​ ​UNIVERSIDAD​ ​NACIONAL​ ​AGRARIA

​ ​LA​ ​MOLINA

DEPARTAMENTO​ ​ACADÉMICO​ ​DE​ ​QUÍMICA

CURSO:​ ​QUÍMICA​ ​ANALÍTICA​ ​-​ ​LABORATORIO

INFORME​ ​DE​ ​PRÁCTICA​ ​N°2

DETERMINACIÓN​ ​DEL​ ​NITRÓGENO​ ​ORGÁNICO.​ ​MÉTODO​ ​KJELDAHL

FECHA:​ ​ ​12​ ​/​ ​09​ ​/​ ​17.

​ ​ALUMNO ​ ​CÓDIGO ​ ​FIRMAS

Mejía​ ​Soria,​ ​Gabriela​ ​María. 20160406

Morrión​ ​De​ ​Paz,​ ​Leydi​ ​Laura. 20160407

Facultad​ ​y​ ​especialidad:​​ ​Facultad​ ​de​ ​Pesquería.

Horario​ ​de​ ​práctica:​​ ​Martes​ ​de​ ​11:00​ ​am.​ ​a​ ​1:00​ ​pm.

Profesor:​​ ​Palma,​ ​Juan​ ​Carlos.

LA​ ​MOLINA​ ​-​ ​LIMA​ ​–​ ​PERÚ

Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

1. Introducción

​El contenido proteínico de los alimentos puede determinarse por medio de diversos
métodos.Actualmente todos los métodos para determinar el contenido proteico total
de los alimentos son de naturaleza empírica.Un método absoluto es el aislamiento y
pesado directo de la proteína pero dicho método se utiliza sólo a veces en
investigaciones​ ​bioquímicas​ ​debido​ ​a​ ​que​ ​es​ ​dificultoso​ ​y​ ​poco​ ​práctico.
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la
actualidad para el análisis de proteínas (​Método Kjeldahl​) mediantes la
determinación del nitrógeno orgánico.En esta técnica se digieren las proteínas y
otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en
presencia de catalizadores.El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta
digestión en sulfato de amonio.La mezcla digerida se neutraliza con una base y se
destila posteriormente.El destilado se recoge en una solución de ácido bórico.Los
aniones del borato se titula con HCl(o H​2​SO​4​) estandarizado para el nitrógeno
contenido​ ​en​ ​la​ ​muestra(alimentos,bebidas,forrajes,fertilizantes).

El resultado de análisis es una buena aproximación del contenido de ¨proteína bruta¨

o ¨proteína total¨ ya que el nitrógeno también proviene de componentes no proteicos.
Una fracción considerable del nitrógeno procede de otros compuestos
nitrogenados(bases púricas,pirimidinas,creatina ,creatinina,urea,amoniaco,etc). Con
el análisis sin embargo no se determina el nitrógeno nítrico,el cianhídrico,el de la
hidracina​ ​y​ ​el​ ​nitrógeno​ ​de​ ​un​ ​núcleo​ ​cíclico.

El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones.Originalmente se utilizó

permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación(digestión),sin
embargo, los resultados no fueron satisfactorios,de manera que este reactivo se
descartó.En 1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión utilizando
ácido sulfúrico y añadiendo un catalizador.Gunning en 1889 propuso añadir sulfato
de potasio que eleva el punto ebullición del ácido sulfúrico utilizado en la digestión
para​ ​disminuir​ ​el​ ​tiempo​ ​de​ ​reacción.

1.1.Justificación

En la actualidad consumimos muchos alimentos funcionales y en la investigación

se busca un método rápido,eficaz y barato para conocer los componentes de estos.
Por ello hallar el porcentaje de proteínas es de gran interés con el método de
Kjeldahl que podrá calcular el porcentaje del nitrógeno. Existen métodos muchos
más rápidos, pero en esta ocasión se utilizará este método ya que se puede
explicar todo el procedimiento así siendo mucho más accesible para los
estudiantes.

1.2. Objetivos
➢ Comprender los fundamentos del método Kjeldahl para la determinación del
contenido​ ​en​ ​proteína​ ​de​ ​un​ ​alimento.

1
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➢ Conocer el procedimiento experimental de análisis de proteínas por el

método​ ​de​ ​Kjeldahl.
➢ Determinar la concentración de nitrógeno amoniacal por la técnica de
volumetría ácido-base por retrovaloración titulando con NaOH estandarizado
y​ ​aplicando​ ​las​ ​leyes​ ​estequiometría.
1.3. Hipótesis
La concentración de amoniaco,NH​3​,una base de Bronsted y Lowry porque
acepta iones H​+ ​formando amonio NH​4​+ ​puede determinarse desprendiendo y
arrastrándolo como gas amoniaco con vapor de agua en una reacción
ácido-base usando la técnica de la retrovaloración o valoración inversa y
aplicando​ ​las​ ​leyes​ ​de​ ​estequiometria.

2. Revisión​ ​de​ ​la​ ​literatura

El método más común para determinar el nitrógeno orgánico es el método de
Kjeldahl,el cual está basado en una valoración de neutralización.El procedimiento
es sencillo,no requiere un equipo especial y es fácilmente adaptable a los análisis
de un gran número de muestras.Este método es el procedimiento estándar para
determinar el contenido de proteínas en granos,carne y materiales biológicos.Ya
que la mayoría de proteínas contienen aproximadamente el mismo porcentaje de
nitrógeno de este por un factor adecuado que proporciona el porcentaje de de
proteína​ ​en​ ​una​ ​muestra.(Skoog.et​ ​al.,2014)

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​TABLA​ ​1.​​ ​Factores​ ​de​ ​conversión​ ​de​ ​nitrógeno​ ​en​ ​proteínas

En el método de Kjeldahl ,la muestra es descompuesta en ácido sulfúrico caliente

y concentrado para convertir la unión de nitrógeno a ion amonio . La disolución
resultante es enfriada, diluida y se hace básica, un proceso que convierte los iones
amonio en amoniaco. el amoníaco es destilado de la disolución básica, de y
valoración​ ​neutralización.(Skoog.et​ ​al,2014).
Es​ ​decir​ ​el​ ​método​ ​comprende​ ​dos​ ​operaciones​ ​unitarias​ ​previas​ ​a​ ​la​ ​titulación:
1) Digestión vía húmeda : se realiza con ácido sulfúrico concentrado,
catalizadores y temperatura alta con lo cual el nitrógeno orgánico pasa a
nitrógeno​ ​como​ ​sulfato​ ​de​ ​amonio.

2
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2) Destilación: terminada la digestión,la solución se enfría,se alcaliniza con

hidróxido de sodio concentrado con lo que el ion amonio se transforma a gas
amoníaco.El amoníaco liberado se arrastra con vapor de agua por
destilación,se​ ​recoge​ ​en​ ​una​ ​solución​ ​ácida;​ ​finalmente​ ​se​ ​titula.
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​OPERACIONES​ ​PREVIAS​ ​A​ ​LA​ ​TITULACIÓN:
1.DIGESTIÓN​ ​VÍA​ ​HÚMEDA
El paso crucial en el método de kjeldahl es la descomposición con ácido sulfúrico;
este oxida el carbono y el hidrógeno en la muestra, el dióxido de carbono y agua.
sin embargo, el el destino del nitrógeno depende de su estado de combinación en
la muestra original. los nitrógenos de aminas y amidas son convertidos
cuantitativamente e ion amonio. en cambio, los grupos Nitro, azo y azoxi son
propensos a producir el elemento o sus diversos óxidos todos los cuales se han
perdido desde el medio ácido caliente. Esta pérdida puede evitarse retratando la
muestra como agente reductor para formar amina o amida. en un esquema de
pre reducción el ácido salicílico y el tiosulfato de sodio son añadidos a la
disolución de ácido sulfúrico concentrado que contiene a la muestra. después de
un​ ​breve​ ​periodo,​ ​la​ ​ ​digestión​ ​es​ ​realizada​ ​en​ ​forma​ ​habitual​ ​.
Este paso frecuentemente es el que más tiempo consume en una determinación
de Kjeldahl. Algunas muestras pueden requerir periodos de calentamiento
superiores aún ahora. . Por ello se realizaron algunas modificaciones entre la más
utilizada la de Gunning, que añadió una sal neutra, como el sulfato de potasio
para incrementar el punto de ebullición de la disolución de ácido sulfúrico, y por lo
tanto la temperatura a la que ocurre la descomposición.En otra modificación, se
añade una disolución de peróxido de hidrógeno después que la digestión ha
descompuesto​ ​la​ ​mayor​ ​parte​ ​de​ ​la​ ​matriz​ ​órgano.​ ​(Skoog.et​ ​al,2014).

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​FIGURA​ ​N°1.​ ​Equipo​ ​de​ ​digestión​ ​de​ ​Kjeldahl.Fuente:​ ​Propia

C​W​H​X​O​Y​N​Z​​ ​+​ ​H​2​SO​4​​ ​----​ ​catalizadores,​ ​calor​ ​ ​------->​ ​NH​4​HSO​4(en​ ​H2SO4)​ ​+CO​2(g)​+SO​2(g)​+​ ​H​2​O​(gas)

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​1

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2.​ ​DESTILACIÓN

Tras la digestión se procede neutralizar el ácido sulfúrico con hidróxido de sodio.

Esto libera amoniaco que se separa de la mezcla por destilación con arrastre de
vapor.
En la destilación con arrastre de vapor, se somete a calentamiento directo la
solución que se va destilar.Después,el vapor atraviesa la solución,llevando
consigo el amoniaco volátil,que se condensa y recoge como en cualquier
destilación.
El destilado de la mezcla de Kjeldahl se recoge en un volumen conocido de una
solución estándar de HCl o también cualquier ácido fuerte como HNO​3 y​ HSO​4 .Se
​
valora por retroceso con álcali el exceso de ácido,para tener una indicación del
contenido de amoniaco.Por cada molécula de amoniaco encontrada en el
destilado,hay​ ​un​ ​átomo​ ​de​ ​nitrógeno​ ​en​ ​la​ ​muestra.(Connors,1981).
Si​ ​el​ ​ácido​ ​es​ ​el​ ​H​2​SO​4​ ​ ​ la​
​ ​reacción​ ​es:

+​ -2​
​ ​ ​ ​ ​2​ ​NH​4​OH​(ac)​ ​ +​
​ ​1​ ​H​2​SO​4​​ ​----------------------​ ​>​ ​ ​ ​2​ ​NH​ 4(ac)​​ ​+​ ​SO​ 4(ac)​​ ​+​ ​H​2​O

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​2

Una variación de este método emplea una solución de ácido bórico.Para recoger
el amoníaco en la destilación con vapor ;no se necesita saber de la concentración
del ácido bórico . El amoníaco queda fijado en la solución como borato de amonio
; susceptible de valorarse directamente como base con una solución de ácido
clorhídrico​ ​estándar​ ​.(Connors,1981)

+​ -​
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​NH​4​OH​​ ​ +​
​ ​H​3​BO​3​​ ​-----------------------------------​ ​ ​ ​>​ ​ ​NH​ 4​+​ ​H​3​BO​3​ ​ ​+​ ​H​2​O

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​3

El ácido bórico es demasiado débil para titularse, pero el borato, que es

equivalente a la cantidad de amoniaco, es una base Brønsted lo suficientemente
fuerte como para poderlo titular con un ácido estándar hasta el punto final de rojo
de metilo. El ácido bórico es tan débil que no interfiere, y no es necesario conocer
su​ ​concentración​ ​con​ ​exactitud.(​ ​Gary,1981)

TITULACIÓN
Dependiendo del tipo de ácido usado para la captura del amoniaco durante la
destilación​ ​se​ ​procede​ ​a​ ​la​ ​valoración.
a)Con ácido sulfúrico por retrovaloración: cuando el amoniaco se recibió en un
exceso de una solución de un ácido fuerte, se titula el remanente del ácido con
una​ ​base​ ​estandarizada.

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Reacción​ ​de​ ​titulación:

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​2NaOH​ ​+​ ​H​2​SO​4(ac)en​ ​exceso​ ​-----​ ​>​ ​2​ ​Na​+​(ac)​+SO​4​-2​(ac)​+​ ​H​2​O

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​4

​ ​mmoles​ ​H​2​SO​4​​ ​exceso=mmoles​ ​NaOH​ ​x​ ​factor​ ​estequiometrico

mmoles​ ​NH​3​​ ​=​ ​(mmoles​ ​H​2​SO​4​ tot​
​ ​ ​-mmoles​ ​H​2​SO​4​​ ​de​ ​exceso)​ ​x​ ​fator​ ​estq.

El​ ​porcentajes​ ​de​ ​nitrógeno​ ​se​ ​puede​ ​resumir​ ​con​ ​la​ ​siguiente​ ​relación:

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​​ ​(VxM​H2SO4​ ​total​​ ​-​ ​VxM​​ ​NaOH​ x​ ​ ​0,​ ​5,​ ​excedidos)​ ​x2x0.014​ ​ ​x​ ​100

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​W​ ​de​ ​muestra

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​5

b) Valoración del borato:Cuando el amoniaco se recibió en una solución de un

ácido débil como el ácido bórico y se han producidos boratos(su base
conjugada),se​ ​titulan​ ​los​ ​boratos​ ​con​ ​una​ ​solución​ ​estandarizada​ ​de​ ​HCl:es​ ​decir:

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​1​ ​H​2​BO​-​3​​ ​+​ ​HCl---------------------------​ ​>​ ​H​3​BO​3

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​6

La modificación del ácido bórico del método de Kjeldahl presenta la ventaja sobre
el método retrovaalorativo de que sólo se necesita una disolución patrón del
ácido.(Palma,2017)

Porcentaje​ ​de​ ​Nitrógeno.

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​w(g)​ ​de​ ​N​ ​en​ ​la​ ​muestra​ ​x100

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​w(g)​ ​de​ ​la​ ​muestra

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​7

A​ ​partir​ ​del​ ​amoniaco​ ​cuantificado:

​ ​ ​w(g)​ ​NH​3​​ ​=​ ​mmoles​ ​de​ ​NH​3​ x​​ ​w(g)​ ​1​ ​mmol​ ​de​ ​NH​3
​ ​ ​w(g)​ ​de​ ​N=​ ​w(g)​ ​NH​3​​ ​X​ ​14gN/17g​ ​NH​3
​ ​Entonces​ ​w(g)​ ​NH​3​=​ ​MHCl​ ​ ​ ​x​ ​V​Hcl​​ ​x1x0.017x14g​ ​N/17g​ ​NH​3

En​ ​resumen​ ​,una​ ​fórmula​ ​general​ ​para​ ​el​ ​cálculo​ ​del​ ​%​ ​del​ ​nitrógeno​ ​es

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​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​ %N=​ ​M​ ​x​ ​V​HCl​​ ​F.E.​ ​x​ ​0.014​ ​x100

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​W(g)muestra

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Ecuación​ ​8

El​ ​porcentaje​ ​de​ ​proteínas​ ​en​ ​la​ ​muestra

Si asumimos que todo el nitrógeno proviene de sus proteínas entonces se puede
calcular el contenido de proteínas a través del contenido de nitrógeno. Es
conocido el tipo de proteínas que hay en un determinado tipo de alimento; y
también se sabe cuál es el contenido de nitrógeno en dichas de
proteínas.(Palma,2017)
Conocemos el peso de nitrógeno de la muestra el peso de proteína se puede
calcular​ ​indirectamente;​ ​por​ ​ejemplo:

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​w(g)​ ​caseína=w(g)​ ​N​ ​de​ ​proteína​ ​de​ ​leche​ ​x​ 1 ​ 00g​ ​de​ ​caseína
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​15.67g​ ​de​ ​nitrógeno
También:

​ ​W(g)​ ​proteína​ ​leche=​ ​gNx100/15,67=​ ​gNx6.38

Para​ ​el​ ​caso​ ​de​ ​la​ ​proteína​ ​de​ ​harina​ ​de​ ​trigo​ ​integral:

W(g)​ ​de​ ​proteína​ ​de​ ​trigo=​ ​gNx100/17,15=gNx5.83

Los​ ​valores​ ​6,38​ ​y​ ​5,83​ ​son​ ​denominados​ ​factores​ ​de​ ​conversión.​ ​En​ ​resumen​ ​la
relación​ ​entre​ ​el​ ​contenido​ ​de​ ​proteína​ ​y​ ​contenido​ ​de​ ​nitrógeno​ ​es:

​ ​%proteína=​ ​%N​ ​x​ ​factor​ ​conversión​ ​gravimétrico​ ​de​ ​N​ ​a​ ​proteína

Se ha establecido un factor universal convencional cuyo valor es :6,25(16g

N/100g​ ​proteína​ ​)​ ​por​ ​consiguiente​ ​%Proteína​ ​=%N​ ​x​ ​6,25.

Tener​ ​en​ ​cuenta​ ​los​ ​valores​ ​específicos​ ​de​ ​la​ ​Tabla​ ​1.

3. Materiales​ ​y​ ​métodos

3.1. Materiales
3.1.1. Infraestructura​ ​de​ ​laboratorio
➢ 1​ ​Bureta​ ​calibrada​ ​de​ ​25​ ​o​ ​50​ ​mL.
➢ 2​ ​Matraz​ ​Erlenmeyer​ ​de​ ​125​ ​mL​ ​o​ ​250​ ​mL.
➢ 2​ ​Vasos​ ​de​ ​precipitado​ ​de​ ​50​ ​o​ ​100​ ​mL.
➢ 1​ ​frasco​ ​lavador​ ​con​ ​agua​ ​destilada.
➢ Pipetas​ ​volumétricas​ ​de​ ​5,​ ​10​ ​o​ ​20​ ​mL.
➢ Matraz​ ​volumétrico​ ​(fiola)​ ​de​ ​50​ ​o​ ​100​ ​mL.
➢ Pizeta​ ​con​ ​agua​ ​destilada.
➢ Probeta​ ​graduada​ ​de​ ​15​ ​o​ ​20​ ​mL.
➢ Bombillas​ ​de​ ​succión.
➢ 2​ ​balones​ ​de​ ​digestión​ ​Kjeldahl​ ​de​ ​100​ ​mL.
➢ Frascos​ ​goteros​ ​con​ ​indicadores.

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3.1.2.
Reactivos
➢ Muestra​ ​problema​ ​de​ ​tejido​ ​biológico​ ​u​ ​orgánico.
➢ Catalizador​ ​(​ ​mezcla​ ​de​ ​100g​ ​K2SO4​ ​más​ ​0,25g​ ​CuSO4).
➢ Ácido​ ​sulfúrico​ ​concentrado.
➢ Hidróxido​ ​de​ ​sodio​ ​12M.
➢ Ácido​ ​sulfúrico​ ​0,10​ ​M​ ​estandarizado.
➢ Ácido​ ​clorhídrico​ ​0,05​ ​M​ ​estandarizado.
➢ Solución​ ​de​ ​ácido​ ​bórico​ ​el​ ​cual​ ​presenta​ ​indicadores:​ ​verde
de​ ​bromofenol​ ​al​ ​0,1​ ​%​ ​y​ ​rojo​ ​de​ ​metilo​ ​al​ ​0,1%​ ​.
3.1.3. Equipos
➢ Balanza​ ​analítica.
➢ Equipo​ ​de​ ​digestión​ ​en​ ​campana​ ​extractora​ ​para​ ​capturar
gases​ ​emitidos.
➢ Equipo​ ​de​ ​destilación​ ​Kjeldahl.
3.2. Métodos

FIGURA​ ​N°2.​ ​Diagrama​ ​de​ ​flujo​ ​“Método​ ​para​ ​la​ ​determinación​ ​de​ ​nitrógeno​ ​por​ ​el
método​ ​Kjeldahl.

4. Resultados​ ​y​ ​discusión

4.1. Resultados

HARINA​ ​DE​ ​CAÑIHUA

A Peso​ ​de​ ​muestra​ ​en​ ​g 0,5641​ ​g

B Volumen de H2SO4 mL tomado para 25​ ​mL

captura​ ​del​ ​NH3

C Molaridad​ ​de​ ​H2SO4​ ​estandarizado 0,0498​ ​M

D Volumen de NaOH gastado en la 18​ ​mL

titulación

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E Molaridad​ ​del​ ​NaOH​ ​estandarizado 0,1088​ ​M

F Factor estequiométrico de NaOH a 2:1

H2SO4
2NaOH​ ​+​ ​H2SO4​ ​→​ ​Na2SO4​ ​+​ ​2H2O

G Factor​ ​estequiométrico​ ​de​ ​H2SO4​ ​a​ ​NH3 1:2

2NH3​ ​+​ ​H2SO4​ ​→​ ​(NH4)2SO4

L %​ ​N​ ​(p/p) 1,​ ​319%

M % Proteínas (p/p) = %N x factor 8,25​ ​%

gravimétrico
TABLA​ ​1.​ ​Determinación​ ​de​ ​Nitrógeno​ ​orgánico.

FIGURA​ ​3.​ ​Determinación​ ​de​ ​porcentaje​ ​de​ ​nitrógeno.

%N=​ ​[(25mL)(0,0498M)​ ​-​ ​(18mL)(0,1088M)(0,5)](2)(0,014)

(0,5641​ ​g)
%N​ ​=​ ​1,319​ ​%.

FIGURA​ ​4.​ ​Determinación​ ​de​ ​porcentaje​ ​de​ ​proteínas.

%​ ​Proteínas​ ​=​ ​(1,319)(6,25)
%​ ​Proteínas​ ​=​ ​8,25​ ​%

MESA MUESTRA %N %​ ​PROTEÍNA

1 Cañihua 1,3193% 8,25%

2 Quinua 0,2540% 1,59​ ​%

3 Cañihua 0,9364% 5,85%

4 Quinua 0,8542% 5,34%

TABLA​ ​N°​ ​2.​​ ​Resultados​ ​de​ ​%N​ ​y​ ​%Proteína.

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4.2. Discusión

➢ El porcentaje de proteína estimado de quinua es de 10,7 % por cada 100 gr

de quinua (Gorbitz A.) como figura en la TABLA N°3 sin embargo en los
análisis efectuados se obtiene un porcentaje de 1,59% y 5,34% (TABLA N°2);
es decir que está muy por debajo del % promedio, ello se puede deber a
diversos​ ​factores​ ​que​ ​generaron​ ​error​ ​en​ ​el​ ​resultado.

TABLA​ ​N°3.​ ​Composición​ ​química​ ​y​ ​valor​ ​nutricional​ ​de​ ​la​ ​quinua.

➢ El porcentaje de proteína estimado de cañihua varía entre los 13,80%

(FUNIBER) y 15.18% (Lescano,1997) como figuran en la TABLA N°4 y
TABLA N°5 respectivamente; sin embargo en los análisis efectuados se
obtienen porcentajes de 8,25% y 5,85% (TABLA N°2); esto evidencia que los
datos obtenidos están muy por debajo del % promedio; ello puede deberse a
diversos​ ​factores​ ​que​ ​generan​ ​error​ ​en​ ​la​ ​determinación​ ​de​ ​los​ ​resultados.

TABLA​ ​N°4.​ ​Valor​ ​nutricional​ ​de​ ​Cañihua​ ​parda.

Fuente:​ ​Universidad​ ​Universitaria​ ​Iberoamericana​ ​(FUNIBER).

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TABLA​ ​N°5.​ ​Valor​ ​nutricional​ ​de​ ​la​ ​Cañihua.

➢ Como en el tratamiento Kjeldahl de alimentos no se determinan sólo

proteínas o aminoácidos libres, sino también ácidos nucleicos y sales de
amonio y también nitrógeno ligado de compuestos orgánicos o vitaminas, el
nitrógeno ligado orgánico se expresa como ¨nitrógeno total calculado como
proteína¨ o como ¨proteína total¨ (N x f). No obstante, como por lo general los
alimentos sólo contienen cantidades traza de compuestos aromáticos
nitrogenados​ ​y​ ​de​ ​vitaminas,​ ​el​ ​error​ ​así​ ​cometido​ ​se​ ​considera​ ​despreciable.
➢ La pérdida de nitrógeno durante la digestión. El exceso de sulfato de sodio o
potasio que se añade al ácido para elevar el punto de ebullición, puede
producir​ ​una​ ​descomposición​ ​por​ ​calor​ ​y​ ​por​ ​lo​ ​tanto​ ​pérdida​ ​de​ ​nitrógeno.
➢ La digestión incompleta de la muestra: generalmente debida a falta de tiempo
de​ ​reacción​ ​o​ ​falta​ ​de​ ​ácido​ ​sulfúrico.
➢ Neutralización incompleta de la mezcla digerida: es necesario añadir
suficiente NaOH para neutralizar el exceso de ácido sulfúrico resultante de la
digestión así como transformar todo el amonio formado en la digestión en
amoníaco.
➢ Pudo haber una pérdida de amoníaco por fugas en el circuito de destilación
alterando​ ​el​ ​resultado​ ​cuantitativo.
➢ El porcentaje de cañihua y quinua pudo haber sido afectado debido a que se
usó el factor de conversión genérico de nitrógeno a proteínas y no el factor
propio​ ​de​ ​dichas​ ​muestras.

5. Conclusiones
➢ La determinación de proteína por el método de Kjeldahl, representa una técnica
analítica muy común, podemos decir que es un método dispendioso y demorado,
pero es un método eficiente para el estudio de este ya que se puede observar todos
su​ ​procedimiento.

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Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

➢ El método de Kjeldahl está basado en la combustión húmeda de la muestra,

calentándose con ácido sulfúrico concentrado en presencia de catalizadores
metálicos y de otro tipo para efectuar la reducción del nitrógeno orgánico de la
muestra a amoníaco, el cual es retenido en solución como sulfato de amonio. La
solución de digestión se hace alcalina y se destila o se arrastra con vapor para
liberar el amoníaco que es atrapado y titulado. De este modo podemos obtener el
porcentaje de nitrógeno en la muestra de cañihua de un 1,319% y como proteína se
reporta​ ​de​ ​la​ ​cañihua​ ​un​ ​8.25%.
➢ Al realizar la prueba y obtener los datos se obtuvo que la medida de los valores
encontrados no difería significativamente del valor real; sin embargo se debió
rechazar por medio de una prueba que un valor puede estar sujeto a errores que
afectaron de manera significativa los resultados; en este método constituyen fuentes
de error: La inclusión de nitrógeno no proteico como parte de la proteína; la pérdida
de​ ​nitrógeno​ ​durante​ ​la​ ​digestión,​ ​la​ ​digestión​ ​incompleta​ ​de​ ​la​ ​muestra.

6. Recomendaciones
➢ La práctica de laboratorio debe ser desarrollada siguiendo los lineamientos
establecidos​ ​en​ ​el​ ​Manual​ ​de​ ​Buenas​ ​Prácticas​ ​de​ ​Laboratorio.
➢ El trabajo en el laboratorio debe ser realizado con orden y concentración al
desarrollar​ ​diferentes​ ​procesos​ ​para​ ​asegurar​ ​exactitud​ ​y​ ​precisión​ ​en​ ​los​ ​resultados.
➢ Aplicar​ ​los​ ​lineamientos​ ​del​ ​Manual​ ​de​ ​Gestión​ ​de​ ​Residuos​ ​de​ ​Laboratorio.
➢ Manejar las instrucciones de tratamiento y disposición de residuos sólidos, efluentes
y/o​ ​emisiones​ ​en​ ​área​ ​de​ ​trabajo.​ ​Referencia:​ ​“elementos​ ​de​ ​la​ ​norma​ ​ISO​ ​14001”.
➢ Utilizar​ ​los​ ​recipientes​ ​para​ ​disposición​ ​de​ ​residuos​ ​sólidos.
➢ Utilizar​ ​los​ ​recipientes​ ​para​ ​disposición​ ​de​ ​residuos​ ​líquidos
➢ Usar​ ​material​ ​y​ ​equipo​ ​de​ ​protección​ ​personal:​ ​guantes​ ​,​ ​mandil,​ ​entre​ ​otros.

7. Referencias​ ​bibliográficas
➢ Gary.C.​ ​D.​ ​(1981).Química​ ​analítica.​ ​Limusa.p​ ​.​ ​Capítulo​ ​2.
➢ O.H.​ ​Lowry,​ ​ ​N.J.​ ​Rosebrough,​ ​A.L.​ ​Farr​ ​y​ ​R.J.​ ​Randall.​ ​J.​ ​Biol.​ ​Chem.​ ​193:
265-275​ ​(1951)
➢ Gary.C.​ ​D.​ ​(1981).​ ​Análisis​ ​de​ ​Kjeldahl:​ ​Determinación​ ​de​ ​proteínas​ ​.Química
analítica.​ ​Limusa.p.287
➢ Skoog, D. a., West, D. M., Holler, F. J., & Couch, S. R. (2005). Fundamentos
de Química Analítica. p.231,388 Disponible en:
https://doi.org/10.1016/S0584-8547
➢ Connors, K. A. (1981). Valoraciones oxidación reducción. In Matias Guzman
(Ed.), Curso de análisis farmacéutico (ensayo del medicamento) (2nd ed., p.
492). Barcelona: reverte, S.A.. Disponible en
https://books.google.com/books?id=HRhFUkEUlyAC&pgis=1
➢ Palma,J.C(2017)​ ​Química​ ​analítica.Guía​ ​prácticas​ ​de​ ​laboratorio.

8. Anexos

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Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

9. CUESTIONARIO
9.1. ¿Cuál​ ​es​ ​el​ ​título,​ ​propósito​ ​e​ ​hipótesis​ ​de​ ​la​ ​práctica​ ​2?
➢ Título:​ ​Determinación​ ​de​ ​nitrógeno​ ​orgánico-Kjeldahl.
➢ Propósito:​ ​Determinar​ ​la​ ​concentración​ ​de​ ​nitrógeno​ ​amoniacal​ ​en
compuestos​ ​orgánicos​ ​e​ ​inorgánicos​ ​por​ ​la​ ​técnica​ ​de​ ​volumetría
ácido-base​ ​por​ ​retrovaloración​ ​titulado​ ​con​ ​NaOH​ ​estandarizado​ ​y
aplicando​ ​las​ ​leyes​ ​de​ ​la​ ​estequiometría.
➢ Hipótesis:​ ​La​ ​concentración​ ​de​ ​amoniaco​ ​puede​ ​determinarse
desprendiendo​ ​y​ ​arrastrándolo​ ​como​ ​gas​ ​NH3​ ​con​ ​vapor​ ​de​ ​agua​ ​en
una​ ​reacción​ ​ácido-base​ ​usando​ ​la​ ​técnica​ ​de​ ​la​ ​retrovaloración​ ​o
valoración​ ​inversa​ ​y​ ​aplicando​ ​las​ ​leyes​ ​de​ ​la​ ​estequiometría.
9.2. ¿Cómo​ ​demuestra​ ​que​ ​el​ ​resultado​ ​aportado​ ​por​ ​usted​ ​es​ ​confiable?
➢ Por​ ​los​ ​parámetros​ ​de​ ​calidad​ ​de​ ​resultado​ ​analítico,​ ​teniendo
exactitud​ ​y​ ​precisión.
9.3. ¿Cómo​ ​demuestra​ ​usted​ ​que​ ​trabajó​ ​de​ ​manera​ ​segura?
➢ Debido​ ​a​ ​que​ ​seguí​ ​las​ ​procesos​ ​adecuados​ ​de​ ​buenas​ ​prácticas​ ​en
el​ ​laboratorio.
9.4. ¿Cómo​ ​demuestra​ ​usted​ ​que​ ​el​ ​impacto​ ​ambiental​ ​de​ ​su​ ​actividad​ ​en​ ​el
laboratorio​ ​fue​ ​mínimo?
➢ Porque​ ​se​ ​usaron​ ​los​ ​contenedores​ ​de​ ​desechos​ ​peligrosos​ ​y​ ​fue​ ​un
experimento​ ​controlado.
9.5. Investigue​ ​el​ ​fundamento​ ​analítico​ ​para​ ​la​ ​determinación​ ​de​ ​proteínas
por​ ​cada​ ​uno​ ​de​ ​los​ ​siguientes​ ​métodos:
➢ Método​ ​de​ ​Biuret
En​ ​solución​ ​alcalina​ ​el​ ​Cu+2​ ​reacciona​ ​con​ ​el​ ​enlace​ ​peptídico​ ​de​ ​las
proteínas​ ​dando​ ​un​ ​color​ ​purpúreo​ ​que​ ​se​ ​cuantifica
espectrofotométricamente​ ​(540nm).​ ​Como​ ​estándar​ ​se​ ​utiliza​ ​una
solución​ ​de​ ​albúmina.​ ​Proteína​ ​+​ ​Cu+2​ ​Complejo​ ​Cu-Proteína
(púrpura).
➢ Método​ ​de​ ​Lowry
Dependen​ ​de​ ​la​ ​concentración​ ​de​ ​tirosina​ ​y​ ​triptófano​ ​de​ ​la​ ​muestra.
Consiste​ ​en​ ​dos​ ​reacciones:​ ​1.​ ​Reacción​ ​de​ ​Biuret​ ​y​ ​2.​ ​Reacción​ ​de
Folin:​ ​característica​ ​de​ ​los​ ​grupos​ ​–OH​ ​reductores​ ​de​ ​los​ ​aminoácidos
tirosina​ ​y​ ​triptófano​ ​que,​ ​junto​ ​con​ ​los​ ​complejos​ ​Cu+2​ ​,​ ​reducen​ ​el
reactivo​ ​de​ ​Folin​ ​generando​ ​un​ ​color​ ​azul.
➢ Método​ ​del​ ​ácido​ ​Bicinconínico​ ​(BCA)
El​ ​ácido​ ​bicinconínico,​ ​sal​ ​sódica,​ ​es​ ​un​ ​compuesto​ ​capaz​ ​de​ ​formar
un​ ​complejo​ ​púrpura​ ​intenso​ ​con​ ​iones​ ​Cu1+​ ​en​ ​medio​ ​alcalino.​ ​Este
reactivo​ ​forma​ ​la​ ​base​ ​de​ ​un​ ​método​ ​analítico​ ​capaz​ ​de​ ​monitorizar​ ​el
ión​ ​cuproso​ ​producido​ ​en​ ​una​ ​reacción​ ​entre​ ​las​ ​proteínas​ ​con​ ​Cu2+
en​ ​medio​ ​alcalino​ ​(reacción​ ​de​ ​Biuret).​ ​La​ ​estabilidad​ ​del​ ​reactivo​ ​y​ ​el
cromóforo​ ​proporciona​ ​un​ ​método​ ​para​ ​la​ ​cuantificación​ ​de​ ​proteínas
que​ ​es​ ​sencillo,​ ​rápido,​ ​muy​ ​sensible,​ ​y​ ​que​ ​muestra​ ​una​ ​gran
tolerancia​ ​a​ ​compuestos​ ​que​ ​afectan​ ​a​ ​otros​ ​métodos.
➢ Método​ ​de​ ​absorción​ ​UV​ ​a​ ​280​ ​nm
Se​ ​usará​ ​la​ ​ecuación​ ​de​ ​Lambert​ ​y​ ​Beer.​ ​El​ ​coeficiente​ ​de​ ​extinción

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Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

molar​ ​de​ ​la​ ​Albúmina​ ​de​ ​Suero​ ​Bovino​ ​(BSA)​ ​que​ ​es​ ​43​ ​824​ ​M-1​ ​cm-1
o​ ​bien​ ​usando​ ​el​ ​coeficiente​ ​dado​ ​en​ ​porcentaje​ ​que​ ​es​ ​de​ ​6.6​ ​para
una​ ​solución​ ​de​ ​BSA​ ​al​ ​1%​ ​(10​ ​mg/mL).
La​ ​fórmula​ ​para​ ​determinar​ ​la​ ​concentración​ ​de​ ​la​ ​muestra.

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Figura​ ​N°1.​ ​Fórmula​ ​para​ ​calcular​ ​la​ ​concentración​ ​de​ ​la​ ​muestra.
➢ Método​ ​de​ ​adhesión​ ​de​ ​colorante
En​ ​determinaciones​ ​colorimétricas,​ ​se​ ​cumple​ ​una​ ​relación
proporcional​ ​entre​ ​la​ ​magnitud​ ​o​ ​intensidad​ ​de​ ​color​ ​que​ ​da​ ​una
reacción​ ​y​ ​la​ ​cantidad​ ​del​ ​reactivo​ ​que​ ​la​ ​provoca.
La​ ​intensidad​ ​de​ ​color​ ​se​ ​mide​ ​con​ ​un​ ​espectrofotómetro​ ​o
colorímetro​ ​en​ ​función​ ​de​ ​las​ ​concentraciones​ ​crecientes​ ​de​ ​la
sustancia​ ​se​ ​obtiene​ ​una​ ​recta.​ ​Es​ ​decir,​ ​a​ ​mayor​ ​cantidad​ ​de
proteína,​ ​mayor​ ​cantidad​ ​de​ ​producto​ ​de​ ​reacción​ ​y​ ​por​ ​lo​ ​tanto,
mayor​ ​intensidad​ ​de​ ​color.
➢ Método​ ​de​ ​Bradfort
Se​ ​basa​ ​en​ ​la​ ​unión​ ​de​ ​un​ ​colorante,​ ​Comassie​ ​Blue​ ​G-250​ ​(también
Serva​ ​Blue)​ ​a​ ​las​ ​proteínas.​ ​El​ ​colorante,​ ​en​ ​solución​ ​ácida,​ ​existe​ ​en
dos​ ​formas​ ​una​ ​azul​ ​y​ ​otra​ ​naranja.​ ​Las​ ​proteínas​ ​se​ ​unen​ ​a​ ​la​ ​forma
azul​ ​para​ ​formar​ ​un​ ​complejo​ ​proteína-colorante​ ​con​ ​un​ ​coeficiente​ ​de
extinción​ ​mayor​ ​que​ ​el​ ​colorante​ ​libre.​ ​Este​ ​método​ ​es​ ​sensible​ ​(1-15
μg),​ ​simple,​ ​rápido,​ ​barato​ ​y​ ​pocas​ ​sustancias​ ​interfieren​ ​en​ ​su
determinación.​ ​Entre​ ​las​ ​sustancias​ ​que​ ​interfieren​ ​están​ ​los
detergentes​ ​y​ ​las​ ​soluciones​ ​básicas.
➢ Método​ ​de​ ​la​ ​Ninhidrina
Todas​ ​aquellas​ ​sustancias​ ​que​ ​presentan​ ​al​ ​menos​ ​un​ ​grupo​ ​amino​ ​y
uno​ ​carboxilo​ ​libre,​ ​reaccionaran​ ​con​ ​la​ ​ninhidrina.​ ​La​ ​positividad​ ​se
manifiesta​ ​por​ ​la​ ​aparición​ ​de​ ​un​ ​color​ ​violáceo​ ​o​ ​amarillo.​ ​Debido​ ​a
que​ ​las​ ​proteínas​ ​y​ ​los​ ​aminoácidos,​ ​poseen​ ​esta​ ​característica,​ ​la
reacción​ ​sirve​ ​para​ ​identificarlos.​ ​Algunas​ ​soluciones​ ​de​ ​amonio​ ​y
aminas,​ ​dan​ ​la​ ​coloración​ ​característica,​ ​aparentemente​ ​debido​ ​a​ ​una
oxidación​ ​y​ ​reducción​ ​intramolecular​ ​de​ ​la​ ​ninhidrina​ ​en​ ​presencia​ ​de
amoníaco.​ ​Los​ ​aminoácidos​ ​porina​ ​e​ ​hidroxiprolina,​ ​que​ ​no​ ​poseen
grupo​ ​amino​ ​sino​ ​imino​ ​(-NH-),​ ​dan​ ​un​ ​color​ ​rojo​ ​que​ ​pasa
rápidamente​ ​a​ ​amarillo.
➢ Método​ ​turbidimétrico
Medición​ ​de​ ​la​ ​turbidez​ ​resultante​ ​de​ ​la​ ​precipitación​ ​de​ ​proteínas.
mide​ ​la​ ​disminución​ ​de​ ​la​ ​luz​ ​transmitida​ ​a​ ​través​ ​de​ ​una​ ​suspensión
de​ ​partículas​ ​utilizando​ ​para​ ​ello​ ​un​ ​espectrofotómetro​ ​(detector​ ​en​ ​la
misma​ ​dirección​ ​del​ ​haz​ ​de​ ​luz,​ ​se​ ​mide​ ​A​ ​o​ ​T).​ ​Se​ ​suele​ ​utilizar​ ​para
soluciones​ ​concentradas​ ​(para​ ​que​ ​haya​ ​una​ ​buena​ ​disminución​ ​de​ ​la
luz​ ​transmitida)​ ​ej.​ ​determinación​ ​de​ ​proteínas​ ​totales​ ​en​ ​suero,​ ​LCR

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Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

u​ ​orina​ ​(haciendo​ ​que​ ​las​ ​proteínas​ ​precipiten​ ​con​ ​TCA​ ​o​ ​ácido
sulfosalicílico).
9.6. Un​ ​determinado​ ​cereal​ ​contiene​ ​16%​ ​de​ ​proteínas.​ ​Calcular​ ​el​ ​peso​ ​del
cereal​ ​que​ ​se​ ​tomaría​ ​como​ ​muestra​ ​para​ ​que​ ​al​ ​analizar​ ​con​ ​el​ ​método
de​ ​Kjeldahl​ ​del​ ​ácido​ ​bórico​ ​se​ ​utilice​ ​50​ ​mL​ ​de​ ​HCl​ ​0.025​ ​M;​ ​(factor​ ​de
conversión​ ​=​ ​5.7).
W(gr)​ ​=​ ​2,56​ ​mL​ ​N​ ​x​ ​50​ ​mL​ ​x​ ​0,025​ ​x​ ​5,7
W​ ​(gr)​ ​=​ ​18,​ ​24​ ​gr.

9.7. Una​ ​muestra​ ​de​ ​leche​ ​desecada​ ​pesa​ ​exactamente​ ​1​ ​g​ ​y​ ​se​ ​analiza​ ​por
el​ ​método​ ​de​ ​Kjeldahl.​ ​El​ ​amoniaco​ ​se​ ​recoge​ ​en​ ​50​ ​ml​ ​de​ ​HCl​ ​0,122​ ​M​ ​y
el​ ​exceso​ ​de​ ​ácido​ ​gasta​ ​20,7​ ​ml​ ​de​ ​NaOH​ ​0,145​ ​M.​ ​Calcular​ ​el
porcentaje​ ​de​ ​proteínas.
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N​ ​=​ ​50mLx0.122M​ ​-​ ​20mLx​ ​0.145M​ ​ ​ ​x100
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​1g
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​3.2​ ​%

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%P=​ ​ ​3.2​ ​%​ ​x​ ​6.38​ ​=​ ​20.416%

9.8. Una​ ​muestra​ ​de​ ​0,5​ ​g​ ​de​ ​un​ ​embutido​ ​es​ ​analizada​ ​por​ ​la​ ​técnica​ ​de
Kjeldahl​ ​(modificación:​ ​ácido​ ​bórico).​ ​El​ ​gasto​ ​de​ ​HCl​ ​0,116​ ​M​ ​fue​ ​de​ ​7,2
ml.​ ​Calcular​ ​el​ ​%​ ​de​ ​proteínas​ ​totales​ ​en​ ​la​ ​muestra.
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N​ ​=​ ​7.2​ ​x​ ​0.116x​ ​0.014​​ ​x100​ ​=2.34%
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​0.5g
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%P=2.34​ ​%​ ​ ​x6.25​ ​=​ ​14.625​ ​%
9.9. Un​ ​gramo​ ​de​ ​un​ ​fertilizante​ ​comercial​ ​es​ ​analizado​ ​por​ ​el​ ​procedimiento
de​ ​Kjeldahl.​ ​El​ ​amoniaco​ ​destilado​ ​es​ ​recibido​ ​en​ ​30​ ​ml​ ​de​ ​solución​ ​de
ácido​ ​bórico​ ​al​ ​2%.​ ​Finalmente​ ​se​ ​necesitaron​ ​45,32​ ​ml​ ​de​ ​HCl​ ​0,182​ ​M.
Calcular​ ​el​ ​%​ ​de​ ​nitrógeno​ ​en​ ​el​ ​fertilizante.
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​(​ ​45.32mLx​ ​0.182M​ ​-​ ​30​ ​mL​ ​x​ ​0.02M)​ ​x​ ​0.014​ ​x100
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​1g
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​10.7%

9.10. ¿Cuál​ ​será​ ​el​ ​peso​ ​en​ ​gramos​ ​de​ ​muestra​ ​que​ ​se​ ​analizará​ ​para​ ​que​ ​por
la​ ​técnica​ ​de​ ​Kjeldahl,​ ​variante​ ​ácido​ ​bórico,​ ​el​ ​gasto​ ​de​ ​HCl​ ​0,1M
consumido​ ​en​ ​la​ ​titulación​ ​final​ ​sea​ ​igual​ ​al​ ​porcentaje​ ​de​ ​proteínas
totales​ ​de​ ​la​ ​muestra?
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​0.1a​ ​x0.014x​100%
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​X
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%P=​ ​0.1a/X​ ​x0.014x100%​ ​x​ ​6.25
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Si​ ​:​ ​%P=​ ​a​ ​x​ ​100%
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​a​ ​=0.1a/X​ ​x​ ​0.014​ ​x​ ​6.25
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​X=​ ​0.00875

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Laboratorio​ ​de​ ​Química​ ​Analítica​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​Informe​ ​de​ ​laboratorio​ ​N°2

9.11. Una​ ​muestra​ ​impresa​ ​de​ ​0,25​ ​g​ ​de​ ​urea​ ​es​ ​analizada​ ​por​ ​la​ ​reciba​ ​de
Kjeldahl.​ ​El​ ​gasto​ ​en​ ​la​ ​valoración​ ​final​ ​fue​ ​de​ ​44,2​ ​ml​ ​de​ ​HCl​ ​0,35​ ​M.
Calcule​ ​el​ ​%​ ​de​ ​pureza​ ​de​ ​la​ ​muestra.
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​44.2mL​ ​x​ ​0.35​ ​M​ ​x100
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​0.25g

​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​6.188%
9.12. Se​ ​sabe​ ​que​ ​un​ ​embutido​ ​contiene​ ​20,09​ ​de​ ​proteínas​ ​totales.​ ​¿Cuál
será​ ​el​ ​volumen​ ​de​ ​HCl​ ​a​ ​0,125​ ​M​ ​que​ ​se​ ​gastará​ ​en​ ​la​ ​valoración​ ​final​ ​si
se​ ​analiza​ ​una​ ​muestra​ ​de​ ​0,875​ ​g​ ​por​ ​la​ ​técnica​ ​de​ ​Kjeldahl?
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%P=20.9
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​%N=​ ​ ​V​ ​X​ ​0.125​ ​X​ ​0.014​ ​X100%
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​0.875
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​20.9%=​ ​%​ ​N​ ​x​ ​6.25
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​N=3.344
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​3.344​ ​=​ ​0.125x​ ​0.014​ ​x​ ​V
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​0.8
​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​ ​V​ ​=​ ​1672mL

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