UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC

DEPARTAMENTO DE CIVIL Y AMBIENTAL

DETERMIACION DE BIOAEROSOLES
Arevalo-Borré, K. Dueñas-Gómez, B, Duque –Dávila, Y. Sánchez-Brown, F.

Laboratorio de Control de emisiones Atmosférica, Grupo AD, Programa de Ingeniería Ambiental,

Universidad de la costa CUC
Karevalo2@cuc.edu.co, Bduenas1@cuc.edu.co. Yduque1@cuc.edu.co, Fsanchez4@cuc.edu.co

Ismael Schneider.
27 /09/2019

RESUMEN

En el presente informe del laboratorio de emisiones atmosféricas de la Universidad de la Costa, tiene como
fin la determinación de bioaerosoles en el laboratorio de cita utilizando un impactado de cascada el cual
consiste en medir la gama de sustancias movidas con una abertura por el aerosol, este equipo consta de 6
etapas, las cuales se le introduce una caja Petri a cada una de ella para la recolección de la muestra en un
tiempo estipulado de 5 minutos, estas serán llevadas a incubación por 48 horas, para luego realizar el
conteo e identificación macroscópica y microscópica de las colonias por medio de la tinción de Gram y
calculando las concentraciones de Unidades Formadoras de Colonias (UFC las cuales presentaron
bacterias Gram negativas de tipo bacilos, así como también se encontraron bacterias del genero cocos,
bacilos.

Palabras claves: Bacteria, bioaerosoles, concentración de UFC, impactador de cascada.

ABSTRACT
In the present report from the atmospheric emission laboratory of the University of the Coast, for the
purpose of determining bioaerosols in the citation laboratory using a cascade impact consisting of
measuring the range of substances moved with an opening by the aerosol, this equipment consists of 6 stages,
which a Petri box is introduced to each of them for the collection of the sample in a stipulated time of 5
minutes, these will be brought to incubation for 48 hours, to then perform the counting and macroscopic and
microscopic identification of the colonies by means of Gram staining and by calculating the concentrations
of Colony Forming Units (CFU which presented Gram-negative bacteria of the type bacilli, as well as
bacteria were found

Keywords: Bacteria, bioaerosols, CFU concentration, cascade impactor .

I. INTRODUCCIÓN tamaño microscópico. Los bioaerosoles constituyen

Los bioaerosoles son un tipo particular de
contaminante atmosférico; dada su estructura
orgánica compleja y variada, son organismos vivos o
fragmentos de materia viviente suspendidos en el
aire, que no pueden verse a simple vista por su
1
cerca de 30% de la masa total del material
particulado.[ CITATION Rey09 \l 2058 ]
En los bioaerosoles se pueden encontrar los
microorganismos (cultivables, contables y los
microorganismos muertos), y los fragmentos, toxinas
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y partículas producto de los desechos de todo tipo,
cuyo origen es la materia viva. La supervivencia,
reproducción y dispersión al aire de los
contaminantes biológicos dependen, en gran medida,
de las condiciones del entorno en que se encuentran.
Factores tales como la temperatura, la humedad
relativa, el movimiento del aire, la luz, las fuentes de
alimento y, por descontado, su presencia, van a
determinar el grado en que los contaminantes
biológicos se encontrarán en un ambiente.[ CITATION
Cal08 \l 2058 ]
El impactador de cascada que está diseñado
para separar las partículas del aerosol en seis etapas
cilíndricas ajustables, retenerlas sobre unas cajas de
Petri. El flujo de aerosol es inducido por una bomba
de vacío con capacidad de hasta 100 L/min, e ingresa
al equipo a través de una manguera de aspiración, un
rotámetro con capacidad de medir flujos hasta 70
L/min y una válvula de sobrepaso para modular el
flujo a través de la sección de prueba.[ CITATION
MCd02 \l 2058 ]
El principio del diseño del impactador se
basa en que las partículas con más inercia son menos
capaces de seguir con el flujo e impactan la
superficie colectora, si cambia rápidamente de
dirección, las demás partículas permanecen en el
fluido hasta que se consigue aumentar su inercia.
Para el aumento de inercia se obtiene incrementando
la velocidad lineal de fluido, lo cual se dispone de un
aja perforadora con orificios sobre cada etapa, el
diámetro de cada orificio se disminuye a medida que
se desciende en las diferentes etapas del impactador.
Un impactador de cascada Andersen Thermo
Scientific se localiza a una altura de 1,5m. Además,
un impactador de cascada es un equipo que actúa
como simulador del sistema respiratorio humano, el
cual está compuesto por síes etapas. (Ver Figura 1);
Por otro lado, en el impactador la velocidad del aire
va incrementando de una etapa a la otra y tiene un
caudal de succión de 28,3 L/min que tiene la función
de arrastrar las partículas con ayuda de una bomba de
vacío.[ CITATION Bar17 \l 9226 ]

II. MARCO TEÓRICO

El aire contiene en suspensión diferentes
tipos de microorganismos, especialmente bacterias y
hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del
origen, de la dirección e intensidad de las corrientes
de aire y de la supervivencia del microorganismo,
pueden ser transportados rápidamente, en forma de
bioaerosoles. Las enfermedades transmitidas por el
aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las
respiratorias (neumonía, tosferina, tuberculosis,
legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas (meningitis,
sarampión, varicela, micosis) y alérgicas.[ CITATION
FAl87 \l 2058 ].

Los impactadores son usados para la

caracterización de partículas de los aerosoles en
diversos ambientes, pueden ser utilizados en estudios
sobre los efectos de la contaminación o del ambiente
de trabajo sobre la salud. Es un instrumento que
permite colectar el aerosol de la atmosfera en una
muestra adecuada, también clasifica por tamaño a las
partículas contenidas en el aire.[ CITATION Jos08 \l
2058 ]1. Impactador de cascada de seis etapas como
Figura
simulador del sistema respiratorio del ser humano.
Fuente: [ CITATION Bar17 \l 9226 ]
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En la imagen anterior se evidencia un realizar el montaje del equipo impactador y la bomba

impactador de cascada de seis etapas como simulador de vacío, seguido a esto se tomaron las cajas Petri.
del sistema respiratorio del ser humano: En cada una de las etapas del impactador.
 ETAPA 1: cavidad Nasal (partículas Luego, teniendo el montaje, se procedió a
entre 7.0 Micras y por encima) realizar el muestreo por un tiempo de 5 minutos
 ETAPA 2: faringe(partículas entre colocando el equipo impactador a una altura de 1,5
4.7 Micras y 7.0) metros del suelo y teniendo en cuenta el rotámetro
 ETAPA 3: tráquea y bronquios para obtener un caudal de 28,3 L/seg.
primarios (partículas entre 4.7 Micras y 3.3) Pasado los 5 minutos, se procedió a tomar las
 ETAPA 4: bronquios cajas Petri con mucho cuidado, rotularlas según su
secundarios(partículas entre 3.3 Micras y 2.1) etapa, envolverlas con papel Craf y llevarlos a la
 ETAPA 5: bronquios terminales. incubadora con una temperatura de 37°C, por 48
(partículas entre 2.1 Micras y 1.1) horas.
 ETAPA 6: alveolos. (partículas entre Parte II
Pasado 48 horas de las muestras en la
1.1 Micras y 0.6)[CITATION Bar17 \l 9226 ]
incubadora, se retiran y se retira el papel craf con
cuidado, para así separar cada una de las etapas y
METODOLOGIA
realizar dos tipos de vistas, que son:
Vista macroscópica: Esta vista consta, de
Materiales, Insumos y Reactivos
observa sin ningún tipo de ayuda cada una de las
etapas y determinar que se formó en cada una de
Equipo impactador de ellas (hongos bacterias), para así realizar una
cascada caracterización de las bacterias encontradas, teniendo
Bomba de vacío en cuenta principalmente que se encuentre en el
Cajas Petri medio de la caja Petri, ya que, si se encuentra
Microscopio alrededor no cuenta como bacteria debido a que ha
Portaobjetos sido creada por la absorción de aire.
Medio de cultivo, Plate Entonces, se realiza la caracterización
Count determinando la etapa, clasificación (código), color,
Mechero textura, forma y si posee o no relieve.
Fósforos Finalmente se determinaron cuatro tipos de
Cristal Violeta ( 1 gota) bacterias clasificadas con el código S1, S2, S3 Y S4,
Lugol (1 gota) la cual se presentó una en cada Código. El código S1
Alcohol Acetona (1 gota) y S2 se presentaron en todas las etapas, a diferencia
Safranina (1 gota) del código S3 y S4 en donde se presentaron solo en
Aceite de inmersión (1 gota) las etapas 3,4,5 y 6.

Procedimiento
La realización de la experiencia se dividió en
dos partes, ya que, se necesitó de toma de muestra y
un tiempo de 48 horas para realizar las visiones
macroscópicas y microscópicas.
Parte I
Inicialmente se determinó el área se estudió
el cual hace referencia al Laboratorio de cita de la
Universidad de la Costa, así entonces se procede a

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Figura 2. Etapas de la caja Petri, donde se realizó la
visión macroscópica. Fuente. Propia.
 Visión microscópica: Una
vez, identificada cada una de las bacterias en
las cajas Petri, se procedió a encender el
mechero y tomar la primera caja Petri y el
PALITO, para pasarlos individualmente por
el mechero 3 veces, para así tomar con el
PALITO de manera suave la bacteria
caracterizada anteriormente en la primera
etapa, la cual fue ubicada en un portaobjetos,
para luego agregarle los diferentes que
reactivos que son:
Figura 3. Toma de
la bacteria caracterizada y pasada por el mechero.
Fuente. Propia
o Cristal violeta: Se agregó una gota a la
bacteria en el portaobjetos por un minuto,
pasado este tiempo se lavó cuidadosamente
con agua destilada.
Figura 3
4
III. RESULTADOS Y ANÁLISIS
En la ecuación (1) se menciona la
fórmula para la clasificación de las colonias. Se
determinó la clasificación, el tiempo, la UFC, la
concentración y el tipo en cada una de las etapas
obtenidas mediante el equipo impactador de
cascada el cual consistió en poner una caja Petri
en cada etapa, comenzando de la 6 a la 1 en el
impactador, este proceso dura alrededor de 5
minutos y el tiempo de incubación es de 48 horas.
Donde se pudo observar de forma
macroscópica que la mayoría de las bacterias se
multiplican rápidamente y eran visibles como
colonias cuando se las siembra en medios de
cultivo sólidos adecuados, las cuales requieren
una incubación de aproximadamente de 48 horas,
a temperatura óptima, además se pudo evidenciar
que el código S1 se presentaban en todas y no
presentaban relieve sin embargo en el código S4
solo presentaban en las etapas 4,5 y 6 y presentan
relieve. (Ver tabla 1)
De forma microscópica se pudo
evidenciar en el código S1 Cocos gram negativo
(ver tabla 2) dado a que presentan una coloración
rosada, dando como resultado en la concentración
de UFC 699,646643 como se muestra en la
ecuación (2).
En el código S2 se observa de forma
microscópica que se encuentran cocos gram
negativo (ver tabla 3), Se obtuvo una
concentración de 155,477032 UFC/m3 como se
muestra en la ecuación (3).
En el código S3 se encontraron cocos, no
se logró identificar si es gram negativo o gram
positivo (ver tabla 4) debido a que hubo un error
en el procedimiento en la tensión del gram, una de
las causas pudo ser el exceso de colorante que se
le adicionó a la prueba o simplemente pudo ser
que al momento de pasarlo al microscopio no se
limpió el lente y pudo haber una alteración en la
muestra. Se obtuvo una concentración de
487,632509 UFC/m3 como se muestra en la
ecuación (4).
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En el código S4 microscópicamente se
observan bacilos gram positivo como se ilustra en la
tabla 5. Se obtuvo una concentración de 113,074205
UFC/m3 como se muestra en la ecuación (5).
IV. CUESTIONARIO
- ¿A qué tipo de riesgos están expuestos los
seres humanos que están en contacto con los
microrganismos encontrados?
Los microrganismos encontrados pueden
causar enfermedades en los seres humanos, como lo
son los (Bacillus, Coccus) la cual se han demostrado
una fuerte evidencia de la capacidad de colocar en
riesgo la salud del se r humano; los bacilos son los
que normalmente causan riesgo en el tracto
digestivo y también se ha demostrado que esta actúa
al tener contacto directo con la piel, estas especies
causa una anomalía de agentes potenciales, que hace
que comúnmente a las personas le dé una
enfermedad por inhalación por el tipo de bacteria ya
sea Gram negativa o Gram positiva. [9]
- ¿Cuáles son las fuentes de estos
contaminantes en el lugar de estudio?
La presencia de Bacillus es frecuente en una
gran variedad de contaminación en el área de
laboratorio, una de sus fuentes son las aguas
residuales utilizadas para prácticas de aprendizaje ya
que ésta contiene una gran cantidad de
microorganismos provenientes de diferentes
orígenes; en el suelo ella encuentra se duplican con
mayor facilidad gracias a los parámetros que se
encuentran en el ambiente. El habitad de los Coccus
se emplea en la piel y mucosas de las aves, teniendo
en cuenta que la zona aledaña al laboratorio hay
nidos de palomas. [10]
- ¿Proponga una forma de mitigación para
este tipo de contaminantes?
En el área del procedimiento al laboral
adecuado y utilizando de medidas técnicas
apropiadas para evitar o minimizar los
5
microorganismos se pueden hacer limpieza más
exhaustiva para reducción de estos. Mantenimiento a
los sistemas de ventilación y si este se encuentra muy
deteriorado, hacerle su respectivo cambio.
V. CONCLUSIONES
VI. BIBLIOGRAFÍA
Reyes, J. G., Guzmán, E. T. R., Gutiérrez, A.
S. P., & Aguirre, C. E. (2009). Bioaerosoles
depositados vía húmeda-seca en la zona
metropolitana del Valle de Toluca. [Accessed 24
May 2019].
Calleja, A. H. (2008). NTP 409:
Contaminantes biológicos: criterios de
valoración. Centro Nacional de Condiciones de
Trabajo. [Accessed 24 May 2019].
M. C. DE LA ROSA, M. A. (2002). El aire:
hábitat y medio de transmisión de microorganismos.
F. Aldape U., E. P. (1987). Diseño,
construcción y pruebas de funcionamiento de un
impactador de cascada f. México.
José Daniel Beltrán Villegas, N. Y. (2008).
Diseño y construcción de un impactador de cascada
para la determinación de la distribución de tamaño
de material particulado suspendido en el aire.
Universidad de los Andes, ingeniería química.
Barraza, Y. (2017). Influencia de las
condiciones ambientales en el comportamiento
de los aerosoles fungí, en relación a las
infecciones respiratorias agudas (IRAs)
presentadas en el corregimiento de cuatro
bocas, departamento del Atlántico. (Trabajo de
grado). Corporación Universidad de la Costa.
Barranquilla.
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ANEXOS

Tabla 1.

Datos obtenidos del conteo de colonias y su respectiva concentración.

Código Forma Relieve Textura Color Etapa #Colonias
S1 Redonda Sin relieve lisa Blanca 1,2,3,4,5,6 99
S2 Asimétrica Sin relieve corrugada Blanca 1,2,3,4,5,6 22
S3 Redonda Sin relieve lisa Amarilla 3,4,5,6 69
S4 Asimétrica Con relieve corrugada Blanca 4,5,6 16
Autor. Propio.

Tabla 2.

Características macroscópicas y microscópicas de las bacterias del código S1 del laboratorio CITA.

Código Características Macroscópicas Imagen Macroscópica Imagen

Microscópica
Color Forma Textura Relieve

Blan Sin
S1 Redondo Lisa
ca relieve

Autor. Propio.

Tabla 3.

Características macroscópicas y microscópicas de las bacterias del código S2 del laboratorio de CITA.

Código Características Macroscópicas Imagen Macroscópica Imagen

Microscópica
Color Forma Textura Relieve

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Blan Asimét Corruga Sin

S2
ca rica da relieve

Autor. Propio.

Tabla 4.

Características macroscópicas y microscópicas de las bacterias del código S3 del laboratorio de CITA.

Codigo Características Macroscópicas Imagen Macroscópica Imagen

Microscópica
Color Forma Textura Relieve

Amar Redond Sin

S3 Lisa
illo a relieve

Autor. Propio.

Tabla 5.

Características macroscópicas y microscópicas de las bacterias del código S4 de laboratorio de CITA.

Código Características Macroscópicas Imagen Macroscópica Imagen

Microscópica
Color Forma Textura Relieve

7
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Blan Asimét Corruga Con

S4
co rica da relieve

Autor. Propio.

Fórmula para la clasificación de colonias.

UFC X 1000
C UFC = (1)
28,3 X t

Cálculos de UFC para la clasificación de código S1.

99 X 1000
C UFC = = 699,646643 (2)
28,3 X 5

Cálculos de UFC para la clasificación de código S2.

22 X 1000
C UFC = =¿155,477032 (3)
28,3 X 5

Cálculos de UFC para la clasificación de código S3.

69 X 1000
C UFC = =¿ 487,632509 (4)
28,3 X 5

Cálculos de UFC para la clasificación de código S4

16 X 1000
C UFC = =¿ 113,074205 (5)
28,3 X 5