Pontificia Universidad Católica de Chile

Facultad de Ciencias Biológicas

BIO225c Fisiología y Bioquímica Vegetal

Bases Moleculares y Aplicaciones de la

Interacción Planta-Patógeno

Dra. Grace Armijo Godoy

giarmijo@uc.cl

12 de Junio de 2019
 Estrés en Plantas
Estrés: Suma de reacciones biológicas ante un estímulo adverso, interno o
externo que altera la homeostasis.

Resistencia /
Tolerancia

Susceptibilidad
Estrés en Plantas

(Jalmi and Sinha, Frontiers in Plant Science, 2015)

 Estrés Biótico : "Microorganismos"

• Virus

• Bacterias

•Hongos
Arabidopsis thaliana
 Estrés Biótico : "Microorganismos"

• Virus

• Bacterias Tipos de Patógenos:

- Estrategias de Infección
- Interacción con la planta

•Hongos
Tipos de Patógenos: Estrategias de Infección

Necrotróficos
Destruyen tejido del hospedero

Biotróficos
Se nutren de los metabolitos
que produce la célula viva

Hemibiotróficos
Fase biotrófica inicial y necrotrófica
final

Vleeshouwers & Oliver (2014) MPMI

Estrategias Infección Patógenos Necrotróficos

Abramovitch y cols. (2006) Nat. Rev. Molec. Cell Biol.

Estrategias Infección Patógenos Necrotróficos

Lo Presti y cols. (2015) Anual. Rev. Plant Biol.; Armijo y cols. (2016) Biotechnology of Grapevine Stress
Estrategias Infección Patógenos Hemi/Biotróficos

Xin & He. (2013) Annu. Rev. Phytopathol; Armijo y cols. (2016) Biotechnology of Grapevine Stress
Estrategias Infección Patógenos Hemi/Biotróficos

Lo Presti y cols. (2015) Anual. Rev. Plant Biol

Estrategias Infección Patógenos Hemi/Biotróficos

Abramovitch y cols. (2006) Nat. Rev. Molec. Cell Biol.

Estrategias Infección Patógenos Hemi/Biotróficos

Stanton (2003) TRENDS in Biotechnology

Estrategias Infección Patógenos Hemi/Biotróficos

Roossinck (2005) Nature Reviews Microbiology

Fitohormonas v/s Tipos de Patógenos

Acido Jasmónico
(JA)

Acido Salicílico
(SA)

Arabidopsis thaliana
• JA y ET pueden actuar sinérgicamente (JA/Et)
• SA y JA pueden actuar antagónicamente

Pieterse y cols., (2009) Nature Chem Biol.

Biosíntesis de Ácido Jasmónico (JA)

Taiz & Zeiger (2010) Plant Physiology

Biosíntesis de Ácido Jasmónico (JA)

Wasternack & Hause (2013) Annals of Botany

Activación de genes en respuesta a JA

Wasternack & Hause (2013) Annals of Botany

Activación de genes en respuesta a JA

Ruan et al. (2019) Int. J. Mol. Sci.

Activación de genes en respuesta a JA

Ruan et al. (2019) Int. J. Mol. Sci.

Fitohormonas v/s Tipos de Patógenos

Acido Jasmónico
(JA)

Acido Salicílico
(SA)

Arabidopsis thaliana

Pieterse y cols., (2009) Nature Chem Biol.

 Biosíntesis de SA

COOH NH2

CH COOH
Phenylpropanoid
CH2 OGluc
pathway
SAGT
COOH Vacuolar hydrolysable
source of SA
SAGH SAG
Phenylalanine OH

SAMT
SA COOMe

COOH MeSA OH
esterase
SABP2
Chorismate Mobile and volatile
pathway
O COOH inducer of SAR
MeSA
OH
Chorismate
Activación de genes en Respuesta a SA

Zhang et al. (2018) Cells

SA & JA

Ali et al. (2018) Microbiological Research

 Estrés Biótico : "Microorganismos"

• Virus

• Bacterias Tipos de Patógenos:

- Estrategias de Infección
- Interacción con la planta

•Hongos
Tipos de Patógenos: Interacción con la Planta
Non Host

PAMP
Avirulent
Virulent PRR

• PAMPs Triggered R

Immunity (PTI) (Non Host)

• Effector Triggered
Susceptibility (ETS) (Virulento)
Basal Immune
Response
• Effector Triggered
Immunity (ETI) (Avirulento) Triggered Immune
Response

Adaptado de Pieterse y cols., (2009) Nature Chem Biol.

 Inmunidad Inducida por PAMPs (PTI)
• También denominada MTI (MAMPs Triggered Immunity) o Defensa Basal.

Chisholm y cols., (2006) Cell

 Inmunidad Inducida por PAMPs (PTI)
• Defensas estructurales: callosa, lignina, cierre de estomas.
• Inducción de genes de defensa, algunos en bajos niveles.

Nürnberger & Lipka, (2005) Mol. Plant. Pathol.

 Susceptibilidad Inducida por Efectores (ETS)

• También denominada Enfermedad

• Defensas basales superadas por efectores patogénicos.

Chisholm y cols., (2006) Cell

 Inmunidad Inducida por Efectores (ETI)
•También denominada Respuesta Inducida o Específica.

Chisholm y cols., (2006) Cell

PTI & ETI

Ali et al. (2018) Microbiological Research

 HR y SAR

HR = Respuesta Hipersensible SAR = Resistencia Sistémica

Adquirida

ROS, SA, genes de defensa Genes de defensa

Avr

AvR SAR Vir

R SAR

Avr
!
HR
SAR

SAR

• El reconocimiento R-Avr induce la respuesta hipersensible o HR y a su vez, esta induce SAR

ROS (Especies Reactivas de Oxígeno) en HR

1. Actividad antimicrobiana
• Fortalecimiento pared celular
(entrecruzamiento glicoproteínas).
• Efecto tóxico sobre patógeno.

2. Toxicidad celular:
• Peroxidación lípidos de membrana.
• Oxidación de proteínas (inhibición
enzimas).
• Daño al DNA y RNA.
• Activación PCD.

3. Señalización intracelular (modulación

fina):
Modulación fina de bajos niveles de
ROS

Grant y Loake, (2000) Plant J.

SAR v/s ISR

Plant Growth Promoting Rhizobacteria

Pieterse et al., (2009) Nature Chem Biol

 Pontificia Universidad Católica de Chile
Facultad de Ciencias Biológicas
BIO225c Fisiología y Bioquímica Vegetal

Análisis y Aplicaciones de la Interacción

Planta-Patógeno

Dra. Grace Armijo Godoy

giarmijo@uc.cl

06 de Junio de 2018
Validación de la inducción del gen

+ SA
Extracción RNA total qRT-PCR
- SA

qRT-PCR qRT-PCR

Armijo y cols, (2013) MPMI

Evaluación del patrón de expresión del gen
en respuesta al patógeno
Estrategia utilizada:
PTI ETS ETI Control

WT
P. syringae P. syringae MgCl2
P. syringae
pv. phaseolicola DC3000 pv. tomato pv. tomato
Psp Vir Avr-Rpm1

Hoja inoculada
(local)
Hoja no inoculada Hojas locales y Sistémicas
(sistémica)

Extracción de RNA total

qRT-PCR
Evaluación del patrón de expresión del gen
en respuesta al patógeno
qRT-PCR

Psp (PTI)

Avr-Rpm1 (ETI)

Vir (ETS)

Armijo y cols, (2013) MPMI

Determinación de la dependencia de la hormona
en la expresión del gen
Estrategia utilizada:

WT y sid2

Hoja inoculada
(local)
Hoja no inoculada
(sistémica)
Determinación de la dependencia de la hormona
en la expresión del gen
Estrategia utilizada:

WT y sid2

Hoja inoculada
(local)
Hoja no inoculada
(sistémica)

Armijo y cols, (2013) MPMI

Determinación de la localización sub-celular del
producto del gen

Promotor 35S + Región codificante

LLP fusionada a GFP

N. benthamiana

A. tumefaciens

A. thaliana
Selección en Antibiótico
Determinación de la localización sub-celular del
producto del gen

Microscopía Confocal
Determinación de la localización sub-celular del
producto del gen

Armijo y cols, (2013) MPMI

Determinación del patrón espacio-temporal del gen

Promotor LLP +
Reportero GUS

Tinción GUS
Ensayos de pérdida o ganancia de función
en la respuesta de defensa

Estrategia utilizada:
WT mutantes Sobre-expresoras

Toma de muestras (hojas inoculadas)

P. syringae
PTI
ETI
ETS

A B
Ensayos de pérdida o ganancia de función
en la respuesta de defensa

Estrategia utilizada:

A B

Diluciones seriadas

Plaqueo y conteo de colonias (UFC)

Ensayos de pérdida o ganancia de función
en la respuesta de defensa

Armijo y cols, (2013) MPMI

Patógenos más importantes de la Vid

Armijo y cols. (2016)

 Patógenos más importantes de la Vid

Erysiphe necator Botrytis cinerea

Jasmonic acid and Ethylene (JA/ET)

Salicylic acid (SA) Antimicrobial proteins
Hypersensitive response (HR) Inhibitors of pathogens enzymes

Armijo*, Espinoza*, Loyola* et al., Grape and Wine Biotechnology; In Tech 2016
 Resistencia en el género Vitis

Erysiphe necator Botrytis cinerea

Classification R Factor Example R

Flame Seedless 0.1

RUN1: (V. vinifera)
Highly 0 – 1.5
susceptible Thompson Seedless 1.0
(V. vinifera)

Red Globe 1.8

Slightly 1.6 – 2.5 (V. vinifera)
susceptible
REN1:
Vanessa Seedless 3.4
Moderately 3.0 – 5.5 (V. labrusca x
resistance V. vinifera)

Mars 12.8
Highly 5.6 - 14 (V. labrusca
resistance x V. vinifera)

This article is protected by copyright. All rights reserved.

Hoffmann et al., (2008); Coleman et al., (2009); Cadle-Davidson et al., (2011) Gabler et al., Phytopathology (2003)
 Obtención de plantas Resistentes

E. necator:

P09-105-34 P09-106-7 P09-106-9 P09-106-40 Crimson Seedless Red Globe

Agurto et al., (2017) Frontiers in Plant Science

B. cinerea:

Fwe Fuky HvaxRBC Red Globe Thompson Seedless

Constanza Núñez (Tesis doctorado)
Evaluación/Selección Plantas Resistentes a E. necator

Proliferación
ROS

E. necator:

36 hpi
(DAB /Trypan blue)

Agurto et al., (2017) Frontiers in Plant Science

Formación de depósitos de callosa

Agurto et al., (2017) Frontiers in Plant Science

 qRT-PCR Plantas resistentes a E. necator

VvSTS36 VvPR5

Las líneas resistentes activan la expresión de genes de defensa relacionados

con la biosíntesis de estilbenos y la respuesta mediada por SA.

PROYECCIÓN: Obtener plantas naturalmente resistentes al oídio

Agurto et al., (2017) Frontiers in Plant Science
Evaluación/Selección Plantas Resistentes a B. cinerea

Tamaño lesión
Proliferación del hongo
ROS
B. cinerea:

0 3 6 (dpi)

Línea
Segregating Lines

Susceptible

Línea
Resistente
 Evaluación fitopatológica de plantas resistentes
a B. cinerea
Línea (S) Línea (R) Línea (R)

Susceptible line (7) Resistant line (8) Resistant line (35)

Evaluación fitopatológica de plantas resistentes
a B. cinerea
Susceptible parental (RG) Resistant parental (FF)

Segregating resistant line 8 Segregating resistant line 35

PROYECCIÓN: Obtener plantas naturalmente resistentes a B. cinerea

 Evaluación fitopatológica de bayas de uvas parentales
Inoculadas con B. cinerea
Resistente: Fwe Fuky
0 dpi 7 dpi

Fwe Fuky

Concord

Kyoho
Susceptible: Thompson Seedless

Red Globe

Thompson S
Evaluación fitopatológica de bayas de uvas parentales
Inoculadas con B. cinerea

PROYECCIÓN: Obtener un biofungicida

 Ejemplo: ISR y Biocontrol

PGPR:
Parabulkholderia
phytofirmans PSJN

Timmerman y cols, (2017) MPMI

 ISR y Biocontrol

PROYECCIÓN: Obtener organismos biocontroladores y promotores del crecimiento

 Agradecimientos/Financiamiento
E. necator

Laboratorio Dra. Loreto Holuigue

Beca Doctorado CONICYT
Núcleo Milenio GFP (P06-009-F y P10-062-F)

Laboratorio Dr. Patricio Arce

FONDECYT Postdoctorado 3140324
Millennium Nucleus for Plant
Synthetic Biology and Systems
Biology NC130030