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Revista Microquímica 87 (2007) 128 - 131

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Determinación de zinc y cobre en cabello humano mediante muestreo de lechada empleando espectrometría
secuencial de absorción atómica de llama de múltiples elementos

Hadla S. Ferreira una, Walter NL dos Santos si, Raigenis P. Fiuza una,
Joaquim A. Nóbrega C, Sergio LC Ferreira una, •
una Universidade Federal da Bahia, Instituto de Química, Campus Universitário de Ondina, Salvador-BA, 40170-290, Brasil
si Universidade do Estado da Bahia, Rua Silveira Martins, 2555, Cabula. Salvador-Ba. CEP: 41.195.001, Brasil
C Universidade Federal de São Carlos, Departamento de Química, São Carlos SP, Brasil

Recibido el 12 de junio de 2007; aceptado el 26 de junio de 2007

On-line el 4 de julio de 2007

Resumen

El presente trabajo propone un método directo basado en el muestreo de lodos para la determinación de zinc y cobre en muestras de cabello humano mediante espectrometría de absorción atómica
de llama secuencial multielemento. Las suspensiones se prepararon mediante trituración criogénica y sonicación de las muestras. El paso de optimización se realizó mediante metodología univariante y
los factores estudiados fueron: naturaleza y concentración de la solución ácida, cantidad de muestra / volumen de suspensión, tiempo de sonicación y tamaño de partícula. Las condiciones
experimentales establecidas son el uso de una masa de muestra de 50 mg, 2 mol L - 1 solución de ácido nítrico, tiempo de sonicación de 20 min y volumen de suspensión de 10 mL. Adoptando las
condiciones optimizadas, este método permite la determinación de zinc y cobre con límites de detección de 88,3 y 53,3 ng g - 1, respectivamente, y la precisión expresada como desviación estándar relativa
(RSD) de 1,7% y 1,6% (ambos, n = 10) para contenidos de zinc y cobre de 100,0 y 33,3 μ gg - 1, respectivamente. La precisión se comprobó y confirmó mediante el análisis de dos materiales de referencia
certificados de cabello humano. El procedimiento se aplicó para la determinación de zinc y cobre en dos muestras de cabello humano. Los contenidos de zinc y cobre variaron de 100,0 a 175,6 y de 3,2 a
32,8 μ gg - 1, respectivamente. Estas muestras también se analizaron después de la digestión completa en un sistema cerrado y la determinación por FAAS. La comparación estadística por t- La prueba (nivel
de confianza del 95%) no mostró diferencias significativas entre estos resultados.

© 2007 Elsevier BV Todos los derechos reservados.

Palabras clave: Zinc; Cobre; Cabello humano; Muestreo de purines; Espectrometría secuencial de absorción atómica de llama multielemento

1. Introducción
La determinación de oligoelementos en el cabello humano es de fundamental
importancia considerando que las concentraciones de estos elementos en el cabello pueden
indicar los niveles de estos elementos en el organismo. Por tanto, la determinación del
contenido de metales en el cabello humano se puede utilizar como índice de exposición a
elementos potencialmente tóxicos (intoxicación) o como información de las condiciones de
salud de un individuo. [1] . Las muestras de cabello normalmente se digieren con ácido antes
de las determinaciones, pero también se puede aplicar el análisis directo de sólidos o lodos.
Las revisiones recientes destacaron las ventajas de los métodos directos de análisis. [2,3]
. El muestreo de purines es una de las alternativas para el análisis directo de muestras
sólidas que se han propuesto utilizando técnicas espectroanalíticas como la
espectrometría de absorción atómica en horno de grafito (GFAAS) [4] , espectrometría de
emisión óptica de plasma acoplado inductivamente (ICP OES) [5,6] y espectrometría de
masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-MS) [7,8] . Los métodos que utilizan
FAAS son más limitados debido a las restricciones de tamaño de partículas y también
cantidades de muestra. Sin embargo, se han publicado varios procedimientos utilizando
esta técnica.

[9 - 11] . Se propusieron métodos para el análisis de muestras de cabello humano

utilizando muestreo de lechada para la determinación de mercurio por generación
de vapor. - espectrometría de absorción atómica electrotérmica [12] , arsénico usando
GFAAS [13] , varios metales incluyendo cobre y zinc por vaporización electrotérmica
ICP OES (ETV-ICP OES) [14] . El cadmio, Cu y Pb se determinaron mediante
• Autor correspondiente. Fax: +55 71 3235 5166. GFAAS en lechadas capilares utilizando un criogénico.
Dirección de correo electrónico: slcf@ufba.br (SLC Ferreira).

0026-265X / $ - ver la portada © 2007 Elsevier BV Todos los derechos reservados. doi: 10.1016 /
j.microc.2007.06.005
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procedimiento de molienda de muestras [15] . Se demostró que el triturado criogénico es
una estrategia eficaz para las muestras de cabello porque la mayoría de los materiales se
vuelven quebradizos a bajas temperaturas. Las muestras de cabello se congelaron en
nitrógeno líquido y se molieron rápidamente en este medio para evitar cualquier aumento
de temperatura debido a la conversión de energía mecánica en calor durante la molienda.
Es bien sabido que algunos tejidos biológicos apenas se pulverizan debido a su flexibilidad
o dureza. La trituración criogénica también se aplicó con éxito para la pulverización de
dientes humanos. [dieciséis] . Este mismo grupo de investigación también presentó una
descripción general de las aplicaciones analíticas de la molienda criogénica. [17] .
Además de estas técnicas espectroanalíticas, hoy en día la espectrometría de
absorción atómica de llama secuencial rápida (FSFAAS) es una opción para la
determinación de metales con múltiples elementos. Nuestro grupo de investigación
propuso un método directo mediante muestreo de lechada para la determinación de
cobre, manganeso y zinc en muestras de chocolate en polvo. [18,19] .
En este trabajo se propone un método analítico para la determinación de zinc y
cobre en cabello humano utilizando muestreo de lechada y FS-FAAS después de la
trituración criogénica de las muestras.
2. Experimental
2.1. Instrumentación
Para el análisis se utilizó un espectrómetro de absorción atómica de llama
Varian Model SpectrAA 220 (Mulgrave, Victoria, Australia) con módulo secuencial
rápido (FS-FAAS), equipado con un nebulizador neumático de sistema convencional
y una cámara de nebulización. Se hizo funcionar una lámpara de cátodo hueco de
cobre y zinc de múltiples elementos en las condiciones sugeridas por el fabricante
aplicando una corriente de 10,0 mA. Se utilizaron las longitudes de onda más
sensibles para el zinc a 213,9 nm y el cobre a 324,8 nm con un ancho de banda de
0,5 y 1,0 nm para el cobre y el zinc, respectivamente. La composición de la llama
era acetileno (caudal
2,0 L min) y aire (caudal: 13,5 L min - 1) y la altura del quemador era de 13,5 mm. El
caudal de aspiración del nebulizador se mantuvo entre 5,5 y 6,0 mlmin - 1. El tamaño de
partícula se midió usando un microscopio electrónico de barrido Shimadzu (Kioto,
Japón) Superscan SS-550. Se utilizó un limpiador ultrasónico de sobremesa VWR
modelo 75D (Cortland, Nueva York, EE. UU.) Para la homogeneización de la
suspensión. Las muestras se trituraron usando un congelador / molino SPEX Certiprep
Modelo 6750 (Metuchen, NJ, EE. UU.).
2.2. Reactivos
Todos los reactivos fueron de calidad analítica a menos que se indique lo contrario.
Se obtuvo agua ultrapura de un RF puro EASY (Barnstedt, Dubuque, IA, EE. UU.). El
nítrico, el clorhídrico y el sulfúrico fueron de calidad Suprapur (Merck, Darmstadt,
Alemania). El material de vidrio de laboratorio se mantuvo durante la noche en una
solución de ácido nítrico al 10% v / v. Antes de su uso, la cristalería se enjuagó con agua
desionizada y se secó en un ambiente sin polvo.
La solución de zinc se preparó diluyendo 1000 mg L - 1 solución de zinc (Merck) con
una solución de ácido nítrico al 1% (v / v).
La solución de cobre se preparó diluyendo 1000 mg L - 1
solución de cobre (Merck) con una solución de ácido nítrico al 1% (v / v).
129
2.3. Molienda criogénica
Una masa de 1 - Se insertaron 2 g de muestra de cabello en un vial triturador, un
cilindro de policarbonato provisto de dos tapones terminales, se sumergió en nitrógeno
líquido y se trituró con un impactador accionado magnéticamente. Se requirió un período
de tiempo de 13 minutos para pulverizar la muestra de cabello y alcanzar el tamaño de
partícula requerido. El procedimiento de molienda se implementó con un primer paso de 5
min para la congelación de la muestra, seguido de tres ciclos con dos etapas de
pulverización y enfriamiento, con un total de 8 min.
2.4. Preparación de purines
La preparación de la lechada implica 50 mg de muestra de cabello (tamaño máximo
de partícula ≅ 120 μ m) y dilución para 10.0 mL usando 2.0 mol L - 1 solución de ácido
nítrico. Posteriormente, el sistema se coloca en un baño de ultrasonidos durante 25 min.
Posteriormente, la suspensión se aspiró neumáticamente para la determinación de
cobre y zinc mediante FS-FAAS. Los espacios en blanco se prepararon como los lodos
de muestra, utilizando una harina de arroz ARROZINA® (Unilever Bestfoods Brasil,
Garanhuns, PE, Brasil), que contiene cobre y zinc en concentraciones inferiores al límite
de cuantificación de este método para ambos metales.
2.5. Procedimientos para la digestión total de muestras de cabello.
2.5.1. Digestión en recipientes a presión cerrados
En una bomba de digestión (Modelo 4746, Parr Instrument Company, EE. UU.) Se
añadió una masa de 100 mg de muestra de cabello y 2,0 mL
de HNO concentrado 3 y 1.0 mL de 30% (m / m) H 2 O 2.
Posteriormente, la bomba se cerró y se mantuvo durante 4 h, que fue
el tiempo optimizado para la digestión completa de la muestra, en un horno a 150 ±
10 ° C. Finalmente, después de enfriar a temperatura ambiente, se abrió la bomba.
Luego, lo digerido se transfiere a un matraz calibrado y se diluye a un volumen final
de 10 mL con
0,5% (v / v) de HNO 3. El cobre y el zinc se determinaron en las soluciones diluidas
mediante FS-FAAS. Todas las muestras fueron analizadas en
triplicado.
3. Resultados y discusión
3.1. Optimización de las condiciones experimentales
El paso de optimización se realizó mediante metodología univariante aplicada a
los principales factores. En primer lugar, se estudió el efecto de la naturaleza y
concentración del ácido utilizado para la preparación de las lechadas. Los
experimentos se realizaron utilizando suspensiones preparadas con ácidos
clorhídrico, nítrico y sulfúrico. Se encontró que las señales analíticas fueron siempre
mayores en medio ácido nítrico para ambos metales y estas fueron máximas y
constantes para concentraciones de ácido en el rango de 1.0 a
6,0 mol L - 1. Se realizaron más experimentos con suspensiones preparadas en 2,0
mol L - 1 solución de ácido nítrico.
Para evaluar el efecto de la cantidad de muestra en el método, se prepararon
lechadas usando 20, 30, 40, 50, 60, 80 y 100 mg de muestra en 2.0 mol L - 1 solución
de ácido nítrico para un volumen de suspensión final de 10 mL. Se midieron las
absorbancias y se
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Los resultados demostraron que las lechadas preparadas con masas de muestra de Tabla 2
Valores medios ( μ gg - 1) y desviaciones estándar para zinc y cobre usando la técnica de muestreo de
80 y 100 mg causaron un bloqueo ocasional del sistema de nebulización del
lechada y usando digestión en recipiente cerrado
FS-FAAS. Este experimento también mostró que existe una relación lineal entre la
Zinc ( μ gg - 1) Cobre ( μ gg - 1)
masa de la muestra y las señales analíticas (absorbancias) para ambos analitos,
para masas de muestra en el rango de 0 (20) a 60 mg. Por tanto, el método Muestra Estiércol líquido Alternativa Estiércol líquido Alternativa
método método método método
recomendado implica una masa de muestra de 50 mg para un volumen de
suspensión de 10 ml. 1 100,0 ± 0,6 100,3 ± 0,2 7,2 ± 0,8 7,3 ± 1,3
2 161,4 ± 0,4 161,7 ± 0,5 32,8 ± 0,4 33,3 ± 0,6

Se investigó el efecto del tiempo de sonicación en la preparación de las

lechadas, preparando lechadas con masa de muestra de 50 mg y dilución para 10
mL usando 2.0 mol L - 1 solución de ácido nítrico. El tiempo de sonicación varió de 0
a 30 min. Los resultados demostraron que en este rango, no hubo influencia de
este parámetro sobre las señales analíticas obtenidas para ambos iones
metálicos. Sin embargo, en ausencia o por sonicación inferior a 10 min se observó
obstrucción en el nebulizador. Por lo tanto, se recomendó un tiempo de sonicación
de 20 min para este método.
En el FS-FAAS, la posición del quemador se mantiene constante durante la
determinación secuencial. Se recomienda que la altura de observación se ajuste
teniendo en cuenta el analito menos sensible de acuerdo con las intensidades de
las líneas de absorción y las concentraciones típicas esperadas en las muestras.
En este trabajo se realizó esta optimización para el cobre, debido a que la
sensibilidad para este elemento es menor que la observada para el zinc.
3.2. Características analíticas
Se investigó la estrategia de calibración del método comprobando los resultados
obtenidos por técnica estándar externa utilizando soluciones acuosas de referencia y
también por técnica de adiciones de analitos, para ambos metales. Las ecuaciones de
calibración para zinc
utilizando soluciones acuosas de referencia ( A = 0.5325C Zn + 0.0223) y
para adiciones de analitos ( A = 0.5337C Zn + 0,1996) tenían pendientes similares y los
coeficientes de correlación eran mejores que 0,999.
Las ecuaciones de las curvas analíticas para el cobre fueron: acuosa
soluciones de referencia A = 0.1341C cu + 0. 0029) y para analito
adiciones A = 0,1338 C cu + 0,027). Estos resultados exhibieron buena similitud entre
los taludes obtenidos, demostrando que el zinc
y el cobre en las suspensiones capilares se pudo determinar usando soluciones
acuosas de referencia. Esto es una indicación de que una parte apreciable del analito
está presente en la fase líquida de la suspensión. La precisión expresada como
coeficiente de variación fue 1,7 y
1,6% ( n = 10) para contenidos de zinc y cobre de 100,0 μ gg - 1 y
33,3 μ gg - 1, respectivamente. Este experimento se realizó utilizando una masa de muestra
de 50 mg.
Los límites de detección (LOD), definidos como las concentraciones de
metales que dan una respuesta equivalente a tres veces
la desviación estándar (es) del blanco ( n = 10) dividido por la pendiente de la
curva analítica, resultó ser 53,3 y 88,3 ng g - 1 para cobre y zinc,
respectivamente. El blanco se preparó utilizando harina de arroz con
concentraciones de cobre y zinc inferiores a los respectivos LOD´s. La
precisión fue confirmada por el análisis de dos materiales de referencia
certificados proporcionados por el Instituto de Exploración Geofísica y
Geoquímica Langfang, China (GBW) y el Instituto Nacional de Estudios
Ambientales (NIES). Los resultados se resumen en tabla 1 .
3.3. Aplicaciones
El método desarrollado se aplicó para la determinación de zinc y cobre en dos
muestras de cabello humano. Para estas muestras, los contenidos de zinc y cobre
alcanzados variaron de 100.0 a
161,4 y de 7,2 a 32,8 μ gg - 1, respectivamente. Estas muestras también fueron digeridas
usando un sistema presurizado cerrado y el cobre y el zinc fueron determinados por
FAAS. Los resultados fueron similares a los obtenidos por el método de suspensión. los t- La
prueba demostró que no hay diferencias significativas entre los resultados. Todos estos
datos se muestran en Tabla 2 .
4. Conclusiones
La molienda criogénica y el muestreo de lechada permitieron el desarrollo de
un método rápido y directo para la determinación secuencial de zinc y cobre en
muestras de cabello humano utilizando FS-FAAS. La viabilidad de la calibración
con soluciones acuosas de referencia constituye también otra ventaja. Los
resultados obtenidos para dos materiales de referencia certificados demostraron la
precisión del método.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado da
Bahia (FAPESB), al Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
Tecnológico (CNPq) y a la Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de
Nível Superior (CAPES) por proporcionar subvenciones y becas y por el apoyo
financiero.

tabla 1
Referencias
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