30 ] Imprimación directa:
Imprimación inversa:
Sonda: (problema FAM-MGB)
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gen, la plantilla se diluyó 1:10 con ddH 2 O y sometidos a una segunda
PCR. Actuar ≤ 40 fue considerado un posi-
resultado positivo [ 13 ].
También un Yersinia PCR específica de género dirigida a inv
se utilizó el gen para cribar los aislamientos [ 30 ].
Análisis de factores de riesgo
La correlación entre las prácticas de producción registradas en la encuesta a nivel
del corral y del rebaño y las probabilidades de detección de Y. enterocolitica en
las muestras fecales recolectadas fue probado por regresión logística de variable
mixta en el lme4 paquete (versión 1.1–12) para R ( versión 3.2.2). Todos los
modelos interpretados incluyeron un término de intersección aleatoria
(u manada) para tener en cuenta las (mediciones repetidas del corral dentro de
cada hato. La correlación intraclase c) oeficiente
2
σ manada
(ICC) también se calculó ICC = ( ) desde un
σ manada
2
+ π2/ 3
modelo vacío: logit (p yo) ∼ β 0 + tu manada (i).
Resultados
Evaluación de métodos de cultivo
Las diluciones de caldo produjeron un crecimiento detectable de hasta 10 - 8
(4-7 colonias) en placas CAY. En placas CIN, Y. enterocolitica se detectó
hasta 10 - 8 usando caldo PMB (4 colonias) y hasta 10 - 7 utilizando caldo
PSB (15 colonias). En muestras fecales enriquecidas, Y. enterocolitica se
detectó hasta una dilución de 10 - 9 cuando se usa PMB y hasta 10 - 8
al usar PSB.
En agar CAY, colonias de la clínica Y. enterocolitica
los aislamientos eran suaves o con tendencia a enjambrar visto como una
fina bruma (Fig. 1 ) excepto por una cepa que crece mal en agar CAY (Tabla 1
). Las colonias de este y otro aislado clínico tenían solo una tendencia de
color rosa / malva después de 48 h de incubación a 25 ° C (Tabla 1 ). Sin
embargo, las colonias de otras tres cepas del bioserotipo 4 / O: 3 eran
blancas con un "ojo de buey" transparente en todas las temperaturas de
incubación probadas (Fig. 2 ). Las colonias de 17 cepas clínicas eran
enjambres y de color azul metálico oscuro (Fig. 2 ).
Secuencia de cebador Amplicón (pb)
CCCAGTAATCCATAAAGGCTAACATAT 163
ATGATAACTGGGGAGTAATAGGTTC
TGACCAAACTTATTACTGCCATA
TTGACACAACCTTAGGCAATATGG 73
ACTGGTCAATGGTGCGCTATAA
CGTTATCACGGATCACAATGACGGCA
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Figura 1 una Yersinia enterocolitica aislado de bioserotipo 2 / O: 9, que muestra un color rosa
con un "ojo de buey" de color malva, en CHROMagar ™ Y. enterocolitica ( CAY) incubadas a 25 ° C
durante 24 a 48 h. si Enjambres de colonias de Yersinia enterocolitica bioserotipo 1B / O: 8
aislado en CHROMagar ™ Y. enterocolitica ( CAY) placa incubada a 25 ° C durante 24 a 48 h

Fig. 3 Número de piaras de cerdos muestreadas por mes. Las celdas negras en el diagrama

representan muestras de bolígrafo donde Y. enterocolitica fue aislado; las celdas grises representan

muestras negativas

Media nacional sueca. De las granjas integradas, el número promedio de

Figura 2 una Yersinia enterocolitica bioserotipo 4 / O: 3 aislado en CHROMagar ™ Y.
enterocolitica ( CAY) incubadas a 25 ° C durante 24 a 48 h. Formaciones de colonias blancas
con una "diana" transparente. si
Yersinia enterocolitica bioserotipo 1A / O: 8 aislado en CHROMagar ™
Y. enterocolitica ( CAY) incubadas a 25 ° C durante 24 a 48 h. Colonias de enjambre
azul con "ojo de buey" azul metálico oscuro
cerdas fue de 293 (rango 45-1100).
El manejo de las granjas muestreadas varió. De las 105 granjas, dos granjas
tenían cerdos de engorde con acceso al aire libre. Solo cinco granjas informaron
que alimentaban a los cerdos de engorde con una ración seca, el resto usaba un
sistema de alimentación líquida. Dieciocho de las granjas informaron que usaban
una ración de alimento completa para los cerdos de engorde y las granjas
restantes usaban su propio grano producido o comprado con una amplia gama
de otros ingredientes de alimentos, incluidos: granos de destilería, suero, soja,
papas, leche, subproductos de producción de pasta y pan.

Granjas de cerdos
La presencia de paja evaluada como "al menos visible" en los corrales de acabado
El muestreo de 105 granjas de cerdos con cerdos en finalización se realizó entre
se informó en todas las granjas, excepto en cuatro, y se informó que la mayoría de los
septiembre de 2014 y enero de 2015 (Fig. 3 ). Las granjas muestreadas eran de
corrales tenían mucha paja. En todas las fincas con acceso al aire libre, excepto en
14 condados suecos, y el número por condado se calculó para representar la
las dos granjas con acceso al aire libre, se utilizó piso de concreto con rejillas
distribución no uniforme de las granjas de cerdos suecas. Un archivo de mapa
parciales en las que se utilizó lecho de paja profunda. Noventa de las granjas
adicional muestra la distribución geográfica (archivo adicional 3 ). Cincuenta y dos
informaron haber vaciado el establo entre todos los lotes de cerdos y 12 informaron
(49,5%) de las granjas eran rebaños de finisher especializados, 46 (43,8%)
que "casi siempre" vaciaron el establo entre lotes. Treinta y siete granjas informaron
fueron paridas para terminar las unidades de producción de las cuales 19
utilizar raspado mecánico entre lotes de cerdos, 96 utilizaron limpieza a alta presión
(18,1%) eran satélites de piscinas de cerdas, seis (5,7%) eran reproductores
con agua fría o caliente y detergente, 43 granjas utilizaron un desinfectante después
suppli - ers y uno (0,95%) era un centro de un grupo de cerdas. La producción
de la limpieza y 35 granjas informaron que incluyeron un período de secado después
del grupo de cerdas constituye un hato central que atiende y alquila cerdas
de la limpieza y antes de agregar nuevos cerdos a la granero.
preñadas para el parto a hatos satélite. Los lechones se mantienen y crían en los
rebaños satélite mientras las cerdas regresan a la unidad central después del
destete. Entre las granjas muestreadas, el número promedio de cerdos de
engorde producidos por año fue de 5649 (rango 1346–39,940). Las granjas
especializadas en la producción de acabado tuvieron un promedio de 6353
cerdos sacrificados por año, que es un poco más grande que el Yersinia enterocolitica en granjas porcinas

Yersinia enterocolitica se detectó en 32 (30,5%) de las 105 granjas

muestreadas, y se obtuvieron un total de 92 aislamientos porcinos. Las cuatro
muestras de pluma dieron positivo a 14
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de las 32 granjas, en cuatro granjas, tres muestras de corrales fueron positivas,
en nueve granjas dos y en cinco granjas solo una muestra de corrales fue
positiva. Y. enterocolitica se detectó durante todo el período de muestreo. El
bioserotipo 4 / O: 3 se identificó en todas las fincas menos una, donde se
identificó 2 / O: 9. Solo se identificó un bioserotipo por granja.
Todos los aislamientos porcinos se caracterizaron con métodos
convencionales de biotipificación y serotipificación y se subtipificaron por
MALDI-TOF, mientras que todas las cepas humanas que aún no se determinó
como biotipo 1A fueron subtipificadas por MALDI-TOF solamente. La
bioserotipificación con métodos convencionales y la subtipificación por
MALDI-TOF dieron resultados idénticos (Tabla 1 ). El método MALDI-TOF podría
subtipificar todos los aislamientos porcinos y todos menos seis de las cepas
humanas; estos tuvieron que ser evaluados más a fondo para la hidrólisis de
aescu- lin para discriminar entre biotipo 1A y 1B [ 26 ]. Todos los aislados porcinos
dieron una señal positiva en la PCR para el
Yersinia ensayo específico de género, así como en la PCR para el gen de virulencia
( afligir) ensayo; la tensión de control de Y. pestis
fue positivo solo en el Yersinia género PCR.
Análisis de factores de riesgo
Ninguno de los factores de riesgo explorados, incluido el tamaño de la manada, el
tipo de manada, el flujo de cerdos, el tipo de alimento, el acceso al aire libre, la
evidencia de aves y roedores en la manada, el uso de paja, el número de cerdos en
el corral muestreado y la edad de los cerdos en la pluma se asociaron
significativamente con Y. enterocolitica estado de la pluma. El uso de lavado a alta
presión con agua fría se asoció significativamente con Y. enterocolitica
en el corral [OR = 84.77, (4.05-1772)] después de ajustar por otros métodos
de lavado usados en el rebaño. La mayor proporción de la variación del
nivel de la pluma Y. enterocolitica estado estaba a nivel de hato (ICC = 0,89)
lo que indica que Y. enterocolitica se agrupa en rebaños. Resumen
detallado de hallazgos no significativos y tabulación de Y. enterocolitica el
estado de los rebaños por las variables medidas se incluyen en archivos
adicionales 4 y 5 ).
Discusión
Para identificar medidas rentables para reducir la incidencia de la
yersiniosis humana, es necesario comprender la prevalencia y la
epidemiología dentro de las granjas porcinas. El conocimiento actual es
insuficiente sobre la incidencia, las posibles diferencias geográficas y otras
diferencias en la prevalencia del rebaño o los factores de riesgo.
Las piaras de cerdos incluidas en este estudio representaron la
distribución geográfica general de las piaras de cerdos en Suecia, con la
mayoría de las piaras en la parte sur del país. En general, patógeno Y.
enterocolitica
se detectó en el 30,5% de las piaras porcinas. Esto es menor que en muchos
estudios previos en otros países de la UE donde se han descrito prevalencias
de rebaño del 69-100% cuando
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se han analizado muestras fecales [ 14 ]. Sin embargo, el pico de excreción fecal
es a los 2-5 meses [ 22 - 24 , 31 ] y los cerdos de nuestro estudio tenían entre 4 y 6
meses de edad, por lo que la prevalencia puede estar subestimada. Además,
una combinación de más de un paso de enriquecimiento podría haber resultado
en una mayor prevalencia [ 32 ].
La prevalencia de corrales dentro de los rebaños positivos varió de 1/4 a 4/4
corrales. El ICC calculado (0,89) del modelo con un efecto aleatorio para la
agrupación dentro del rebaño indicó un grado muy alto de agrupación por rebaño.
Esto indica que los factores que afectan Y. enterocolitica el estatus en estos
rebaños se encuentra a nivel del rebaño, no factores que varían según el corral o
el animal dentro de los rebaños. El hallazgo de que el uso de lavado a alta presión
con agua fría era un factor de riesgo para Y. enterocolitica es quizás contradictorio.
Sin embargo, un estudio de las prácticas de limpieza en los rebaños de cerdos de
Ontario, Canadá, mostró que la limpieza con agua fría estaba asociada con
Salmonela derramamiento [ 33 ]. Es razonable considerar las variables de limpieza
juntas como un conjunto de prácticas en el hato y no como factores de manejo
independientes. Esto puede explicar el mayor riesgo de Yersinia cuando se lava con
agua fría, ya que podría ser simplemente una indicación de que el rebaño no utiliza
otro conjunto de procedimientos de lavado que sean protectores pero no
reconocibles en el estudio actual. El hecho de que no se hayan identificado otros
factores de riesgo importantes de higiene u otros factores de riesgo a nivel del
rebaño, a pesar de la alta agrupación del resultado dentro del rebaño, puede estar
relacionado con que las preguntas formuladas en la encuesta se relacionen
únicamente con la fase final de producción. En otros estudios, las rutinas de
desinfección adecuadas han sido protectoras [ 34 ]. Si los rebaños de engorde se
infectan a partir de sus rebaños de origen, entonces los factores de riesgo
importantes para Y. enterocolitica El estado se encontraría en el vivero o en los hatos
de parto y, por lo tanto, daría lugar a un alto grado de agrupación del resultado
dentro del hato (ICC = 0,89). Para comprender esta propagación potencial desde las
primeras etapas de producción hasta la fase final, una investigación longitudinal de Y.
enter- ocolitica Serían necesarios los hatos de finalización positiva y sus viveros de
origen y los hatos de cerdas que incluyen la tipificación molecular de los aislados
bacterianos. También se necesitan más estudios para establecer la prevalencia
dentro del rebaño, ya que cuatro muestras de corrales eran demasiado pocas para
calcularlo con precisión. El enriquecimiento en frío se utiliza ampliamente para la
detección de Y. enterocolitica de muestras clínicas, alimentarias y ambientales [ dieciséis
]. En este estudio, se aplicó un paso de enriquecimiento en frío de 1 semana. Los
intentos de acortar los pasos de cultivo han dado resultados contradictorios. El
enriquecimiento en frío de 1 semana fue tan sensible como los pasos de
enriquecimiento en frío más largos [ 25 ]. También se han aplicado pasos de
enriquecimiento en frío más cortos [ 35 ]. Sin embargo, el enriquecimiento en frío de
14 días fue superior a 7 días en el aislamiento de patógenos Y. enterocolitica [ 36 ].
Además, utilizando un método de detección con períodos de enriquecimiento en frío
de 7
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y 14 días en combinación dieron como resultado más aislamientos [ 32 ] la aplicación
de más de un paso de enriquecimiento podría haber aumentado la estimación de
prevalencia de nuestro estudio. Sin embargo, la subtipificación adicional por
MALDI-TOF se comparó con la bioserotipificación convencional para una
caracterización más rápida y menos costosa de los aislados. Además, la
subtipificación por MALDI-TOF se comparó con la bioserotipificación convencional
para una caracterización más rápida y menos costosa de los aislados.
En este estudio, PMB pareció ser un poco más sensible que PSB en la
detección de Y. enterocolitica en caldo y heces de cerdo enriquecidas. Sin
embargo, como se detectaron menos de cinco colonias en las placas de los 10 - 9
dilución las diferencias entre los dos métodos no se probaron con métodos
estadísticos. Además, probamos un medio selectivo cromogénico, agar CAY,
para permitir una detección más fácil de la bacteria. Según el conocimiento de
los autores, esta placa no ha sido probada para la detección de Y. enterocolitica en
muestras de heces porcinas, pero se obtuvieron resultados prometedores en un
estudio de muestras de heces humanas [ 18 ]. En comparación con el
CINmedium, el uso de placas CAY mejoró aún más la detección de sospechas
de patógenos Y. enterocolitica colonias de heces de cerdo como el Y.
enterocolitica las colonias fueron más fáciles de identificar en placas de agar
CAY probablemente debido a la supresión de la población microbiana
competidora. Sin embargo, se obtuvo una alta tasa de recuperación comparable
utilizando ambos métodos.
Colonias de tres clínicas Y. enterocolitica cepas y la cepa CCUG
frecuentemente subcultivada utilizada en nuestro laboratorio no cambiaron
de color a malva en las placas CAY pero permanecieron blancas incluso
cuando se incubaron a 30 ° C, lo que contrasta con los hallazgos de otros
autores [ 17 ,
18 , 37 ]. El subcultivo frecuente podría haber dado como resultado el color de la
colonia atípico, ya que una cepa CCUG menos subcultivada obtenida del stock
de cultivo congelado tenía colonias malva (datos no incluidos).
El bioserotipo 4 / O: 3 fue el bioserotipo más común en las granjas porcinas
suecas, ya que se detectó en todas las granjas excepto en una en la que se
encontró el bioserotipo 2 / O: 9. El bioserotipo 4 / O: 3 es el bioserotipo más
común en cerdos en varios países europeos [ 1 , 38 - 40 ]. Solo se detectó un
bioserotipo en cada granja, lo que indica que pocos bioserotipos están
circulando dentro de las granjas porcinas suecas. Todos los aislados porcinos
tenían el afligir gen de patogenicidad, confirmando la patogenicidad de todos los
aislamientos.
Conclusiones
Patógeno humano Y. enterocolitica se encontró en casi un tercio de las
granjas de cerdos suecas con cerdos de engorde, lo que confirma la
importancia de los cerdos como reservorio de este patógeno. Para disminuir el
riesgo para la salud pública,
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Se necesitan métodos rentables para controlar la infección en el reservorio de
cerdos.
Archivos adicionales
Archivo adicional 1. Un cuestionario con preguntas sobre el sistema de gestión de la explotación y
cumplimentado por el veterinario.
Archivo adicional 2. El cuestionario traducido al inglés.
Archivo adicional 3. Un mapa que muestra los rebaños de cerdos muestreados por condado. La distribución de
las muestras refleja la distribución no uniforme de las granjas de cerdos suecas.
Archivo adicional 4: Apéndice Tabla S1. La proporción de rebaños posi-
vivo por Yersinia enterocolitica para cada uno de los niveles de variables categóricas registrados en el
cuestionario. los PAGS- valores y razones de probabilidades asociadas para la asociación de cada variable con
el nivel de la pluma Y. enterocolitica estado, probado por regresión logística controlando las mediciones
repetidas del corral dentro del rebaño mediante un efecto aleatorio.
Archivo adicional 5: Apéndice Tabla S2. Un resumen de la continua
variables registradas en el cuestionario y el PAGS- valores y los odds ratios asociados para la
asociación de cada variable con el nivel de la pluma Y. enterocolitica estado, probado por regresión
logística controlando las mediciones repetidas del corral dentro del rebaño mediante un efecto
aleatorio.
Contribuciones de los autores
ETL inició el estudio. ETL, TRO, MS y AS planificaron el muestreo y selección de los rebaños. ETL
y MS fueron responsables de la coordinación del muestreo. TRÅ planificó la evaluación del método
de detección. TRÅ, AA y KJ fueron responsables de los análisis de laboratorio. TRO realizó los
análisis estadísticos. TRÅ redactó el manuscrito. Todos los autores contribuyeron al manuscrito.
Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.
Detalles del autor
1 Departamento de Microbiología, Instituto Nacional Veterinario (SVA), 751 89 Uppsala, Suecia. 2 Departamento
de Control de Enfermedades y Epidemiología, Instituto Nacional Veterinario (SVA), 751 89 Uppsala,
Suecia. 3 Sanidad animal y agrícola, Kungsängens Gård 6B, 753 23 Uppsala, Suecia. 4 Departamento de
Ciencias Clínicas, Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas (SLU), Box 7070, 750 07 Uppsala, Suecia.
Agradecimientos
Agradecemos a las granjas y veterinarios participantes por su buena cooperación, y a Susanne Thisted
Lambertz, de la Agencia Nacional de Alimentos de Suecia, a Kristina Rizzardi y Cecilia Jernberg de la
Agencia de Salud Pública de Suecia por su asesoramiento científico y por proporcionarnos aislados
humanos. de Y. enterocolitica. Los laboratorios de microbiología clínica suecos son muy reconocidos por
el aislamiento de los aislados humanos. Agradecemos a Susanne André (SVA) por la asistencia técnica y
Linda Svensson (SVA) por las excelentes fotografías.
Conflicto de intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en competencia.
Disponibilidad de datos y materiales
Los conjuntos de datos utilizados y analizados durante el estudio actual están disponibles del autor
correspondiente a solicitud razonable.
Consentimiento para la publicación
Se obtuvo el consentimiento de los criadores de cerdos para la publicación del estudio.
Aprobación ética y consentimiento para participar
Se obtuvo el consentimiento de los criadores de cerdos para participar en el estudio.
Fondos
Se agradece enormemente el apoyo financiero de la Junta de Agricultura de Suecia.
Råsbäck et al. Acta Vet Scand (2018) 60:39 Página 8 de 8

Nota del editor 20. Nesbakken T, Eckner K, Hoidal HK, Rotterud OJ. Ocurrencia de Y. enterocolitica en los cerdos de

Springer Nature permanece neutral con respecto a los reclamos jurisdiccionales en mapas publicados y matanza y consecuencias para la inspección de la carne, procedimientos de sacrificio y faenado. Adv

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