UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADADAS-“E.S.P.

E”
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
MICROBILOGÍA I
Nombre: Stefany Recalde
NRC: 9194
Fecha: 2020-06-22

Título: Tinción de esporas y cápsulas bacterianas.

Resumen:
Bacillus subtilis y E.coli, fueron las bacterias usadas para la observación de esporas,
para ello se realizó el frotis adecuado para el cultivo sólido. Se usaron los colorantes verde
malaquita y safranina para la diferenciación entre esporas y bacilos. Las esporas se tiñeron
de color verde y las bacterias de rojo. Klebsiella pneumoniae se usó para la tinción de
cápsulas, tinción negativa con el colorante negrosina. Se realizó el frotis del cultivo
Klebsiella pneumoniae a pesar de tener cápsula no fue observada en la tinción negativa.
Palabras claves: Verde malaquita, negrosina, Klebsiella pneumoniae
Introducción
Antecedentes:
Bio-Nica (2017), realizó la tinción de Bacillus sphaericus, Bacillus subtilis y
Bacillus thuringiensis para la observación de esporas. Las tres bacterias que emplearon
difieren en su disposición y morfología, sin embargo diferenciaron las esporas de los
bacilos, debido a que los primero se tiñeron de verde y los segundos de rojo.
Justificación:
Algunas estructuras como las esporas, cápsulas bacterianas o flagelos no se logran
teñir con técnicas habituales, es por esto que se hace uso de tinciones especiales, además
estas tinciones permiten la identificación de esporas, bacilos y cápsulas.
Marco Teórico:
Las endoesporas tienen estructura especial, resistente y latente la cual se forma
dentro de la célula, brinda protección a las bacterias de las condiciones ambientales
adversas, son inusual en las células bacterianas, las endoesporas no se tiñen con los
métodos tradicionales como tinción Gram ya que a estos colorantes no se les hace fácil
atravesar la pared, para ello se utiliza la tinción de Schaeffer Fulton para endoesporas, que
se utiliza como colorante principal verde malaquita, este si logra atravesar la pared.
[ CITATION Tor07 \l 2058 ]
 Algunos géneros bacterianos producen en su interior formas de resistencias estas
toman el nombre de endoesporas, estas se producen cuando las condiciones ambientales
son desfavorables, al final el proceso de esporogénesis, la célula se libera la espora al
exterior para la tinción de las esporas se utiliza verde malaquita es un colorante débilmente
básico debido a que posee una carga débil por lo que se une débilmente a la bacteria, otra
de sus ventajas es que penetra en las células vegetativas y cuando se calienta penetra a la
endoespora.[ CITATION Int07 \l 2058 ]
Tanto las capsulas bacterianas como micóticas no tienen la misma afinidad por los
colorantes que otros componentes celulares, por lo que para su tinción se hace el uso de
nigrosina un colorante negro insoluble en agua, el cual contituye una suspensión coloidal
que no puede penetrar a través de la capsula sino la precipita alrededor de ella, por lo que
esta estrutctura se ve como un halo refrigerante alrededor de los microorganismos sobre un
fondo negro o pardo oscuro. [ CITATION Mar09 \l 2058 ]
Objetivos:
 Teñir esporas y cápsulas de bacterias.

Objetivos Específicos:

 Diferenciar esporas de bacilos por su coloración.

 Identificar bacterias con cápsula y sin ella mediante tinción negativa.

Hipótesis:
En la tinción de esporas: Las esporas se teñirán de color verde mientras que los bacilos
serán rojos.
En la tinción negativa: El halo transparente observado alrededor de la bacteria corresponde
a la cápsula, esta no se tiñe.
Métodos:
Tinción de esporas
Se preparó el frotis bacteriano de Bacillus subtilis. Se colocó un trozo de papel de
toalla, del tamaño de la extensión, sobre la placa. Se añadió colorante verde malaquita
cubriendo toda la placa. Se mantuvo la preparación por encima de la llama del mechero con
la ayuda de un trípode y una malla, esto para fijar el colorante, durante cinco minutos. Se
retiró el papel toalla, se lavó con agua destilada para eliminar el exceso de colorante. Por
último, se tiñó la preparación con safranina, para el contraste, durante un minuto. Se lavó
con agua destilada hasta el eliminar el exceso de colorante. Se secó y se observó al
microscopio, objetivo 100x con aceite de inmersión.
Tinción negativa
 Se tomó una pequeña muestra de Bacillus subtilis y de igual manera con Klebsiella
pneumoniae. Se añadió al portaobjetos una gota de nigrosina y se mezcló con el asa
bacteriológica la muestra tomada con el colorante. Se extendió la mezcla con ayuda de un
portaobjetos limpio. Se dejó secar. Se observó al microscopio, objetivo 100x con aceite de
inmersión.
Los procedimientos dados fueron obtenidos de (Manual de prácticas de microbiología,
2020)
Resultados:
Se observaron esporas, que tienen estructura con forma ovalada, teñidas de color verde,
poseen menor tamaño que los bacilos (teñidos de rojo).

Figura 1. Bacillus subtilis- Microscopio óptico 100x.

Se puede observar los bacilos de teñidos de color rojo, pero no la presencia de esporas (color
verde).

Figura 2. E.coli –. Microscopio óptico 100x.

En la tinción negativa, el medio se coloreó con nigrosina (color negro) y las cápsulas bacterianas se
pudieron observar como puntos transparentes atravesados por la luz del microscopio.
 Figura 3. Klebsiella pneumoniae – Tinción negativa. Microscopio óptico 100x.

Discusión:
Tinción de esporas
Debido a que algunas bacterias poseen endoesporas, las cuales son estructuras de
resistencia que les permiten sobrevivir en condiciones ambientales extremas y poseen
cubiertas gruesas e impermeables que no absorben la mayoría de los colorantes, el
portaobjetos se sometió a calentamiento para permitir que el colorante verde malaquita
tiñera las esporas y posteriormente la safranina para la tinción de los bacilos [ CITATION
Fra17 \l 12298 ]. En la práctica en el primer frotis se utilizó muestra de Bacillus subtilis dio
negativo no se observo esporas teñidas de verde, solo se observó artefactos. Para el segundo
frotis donde se utilizo muestra de E.coli no se observo la presencia de ninguna espora.

Tinción negativa
Klebsiella pneumoniae es un representante importante no sólo por su frecuencia
como causa de infecciones asociadas al cuidado de la salud y de la comunidad, sino por los
mecanismos patogénicos que posee, como la capacidad de producir cápsula, parte
importante de esta cápsula es el componente lipopolisacárido, en la tinción de Klebsiella
pneumoniae, para esta práctica no fue posible observar la cápsula y pudo deberse a que el
cultivo no tenía suficientes azúcares que permitan la formación de la cápsula
(Negrón,2009).

Conclusiones:
 La tinción de esporas permitió la identificación de dichas estructuras por una
coloración verde y se diferenciaron de los bacilos debido a que estos tenían
coloración roja.
 Mediante tinción negativa se puede observar a las bacterias no coloreadas sobre un
fondo negro, además es posible visualizar la cápsula de las que la poseen.
Bibliografía:

García, P., Fernandez, M., & Paredes, F. (2005). Microbilogía Clinica Practica. Servicio de
Publicaciones de la Universidad de Cádiz.
Koch, A. (2020) Manual de prácticas de prácticas de laboratorio de Microbiología

Negron, M. (2009). Microbiología Estomatológica. España: Editorial Médica

Panamericana.
Rodriguez, F. (27 de 10 de 2017). Franrzmn. Obtenido de
https://www.franrzmn.com/tincion-de-esporas-mediante-tecnica-de-wirtz/
Toka, J. (2007). Introducción a la Microbiología. España: Editorial Medica Panamericana.
Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Introducción a la Microbiología. Buenos Aires:
Editorial Medica Panamericana.