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Agrobiotecnología

Curso 2007

Vacunas Veterinarias
Andrés Wigdorovitz

Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires

Sumario

Tipos de vacunas

Nuevas vacunas

Referencias

Agrobiotecnología

Vacunas
veterinarias

Tipos de vacunas

Agrobiotecnología

Vacunas
veterinarias

Conceptos
introductorios
• El objetivo de la vacunación es generar una
respuesta inmune protectora de larga duración
mediante la estimulación de una respuesta
inmune adecuada.

• La vacunación reduce la cantidad de agente
infectante ante una exposición. Usualmente
no se logra inmunidad esterilizante.

• Las vacunas pueden ser preventivas
o terapéuticas.

• El mercado mundial de vacunas veterinarias
Agrobiotecnología
alcanza los 2000 millones de dólares anuales.
Vacunas
veterinarias

Características de una vacuna ideal: • Segura • Específica • Protectora • Inmunidad duradera • Debe prevenir la dispersión del patógeno • Aplicación en dosis única • Bajo costo y estable Agrobiotecnología • Fácil de administrar Vacunas veterinarias .

. .Estas vacunas se desarrollan empíricamente y no se necesita un amplio conocimiento del patógeno y de la respuesta inmune que induce.Estas vacunas se basan en un desarrollo racional donde se utiliza la información derivada del Agrobiotecnología estudio de la respuesta inmune que el agente Vacunas patógeno genera así como de cuales son los veterinarias antígenos principales.Incorporan para su desarrollo tecnologías del ADN recombinante y de purificación de proteínas.La gran mayoría de las vacunas licenciadas al presente pertenecen a esta categoría.Vacunas en medicina • Convencionales: veterinaria . • Modernas: . .

Vacunas actuales .Toxoides bacterianos. .Microorganismos vivos atenuados. Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .Microorganismos muertos (inactivados). .

irradiación. calor.) Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .Vacunas inactivadas Inactivados Tratamiento Patógenos (químico. etc.

Son más seguras que las vacunas en el basadas en microorganismos atenuados. . veterinarias . hospedador • Desventajas: . .En las vacunas inactivadas • Ventajas: el agente .Son estables.Son fáciles de producir. Agrobiotecnología . no se replica .Requieren gran cantidad de antígeno. biológico .No generan una respuesta inmune de larga duración.El agente vacunal puede no estar Vacunas completamente inactivado.No generan reacciones adversas debidas al uso de adyuvantes.

Vacunas a toxoides Tratamiento químico Toxina bacteriana activa .

Vacunas vivas atenuadas Pasajes sucesivos en distintos hospedadores Patógenos Atenuados .

Generan una respuesta inmune replica en el de larga duración. • Desventajas: . . biológico se . hospedador .En las vacunas basadas en • Ventajas: microorganismos atenuados .Requieren una única dosis.Son eficaces.El microorganismo puede revertir a una forma virulenta.Requieren cadena de frío para veterinarias su conservación. .No requieren adyuvantes. Vacunas .La atenuación puede ser excesiva o Agrobiotecnología insuficiente. el agente .

Desventajas de las vacunas convencionales • Inactivación completa (patógeno inactivado/ • Reactivación de la patogenicidad atenuado) • No se diferencian vacunados de infectados • Manipuleo del agente infectado durante el proceso de producción • Reacciones inespecíficas con otros patógenos • Reacciones de hipersensibilidad Agrobiotecnología por los inactivantes usados Vacunas veterinarias .

Nuevas vacunas Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .

• Uso de la tecnología de ADN recombinante. • Patógenos que no se pueden cultivar in vitro • Vacunas que combinen las ventajas Agrobiotecnología de las inactivadas (seguridad) y las de Vacunas organismos vivos modificados (eficacia) veterinarias . • Nuevas regulaciones de las autoridades sanitarias. • Uso de técnicas genómicas y proteómicas.¿Por qué nuevas • Enfermedades infecciosas donde los métodos vacunas? tradicionales fallaron. • Aparición de patógenos emergentes.

El desarrollo de nuevas vacunas es un área que se nutre de múltiples disciplinas .

Proveer immunidad de por vida. veterinarias . .Identificar nuevos métodos para la industria la producción de vacunas o mejorar los existentes.Identificar nuevos métodos para la administración de vacunas. . • Seguridad: . .Evitar efectos negativos en el medio ambiente y otras especies.Proveer protección cruzada.Nuevas vacunas: • Innovación: desafíos para .Evitar reacciones locales y/o sistémicas. Agrobiotecnología • Eficacia: Vacunas .

Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . • Elección de antígeno(s) que induzca(n) una respuesta inmune en una amplia mayoría de los individuos a ser vacunados. • Uso de un modo correcto de presentación del/de los antígeno/s al sistema inmune.Etapas a seguir para el desarrollo de nuevas vacunas • Identificación de los mecanismos efectores protectores de la respuesta inmune.

de nuevas • Basadas en bacterias patógenas atenuadas vacunas por modificación genética que expresen antígenos heterólogos de otros patógenos. • Basadas en virus Vaccinia y Avipoxvirus recombinantes vivos. Vacunas veterinarias • Basadas en plantas recombinantes. Agrobiotecnología • Basadas en ADN (génicas). • Basadas en subunidades de antígenos recombinantes.Estrategias para la • Basadas en bacterias y virus atenuados por obtención modificación genética. . • Basadas en baculovirus como vectores de presentación de antígenos heterólogos.

Portadas por vectores Virales Bacterianos • No replicativas: .Nuevas • Replicativas: vacunas .Atenuadas por ingeniería genética: No marcadas Marcadas (DIVA) .Vacunas génicas (a ADN) .Subunidades Recombinantes Procariotas Eucariotas Levaduras Plantas Agrobiotecnología No recombinantes Vacunas Péptidos sintéticos veterinarias .

Codificantes para proteínas de rutas metabólicas biosintéticas • La metodología involucrada es el reemplazo alélico mediante la recombinación homóloga. Vacunas veterinarias .Codificantes para factores de virulencia (generalmente proteínas exportadas) . Los genes candidatos a ser mutados usualmente son: . la cepa Agrobiotecnología vacunal no debe llevar marcadores de resistencia a antibióticos. • Para su liberación al medio ambiente.Vacunas replicativas • La estrategia común involucra introducir atenuadas mutaciones en uno o más genes.

generación de energía. • Identificación y caracterización molecular de genes que codifican proteínas exportadas. proteínas • Las proteínas exportadas cumplen diversas exportadas funciones: captación y transporte de nutrientes. Agrobiotecnología • Análisis sistemático de la contribución de proteínas exportadas a la virulencia bacteriana. comunicación celular. motilidad. división celular. Vacunas veterinarias . etc. transducción de señales.Identificación de genes • El 20% de las proteínas sintetizadas que codifican por bacterias se alojan fuera del citoplasma. detoxificación. virulencia. biogénesis e integridad de membranas.

• El gen reportero phoA utilizado no posee su promotor ni la región que codifica el péptido señal amino terminal. Vacunas veterinarias . Agrobiotecnología • La actividad PhoA se detecta fácilmente utilizando BCIP como sustrato.Estrategías utilizadas para la • Los genes que codifican proteínas identificar exportadas pueden identificarse mediante fusiones traduccionales al gen de la fosfatasa proteínas alcalina (phoA) de Escherichia coli. exportadas • La actividad de fosfatasa alcalina se manifiesta cuando la enzima se encuentra fuera del ámbito citoplasmático.

Actividad de PhoA de acuerdo con la localización subcelular NH2 MEDIO EXTERNO NH2 Membrana externa NH2 PERIPLASMA NH2 NH2 Membrana interna CITOPLASMA NH2 NH2 PhoA enzimáticamente inactiva Segmento hidrofóbico PhoA enzimáticamente activa de transmembrana .

Búsqueda de proteínas exportables Agrobiotecnología Vacunas Clonado y expresión de fusiones a veterinarias PhoA en Escherichia coli CC118 .

Vacunas marcadoras (differentiate Principio: infected from La vacuna perdió un gen específico que vaccinated codifica un antígeno inmunodominante. Estas vacunas tienen ventajas diagnósticas. sigue siendo protectiva. animals. DIVA) El presupuesto es que los animales vacunados no presentarán anticuerpos contra la proteína delecionada. Estas vacunas vienen asociadas a un kit diagnóstico donde el antígeno Agrobiotecnología es la proteína inmunodominante. Sin embargo. Vacunas veterinarias .

Vacunas marcadoras NUEVAS VACUNAS CONTRA HERPESVIRUS BOVINO (Differentiate TIPO 1: DESARROLLO DE UNA CEPA VIRAL CON PATRÓN ANTIGÉNICO DIFERENCIAL CON RESPECTO Infected from AL DE LAS CEPAS CIRCULANTES EN EL CAMPO Vaccinated Animals.9% de abortos • Vacunación NO OBLIGATORIA Agrobiotecnología Vacunas • Vacuna comercializada actualmente inactivada recombinantes . en base al virus completo . Situación en la República Argentina: DIVA) • Cepa circulante de HVB-1 tipo Los Angeles • Seroprevalencia general • 20-70% de animales y 8.

Finlandia. Hasta el momento. 86/566)- restricción para la comercialización de semen. embriones y ganado en pie.países libres de HVB-1 Vaccinated Dinamarca y Suiza HVB-1-erradicado Animals.Vacunas marcadoras Importancia económica (Differentiate Comunidad Europea: Infected from Suecia. Restricciones para la comercialización de productos derivados DIVA) Campañas de control y erradicación actualmente en marcha Vacunación con vacunas marcadoras. Mercosur: Brasil y Argentina existe un interés creciente en el desarrollo de nuevas vacunas y evaluación de la situación epidemiológica. . Noruega y Austria . Vacunas recombinantes Disposición de la Comunidad Europea (64/432. no se realizan planes oficiales de control de Agrobiotecnología la enfermedad.

Vectores virales HVB-1 salvaje HVB-1 gE (-) Transmisión reducida dentro del rodeo Agrobiotecnología Vacunas Sintomatología Sintomatología reducida o nula recombinantes Excreción viral Discriminación entre vacunados e infectados .

constituyendo así una vacuna multivalente.Vacunas portadas por un vector • El gen que codifica el antígeno es portado por un vector (un virus o una bacteria) que lo presenta al sistema inmune. Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . • El vector puede presentar varios antígenos heterólogos de interés.

• Con las modernas tecnologías se puede expresar un antígeno definido y purificarlo por métodos convencionales. Agrobiotecnología • Es necesario tener presente que se necesita Vacunas conocer previamente cuales son lo antígenos veterinarias que inducen una respuesta inmune protectora. Vacunas a • Existen vacunas tradicionales a subunidades que generalmente son componentes subunidades de una fracción subcelular. • Usualmente los vectores de expresión son eucariotas (levaduras o plantas). .Vacunas modernas no • Solamente un componente de un replicativas. microorganismo es parte de la vacuna. • Este componente puede estar definido (una proteína específica) o ser una fracción subcelular (membranas celulares).

Vacunas a Antígenos de agentes patogénicos involucrados subunidades en la generación de respuestas inmunes protectoras Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .

Vacunas recombinantes Principales etapas en la obtención de una vacuna recombiante Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .

el gen de interés que codifica el antígeno y una secuencia de terminación transcripcional Agrobiotecnología y de poliadenilación. • Consisten de un plásmido bacteriano que contiene un promotor eucariota fuerte (generalmente viral).Vacunas a ADN • Las vacunas a genes representan un novedoso medio para expresar antígenos in vivo para la generación de una respuesta inmune tanto humoral como celular. Vacunas veterinarias .

Desarrollo de vacunas Expresión in vivo en tejido de ratones inoculados a ADN con plásmidos control y con plásmidos portadores del gen de la β-galactosidasa Agrobiotecnología Control negativo Control positivo Vacunas veterinarias .

Vacunas Desarrollo de vacunas a ADN a ADN Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .

Vacunas a ADN Respuesta inmune citotóxica a vacunas a ADN .

Vacunas a ADN Desarrollo de construcciones genéticas que permiten acumular el antígeno en diferentes fracciones celulares Citoplasmática PCMV Secretada PCMV Anclada a PCMV membrana Promotor de citomegalovirus Secuencia de anclaje a membrana Secuencia de exportación .

Existe riesgo de integración del ADN vacunal al genoma del receptor.Generan una respuesta inmune de baja intensidad .No requieren cadena de frío .No requieren el cultivo de agentes infecciosos para su producción . .Pueden desarrollarse aunque el microorganismo no pueda cultivarse . Vacunas .Aplicable solamente a antígenos proteicos.Riesgo de integración al genoma de células veterinarias germinales.Existe riesgo de generar tolerancia inmunológica. Agrobiotecnología .Simplicidad metodológica a ADN .Pueden inducir la generación de linfocitos T citotóxicos .Se pueden generar vacunas multivalentes • Desventajas: .Desarrollo • Ventajas: de vacunas . .

Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . y las proteínas evaluadas como vacunas.Impacto de las técnicas genómicas y proteómicas • La “vacunología reversa” es una estrategia derivada de la secuencia de los genomas de en el microorganismos patogénicos. todos los marcos de lectura abiertos son clonados y expresados. desarrollo de vacunas • En esta estrategia. o bien clonados en vectores para vacunas a ADN e inoculados en este formato.

Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . • Se pueden identificar antígenos no expresados in vitro. • No es aplicable a antígenos no proteicos. • Desventajas: • Es necesario disponer de la secuencia genómica completa del agente en estudio.Vacunología reversa • Ventajas: • Se pueden identificar antígenos de escasa abundancia. • Es aplicable a agentes no cultivables.

Vacunas no convencionales • Neutralización de la hormona para liberadora de gonadotrofina incrementar (GNRH) en vacunos la producción animal • Inmunización de vacunos contra miostatina • Regulación de la fertilidad en animales de compañía Agrobiotecnología Vacunas veterinarias .

seguridad.Requisitos para la • Resultados de pureza.Cambios en el tropismo o virulencia del microorganismo en el hospedador.Caracterización bioquímica del agente recombinante.Evaluar la posibilidad de recombinación Vacunas con cepas de campo que son similares veterinarias al microrganismo. .Evaluar la posible diseminación (shedding) del organismo a partir del hospedador vacunado y su esparcimiento a especies blanco y no blanco . . . potencia aprobación y eficacia de vacunas • Efectos en el ambiente y en humanos recombinantes .Evaluar la persistencia en el ambiente. . Agrobiotecnología .Estabilidad genética (in vitro e in vivo).

Sin embargo. Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . • Razones: • Muchas de las vacunas actuales son efectivas. • Las agencias regulatorias son cautelosas. • La sociedad es generalmente conservadora. más del 90% de las vacunas licenciadas son obtenidas mediante métodos convencionales y se asume que esta situación se mantendrá en la próxima década.Conclusiones • En medicina veterinaria. durante este período también comenzaran a comercializarse vacunas de nueva generación. • Los costos para registrar los nuevos desarrollos son muy elevados.

nuevos adyuvantes y vías de administración (oral. epidermal) Agrobiotecnología • La tendencia actual se orienta a la producción Vacunas de vacunas no replicativas. vacunas en medicina veterinaria • Los documentos necesarios para el registro de OVM buscan fortalecer la bioseguridad y eficacia de las nuevas vacunas • Los futuros desarrollos incluyen: vacunas de ácidos nucleicos. veterinarias .Conclusiones • Las nuevas tecnologías de generación de organismos vivos modificados (OVM) son un método eficaz en el desarrollo de .

and Ben-Yedidia. Old and new vaccine approaches. Rappuoli. 164:188-201. Overview of Vaccines. 1997. 2001. A. 3. 2002. Green. G. 2003. Veterinary Journal. 2002. S. Molecular Biotechnology. International Immunopharmacology. R.M. B. Reverse vaccinology. 5.A. 19:2688-2691. 6. Agrobiotecnología Vacunas veterinarias . Vaccine. L. R. Antibacterial vaccine design using genomics and proteomics. Arnon. Trends in Biotechnology. Recent advances and novel strategies in vaccine development. 5:483-488. T. Current Opinion in Microbiology. 2001. Babiuk. Ada. G. 8:123- 134. 3:1195-1204. and Baker. 2.Referencias 1. 19:181-188. a genome-based approach to vaccine development. Vaccination: a management tool in veterinary medicine. Grandi. 4.