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El pretratamiento y el inóculo afectan la estructura de la comunidad microbiana y mejoran el rendimiento

del reactor de biogás en una biodigestión a escala piloto de residuos sólidos municipales.

Valeria Ventorino, Ida Romano, Giorgia Pagliano, Alessandro Robertiello, Olimpia Pepe ⇑
Departamento de Ciencias Agrícolas, División de Microbiología, Universidad de Nápoles Federico II, Portici, Italia.

información del artículo resumen

Historia del articulo: Durante la digestión anaeróbica de los residuos sólidos municipales, la materia orgánica se convierte en metano, dióxido de carbono y otros
Recibido el 17 de julio de 2017 Revisado el 4 de diciembre
compuestos orgánicos e inorgánicos a través de una compleja cooperación entre diferentes grupos microbianos con diferentes actividades
de 2017 Aceptado el 6 de diciembre de 2017 Disponible en
metabólicas. Aquí, los enfoques independientes y dependientes de la cultura proporcionaron evidencia para examinar la relación entre las
línea el 15 de diciembre de 2017
comunidades bacterianas y arqueológicas y la producción de metano en una digestión anaerobia a escala piloto. La abundancia de grupos
funcionales aeróbicos y anaeróbicos de ciclos C y N, como las bacterias celulolíticas, pectinolíticas, amilolíticas y proteolíticas, fue alta al
comienzo del experimento y disminuyó drásticamente después de la digestión anaeróbica. En contraste, los amoníacos aumentaron en los
Palabras claves:
reactores productores de biogás en un ambiente de pH más alto. Los géneros arqueo metanogénicos recuperados fueron Methanobrevibacter,
Digestión anaerobia Pretratamiento
Methanobacterium, Methanoculleus
mecánico Diversidad microbiana
OFMSW
y Metanocorpúsculo, indicando así que el metano se formó principalmente por la vía hidrogenotrófica en los reactores.

Además, se consideraron los efectos mecánicos de pretratamiento, así como el efecto del estiércol granulado como inóculo. La mayor
producción de metano se detectó en los biodigestores con desechos orgánicos picados, lo que indica que el pretratamiento de una matriz de
partida heterogénea era esencial para mejorar la producción de biogás y estabilizar el proceso.

2017 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción
Actualmente, la digestión anaeróbica es la tecnología más sostenible, rentable y atractiva para
eliminar la fracción orgánica de los residuos sólidos municipales (OFMSW), debido a la posibilidad de
producir gas rico en metano ( Kothari et al., 2014 ) El digestato también se puede tratar con un
proceso aeróbico para producir un residuo estabilizado que se puede usar como aditivo del suelo o
para restauraciones ambientales ( Castillo et al., 2006 ) Existe un creciente interés en la gestión de
residuos mediante el uso de la digestión anaeróbica ( Banks et al., 2001 ), y la Comisión Europea ha
estimado que aproximadamente un tercio del objetivo de la UE para 2020 para la energía renovable
en el transporte podría alcanzarse utilizando biogás producido a partir de residuos biológicos ( Comisión
Europea, 2010 )
La digestión anaerobia se produce en cuatro pasos: hidrólisis, acidogénesis, acetogénesis y
metanogénesis. Durante estos pasos, los desechos orgánicos son degradados por un consorcio de
microorganismos y se convierten en biogás limpio ( Kothari et al., 2014; Pagliano et al., 2017 )
En el primer paso, las biomoléculas de desechos orgánicos se transforman en orgánicos solubles y
biodegradables por varios grupos microbianos que pueden sintetizar enzimas extracelulares como
celulasa, pectinasa, amilasa, lipasa y enzimas proteolíticas ( Panico et al., 2014 ) Posteriormente, en
la fase acidogénica, las bacterias formadoras de ácido metabolizan los productos de hidrólisis hacia
ácidos grasos principalmente volátiles, como el ácido acético, el ácido propiónico, el ácido butírico y
el ácido valérico ( Sans et al., 1995 ) Estos productos acidógenos se convierten luego en ácido
acético, hidrógeno y dióxido de carbono (fase acetogénica), y finalmente en metano mediante
Archaea productora de metano (fase metanogénica) ( Chynoweth et al., 2001 ) Durante el proceso de
formación de metano, pueden estar presentes principalmente dos grupos de metanógenos
diferentes: metanógenos hidrogenotróficos, que producen metano mediante el uso de H 2 y compañía 2,
y metanógenos acetoclásticos, que utilizan principalmente acetato ( Zhang et al., 2014 ) Entre los
factores que afectan las actividades microbianas durante las fases de la digestión anaeróbica, la
composición, la fuente y la estructura de los desechos orgánicos juegan papeles fundamentales,
porque los desechos son extremadamente heterogéneos e impredecibles ( Abdullah et al., 2008 ) En
particular, la hidrólisis se informa como el paso limitante de la velocidad en la digestión anaerobia de
OFMSW ( Fantozzi y Buratti, 2011 )

⇑ Autor correspondiente.

Dirección de correo electrónico: olipepe@unina.it (O. Pepe).

https://doi.org/10.1016/j.wasman.2017.12.005
0956-053X / 2017 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
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Por lo tanto, para optimizar los rendimientos del proceso biológico, se han desarrollado diferentes
parámetros tecnológicos. Dependiendo del tipo de sustrato, se han utilizado varios pretratamientos,
como biológicos, térmicos, químicos, mecánicos y una combinación de ellos, para mejorar la
solubilidad y biodegradabilidad de la materia orgánica ( La fi tte-Trouqué y Forster, 2002 ) aumentando
el área de superficie del sustrato orgánico y / o la actividad enzimática microbiana ( Cesaro y
Belgiorno, 2014 ) y, por lo tanto, el rendimiento del biogás. Entre estos, el pretratamiento mecánico se
usa comúnmente para reducir el tamaño de partícula del material orgánico y podría aplicarse con
éxito a nivel de escala completa para su viabilidad económica y fácil implementación ( Ariunbaatar et
al., 2014 ) Además, el tratamiento de OFMSW combinado con estiércol en un proceso de codigestión
se ha establecido para aumentar la producción de biogás y estabilizar el proceso ( Hartmann y
Ahring, 2005 ) ya que el uso de inóculo permite tener un inicio rápido del proceso y un equilibrio
correcto de las poblaciones bacterianas ( Fantozzi y Buratti, 2011 ) Sin embargo, el uso de abono
fresco como inóculo implica varias desventajas, como problemas de salud debido a la presencia de
patógenos. Para superar este problema, podría ser posible usar estiércol granulado estabilizado y
libre de patógenos ( Holm-Nielsen et al., 2009 ) Sin embargo, aunque el proceso anaeróbico es un
proceso biológico que depende de una cooperación compleja de numerosos microorganismos con
diferentes capacidades metabólicas, la influencia de la estructura de la comunidad microbiana en la
función del digestor, así como en su estabilidad, ha sido poco investigada ( Venkiteshwaran et al.,
2015 ) En los últimos años, los estudios se han centrado principalmente en la dinámica de la
comunidad microbiana utilizando enfoques moleculares relacionados con parámetros químicos ( Rui
et al., 2015; Solli et al., 2014; Yi et al., 2014 ) Sin embargo, el uso de una combinación de técnicas
dependientes y dependientes del cultivo podría ser un enfoque útil para investigar los grupos
microbianos ecofisiológicos específicos activos y en crecimiento.

Figura 1. Representación esquemática de biodigestores piloto de 100 L (NHP SRL / ESCo, Nápoles, Italia).

En el presente trabajo, se desarrollaron tanto un enfoque microbiano dependiente del cultivo
como uno independiente del cultivo para evaluar las relaciones entre las comunidades bacterianas y
arqueológicas, con la producción de metano en una digestión anaeróbica a escala piloto utilizando
OFMSW pretratado mecánicamente inoculado con estiércol granulado comercial. Estos resultados
0.5–5 cm) usando una amoladora manual de acero. Se usaron dos digestores no inoculados (Ca y
Cb) como controles.
El análisis de las comunidades microbianas en las muestras de desechos orgánicos se realizó
en la matriz inicial (C0) y luego, después de 21 días de digestión anaeróbica, mediante el muestreo
de 1 kg de biomasa, como se describe en las Secciones 2.3 y 2.4 .
2.2. Características fisicoquímicas

nos ayudarán a comprender el papel de los diferentes microorganismos en el desempeño de la

digestión anaeróbica dependiendo de las condiciones de operación, como temperatura, pH, La mezcla de residuos se caracterizó física y químicamente de la siguiente manera: durante el

contenido sólido, diversidad y abundancia microbiana, así como la estructura física y química de los proceso, la temperatura ( C) y el pH se midieron utilizando sensores de temperatura específicos

desechos orgánicos, incluido el pretratamiento. y tamaño de partícula. (Mettler-Toledo Sp

a.) colocado en el núcleo del biodigestor. Los sólidos suspendidos totales (TSS) y los sólidos
suspendidos volátiles (VSS) se evaluaron según los métodos estándar ( APHA, 2005 ); El valor de
DQO se midió con un termorreactor (Velp Scienti fi c ECO08, Usmate (MB), Italia) y un fotómetro
(Velp Scienti fi c PF-3 COD-usando el kit NANOCOLOR , Usmate (MB),

2. Materiales y métodos Italia) según el fabricante

instrucciones.

2.1. Biodigestión de residuos sólidos municipales orgánicos y muestreo El biogás se controló y se recogió en bolsas Tedlar de 10 litros (bolsa de muestreo de gas
Tedlar, Sigma-Aldrich, Milán, Italia). CH 4, CO 2,

La digestión anaerobia a pequeña escala de la fracción orgánica de los residuos sólidos y O 2 como porcentaje del volumen de gas de muestra (% v / v) y H 2 Se midieron S (ppm) con un

municipales (OFMSW) se llevó a cabo en diez digestores piloto (NHP srl / ESco, Nápoles, Italia) en la detector de gas portátil (serie PGD 2

estación experimental del Departamento de Ciencias Agrícolas (Portici, Nápoles, Italia) . - Controles científicos de estado, Nottinghamshire, Reino Unido).

Los experimentos se llevaron a cabo en digestores aislados. Cada digestor estaba equipado con
un tanque de recolección de plástico (capacidad de retención de 100 L, llenado a 80 L), un
manómetro, un medidor de pH (Mettler-Toledo Sp
a., Milán, Italia) y termómetro (Mettler-Toledo Spa), una válvula para la detección de metano y una
válvula de salida de residuos. Figura 1 muestra un diagrama esquemático de la configuración del
biodigestor.
El OFMSW estaba compuesto de 30% de celulosa, 21% de hemicelulosa, 15% de almidón, 12%
de pectina y 20% de lignina, e inoculado con pellets de estiércol animal (Humoscam, Scam, Modena,
Italia) caracterizado por
0.87 gTSS / g (relación de peso seco / húmedo) y 0.42 gVSS / g (relación de peso seco / húmedo)
con un pH de 7.8. Se llenaron cuatro reactores (B1a, B2a, B3a y B4a) con OFMSW sin tratar y cuatro
reactores (B1b, B2b, B3b y B4b) se llenaron con OFMSW picado (tamaño final
2.3. Cuantificación microbiana
Las suspensiones iniciales de OFMSW se prepararon agregando 20 g de muestra a 180 ml de
solución de Ringer de un cuarto de fuerza (Oxoid, Milán, Italia).
Después de agitar, se hicieron diluciones adecuadas en el mismo disolvente y se usaron para
inocular diferentes medios sólidos y líquidos para hacer crecer los grupos microbianos genéricos y
funcionales. Se analizaron tres placas o tubos de cada dilución.
Las muestras se caracterizaron por bacterias aeróbicas y anaeróbicas, bacterias formadoras de
esporas y hongos, así como otros grupos microbianos tales como celulolíticos proteolíticos, de
amoníaco, aeróbicos y anaerobios, pectinolíticos, amilolíticos, acidificantes y metanogénicos. Todas
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los análisis se llevaron a cabo de acuerdo con Pepe y col. (2013) . Las condiciones sanitarias fueron
además considerado por contando
Enterobacteriaceae.
Se enumeraron las bacterias heterótrofas aerobias y anaerobias totales en agar de recuento en
placa (Oxoid, Milán, Italia). Las placas fueron incubadas durante 5 días en condiciones aeróbicas y
anaeróbicas (Anairógeno de Oxoid TM Sistema) a los 28 C. Las bacterias formadoras de esporas se
cultivaron en el mismo medio después de pretratar las diluciones a 80ºC durante 10 minutos.
Los hongos (moho y levadura) se cultivaron en agar con extracto de malta (oxoide)
suplementado con cloranfenicol (100 mg L 1) a 28 C por 7 días.
Biomedicals, Illkirch Cedex, Francia), según las especificaciones del fabricante.
la
2.4.2 Amplificación por PCR de fragmentos de ADNr 16S arqueales
La huella genética de los fragmentos de ADNr 16S arcaicos por DGGE se realizó mediante dos
reacciones de PCR diferentes. Para la primera ronda, los cebadores oligonucleotídicos sintéticos
universales, Arch 46f (5 0- YTA AGC CAT GCR AGT-3 0; Øvreas et al., 1997 ) y Arch 1017r (5 0- GGC
CAT GCA CCW CCT CTC-3 0; Barns et al., 1994 ), fueron usados. La mezcla de PCR fue como se
describió previamente ( Ventorino et al., 2017 ) La condición de PCR se optimizó de acuerdo con Akarsubasi
y col. (2005) .

Las bacterias celulolíticas aerobias y anaerobias se enumeraron en medio de agar CMC (5 g L 1 de Para la segunda ronda, se realizó una PCR anidada utilizando los cebadores, Arch 344-f-GC (5 0- GAC
carboximetilcelulosa, 1 g L 1 de [NH 4] NO 3, 1 g L 1 de extracto de levadura, 50 ml L 1 de solución salina GGG GHG CAG GCG CGA-3 0;
estándar, 1 ml L 1 de solución de oligoelementos, 0.1% rojo Congo y 15 g L 1 de agar bacteriológico,
Raskin et al., 1994 ) y Univ 522-r (5 0- GWA TTA CCG CGG CKG CTG-3 0; Amann et al., 1995 ) Sobre la
pH 7.0). Las placas se incubaron durante 7 días en condiciones aeróbicas o anaeróbicas (anaígeno
base del método de
de Oxoid TM
Muyzer y col. (1993) , se añadió una abrazadera GC al cebador directo. La mezcla de PCR y las
condiciones se optimizaron de acuerdo con
Sistema) a los 28 C y celulolíticos se detectaron como se describió anteriormente ( Ventorino et al., Akarsubasi y col. (2005) .
2015 )
Para detectar grupos pectinolíticos, el medio sólido estaba compuesto de 2 g L 1 de pectina
2.4.3 Análisis DGGE de productos de PCR y secuenciación
(Sigma-Aldrich), 1 g L 1 de extracto de levadura, 50 ml L 1 de solución salina estándar, 1 ml L 1 de
Para la huella digital DGGE, 25 metro La L de la PCR anidada se analizó utilizando un sistema
solución de oligoelementos, 5 g L 1 de CaCO 3 y 20 g L 1 de agar bacteriológico, pH 7.0. Después de la
de mutación universal DC-Rad DCode (Bio-Rad Laboratories, Milán, Italia).
incubación a los 28 C durante 7 días, se detectaron pectinolíticos inundando las placas con solución
de bromuro de hexadeciltrimetilamonio al 1% ( Pepe et al., 2013 )
El análisis DGGE de las comunidades arqueales se realizó mediante electroforesis en un gel de
poliacrilamida. [10% (peso / vol)
acrilamida-bisacrilamida (37: 5: 1)] con un gradiente desnaturalizante del 30-70%, según lo descrito
Las bacterias amilolíticas se determinaron usando un medio sólido compuesto de 2 g L 1 de
almidón soluble, 1 g L 1 ( NUEVA HAMPSHIRE 4) NO 3, 1 g L 1 por Akarsubasi y col. (2005) . La electroforesis se realizó a 60 C y 200 V durante 330 min.

de extracto de levadura, 50 ml L 1 de solución salina estándar, 1 ml L 1 de solución de oligoelementos y

Después de la electroforesis, el gel se tiñó con SYBR Gold (20 min) (Invitrogen, Milán, Italia) y
17 g L 1 de agar bacteriológico, pH
se enjuagó en agua destilada (5 min).
7.0. Las placas fueron incubadas a 28 C durante 15 días e inundado con solución de Lugol (Sigma-Aldrich)
Las bandas arqueadas dominantes se extirparon del gel, y el ADN eluido se volvió a amplificar
durante unos segundos para detectar la limpieza de las zonas de color blanco-amarillo.
en las condiciones de PCR descritas anteriormente. DGGE verificó los amplicones utilizando ADN
amplificado de las muestras de OFMSW como control. Los productos que migraron como una sola
El medio sólido utilizado para detectar grupos proteolíticos estaba compuesto por 30 g L 1 de
banda y en la misma posición con respecto al control fueron purificados y secuenciados. Las
gelatina, 50 ml L 1 de solución salina estándar, 1 ml L 1 de solución de oligoelementos y 17 g L 1 de
secuencias de ADN se determinaron y analizaron como se informó anteriormente ( Ventorino et al.,
agar bacteriológico, pH 7.2. Después de la incubación a los 28 C durante 15 días, las placas se
2016 ) y en comparación con la biblioteca de datos de nucleótidos GenBank mediante el uso del
inundaron con azul de naftol negro (0,05%) en solución de ácido acético (7%) y se examinaron para
programa BLAST del sitio web del Centro Nacional de Información Biotecnológica ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov
determinar las zonas de limpieza alrededor de las colonias ( Pepe et al., 2013 )
) para determinar sus parientes filogenéticos más cercanos.

Los amoniacales se enumeraron en un medio líquido (0.2 g L 1 de asparagina, 50 ml L 1 de

solución salina estándar, 1 ml L 1 de solución de elementos traza, pH 6,8), según lo descrito por Pepe
y col. (2013) . Después de la incubación a los 28 C durante 15 días, la presencia de amoníaco se
2.4.4 análisis estadístico
detectó en base al desarrollo del color naranja en 1 ml del cultivo con el reactivo de Nessler agregado
Se utilizó el software Phoretix 1 versión avanzada 3.01 (Phoretix International Limited, Newcastle
(Sigma-Aldrich).
upon Tyne, Inglaterra) para detectar automáticamente las bandas DGGE y realizar un análisis de
agrupamiento después de la coincidencia de bandas de acuerdo con Ventorino y col. (2013) . La
Los recuentos microbianos de bacterias acidificantes se determinaron en placas de agar
matriz de correlación de los patrones de banda se realizó utilizando el método descrito por Saitou y
Chalmers modificadas ( Anastasio et al., 2010 ) Los metanógenos se enumeraron usando medio SAB
Nei (1987) . Finalmente, el porcentaje de similitud (S) de las comunidades arqueales se estimó
( Khelai fi a et al., 2013 ), y las placas se incubaron a 37ºC. C durante 7 días en una cámara
mediante el análisis de la matriz resultante utilizando el método de vinculación promedio en el
anaeróbica (Whitley DG 250 Anaerobic Workstation, Don Whitley Scienti fi c, Shipley, Reino Unido).
procedimiento de agrupación de Systat 5.2.1.

La calidad sanitaria se evaluó contando los Enterobacteriaceae con agar de glucosa biliar rojo
Para evaluar las diferencias entre las muestras en cada grupo microbiano, se realizó un ANOVA
violeta (oxoide) a través del método de vertido en doble capa.
unidireccional y la prueba post hoc de Duncan para la comparación de medias por pares (p <.05)
utilizando el SPSS
Paquete de software estadístico 21.0 (SPSS Inc., Cary, NC, EE. UU.).

2.4. Análisis molecular

2.4.1 Extracción de ADN genómico
Se diluyeron diez g de las matrices OFMSW (1/10) en solución de Ringer (Oxoid) de un cuarto
de fuerza suplementada con Tween80. Dos ml de los 10 1 la dilución se centrifugó a 14,000 sol durante
5 minutos y los gránulos resultantes se usaron para aislamiento de ADN. El ADN microbiano total se
extrajo utilizando un kit FastDNA Spin para suelo (MP
3. Resultados y discusión
3.1. Producción de biogás e influencia de los parámetros operativos.
Se realizó la caracterización fisicoquímica de los desechos orgánicos al comienzo del proceso
de digestión anaeróbica. La caracterización química del sustrato utilizado en este estudio mostró
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una concentración de DQO de 112.5 gCOD / L que indica el potencial de este sustrato para alimentar
el proceso anaeróbico ( Mu et al., 2017 ) y produciendo metano. Este aspecto se demostró aún más
mediante la medición de VSS y TSS que muestra una concentración de TSS de
24,6 (g / g, relación peso seco / húmedo) 97,7% de los cuales era VSS (% TSS). De acuerdo a Sans y
col. (1995) , esta composición de residuos coincidió con el valor medio italiano de la fracción orgánica
de los residuos sólidos municipales.
Debido a que el proceso se realizó a temperatura ambiente, se observaron ligeras variaciones
en las temperaturas del biorreactor que van desde 23 C a 25 C (límite de condiciones psicofílicas y
mesofílicas). Además, la temperatura mesofílica hace que la digestión anaerobia sea más sostenible
económicamente, reduciendo los costos operativos y proporcionando un valor agregado al proceso ( Cesaro
y Belgiorno, 2014 )
En general, el pH aumentó durante el experimento, y los valores oscilaron entre 4.0 y 5.0 en los
biodigestores que producían metano ( tabla 1 ) En particular, el valor de pH inicial (4.0) estaba
relacionado con los desechos orgánicos y la adición de inóculo permite que el pH aumente lo
suficiente para la fase de metanogénesis ( Klocke et al., 2007 ) De hecho, el estiércol animal actuó
como un amortiguador debido a la presencia de amonio ( Pindozzi et al., 2013 ) permitiendo el
aumento del pH y la producción de metano.
La mayor producción de metano se observó en los biodigestores llenos de OFMSW picado ( tabla
1 ) El biogás se liberó después de 7 días, alcanzando valores de 4–15 y 18–20% v / v en reactores
llenos de desechos orgánicos inoculados picados y no picados, respectivamente. Después de 14
días, se observó un aumento significativo en B1b, B2b, B3b y B4b, en el cual el metano se midió a
una concentración de 53-65% v / v, que permaneció mayormente constante hasta el final del proceso
(21 días). Se observó una tendencia similar en B2a, B3a y B4a ( tabla 1 ), aunque la ausencia del
tratamiento picado y / o la inoculación condujo a una producción de metano escasa o nula (B1a, Ca y
Cb). Además, la producción específica de metano (mLCH 4 / gVSS) también destacó las diferencias en
la producción de biogás entre los no picados (8.7–13.8 mLCH 4 /
gVSS) y picado (22–26.5 mLCH 4 / gVSS) desechos orgánicos que alcanzan los valores más altos a
los 14 o 21 días ( tabla 1 ) Además, la producción acumulada específica de metano después de 21
días fue aproximadamente
18,6 mLCH 4 / gVSS y 56.2 mLCH 4 / gVSS en promedio en biodigestores que contienen desechos
orgánicos no picados y picados, respectivamente. De acuerdo a Ariunbaatar y col. (2014) la mecánica
El pretratamiento de la matriz inicial afectó la producción de metano, aumentando así el porcentaje
de metano y la producción específica en 2-3 veces.
Estos resultados estuvieron de acuerdo con los valores de DQO medidos. De hecho, al final del
proceso, en los reactores llenos de residuos no picados (B2a, B3a y B4a), la DQO osciló entre 93 y
96 gCOD / L; mientras que alrededor del 50% de la DQO inicial se consumió en los reactores B1b,
B2b, B3b y B4b (llenos de desechos picados) alcanzando valores de 51-71 gCOD / L. Finalmente, no
se produjo un consumo de DQO relevante en el reactor que condujo a una producción de metano
escasa o nula (B1a, Ca y Cb).
Se sabe que los métodos de pretratamiento mecánico antes de la digestión anaeróbica mejoran
la producción de biogás. De hecho, la producción de metano se ve reforzada por la reducción del
tamaño de partícula que interfiere en la hidrólisis de sustratos complejos, principalmente debido al
aumento del área de superficie específica disponible ( Franco et al., 2016 ) El tamaño de partícula de
los desechos orgánicos se redujo mediante un pretratamiento mecánico que mejora el rendimiento
de biodegradabilidad anaeróbica del sustrato e influye positivamente en la tasa de hidrólisis.
resultando así en un mayor rendimiento de metano
( Kondusamy y Kalamdhad, 2014; Zhang et al., 2014 ) En particular, durante la digestión anaerobia del
desperdicio de alimentos se observó una disminución en la biodegradabilidad del sustrato por Kim y
col. (2000) a medida que aumentaba el tamaño de partícula. Además, Izumi y col. (2010) han
informado que, aunque la digestión anaerobia se ve afectada por el tamaño de las partículas de
desperdicio de alimentos, una reducción excesiva (<0.6 mm) no aumenta la producción de metano.
Aunque los métodos de pretratamiento podrían mejorar la digestión anaeróbica de OFMSW, solo
unos pocos se han aplicado a gran escala debido a su costo adicional, consumo de energía y
condiciones de operación (mantenimiento, control de olores, etc.) ( Ariunbaatar et al., 2014 ) Sin
embargo, en comparación con otros métodos, como los tratamientos térmicos, químicos, biológicos y
termoquímicos, los pretratamientos mecánicos de OFMSW se encuentran entre los métodos más
confiables y pueden aplicarse con éxito a nivel industrial ( Ariunbaatar et al., 2014 ) De hecho, el
pretratamiento mecánico mediante picadura muestra una buena eficiencia y viabilidad económica
debido a sus bajos costos operativos, fácil implementación, consumo de energía moderado, ausencia
de generación de olores y mejora de la deshidratación de lodos ( Ariunbaatar et al., 2014; Cesaro y
Belgiorno, 2014; Mata-Alvarez et al., 2000 ) Sin embargo, en lo que respecta a los aspectos
ambientales, este método tiene la desventaja de no exhibir ningún efecto sobre la eliminación de
patógenos ( Pérez-Elvira

tabla 1
Composición de biogás (% v / v de CH 4 4 y compañía 2) producción específica de metano (mL CH 4 / gVSS) y pH en los reactores durante la digestión anaerobia.

Días 0

77 14 21

Biorreactor CH 4 4 * * CO 2 * * mL CH 4 / pH CH 4 4 * * CO 2 * * mL CH 4 / pH CH 4 4 * * CO 2 * * mL CH 4 / pH CH 4 4 * * CO 2 * * mL CH 4 / pH
[% v / v] [% v / v] gVSS una [% v / v] [% v / v] gVSS una [% v / v] [% v / v] gVSS una [% v / v] [% v / v] gVSS una

B1a 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3.8 0.0 ± 0.0 pags 99,2 ± 0,3 ab 0.0 ± 0.0 pags 3.8 0.0 ± 0.0 pags 98.8 ± 0.5 ab 0.0 ± 0.0 pags 3.8 0.0 ± 0.0 pags 98,3 ± 0,6 ab 0.0 ± 0.0 pags 3.7
B2a 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 4.0 15 ± 1.0 metro 84,7 ± 0,6 F 6.26 ± 0.2 metro 4,5 23 ± 1,0 ijk 76,9 ± 0,5 j 9.6 ± 0.7 yo 4.8 21 ± 0.5 jkl 79,6 ± 1,0 h 8.7 ± 0.4 jk 4.9
B3a 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 4.0 6.6 ± 0.5 norte 93,4 ± 0,8 mi 2.80 ± 0.5 norte 4,5 22 ± 1,0 ij 78,2 ± 0,5 yo 9.2 ± 0.6 ij 4.9 33 ± 1.5 sol 67,1 ± 1,0 metro 13.8 ± 1.0 F 5.0
B4a 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3.8 4.2 ± 0.1 No 95.8 ± 0.8 re 1.75 ± 0.2 o 4.4 25.9 ± 1.0 yo 74,5 ± 0,9 k 10.8 ± 1.0 h 4.6 28 ± 1.0 h 72,7 ± 1,0 l 11,6 ± 0,3 sol 4.9
California 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 4.0 0.0 ± 0.0 pags 99,6 ± 0,7 una 0.0 ± 0.0 pags 3.8 0.0 ± 0.0 pags 98,4 ± 0,5 ab 0.0 ± 0.0 pags 3.6 0.0 ± 0.0 pags 98.7 ± 0.5 ab 0.0 ± 0.0 pags 3.5
B1b 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3.6 20 ± 0.8 l 79,8 ± 0,7 h 8.7 ± 0.5 jk 4,5 60 ± 2,0 si 40,2 ± 0,8 q 25.0 ± 1.0 si 4.6 56 ± 1.0 Delaware 44,1 ± 0,5 o 23,3 ± 0,5 re 4.9
B2b 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3,6 18 ± 1,2 l 82.0 ± 0.5 sol 7.5 ± 0.5 l 4.3 58 ± 1.0 antes de Cristo 41,7 ± 1,0 pags 24,3 ± 1,0 antes de Cristo 4,5 57 ± 1,0 cde 42,9 ± 0,8 pags 23.8 ± 0.5 discos compactos 4.9

B3b 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 4.0 20 ± 0.4 l 80.0 ± 1.0 h 8.3 ± 0.4 k 4.3 65 ± 0.8 una 36,4 ± 0,8 r 26,5 ± 0,5 una 4,5 58 ± 1,3 bcd 42.0 ± 0.8 pags 24,2 ± 0,5 C 4.9
B4b 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3.7 20 ± 1.0 kl 80,2 ± 0,6 h 9.3 ± 0.7 ij 4,5 53 ± 1,5 ef 47,1 ± 0,8 norte 22.0 ± 0.4 mi 4.7 53 ± 2.0 F 47,4 ± 0,7 norte 22.0 ± 0.8 mi 5.0
Cb 0.0 ± 0.0 pags Dakota del Norte 0.0 ± 0.0 pags 3.5 0.0 ± 0.0 pags 97,9 ± 0,4 antes de Cristo 0.0 ± 0.0 pags 3.0 4.0 ± 0.2 No 96,2 ± 0,6 re 0.0 ± 0.0 pags 4.0 3.0 ± 0.2 o 96,9 ± 0,5 discos compactos 0.0 ± 0.0 pags 4.1

Muestras: C0, matriz inicial; Ca, reactor no inoculado lleno de OFMSW; Cb, reactor no inoculado relleno con OFMSW picado; B1a, reactor 1 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B2a, reactor 2 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B3a,
reactor 3 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B4a, reactor 4 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B1b, reactor 1 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado; B2b, reactor 2 rellenado con OFMS picado con estiércol granulado;
B3b, reactor 3 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado; B4b, reactor 4 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado.

**
Los valores representan un porcentaje volumétrico relacionado con un volumen total de gas de 10 L producido en cada tiempo de muestreo y las medias ± DE de tres réplicas. Diferentes letras después de los valores indican diferencias
significativas (P <.05) dentro de cada parámetro analizado (CH 4, CO 2 o ml de CH 4 / gVSS). nd, no determinado.
una Los datos estaban relacionados con el gVSS inicial. 72
 V. Ventorino y col. / Gestión de residuos 73 (2018) 69–77 73

et al., 2006 ) En esta condición, podría ser ventajoso usar un inóculo microbiano libre de patógenos,
como el estiércol granulado, ya que el estiércol animal tratado podría usarse fácilmente como inóculo
para reducir olores y patógenos ( Holm-Nielsen et al., 2009 ) Por lo tanto, a través del uso de pellets
de estiércol animal, el tratamiento de saneamiento del digestato podría no ser necesario porque la
cadena de producción permite la eliminación de los patógenos ( Kothari et al., 2010 ) Además, entre
las ventajas del uso de pellets de estiércol animal, están los bajos costos de transporte y la
posibilidad de usar una masa homogénea. Además, la cadena de producción comercial de pellets de
estiércol animal provoca la fragmentación del estiércol en una masa homogénea que favorece la
descomposición por microorganismos implicados en la digestión anaeróbica ( Cestonaro et al., 2015 )
En comparación con las poblaciones bacterianas, la concentración inicial de hongos en el
sustrato inicial fue baja (6.5 ⁄ 10 6 6 UFC g 1)
como también informó González-Martínez y cols. (2016) . Esta concentración disminuyó
significativamente al final del proceso, particularmente en los biodigestores con la mayor producción
de biogás (B1b, B2b, B3b y B4b), alcanzando valores de aproximadamente 10 3 UFC g 1 ( Tabla 2 ), lo
que indica que las bacterias eran dominantes en la digestión anaerobia de OFMSW ( Lin et al., 2016 )
Los grupos funcionales aeróbicos y anaeróbicos en los ciclos C y N, como las bacterias celulolíticas,
pectinolíticas, amilolíticas y proteolíticas, estuvieron inicialmente presentes en una concentración de
10 7 7 UFC g 1) Estos grupos funcionales están involucrados en las actividades de degradación inicial a
través de la síntesis de enzimas específicas para la hidrólisis de sustancias complejas, como
polisacáridos, lípidos, proteínas y otros nutrientes presentes en los desechos orgánicos ( Cardinali-Rezende
et al., 2012; Kalia y Purohit, 2008; Sasaki et al., 2011; Yu et al., 2010 ) La abundancia relativa de
estas poblaciones bacterianas en los digestores anaerobios es muy alta (aproximadamente 10 5 5 –10 8
células mL para cada grupo; Gerardi, 2003 ); sin embargo, el agotamiento de las fuentes de
nutrientes, así como la menor concentración de materia orgánica fácilmente disponible en las últimas

3.2. Cuantificación microbiana fases del proceso, disminuyeron significativamente estos grupos microbianos en 1-3 log ( Tabla 2 ) al
final de la digestión anaerobia ( Ranalli et al., 2002 ) Curiosamente, se observó lo contrario en el grupo

Como se muestra en Tabla 2 , el número total de aeróbicos heterotróficos de los amoníacos, porque se detectó un aumento significativo en esta población microbiana en los

las bacterias de la matriz inicial fueron 1 ⁄ 10 9 9 UFC g 1, y este número permaneció constante hasta el reactores productores de biogás, y también se observó un pH más alto ( tabla 1 ) En particular, la

final del proceso anaeróbico para los controles, así como para los digestores no pretratados B1a, actividad metabólica de esta población bacteriana podría ser la causa principal del aumento de los

B2a, B3a y B4a. Por el contrario, se detectó una disminución significativa (aproximadamente 1 log) valores de pH en estos digestores que determinan la producción de metano. Los amoniaceros

en el reactor lleno de OFMSW picado (B1b, B2b, B3b y B4b). Se observó una tendencia similar en pueden crecer en una amplia gama de condiciones ambientales, y su aumento depende de las

las bacterias aeróbicas formadoras de esporas, que disminuyeron significativamente al final de la propiedades fisicoquímicas del sustrato, el pH, la temperatura y la humedad ( Körner y Stegmann,

digestión anaeróbica en los reactores con producción de biogás. Estas bacterias generalmente 2002 ) De acuerdo con los resultados de

comprenden bacilos y son un componente menor de la comunidad microbiana en la digestión

anaerobia de los desechos sólidos municipales, detectados solo durante la puesta en marcha del
reactor ( Cardinali-Rezende et al., 2012 ) Sin embargo, el número total de bacterias anaerobias
heterotróficas varió de 4 ⁄ 10 8 a 1 ⁄ 10 9 9 UFC g 1 en todas las muestras excepto el inóculo granulado (8 ⁄
10 6 6 UFC g 1) Las bacterias anaerobias formadoras de esporas aumentaron aproximadamente 1–3 log
en todos los biodigestores con respecto a la matriz de partida y al estiércol granulado,
respectivamente, lo que confirma que las poblaciones clostridiales eran dominantes en la comunidad
de reactores de varios digestores anaerobios ( Yu et al., 2010 ) De hecho, en condiciones
anaeróbicas, el género Clostridium se encuentra entre la población anaeróbica más común
involucrada en los primeros pasos del proceso ( Pagliano et al., 2017 ) Pepe y col. (2013) , se observó una correlación negativa en el crecimiento de los grupos proteolíticos
y de amoníaco, que están estrechamente relacionados metabólicamente ( Tabla 2 )

Se detectaron bacterias acidógenas a una concentración inicial de

4.6 ⁄ 10 5 5 UFC g 1, aumentando en 2–3 log al final de la digestión anaerobia, aunque el aumento fue
significativamente diferente entre los biodigestores. Como se muestra en Tabla 2 , en los biodigestores
donde el

Tabla 2
Cuantificación de las poblaciones microbianas genéricas y ecofisiológicas (log UFC g 1 o log MPN g 1) en la matriz de partida y en los reactores al final de la digestión anaerobia.

Grupos microbianos Estiércol C0 California Cb B1a B2a B3a B4a B1b B2b B3b B4b
granulado

Aeróbico total 5.8 ± 0.1 mi 9.1 ± 0.1 una 8,9 ± 0,1 ab 8,9 ± 0,1 ab 8.8 ± 0.1 si 9.0 ± 0.1 si 9.0 ± 0.1 ab 8,9 ± 0,1 ab 7,9 ± 0,2 si 8.1 ± 0.1 C 8.2 ± 0.2 C 8.0 ± 0.1 discos compactos

bacterias
Anaeróbico total 6,9 ± 0,0 mi 8.8 ± 0.9 si 8.8 ± 0.1 antes de Cristo 8.8 ± 0.1 antes de Cristo 8.8 ± 0.0 antes de Cristo 9.0 ± 0.1 una 8.8 ± 0.1 si 8.8 ± 0.1 antes de Cristo 8.6 ± 0.1 discos compactos 8.6 ± 0.2 re 8.6 ± 0.1 re 8.7 ± 0.1 bcd

bacterias
Sporigenous aeróbico 4.6 ± 0.1 C 5.6 ± 0.2 una 5.5 ± 0.1 una 5.1 ± 0.1 si 5.5 ± 0.0 una 4.2 ± 0.1 Delaware 4.3 ± 0.1 re 4.0 ± 0.1 sol 4.2 ± 0.1 defg 4.1 ± 0.0 efg 4.0 ± 0.2 fg 4.0 ± 0.1 def
Anaeróbico 2.5 ± 0.3 sol 4.6 ± 0.1 F 4.8 ± 0.1 F 6.1 ± 0.1 una 5.7 ± 0.1 Delaware 5.9 ± 0.1 ab 5.8 ± 0.1 bcd 5.6 ± 0.2 Delaware 5.9 ± 0.1 antes de Cristo 5.5 ± 0.1 mi 5.5 ± 0.1 mi 5.7 ± 0.1 cde
esporigen
Hongos 0.0 ± 0.0 sol 7.7 ± 0.1 una 6.82 ± 0.1 si 5.9 ± 0.1 C 6.7 ± 0.1 si 5.8 ± 0.1 discos compactos 5.7 ± 0.1 discos compactos 5.7 ± 0.1 re 3.0 ± 0.1 mi 3.2 ± 0.1 mi 3.1 ± 0.1 mi 2.8 ± 0.2 F
Celulolíticos aeróbicos 6.2 ± 0.2 si 7.3 ± 0.1 una 6.1 ± 0.1 si 5.8 ± 0.2 discos compactos 5.8 ± 0.0 C 5.5 ± 0.1 re 5.3 ± 0.2 mi 5.3 ± 0.2 mi 3.9 ± 0.1 F 4.1 ± 0.2 F 4.2 ± 0.1 F 4.2 ± 0.1 F
Anaeróbico 5.2 ± 0.0 C 6.2 ± 0.2 una 5.7 ± 0.1 si 5.8 ± 0.1 si 5.9 ± 0.1 si 5.9 ± 0.3 si 5.7 ± 0.2 si 5.7 ± 0.1 si 4.3 ± 0.2 re 4.4 ± 0.1 re 4.2 ± 0.3 re 4.3 ± 0.1 re
celulolíticos
Pectinolíticos 5.2 ± 0.1 re 7.6 ± 0.1a 5.8 ± 0.1 si 5.6 ± 0.1 antes de Cristo 5.1 ± 0.1 re 5.0 ± 0.1 re 5.6 ± 0.2 antes de Cristo 5.5 ± 0.1 C 4.9 ± 0.2 C 5.6 ± 0.2 antes de Cristo 4.9 ± 0.3 re 5.8 ± 0.1 si

Amilolíticos 5.8 ± 0.1 re 7.8 ± 0.0 una 7.6 ± 0.0 si 7.5 ± 0.1 si 7.5 ± 0.1 si 6.8 ± 0.1 C 6.8 ± 0.0 C 6.7 ± 0.3 C 5.1 ± 0.1 mi 5.1 ± 0.2 mi 5.1 ± 0.1 mi 5.1 ± 0.1 mi
Proteolíticos 8.0 ± 0.1 C 7.7 ± 0.1 re 9.1 ± 0.1 una 7.8 ± 0.2 re 8,9 ± 0,2 si 5.8 ± 0.1 ef 5.6 ± 0.1 F 5.9 ± 0.1 mi 4.9 ± 0.1 sol 4.9 ± 0.1 sol 5.0 ± 0.0 sol 5.1 ± 0.1 sol
Amoníaco 4.8 ± 0.2 una 2.3 ± 0.2 mi 2.1 ± 0.0 F 3.0 ± 0.0 re 2.4 ± 0.2 mi 3.5 ± 0.1 C 3.6 ± 0.0 C 3.4 ± 0.2 C 4.4 ± 0.1 si 4.5 ± 0.2 ab 4.4 ± 0.3 si 4.5 ± 0.1 ab
Bacterias acidógenas 0.0 ± 0.0 mi 5.7 ± 0.1 re 8,9 ± 0,1 una 8.3 ± 0.0 si 8.8 ± 0.2 una 8.1 ± 0.1 si 8.2 ± 0.1 si 8.2 ± 0.1 si 7.6 ± 0.1 C 7.7 ± 0.2 C 7.6 ± 0.1 C 7.6 ± 0.2 C
Metanógenos 6.2 ± 0.2 C 3.3 ± 0.2 re 3.3 ± 0.2 re 6.5 ± 0.2 C 3.4 ± 0.2 re 7.3 ± 0.1 si 7.3 ± 0.1 si 7.3 ± 0.2 si 9.2 ± 0.2 una 9.2 ± 0.1 una 9.2 ± 0.1 una 9.2 ± 0.2 una
Enterobacteriaceae 0.0 ± 0.0 h 6.7 ± 0.1 una 5.0 ± 0.2 si 4.2 ± 0.2 re 4.5 ± 0.2 C 4.1 ± 0.0 re 4.0 ± 0.1 re 4.1 ± 0.1 re 2.1 ± 0.2 fg 2.3 ± 0.1 ef 2.0 ± 0.1 sol 2.5 ± 0.3 mi

Muestras: C0, matriz inicial; Ca, reactor no inoculado lleno de OFMSW; Cb, reactor no inoculado relleno con OFMSW picado; B1a, reactor 1 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B2a, reactor 2 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B3a,
reactor 3 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B4a, reactor 4 lleno de OFMSW con estiércol granulado; B1b, reactor 1 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado; B2b, reactor 2 rellenado con OFMS picado con estiércol granulado;
B3b, reactor 3 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado; B4b, reactor 4 lleno de OFMSW picado con estiércol granulado. Los valores representan las medias ± DE de tres réplicas. Las letras diferentes después de los valores indican
diferencias significativas (P <.05).
74 V. Ventorino y col. / Gestión de residuos 73 (2018) 69–77
se produjo la mayor producción de metano (B1b, B2b, B3b y B4b), la carga de bacterias
acidogénicas fue 1 log menor que la de otros biodigestores, ya que las bacterias acidogénicas
disminuyeron durante la fase metanogénica. Esto está de acuerdo con Kwon y Nakasaki (2015) eso
observó una reducción en la diversidad de la comunidad metanogénica y un aumento en la
comunidad acidogénica en la secuenciación de reactores discontinuos donde se produjo una baja
producción de biogás.
Este hallazgo también fue confirmado por la cuantificación de los metanógenos, que revelaron
que los biodigestores B1b, B2b, B3b y B4b tenían la concentración más alta de arqueas
(aproximadamente 2 ⁄ 10 9 9 UFC g 1)
( tabla 1 ) Deublein y Steinhauser (2010) También se detectaron arqueas metanogénicas durante la
fase acidogénica, aunque su número aumentó en la fase metanogénica.
El metano está formado por relaciones sintróficas entre bacterias acidogénicas y arqueas
metanogénicas que difieren en sus necesidades nutricionales y sensibilidad ambiental ( Chen y otros,
2008 ) De hecho, en un reactor discontinuo, la interacción entre estos dos grupos de
microorganismos es un delicado equilibrio debido a diferentes cinéticas de crecimiento y sensibilidad
a las condiciones ambientales. Probablemente, la heterogeneidad de un residuo no picado podría
desempeñar un papel importante como factor operativo para mantener un equilibrio entre estos dos
grupos microbianos ( Demirel y Yenigun, 2002 ) En estas condiciones, los metanógenos parecen
consumir lentamente o no pueden eliminar los productos metabólicos liberados por las bacterias
formadoras de ácido, lo que provoca la acumulación de productos de degradación intermedios,
aunque el mecanismo preciso aún no se ha dilucidado ( Solli et al., 2014; Weiland, 2010 ) Se sabe que
las características físicas de OFMSW están relacionadas con el sistema de recolección y las
fracciones ( Campuzano y González-Martínez, 2016 ) especialmente el tamaño y la densidad de las
partículas y, por lo tanto, los métodos de pretratamiento antes de la digestión anaeróbica no solo
mejoran la producción de biogás sino que también mejoran la aceleración de la tasa de conversión y
residuos sólidos municipales, biorreactores de aguas residuales, tanques de almacenamiento de
/ o la estabilización del proceso ( Cesaro y Belgiorno, 2014 ) Campuzano y Gon zález-Martínez (2016) informó
que los desechos orgánicos generalmente tenían una densidad de 790–810 kg / m 3 representando
una fracción muy heterogénea. Debido a la heterogeneidad y al tamaño de las partículas, el OFMSW
necesita reducir el tamaño mediante molienda, corte o cualquier otro proceso adecuado antes de
usarlo para la producción de biogás ( Al Seadi y Lukehurst, 2012 ) Finalmente, Enterobacteriaceae como
indicador del estado sanitario, se detectaron a una concentración de 4.6 ⁄ 10 6 6 UFC g 1 en la matriz
inicial y disminuyó drásticamente en 3-4 log después de la digestión anaeróbica ( Tabla 2 ) La
eliminación efectiva de patógenos es una de las ventajas significativas del tratamiento de residuos
por digestión anaeróbica ( Kothari et al., 2010 ), particularmente en digestores de etapas múltiples
debido a la acción bacteriana acidogénica ( Kunte et al., 2004 ) De acuerdo con los límites legales
para el uso de lodos de depuradora en la agricultura ( DL No. 99 del 27/1/1992 ), el digestato podría
usarse después del tratamiento de compost.
3.3. Composición taxonómica de las comunidades arqueales.
El análisis molecular de la diversidad de la comunidad arqueológica del OFMSW digerido se
realizó al final del proceso. La composición de las arqueas metanogénicas se evaluó en la matriz de
partida, así como en el estiércol granulado que se usó como inóculo.
Los perfiles DGGE mostrados en Figura 2 ilustran que el número de bandas de especies
arcaicas aumentó durante el proceso anaeróbico con respecto a la matriz de partida (C0),
especialmente en los biorreactores con la mayor producción de metano (B1b, B2b, B3b y B4b).
Las diferencias en las muestras debido a la posición e intensidad de las bandas se evaluaron
mediante análisis estadístico. Análisis de conglomerados ( Figura 2 ) identificaron tres grupos
principales (grupo 1: C0, Ca y Cb; grupo 2: B1a, B2a, B3a y B4a; grupo 3: B1b, B2b, B3b, B4b
y PM) en los que los cambios dentro de las poblaciones arqueológicas mostraron un nivel de similitud
del 60 al 97%.
El grupo 1 incluía muestras de la matriz inicial (C0) y los dos controles (Ca y Cb), mientras que
el grupo 2 agrupaba las muestras recogidas al final de la digestión anaeróbica de los reactores con
OFMSW no picado (B1a, B2a, B3a y B4a). Estos dos grupos mostraron un nivel de similitud del 41%
con el grupo 3, que incluyó muestras de digestato de reactores llenos de OFMSW picado (B1b, B2b,
B3b y B4b) y estiércol granulado (PM).
Para caracterizar las poblaciones arqueológicas involucradas en el proceso de metanización, se
purificaron y secuenciaron 9 bandas dominantes para el análisis filogenético. Las secuencias de
nucleótidos recuperadas de estos perfiles mostraron similitudes en el rango de 97-98% u 87-100%
con la región V3-V4 de las secuencias del gen 16S rRNA de arqueas metanogénicas y no
metanogénicas, respectivamente, de la base de datos pública ( Tabla 3 )
La mayoría de las bandas identificadas estaban relacionadas con el filo Euryarchaeota, seguido
de Thaumarchaeota y Crenarchaeota no cultivado. El mayor número de bandas identificadas como
pertenecientes a géneros arqueo metanogénicos se recuperaron en los biodigestores llenos de
OFMSW picado, que produjo el mayor porcentaje de metano (B1b, B2b, B3b y B4b; tabla 1 ) Este
resultado destacó que el tratamiento previo de la OFMSW homogeneizó la matriz y favoreció el
crecimiento de estas poblaciones microbianas.
En todas las muestras, las arqueas metanogénicas recuperadas incluyeron especies de los
géneros. Methanobrevibacter, Methanobacterium, Methanoculleus y Methanocorpusculum. Entre
estos, Methanoculleus es el género de metanógeno más predominante que se encuentra en los
estiércol porcino, aguas residuales y vertederos ( Barret et al., 2012; CardinaliRezende et al., 2012,
2009; Nayak et al., 2009; Tabatabaeia et al., 2010; Weiss et al., 2008 ) Sin embargo, debido a que los
géneros metanogénicos recuperados en este estudio usan CO 2 y H 2 como sustrato primario para la
producción de metano ( García et al., 2000; Liu y Whitman, 2008 ), su abundancia indica que el
metano se formó principalmente a partir de una vía hidrogenotrófica en los reactores.
Cardinali-Rezende y col. (2009) han observado que solo los metanógenos hidrogenotróficos están
presentes durante la digestión anaeróbica de los residuos sólidos municipales. Además, estudios
previos que han utilizado un enfoque independiente del cultivo para evaluar la diversidad
arqueológica en los reactores que tratan OFMSW, han revelado que las arqueas hidrogenotróficas
son dominantes ( Cardinali-Rezende et al., 2012; Nayak et al., 2009; Sasaki et al., 2011; Tang y otros,
2004 ) Rui
Figura 2. Perfiles de DGGE y dendrograma que muestran el grado de similitud (%) de los perfiles de PCR-DGGE de
las poblaciones arqueológicas al comienzo y al final de la digestión anaerobia.
 V. Ventorino y col. / Gestión de residuos 73 (2018) 69–77
Tabla 3
Identificación de las bandas Archaea sobre la base de la comparación Blast en las bibliotecas de datos GenBank obtenidas por PCR-DGGE. El color gris indica la presencia de las bandas en los diferentes biorreactores.
**
Las bandas se nombran como se indica en el gel DGGE mostrado en Figura 2 .
una Número de acceso de la secuencia de las especies relativas más cercanas identificadas usando el software Blast.
et al. (2015) han observado metanógenos hidrogenotróficos entre las comunidades dominantes de las
poblaciones centrales de las arqueas en los digestores domésticos de biogás. El dominio de los
metanógenos hidrogenotróficos durante el proceso anaeróbico podría deberse a las condiciones de
temperatura y pH. En particular, estas poblaciones exhiben sus funciones en un rango de
temperatura más amplio y son metanógenos predominantes bien adaptados tanto en los procesos de
digestión anaeróbica psicofílica como mesofílica ( Chen et al., 2012; McKeown et al., 2009; O'Reilly et
al., 2010 ) La dependencia de la temperatura de la composición de la comunidad metanogénica fue
demostrada por Kundu y col. (2017) demostrando una transición comunitaria hacia metanógenos
hidrogenotróficos, que corresponde principalmente al orden Methanomicrobiales ( como
Methanobrevibacter y Methanobacterium), bajo baja temperatura de operación en comparación con
reactores operados a 37 C. Además, el pH bajo podría determinar un cambio en las poblaciones
arqueológicas de metanogénesis acetotrófica a hidrogenotrófica ( Goux et al., 2015 ) De hecho, Methanobacteriales
Expresiones de gratitud
( como Methanoculleus y
Metanocorpúsculo) y Methanomicrobiales (como
Methanobrevibacter y Metanobacteria) no fueron influenciados por el cambio de pH y el contenido de
smaltimento dei rifi uti solidi urbani (RSU) ”Decreto di concessione DD n. 1979,
amoníaco ( Kundu et al., 2017 ) En particular, entre los metanógenos recuperados en este estudio, Methanocorpusculum
se correlacionó negativamente con el pH causando la presencia de esta especie a un pH más bajo
que el rango típico (6 <pH <8) del proceso de digestión anaerobia ( Rui et al., 2015 ) así como el
género Methanobrevibacter que se ha informado que crece a un valor de pH <6 ( Savant et al., 2002 )
Arqueas no metanogénicas pertenecientes a la Nitrososphaera
también se identificaron los géneros, particularmente en biorreactores en los que se recuperó poca o
ninguna producción de metano ( Tabla 3 ), probablemente debido a la presencia de O 2 fracciones en el
biogás ( Gonzalez-Martinez et al., 2016 ), así como de amonio ( Rodriguez-Sanchez et al., 2014 ) en
estos digestores. Este hallazgo está de acuerdo con estudios previos que han encontrado que el
oxidante de amonio Nitrososphaera comprende una población abundante o dominante en procesos
de digestión anaerobia analizados por métodos de cuantificación independientes del cultivo ( Chen et
al., 2012; Li et al., 2014 )
Finalmente, en menor medida, se identificó Crenarchaeota no cultivado en los biodigestores B3a
y B3b, así como en el estiércol granulado ( Tabla 3 ) Estas Archaea no metanogénicas se han
detectado en diversos entornos, aunque sus funciones ecológicas aún no están caracterizadas ( Chen
y él, 2016 )
75
4. Conclusiones
El uso de pretratamiento mecánico e inóculo con estiércol granulado fue esencial para aumentar
la producción de metano y estabilizar el proceso anaeróbico, lo que indica que este enfoque
tecnológico puede ser un método útil y rentable para tratar una matriz de partida heterogénea como
OFMSW.
Los principales grupos funcionales microbianos de los ciclos C y N involucrados en el proceso
anaeróbico de OFMSW, así como las poblaciones arqueológicas impulsaron la producción de
metano. Además, la recuperación de los géneros. Methanobrevibacter, Methanobacterium,
Methanoculleus y Methanocorpusculum mostró que la producción de metano creía que la digestión
anaeróbica de OFMSW se formó principalmente a través de la vía hidrogenotrófica.
Este trabajo fue apoyado por NHP SRL / ESCo (Nápoles, Italia) y por la subvención de la
Provincia di Avellino - proyecto de investigación '' Comparazione di diversi sistemi alternativi per lo
13.05.2011.
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