La Pared bacteriana

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Cubiertas superficiales

Las cubiertas que rodean la célula bacteriana se han identificado por

medio de técnicas de tinción en microscopía óptica y electrónica, y
técnicas de aislamiento y caracterización bioquímica de los componentes
celulares.
Las principales cubiertas son:

cápsulas y limos
la pared celular de las bacterias Gram-positivas
la pared celular de las bacterias Gram-negativas
la membrana plasmática
los mesosomas (invaginación de la membrana plasmática)

La relación topográfica entre la pared celular y la membrana plasmática

se observa en la microfotografía electrónica de Micrococcus
lysodeikticus (A) y de Bacteroides melaninogenicus (B).
 A.  Microfotografía electrónica de la bacteria Gram positiva Micrococcus
lysodeikticus mostrando la gruesa capa de peptidoglicano que conforma la pared celular
(cw), por debajo de ella la membrana plasmática (cm), un mesosoma(m), y el nucleoide (n).
B. Célula bacteriana procesada mostrando la línea de fractura entre la membrana
citoplasmática (m.i.) y la  pared celular (m.e.). Barra = 1 µm.

Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una
pared celular de peptidoglicanos que les confieren su forma característica
y les provee de protección mecánica.

Dos grupos de bacterias carecen de pared celular:

los Mycoplasma que poseen solamente membrana celular

las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de sintetizar su
pared celular

MET de Mycoplasma

La pared celular bacteriana rodea al protoplasto. La pared bacteriana

es permeable a las sales y a muchas sustancias de bajo peso molecular.
No es rígida sino elástica como el "cuero" de una pelota de fútbol, el
protoplasto bacteriano confiere una cierta rigidez al conjunto protoplasto
+ pared que lo rodea, derivada de su presión interna o turgencia (al igual
que la cámara hinchada de la pelota).

La presión interna del protoplasto esta determinada osmóticamente. Se

debe tener en cuenta que la membrana citoplasmática es la verdadera
barrera osmótica (es semipermeable y controla la entrada y salida de
sustancias a la célula).

La pared celular y la plasmólisis

La semipermeabilidad de la membrana citoplasmática y la permeabilidad

de la pared celular originan, entre otros, el fenómeno de plasmólisis. Este
fenómeno se observa cuando la tonicidad del medio externo es mayor
que la del protoplasto (medio hipertónico) en estas condiciones el agua
sale del protoplasto y este se encoge por lo que la membrana
citoplasmática se separa de la pared.

La pared celular y la coloración de Gram

La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado

en la Tinción de Gram (1884). La propiedad de teñirse o no de violeta
oscuro (Gram positivas o Gram negativas) por esta coloración es un
criterio de clasificación importante correlacionable con otras propiedades
bacterianas. Unos pocos organismos son Gram-variables.

Tanto las Gram-positivas como las Gram-negativas captan la misma

cantidad de cristal violeta (CV) e iodo (I). El complejo CV-I sin embargo
es atrapado dentro de la célula Gram positiva por la deshidratación y la
reducción del tamaño de los poros de la pared resultante del proceso de
lavado con solvente. En contraste en las Gram negativas la fina (y
probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la
extracción por el solvente del complejo.

Avala lo antedicho el hecho que, si después de su tinción se tratan con

lisozima bacterias Gram positivas, se ve que los protoplastos siguen
teñidos, pero pierden el colorante si se los trata con alcohol. Esto indica
que el colorante es fijado a nivel del protoplasto, y que la pared
celular de las bacterias Gram positivas es la que impide la extracción
del colorante. Corroborando esta suposición se observa que
cuando Bacillus subtilis emerge de su espora su pared celular esta
"inmadura" y se comporta como Gram negativa. Cuando la pared
celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva.

La pared bacteriana: Estructura Química

El esqueleto de la pared celular bacteriana está constituido por un

heteropolímero, el peptidoglicano mureína. El mismo, y las enzimas que
intervienen en su síntesis, son una característica general de todas las
eubacterias. Lasarqueobacterias no poseen mureína.

Esta macromolécula esta formada por una secuencia alternante de N-

acetil-glucosamina (NAG) y el ácido N-acetilmurámico (NAM) unidos
mediante enlaces ß-1,4. La cadena es recta y no ramificada, constituyendo
la estructura básica de la pared celular (su "backbone").  

El ácido N-acetilmurámico es un éter resultante de la unión del oxhidrilo

del C3 de la molécula de N-acetil-glucosamina con el oxhidrilo del ácido
láctico. 

El grupo ácido del láctico enlaza con una pequeña cadena peptídica.
Entre los aminoácidos típicos de esta cadena se encuentran la L-alanina,
ácido D-glutámico, ácido m-diaminopimélico o la L-lisina o D-alanina.
Los diaminoácidos al tener dos grupos amino pueden formar enlaces
peptídicos con aminoácidos dicarboxílicos de otra cadena. A través de
estas uniones peptídicas se unen entre sí las cadenas de heteropolímeros
formando una molécula gigante, el sáculo de mureína.

Representación esquemática de los peptidoglicanos

Debemos destacar lo siguiente:

Las formas D de la Alanina y del ácido glutámico no se presentan en las

proteínas de los eucariotas. Tampoco en dichas proteínas se encuentra el
ácido m-diaminopimélico. La secuencia alternante de N-
acetilglucosamina y N-acetilmurámico no se encuentra en eucariotas
Estas características estructurales hacen que las bacterias (al igual que con
la diferencia en los ribosomas) presenten un "talón de Aquiles"
susceptible de ser utilizado en su contra por los fármacos de la terapia
medica. Los agentes terapéuticos que actúan en el ámbito de la pared
celular bacteriana y tienen como "blanco" las enzimas involucradas en su
síntesis son en gran medida inocuos para el organismo eucariota
sometido a una agresión bacteriana (las "balas mágicas" visualizadas por
Paul Erlich).
La pared celular de las bacterias Gram positivas

Sus principales características son:

La red de mureína esta muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas

Los aminoácidos implicados varían de una especie a otra.
La constitución del esqueleto es característica de la especie y constituye una buen
parámetro taxonómico
Es frecuente la presencia de los aminoácidos L-diaminopimélico o de lisina
Los polisácaridos están unidos por enlaces covalentes (en el caso de tenerlos) Su
 contenido proteico es bajo.
En ella se encuentran ácidos teicoicos

La pared celular de las bacterias Gram negativas

La red de mureína presenta una sola capa

La constitución del saco de mureína es igual en todas las bacterias Gram
negativas.
Contiene siempre únicamente meso-diaminopimélico
Nunca contiene lisina
No se encuentran puentes interpeptídicos.
Se encuentran grandes cantidades de lipoproteínas y lipopolisacáridos que
representan hasta el 80 % del peso seco de la pared celular. Para mantener la
estabilidad de las capas de lipopolisacáridos es necesario el ión Ca++.
En las bacterias Gram negativas la capa de mureína puede ser atacada por la
lisozima cuando se las trata con EDTA (Etilen-diamino-tetracético). Este agente,
al quelar el Ca++ libera una parte de los lipopolisacáridos y permite la acción de la
enzima..
Hasta ahora no han podido demostrarse ácidos teicoicos.

Acción de la lisozima y la penicilina

Un viejo refrán dice que  Dios llama a la puerta de un hombre solo una
vez en la vida. No es el caso de Sir Alexander Fleming a la de él llamo
dos veces (o más), aunque es necesario coincidir que no es suficiente
con el llamado, amén de él, es necesario escuchar y responder.

Según se cuenta el descubrimiento de la lisozima tuvo lugar cuando las

lagrimas de un niño (que estaba en el laboratorio donde trabajaba
Fleming), caen en un tubo y aclaran una suspensión Micrococcus
lysodeikticus, que, hoy se sabe, es la bacteria mas sensible a la lisozima,
ma siii....

Este hecho esta un poco menos difundido que la novelesca historia de

la espora de Penicilium que entro por la ventana del laboratorio de
Fleming, cayo en una placa de Petri y al crecer puso de manifiesto la
acción bactericida del antibiótico que llamo penicilina....( Florey y
Chain en Oxford la aislaron, dieron las pautas de su producción
industrial y al hacerlo pusieron en marcha la era de los antibióticos, por
ello, Fleming , Florey y Chain recibieron el premio Nobel en 1945 )
La lisozima descubierta en 1922, es una enzima que rompe el enlace
beta glucosídico de la mureína. Se la encuentra en el líquido lagrimal,
secreciones nasales y en la clara de huevo. También se la ha aislado de
bacterias y bacteriófagos. La acción de la lisozima se pone en evidencia
por un aclaramiento rápido de una suspensión bacteriana, Micrococcus
lysodeikticus ya se lisa con 1 ug de lisozima / ml. Para lisar otras
bacterias p.e Bacillus megaterium se necesitan 50 ug / ml . La capa de
mureína de muchas bacterias Gram negativas solo es atacada por la
lisozima cuando se añade EDTA (Etilen-diamino-tetracético).

El mecanismo de lisis es el siguiente: la destrucción de la pared celular

deja al protoplasma de las bacterias rodeado únicamente por la
membrana celular ("protoplasto"), lo cual convierte a la bacteria en un
organismo extraordinariamente sensible a las variaciones de tonicidad
del medio, esta es la base del fenómeno de aclaraciónque tiene lugar
luego de la acción de la lisozima, cuando la solución es  hipotónica.
Los protoplastos son estables en medios hipertónicos e isotónicos; en
medios hipotónicos, tal lo señalado, estallan y dejan restos de
membrana citoplasmática llamados "fantasmas" (ghosts).

El proceso de síntesis de la pared celular comienza en el citoplasma

bacteriano, a partir de N-acetilglucosamina-1-fosfato que se une al UDP
(uridin difosfato).

El UDP se combina con la N-acetilglucosamina-1-fosfato, para dar UDP-N-

acetilglucosamina que primero forma el éter láctico y luego en sucesivos pasos
enzimáticos se unen al mismo los cinco aminoácidos para formar el N-
acetilmurámico.

En el siguiente paso, que ocurre en el ámbito de la membrana citoplasmática la

molécula que es hidrófila cambia a lipófila, lo cual facilita su transporte, por el
cambio del UDP por undecaprenil-fosfato y el agregado de un pentapéptido de
glicina a nivel de la L-lisina
En la siguiente fase, en el ámbito de la pared celular, se produce la
transglucosidación y formación del enlace beta alargando de esta manera la
molécula.
Los enlaces transversales entre moléculas del polímero se produce por
transpeptidación, se libera una D-alanina y el grupo carboxilo se une a un grupo
amino de la lisina de otro oligopéptido, también se libera el undecaprenil-fosfato.

La penicilina interfiere en este ultimo paso, es decir impide la unión

transversal o puente interpeptídico pero no la elongación del polímero.
De la misma manera actúan las cefalosporinas, vancomicina,
bacitracina y cicloserina. Debe notarse que la síntesis de la pared no se
realiza cuando no hay lisina disponible o cuando se impide la
racemización de la L-alanina y por lo tanto la disponibilidad de la D-
alanina por efecto de la c-clicoserina (oxamicina).

La membrana externa

En la bacterias Gram negativas se observa por fuera del saco de

mureína una capa semejante a la membrana celular por lo que se ha
dado en llamarla membrana externa, es de composición compleja y en
ella intervienen fosfolípidos, proteínas y lipopolisacáridos.

Cumple funciones mecánicas y fisiológicas. En esta bicapa lipídica

(compuesta por el lípido A del lipopolisacárido en su parte externa y
los fosfolípidos en la interna) se encuentran proteínas que la atraviesan
en todo su espesor y que delimitan poros (por eso se denominan
porinas) hidrófilos que permiten el paso de sustancias hidrófilas de
bajo peso molecular. No se encontraron sistemas de transporte activo.

La membrana externa se encuentra unida al peptidoglicano a través de

la proteína conocida como lipoproteína de Braun cuya parte lipídica se
encuentra en la membrana y la proteína unida covalentemente a la
mureína. de la membrana. La membrana externa tiene unos puntos de
contacto con la membrana interna que se denominan uniones de Bayer
y que se supone son importantes en el transporte a través de la
membrana.

ESPACIO PERIPLÁSMICO

En las bacterias Gram negativas el espacio que va desde membrana

plasmática a membrana externa (ver figura abajo) se denomina espacio
periplásmico, tiene aparentemente una consistencia gelatinosa. 

En numerosas bacterias contiene abundantes enzimas, por ejemplo aquellas que

inician la degradación de substratos como la glucosa, o la transformación de
compuestos inorgánicos como los nitratos. 
También se encuentran las depolimerasas que actúan sobre los biopolímeros
(proteasas, polisacaridasas, nucleasas y otros). 
Otras enzimas importantes presentes en el espacio periplásmico son las b-
lactamasas responsables de la destrucción de los antibióticos  b-lactámicos y, por
tanto, de la resistencia de ciertas bacterias a ellos.
Asimismo se encuentran allí  sensores químicos destinados a detectar variaciones
ambientales. 

Algunas de estas enzimas están libres y otras ligadas a la membrana

citoplasmática.

En las bacterias Gram-positivas no hay, en realidad, espacio

periplásmico; pero pareciera que la parte más interna del
peptidoglicano puede desarrollar una función similar reteniendo
mediante fuerzas electrostáticas moléculas de enzimas equivalentes a
las periplásmicas de las Gram-negativas.

Los lipopolisacáridos

Los lipopolisacáridos con una estructura característica se encuentran en

la capa externa, a diferencia de la membrana plasmática los forman:

La parte glucosídica corresponde a dos molécula de N-acetilglucosamina (es,

para ponerlo en un nombre mas largo una glucosaminadisacárido, es la
estructura equivalente al
 glicerol de los fosfolípidos) sus grupos hidroxilos están esterificados
por ácidos grasos C12, C16, C18, que al ser hidrofóbicos se orientan
hacia el interior. Se lo conoce como lípido A

unida a ellas y proyectándose al exterior se encuentra una cadena glicosídica.

Esta cadena posee una zona central R y a ella le sigue extermamente la cadenas
heteropolisacárida O- especifica que representa a los antígenos somáticos.

La función del lipopolisacárido en las bacterias es la de incapacitar las

defensas del huésped, proporcionar carga negativa a la superficie de la
membrana y estabilizarla.

Constituyen una de las endotoxinas más activas de las bacterias, son

fuente de origen de fiebre, diarrea y provocan una fuerte respuesta
inmune, siendo uno de los agentes responsables del llamado «shock
endotóxi producido cuando las células del sistema inmune entran en
contacto con él. Tienen gran importancia en el diagnóstico
bacteriológico y en la identificación de infecciones.

Distintas cepas se diferencian entre sí por las llamadas cadenas laterales O

específicas ya señaladas, hecho que puede ponerse de manifiesto por métodos
inmunológicos.
Las células bacterianas crecen sobre agar generalmente como colonias lisas y
brillantes denominadas formas S (por smooth= lisos); la superficie regular
contiene mucha agua debido a la presencia de las cadenas polisacáridas O-
específicas.
Estas formas lisas mutan espontáneamente a formas que crecen como colonias
planas y rugosas, denominadas formas R (por rough = rugoso).
Cuando invaden un organismo, la presencia de esas cadenas de polisácaridos
dan a las bacterias S una ventaja selectiva al ser más resistentes a la fagocitosis
por los leucocitos y por ello más virulentas.
Hasta que el hospedador no forme anticuerpos y éstos se unan a los
polisácaridos, las bacterias no son atacables, la gran variedad de polisacáridos O-
específicos en bacterias patógenas puede deberse a una selección de tipos O-
antigénicos (mutantes) nuevos cada vez; tienen por tanto una ventaja en el
 desarrollo, porque el hospedador no puede disponer simultáneamente de los
anticuerpos contra cientos de antígenos.

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Acidos teicoico: son cadenas de moléculas de glicerina o ribitol esterificadas entre

sí por puentes fosfato, portan una fuerte carga negativa (probablemente sirvan
para "secuestrar" cationes). Los ácidos teicoicos se unen probablemente a la
mureína a través del fosfato formando una amida. Son muy antigénicos.
Los grupos sustitutivos de los polioles incluyen D-alanina (como éster), N-
acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina, los sustituyentes son característicos de
las especies bacterianas.

Estructura de los ácidos teicoicos de la pared celular

(A) Acido Ribitol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces
1,5-fosfo diéster de D-ribitol y éster de D-alanina en posición 2 y
sustituyentes glicosidícos en posición 4 (R= N-acetilglucosamina en S.
aureus o alfa-glucosil en B. subtilis .
(B)Acido Glicerol- teicoico con unidades repetitivas unidas por enlaces
1,3-fosfo diéster (1,2,en algunas especies). (R =H o D-alanina o
glucosil).

Pelota de fútbol: En mi época la "numero 5" tenia un "cuero con tientos" y una
cámara. Con un inflador se inflaba la pelota hasta que adquiría la consistencia
debida y, salvo que ahora las pelotas no tienen tientos y otras sofisticaciones,
para que tengan esa consistencia hay que inflarlas. 
El valor osmótico del contenido celular es equivalente al de una disolución al 10-
20% de sacarosa; . Normalmente la concentración de azúcares y sales es superior
en el interior de las células que en el exterior y la célula capta tanta agua como lo
permite la pared celular
Aquíles: héroe de la mitología griega. La leyenda cuenta que su madre lo
sumergió en la laguna Estige lo que lo hizo invulnerable, excepto en el talón por
donde lo sostuvo. Muere a consecuencia de una flecha que París, el héroe
troyano, raptor de la bella Helena, acertó en su talón. Por extensión "talón de
Aquiles" = punto débil.  
Tinción de Gram:

1. El procedimiento se inicia fijando a la llama las bacterias extendidas en un

portaobjetos.
2. Las mismas se tiñen con una solución del colorante básico cristal violeta.
3. El paso siguiente consiste en un tratamiento con solución de Lugol (iodo/ioduro
de potasio). El yodo forma una laca con el cristal violeta, que es insoluble en
agua y soluble en alcohol o acetona
4. El preparado se trata después con alcohol o acetona
5. Finalmente se procede a realizar una coloración de contraste (diferenciación) con
otro colorante (fucsina).
6. Como consecuencia de este tratamiento las bacterias que retienen el complejo
colorante-yodo durante el paso 4 quedan azules y se denominan Gram positivas.
7. Las células que NO retienen el complejo colorante-yodo durante el paso 4 al
tomar el colorante de contraste (paso5) quedan rojas y se denominan Gram
negativas.
Secuencia de las etapas de la coloración de Gram y la coloración 
resultante en las Gram negativas y positivas.