CAPITULO III

3. RESULTADOS Y DISCUSION

3.1. Caracterización físico-química del agua de la Laguna Negra

Los resultados obtenidos para la determinación de temperatura y pH en las 5 muestras de agua

tomadas de la Laguna Negra en la provincia de Chimborazo se detallan a continuación.

Tabla 1-3: Características físico-químicas del agua de Laguna Negra

Numero de Punto Temperatura(ºC ) pH

P1 9.8 5
P2 9.8 6
P3 9.8 6.5
P4 11 7
P5 13 7

La temperatura registrada de la laguna Negra oscila entre los 13ºC.Sin embargo, las lagunas que
no son afectadas por actividades antropogénicas el rango de pH esta entre los 6.5 a 7.5.

En el presente estudio, las muestras tomadas mostraron temperaturas que oscilan desde los 9.8
hasta los 13 ºC. Este valor de temperatura puede deberse debido a la gran variación climática
que existen ya que a su vez esta laguna se encuentra limitada entre la región Sierra y Oriente,
por lo que los primeros puntos tomados (P1, P2 y P3) muestran menor temperatura que los
puntos (P4 y P5).

En cuanto al valor del pH se observaron valores en un rango de 5 y 7 valor promedio de 6.3

(Tabla 1-3).

3.2. Aislamiento de colonias bacterianas

3.2.1 Siembra y estimación del número de colonias de las muestras

Para obtener un estimado inicial del número de colonias se realizó la siembra en superficie
sobre agar PCA por triplicado, a través de diluciones (10-4, 10-5 y 10-6) incubando a tres
temperaturas (18°C, 37°C y 45ºC). A temperatura ambiente es decir a 18°C se observó
crecimiento a 48 horas, a los 37°C se obtuvieron colonias visibles a 24 horas, mientras que a la
temperatura de 45ºC se observó dentro de 72 horas. El promedio de colonias bacterianas se
detallan en la (Tabla 3.2).
 Tabla 3-2: Promedio del número de Colonias
por el número de colonias muestras
Numero de muestras PCA
18ºC 37ºC 45ºC

Punto 1 13 0 1

Punto 2 12 8 0

Punto 3 37 3

Punto 4 3 0 0

Punto 5 2 2 0

Promedio 67 13 1

Despues de haber realizado la siembra, se observo solamente crecimiento bacteriano en dos

temperaturas: a temperatura ambiente (18°C) claramente se observa un mayor numero de
unidades formadoras de colonias; a 37°C hubo un menor número de colonias, mientras que a
45°C por ser una temperatura elevada no hubo la presencia de bacterias sino de hongos .Por lo
que al ver esta variabilidad de crecimiento entre las tres temperaturas se tomó en cuenta a las
temperaturas (18°C y 37°C).

3.2.2. Selección y asilamiento de las colonias

De cada placa sembrada tanto a temperatura ambiente ( 18°C) como a 37°C, se procedió a la
selección de un representante de cada uno de los tipos de colonias obtenidas, los cuales fueron
replicados en diferentes medios de cultivo PCA+ Mantequilla industrial y PCA+ Leche
descremada que se detallan en la tabla (Tabla 3-3).
 Tabla 3-3: Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 18ºC

Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 18ºC

Muestra PCA+Mantequilla PCA+Leche

Descremada
P1 4 4
P2 9 7
P3 7 7
P4 2 3
P5 2 2
TOTAL 26 23
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Tabla 4.3: Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 37ºC

Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 37ºC

Muestra PCA+Mantequilla PCA+Leche

Descremada
P1 --- ---
P2 3 3
P3 1 1
P4 --- ---
P5 2 2
TOTAL 6 6
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

 Se realizaron al menos 3 repiques con la finalidad de lograr la adaptación a los dos

medios utilizados y la estabilización de los mismos.
 Se evaluó el crecimiento de cada uno de los clones en ambos medios: lo cual se obtuvo
un total de 31 colonias que crecieron en el medio PCA+ Mantequilla donde
corresponden : 4 al P1, 8 del P2, 7 al P3, 2 al P4 y 2 al P5 a la temperatura de 18°C ,
a 37°C hubo crecimiento de 3 del P2, 1 del P3 , y 2 del P5 ; mientras que un total
entre la temperatura ( 37°C ) solo se observaron 29 colonias . DEBO PONER
PORCENTAJES
 Para la observación cuantitativa no se visualizaron halos de aclaramiento alrededor de
las colonias, tan solo las únicas que presentaron fueron los clones P52, y P11 a la T=
18°C mientras que a T=37°C solo hubo en el P21.
 Tabla 5-3: Clones obtenidos en los tres repiques realizados a 18ºC

Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 18ºC

Muestra PCA+Mantequilla PCA+Leche

Descremada
P1 2 2
P2 7 6
P3 5 5
P4 3 3
P5 1 1
TOTAL 18 17
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Tabla 6-3: Clones obtenidos en los tres repiques realizados a 37ºC

Identificación de las colonias seleccionadas para la caracterización a 37ºC

Muestra PCA+Mantequilla PCA+Leche

Descremada
P1 -- --
P2 1 1
P3 -- --
P4 -- --
P5 2 2
TOTAL 3 3
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.2.3. Caracterización macroscópica y microscópica

3.2.3.1. Tinción Gram

A través de la técnica diferencial de Gram fue posible identificar la morfología microscópica y

el comportamiento de cada uno de los clones aislados y replicados en los medios
PCA+Mantequilla y PCA+ Leche Descremada en la Tabla 4.2.
 Tabla 7-3: Resultados de la Tinción diferencial de Gram de los clones sembrados y aislados en
los medios PCA+Mantequilla y PCA+Leche Descremada a 18°C

Clones aislados
Medio PCA+Mantequilla Medio PCA+Leche Descremada
Clones T°(C) Forma de Coloración Tinción Clones T°(C) Forma de Coloración Tinción
la colonia Gram la colonia Gram
P11 13 Cocos Rojos - P11 13 Cocos Rojos -
P14 13 Bacilos Rojos - P14 13 Bacilos Rojos -
P21B 13 Bacilos Rojos - P21B 13 Bacilos Rojos -
P22A 13 Bacilos Rojos - P22A 13 Bacilos Rojos -
P21T 13 Cocos Rosados - P21T 13 Cocos Rosados -
P25T 13 Cocos Morados + P25T 13 Cocos Morados +
P23 13 Bacilos Rosados - P23 13 Bacilos Rosados -
P24 13 Cocos Rosados - P24 13 Cocos Rosados -
P32 13 Cocos Rojos - P32 13 Cocos Rojos -
P34 13 Cocos Rosados - P35 13 Bacilos Rosados -
P35 13 Bacilos Rosados - P31T 13 Bacilos Rojos -
P36 13 Cocos Rosados - P36 13 Cocos Rosados -
P31T 13 Bacilos Rojos - P41 13 Cocos Morados +
P41 13 Cocos Morados + P42 13 Bacilos Rosados -
P42 13 Bacilos Rosados - P43 13 Cocos Rojos -
P43 13 Cocos Rojos - P52 13 Bacilos Rojos -
P52 13 Bacilos Rojos - P53 13 Cocos Rosados -
P53 13 Cocos Rosados -

“GRAM positivo (+)”, “GRAM negativo (-)”

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

11%

Bacilos Gram-
46% Bacilos Gram+
Cocos Gram -
Cocos Gram +
43%
 Gráfico 1-3: Porcentaje de clones bacterianos Gram positivos y Gram negativos 13° C.
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Tabla 8-3: Resultados de la Tinción diferencial de Gram de los clones sembrados y aislados en
los medios PCA+Mantequilla y PCA+Leche Descremada a 37°C

Clones aislados
Medio PCA+Mantequilla Medio PCA+Leche Descremada
Clones T°(C) Forma de Coloración Tinción Clones T°(C) Forma de Coloración Tinción
la colonia Gram la colonia Gram
P22 37 Bacilos Rojos - P22 37 Bacilos Rojos -
P52 37 Cocos Rosados - P52 37 Cocos Rosados -
P51 37 Cocos Rojos - P51 37 Cocos Rojos -

“GRAM positivo (+)”, “GRAM negativo (-)”

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

33% Bacilos Gram-

Bacilos Gram+
Cocos Gram -
67% Cocos Gram +

Gráfico 2-3: Porcentaje de clones bacterianos Gram positivos y Gram negativos 37° C.
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.3 Caracterización macroscópica de los clones aislados

La evaluación macroscópica que se le realizo a cada uno de los clones aislados y estabilizados
llevado a cabo a las temperaturas de (18° C y 37°C) se consideraron las siguientes
características morfológicas: forma, borde, elevación, superficie, color.

3.3.1 Forma
 Porcentaje de clones
80.0% 72.2%
70.0%
60.0%
50.0%
40.0%
30.0% 22.2%
20.0%
10.0% 5.6%
0.0%
Irregular Puntiforme Circular

Gráfico 3-3: Forma de los clones cultivados a 13° C

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Porcentaje de clones
60%
50%
50%
50%
40%

30%

20%

10%

0%
Puntiforme Irregular

Gráfico 4-3: Forma de los clones cultivados a 37° C

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.3.2. Borde
 Porcentaje de clones
60%
50%
50% 50%
40%
30%
20%
10%
0%
Entero Ondulado

Gráfico 5-3: Tipo de Borde de los clones cultivados a 13° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Porcentaje de clones
80.00%
70.00%
60.00% 66.70%

50.00%
40.00%
30.00% 33.30%
20.00%
10.00%
0.00%
Entero Ondulado

Gráfico 6-3: Tipo de Borde de los clones cultivados a 37° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.3.3.. Elevación
 Porcentaje de clones
50.0%
45.0%
40.0% 44.4%
35.0% 38.9%
30.0%
25.0%
20.0%
15.0% 16.7%
10.0%
5.0%
0.0%
Convexa Elevado Plana

Gráfico 7-3: Tipo de Elevación de los clones cultivados a 13° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Porcentaje de clones
35.00%
33.33% 33.33% 33.33%
30.00%
25.00%

20.00%

15.00%

10.00%
5.00%

0.00%
Convexa Umbanado Elevado

Gráfico 8-3: Tipo de Elevación de los clones cultivados a 37° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.3.4. Color
 Porcentaje de clones
25.0%
22.2%

20.0%
16.5%
15.0%
11.1% 11.1% 11.1%
10.0%

5.6% 5.6% 5.6% 5.6% 5.6%

5.0%

0.0%
Amarillo Oro Beige Amarillo Naranja Hueso Coral Rojo Rosado Naranja
claro naranja claro

Gráfico 9-3: Tipo de Color de los clones cultivados a 13° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Porcentaje de clones
35.00%
33.33% 33.33% 33.33%
30.00%

25.00%

20.00%

15.00%

10.00%

5.00%

0.00%
Naranja claro Blanco Hueso

Gráfico 10-3: Tipo de Color de los clones cultivados a 37° C.

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

Tabla 9-3: Caracterización macroscópica de los clones aislados en los medios

PCA+Mantequilla y PCA+Leche Descremada a 18°C

Clones T° Forma Borde Elevació Superficie Color Olor Fecha de Fecha de

C n Crecimient Siembra
o
P11 13 Irregular Entero Convexa Brillante Amarillo sin 17/01/20 15/01/20
P14 13 Irregular Ondulado convexa Brillante oro sin 17/01/20 15/01/20
P21B 13 Irregular Entero Elevado Brillante beige sin 17/01/20 15/01/20
P22A 13 puntiforme entero convexa brillante Amarillo sin 17/01/20 15/01/20
claro
P21T 13 Irregular Entero Elevado Brillante Naranja sin 17/01/20 15/01/20
P25T 13 Circular entero convexa brillante Naranja sin 17/01/20 15/01/20
P23 13 puntiforme entero Convexa Brillante Oro sin 17/01/20 15/01/20
P24 13 irregular ondulado convexa brillante Amarillo sin 17/01/20 15/01/20
P32 13 Irregular Ondulado Elevado Brillante Hueso sin 17/01/20 15/01/20
P34 13 Irregular Ondulado Elevado Brillante Naranja sin 17/01/20 15/01/20
claro
P35 13 Irregular Entero Elevado Brillante Amarillo sin 17/01/20 15/01/20
P36 13 Irregular ondulado elevado brillante Naranja sin 17/01/20 15/01/20

P31T 13 Irregular ondulado Plana Brillante Naranja sin 17/01/20 15/01/20

P41 13 Irregular Ondulado Convexa Brillante Coral sin 17/01/20 15/01/20

P42 13 Puntiform entero convexa brillante Rojo sin 17/01/20 15/01/20
e naranja
P43 13 Puntiform Entero plana Seca Rosado sin 17/01/20 15/01/20
e polvorosa
P52 13 Irregular Ondulado Plana Liso, Naranja sin 17/01/20 15/01/20
brillante claro
P53 13 Irregular Ondulado Elevado Liso, Hueso sin 20/01/20 15/01/20
brillante
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

NOTA: ANITA LE PUSE EN GENERAL TANTO PARA LECHE COMO MANTEQUILLA AL MOMENTO QUE VAS HACER

LOS GRAFUCOS PARA LA FORMA, ELVACION ETC, PARA LO DE LA LECHE ES EL MISMO PERO AQUÍ NO CRECIO

EL P34 OJO AHÍ LE BORRAS SI GRACIAS

Tabla 10-3: Caracterización macroscópica de los clones aislados en los medios

PCA+Mantequilla y PCA+Leche Descremada a 37°C

Clone T° Forma Borde Elevació Superfici Color Olo Fecha de Fecha

s C n e r Crecimient de
o Siembr
a
P22 37 Puntiform Entera Convexa Seco Naranj sin 17/01/20 15/01/20
e brillante a claro
P52 37 Irregular Ondulad Umbanado Seco Blanco sin 17/01/20 15/01/20
o polvoroso
P51 37 Irregular Entero Elevado Seco Hueso sin 17/01/20 15/01/20
polvoroso
Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

3.4. Identificación Bacteriana a través de pruebas Bioquímicas

Para la identificación de los posibles géneros microbianos aislados a las temperaturas de (18°C
y 37°C), se utilizó el manual de técnicas en microbiología clínica de M.V. Alvarez, E.Boquet y
M.I de Fez (1990).

Tabla 11-3: Bacilos Gram Negativos

CARACTERISTICAS KLIGLER SIM
 Lactosa

Indol
Gas/GL

SH2

Ureasa
Citrato

Manitol
Glucosa

Movilidad
Gram
CLON T°( C) Forma
colonia

P21B 13 bacilos - + + + - - - - - +
P52 13 bacilos - K/K K/K K/K K/K - - + - +
P35 13 bacilos - K/K K/K K/K K/K - - + + +
P22 37 bacilos - K/K K/K K/K K/K - - - - +
P22A 13 bacilos - K/K K/K K/K K/K + - V- - -
P31T 13 bacilos - K/K K/K K/K K/K - - V- - +
P23 13 bacilos - + + + - - - - - +
P14 13 bacilos - + + - - - + - - -
P42 13 bacilos - K/K K/K K/K K/K - + V- - +

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

De los (21 cambiar ) clones aislados y finalmente seleccionados se realizó las pruebas
bioquímicas en dos grupos, donde resulto que procentaje son bacterias Gram (-) mientras que
porcentaje son bacterias Gram (+). Estos resultados coinciden con bibliografía encontrada
donde menciona que en ambientes fríos, especialmente en nieve, hielo y escombros Antárticos
existen bacilos Gram negativos o cocos Gram positivos formadores de esporas. Bibliografía :
https://www.researchgate.net/publication/234065067_Psychrophilic_and_Psychrotolerant_M
icrobial_Extremophiles_in_Polar_Environments?
enrichId=rgreq5317cb45856a5b1ac123d870f48e8196XXX&enrichSource=Y292ZXJQYWdlOzIzN
DA2NTA2NztBUzo5NzI5MzYyMTUzMDYyNUAxNDAwMjA4MDE1MTg3&el=1_x_3&_esc=public
ationCoverPdf página 2-4.

Con los resultados obtenidos a partir de las caracterización tanto microscópicos, macroscópicos,
pruebas bioquímicas se puede establecer que los clones bacterianos pertenecen probablemente a
los siguientes géneros:

Tabla 12-3: Cocos Gram Negativos

 CARACTERISTICAS PRUEBAS RAPIDAS

Coagulasa
Gram

Catalasa
CLON Forma de T°(C)
la
P32
colonia
cocos 13 R- - -
P21T cocos 13 R- - +
P36 cocos 13 R- - +
P53 cocos 13 R- + +
P43 cocos 13 R- + +
P52 cocos 13 M+ - +
P51 cocos 13 R- + +
P41 cocos 13 R- + -
P25T cocos 13 R- - +
P52 cocos 37 R- - -
P51 cocos 37 R- + +

Realizado por: LOPEZ, Evelyn, 2020

En cuanto a los clones determinados como cocos Gram negativos para determinar las
características diferenciales de cada uno se utilizó las pruebas bioquímicas catalasa y coagulasa
donde arrojo como resultados que:

Streptococcus catalasa positiva

Staphylococcus catalasa negativa

Micrococcus

Las investigaciones realizadas en lagos oligotróficos de agua dulce que se encuentran en alta
montaña presentan exigüidad de datos en cuanto a la microbiota existente, ya que no permite
tener con exactitud los posibles géneros que se puedan encontrar, varias especies identificadas
coinciden con el estudio de la laguna amarilla del Altar y otros. Bibliografía
http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/123456789/7877/1/236T0302.pdf, página 58.