APLICACIONES DE

METODOLOGÍAS BIOQUÍMICAS
EN VETERINARIA
Curso 2019/2020
2º Cuatrimestre
 PRESENTACIÓN DEL CURSO I
•  Profesores:
–  C. Alicia Padilla Peña (bb1papec@uco.es)
–  Daniel Lagal Ruiz (b32larud@uco.es)
•  Horario:
–  Martes y jueves (según los grupos)
•  15,30 horas a 19,30 horas
•  Lugar:
–  Teoría y Prácticas.- Laboratorio de Bioquímica de 2ºciclo-2
del edificio Severo Ochoa
 PRESENTACIÓN DEL CURSO II
GRUPO 1: días 18 y 25 de febrero, y 3, 10 y 17 de marzo de 15,30 a 19,30 horas.
GRUPO 2: días 20 y 27 de febrero, y 5, 12 y 19 de marzo de 15,30 a 19,30 horas.
GRUPO 1: MARTES GRUPO 2: JUEVES
Hamed Mohamed, Adam Andrade Muñoz, Rosario

Ibáñez Paz, Laura Ardanuy García, Noelia

Ibarrondo Hurtado, Mª Ángeles Ayala Pan, Ana Pilar

Jaén Vega, Lidia Cabrera Rodríguez, Ana

Portero García, Elena Caysaguano Cajilema, Nataly Viviana

Rafael García, Ángela Gómez Carmona, Carmen María

Reina López, Pilar María Gómez Marín, María

Rodrigo Montiano, María Merino García,Laura

Ruiz Serena, Carmen Moya Damián, María del Pilar

Saez Granadal, Raquel Muñoz Arrebola, Cristina

Sánchez Palacín, Eugenio Muñoz Montes, Ana

Sánchez Sánchez, Juan Manuel Samaniego Bravo, Marta

Sanz Domínguez, Laura

 PRESENTACIÓN DEL CURSO III
•  Objetivos:
–  Proporcionar a los alumn@s la comprensión de los fundamentos y
el manejo de metodologías básicas de Bioquímica con aplicaciones
en Veterinaria
•  Metodología:
–  Actividades presenciales:
•  Explicaciones de fundamentos metodológicos
•  Prácticas en grupos de menos de 15 alumn@s
•  Discusión de resultados experimentales
•  Seminarios
–  Actividades no presenciales
•  Elaboración de un cuaderno de laboratorio
•  Preparación de seminarios o algún tema de actualidad relacionado con
las prácticas
•  Estudio y lectura de los fundamentos metodológicos
 PRESENTACIÓN DEL CURSO IV
•  Evaluación:
–  Listas de control (30%)->mínimo 10
–  Pruebas de respuesta corta (30%)->mínimo 5
–  Informe/Memoria de prácticas (30%)->mínimo 5
–  Presentaciones orales o seminarios (10%)->mínimo 5
•  Contenidos teóricos y prácticos:
–  BLOQUE I: Aislamiento y cuantificación de ácidos nucleicos.
–  BLOQUE II: Amplificación de ácidos nucleicos por PCR y separación
y visualización mediante electroforesis.
–  BLOQUE III: Ensayos enzimáticos y colorimétricos para
determinación de metabolitos.
–  BLOQUE IV: Separación y visualización de proteínas mediante
electroforesis SDS-PAGE.
–  BLOQUE V: Identificación de proteínas/antígenos mediante ensayos
inmunoquímicos. ELISA de lengua azul.
–  BLOQUE VI: Desarrollo de biorreactores con enzimas inmovilizadas.
 PRESENTACIÓN DEL CURSO V
•  BLOQUE I: Aislamiento y cuantificación de ácidos nucleicos
–  Técnicas de extracción y purificación de ácidos nucleicos
•  Aislamiento de DNA genómico
•  Cuantificación espectrofotométrica de ácidos nucleicos

Extracción de DNA total

300 mg

65ºC durante 30 min
 PRESENTACIÓN DEL CURSO VI
•  BLOQUE I: Aislamiento y cuantificación de ácidos nucleicos

Extracción de DNA total

Cuantificación de la [DNA]
+ RNAsa
durante 15 min
a 37 ºC

15 minutos a
máxima Alcohol
velocidad

50 µL de DNA total
 PRESENTACIÓN DEL CURSO VII
•  BLOQUE II: Amplificación de ácidos nucleicos por PCR y
separación y visualización mediante electroforesis
–  Técnica de la PCR
–  Identificación de especies animales

La secuencia del gen del citocromo b

de muchos animales es conocida

Citocromo b

Cebador común para

todas las especies
animales

PCR múltiple

Cebadores específicos para cada especie

 PRESENTACIÓN DEL CURSO VIII

•  BLOQUE II: Amplificación de ácidos nucleicos por PCR y
separación y visualización mediante electroforesis
–  Técnica de la PCR
–  Identificación de especies animales

94 ºC 3 min
94 ºC 30 s
60 ºC 30 s 35 ciclos
72 ºC 30 s
72 ºC 3 min
 PRESENTACIÓN DEL CURSO IX
•  BLOQUE II: Amplificación de ácidos nucleicos por PCR y
separación y visualización mediante electroforesis
!  PCR technique
! Electroforesis de ácidos nucleicos en gel de agarosa
 PRESENTACIÓN DEL CURSO X

•  Contenidos teóricos y prácticos:

–  BLOQUE I: Aislamiento y cuantificación de ácidos nucleicos.
–  BLOQUE II: Amplificación de ácidos nucleicos por PCR y separación
y visualización mediante electroforesis.
–  BLOQUE III: Ensayos enzimáticos y colorimétricos para
determinación de metabolitos.
–  BLOQUE IV: Separación y visualización de proteínas mediante
electroforesis SDS-PAGE.
–  BLOQUE V: Identificación de proteínas/antígenos mediante ensayos
inmunoquímicos. ELISA de lengua azul.
–  BLOQUE VI: Desarrollo de biorreactores con enzimas inmovilizadas.
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XI
•  BLOQUE III: Ensayos enzimáticos y colorimétricos para
determinación de metabolitos
!  Determinación de urea
•  Suero o plasma
•  Orina
!  Determinación de glucosa
•  Suero o plasma
•  Orina
!  Determinación de fosfatasa alcalina
•  Suero o plasma
•  Orina
!  Determinación de creatinina
•  Suero o plasma
•  Orina
!  Determinación de hemoglobina
•  Sangre
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XII
•  BLOQUE IV: Separación y visualización de proteínas mediante
SDS-PAGE
–  Introducción
•  Fundamentos
–  Electroforesis: “llevado por la electricidad”
–  La velocidad depende de la carga, forma y tamaño de la molécula
–  Análisis y purificación de macromoléculas: ácidos nucleicos y proteínas
•  Parámetros eléctricos
•  Tipos de electroforesis
–  Tipos de geles
–  Tampones y PH
–  Electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS (PAGE-SDS)
–  Electroforesis en papel de acetato de celulosa
–  Enfoque isoelétrico (IEF) y electroforesis  bidimensional (2-DE)
–  Análisis de los geles
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XIII
•  BLOQUE IV: Separación y visualización de proteínas
mediante SDS-PAGE
–  Electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS (PAGE-SDS):
(separación de proteínas en función de su masa molecular)
•  SDS: Sodium dodecyl sulfate
"  Rompe interacciones no covalentes de las proteínas
"  Desnaturaliza
"  Se une al polipéptido: 1 SDS / 2 AAs  (1,4gSDS/g de proteína)
"  Enmascara la carga eléctrica propia de la proteína
"  Todas con carga negativa
•  Poliacrilamida
"  Relación acrilamida/bisacrilamida y tamaño del poro
"  TEMED
"  Persulfato amónico
"  Oxígeno
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XIV
•  BLOQUE IV: Separación y visualización de proteínas
mediante SDS-PAGE
• Geles discontinuos
" Gel separador
" Gel concentrador
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XV
•  BLOQUE V: Identificación de proteínas/antígenos mediante
métodos inmunoquímicos
–  ELISA de lengua azul
 PRESENTACIÓN DEL CURSO XVI
•  BLOQUE VI: Inmovilización de enzimas y desarrollo de
biorreactores
–  Inmovilización de la enzima invertasa en gel de alginato.
–  Producción de jarabe de azúcar invertido.
–  Determinación de hidrólisis de sacarosa.
–  Determinación de la producción de glucosa

Sacarosa Glucosa + Fructosa

(jarabe de azúcar)