Bioensayo

Procedimiento que usa sistema biológico para evaluar cantidad

de constituyente activo y/o potencial contamiente.
Son indicadores de seguridad y de eficacia

Son métodos que permiten la determinación de la potencia u

otras propiedades de ciertas sustancias o preparaciones las
cuales no pueden ser adecuadamente evaluadas por métodos
físicos o químicos.

Permiten determinar ausencia o presencia de cierto tipo de

actividad (antibacteriana, presora), la calidad ( no antigenicidad,
toxicidad, o constituyentes (pirógenos, sustancias depresoras).

Por ello las pruebas microbiológicas, farmacológicas y

toxicológicas se las conoce como: Ensayos Biológicos
 Medicamento biológico
Definición de la EMEA: (Agencia Europea de Medicamentos)

Un medicamento biológico es un medicamento cuyo principio activo

es producido por, o deriva de un organismo vivo.

Los medicamentos biológicos son generalmente más difíciles de

caracterizar con respecto a medicamentes de origen químico.

Además, existe un amplio espectro de complejidad molecular entre

los diversos productos (de ADN recombinante, la sangre o derivados
de plasma, inmunológicos, genéticos y la terapia celular, etc.).

Asegurar:
Eficacia Calidad y Seguridad
 Tipos de ensayos biológicos

Valoraciones Biológicas (API) cuantifica  potencia

Ensayos de Pureza (ensayos límite). Químicos y biológicos

Generalmente para inyectables
Controles de calidad de materia prima o producto terminado
No evalúa API sino contaminantes (máximo permitido)
piretógenos
histaminosímiles
inocuidad
reactividad
antigenicidad

Estudios de toxicidad
 Valoraciones Biológicas

Evalúa la potencia de un producto biológico

Métodos comparativos con un Patrón de referencia

1925: 1er. Patrón internacional de Insulina

Primario y secundarios
Expresión de actividad: UI/ml o mg
Resultado: potencia estimada

Tipos:
in vivo (gonadotrofinas, eritropoyetina, AB,Vit.Tox.botulunica
in vitro (heparina, AB)

Reemplazos: calcitonina, ocitocina, insulina, dTC

Piretógenos y Ensayos de endotoxinas bacterianas (LAL)

Exógenos: lipopolisacáridos (endotoxinas) de bacterias Gram (-)

Endógenos: respuesta celular del huésped al estímulo.

 fiebre, activación fibrinolisis, alt. hemáticas, del MB de H de C,
renales , permeabilidad vascular.

Diferencias: pasaje BHE, resistencia al calor, latencia, tolerancia

La contaminación con piretógenos o endotoxinas bacterianas es
riesgosa especialmente en adm iv.

1942: incorporación en la USP cc ensayo en conejos para

detectar contaminación causante de fiebre por adm de inyectable
Consiste en medir el ↑ de la T rectal por adm iv de solucion de
esteril del producto
dosis < 10ml/kg / 10 min / iv.
1970: radiofármacos  necesidad estudios in vitro
productos antigénicos, l-asparaginasa

Ensayo LAL: determinación de cc de endotoxinas de Gram (-)

usando como reactivo el Lisado de Amebocitos del cangrejo
herradura Limulus polyphemus.
Proteína coagulable que por endotoxina gelifica.
Interferencia: heparina, gluconato de Calcio
Buen correlato con conejos si el piretógeno es endotoxina.

En la monografía individual figura el

límite de de endotoxinas del producto
(mat. Prima o PT)
Ensayo de sustancias vaso depresoras

Se realiza en productos de adm. parenteral

 Ensayo de inocuidad (Safety test)
Objetivo: detectar eventuales contaminantes inespecíficos.
Se realiza en productos de adm. oral y parenteral

Determinar reactividad biológica inaceptable o inesperada en productos

farmacéuticos.

Dosis: si la droga no figura en Farmacopea, se da la DL 0.1. o media unidad log

menos.
 METODOLOGÍA
Se utilizaron ratones machos de la cepa Swiss provenientes del Bioterio. Se
procedió de acuerdo (BP 2007, Iron Dextran Injection), La muestra se administró por
vía intravenosa, en la vena de la cola, a dos grupos de 10 ratones cada uno, cuyo peso
corporal fue entre 18 y 21 g. Este rango de peso está dentro de lo que establece la
Farmacopea Europea 3ra. Edición, 1997 (2.6.9. Abnormal toxicity, pág. 81) que es 17
a 22 g.
De acuerdo a lo solicitado por el Laboratorio, los ratones fueron administrados con
0.15 ml y 0.20 ml de la muestra sin diluir que corresponden a 150 y 200 mg de Fe
elemetal/kg respectivamente. Del lote de ampollas se seleccionaron 10 al azar para
cada dosis y el volumen administrado a cada uno de los 10 ratones fue tomado de una
ampolla distinta.
CRITERIO DE ACEPTACIÓN:
No más de 3 (tres) ratones mueren dentro de los 5 (cinco) días de la inyección. Si
más de 3 (tres) ratones mueren dentro de los 5 (cinco) días, se repite el test con otro
grupo de 20 (veinte) ratones. No más de 10 (diez) de los 30 (treinta) ratones usados en
los test combinados mueren dentro de los 5 (cinco) días de la inyección.
RESULTADOS
Ninguno de los ratones administrados con 0.15 ml/ratón murió dentro de los 5
(cinco) días posteriores a la administración.
Ninguno de los ratones administrados con 0.20 ml/ratón murió dentro de los 5
(cinco) días posteriores a la administración.
 Ensayos de Reactividad Biológica (FNA)

Determinar la reactividad biológica de materiales

elastoméricos, plásticos y otros polímeros destinados a estar
en contacto directo o indirecto con pacientes. Según material,
producto final y uso:

In vitro: Ensayo de difusión en agarosa

Ensayo de contacto directo
Ensayo de elución

In vivo: Ensayo de inyección sistémica (ratones)

Ensayo intracutáneo (conejos)
Ensayo de implantación (conejos)

http://www.anmat.gov.ar/webanmat/fna/flip_pages/Farmaco
pea_Vol_I/files/assets/basic-html/page209.html
 ENSAYO DE DIFUSIÓN EN AGAROSA

Este ensayo se emplea para evaluar materiales poliméricos o sus respectivos

extractos. En este ensayo la capa de agarosa protege a la monocapa
celular de un eventual daño mecánico, al mismo tiempo que permite la difusión
de productos químicos cedidos por la muestra. Cuando se analizan extractos,
éstos se aplican sobre una porción de papel de filtro atóxico.
Interpretación de los resultados
– La reactividad biológica (degeneración y malformación celular) se describe y
se califica en una escala de 0 a 4 Medir las respuestas obtenidas con el
control negativo , el control positivo y la muestra. El ensayo es válido si la
respuesta observada con el control negativo es grado 0 (ninguna reactividad) y
para el control positivo no es menor que grado 3 (reactividad moderada). La
muestra cumple con los requisitos del ensayo si la respuesta observada no es
mayor de grado 2 (reactividad leve). Repetir el ensayo si no se confirma su
validez
 ENSAYO DE ELUCIÓN

• Este ensayo se emplea para evaluar extractos de

materiales poliméricos. El procedimiento permite la
extracción de la muestra a temperatura fisiológica o no
fisiológica, variando los intervalos de tiempo. Es
apropiado para materiales de alta densidad y para
evaluaciones dosis-respuesta.
ENSAYO DE CONTACTO DIRECTO

Este ensayo se emplea para evaluar materiales

poliméricos. El procedimiento permite la
extracción y ensayo simultáneo de los componentes
químicos extraídos desde la muestra con un medio
suplementado con suero. Este ensayo no es
apropiado para materiales de muy baja densidad ni
alta densidad que puedan causar daño mecánico
 Reactividad in vivo

Ensayo de Inyección Sistémica y el Ensayo Intracutáneo

se emplean para evaluar la respuesta sistémica y local
respectivamente, luego de la inyección de una sola dosis de extractos
específicos del material a ensayar. Se aplican a materiales
elastoméricos, con significativa reactividad positiva en el Ensayo de
Reactividad Biológica in vitro.

El Ensayo de Implantación evalúa la reacción del tejido vivo luego de

la implantación del material como tal.

Materiales para la fabricación de envases y otros accesorios para uso

en preparaciones parenterales y para uso en dispositivos biomédicos
e implantes.