MICROSCOPIOS ESPECIALES:

Al – longitud de onda de rayos, + angulo de apertura, se consigue de 0.1 micras a

2000 aumentos

MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN

- La luz:
o En medios homogéneos (monorrefrigentes e isótropos)  forma lineal, el
campo se verá oscuro
o En medios anisótropos y birrefrigentes  difracción (rayo ord. y extraord. –
solo vibra en un plano-) Ejm; cuarzo, turmalia, espato de Islandia, topacio, fibras
musculares y nerviosas, fibras de tejido conjuntivo (colágenas elásticas y de
reticulina), conos y bastones de la retina, gotitas de líquido en corteza suprarrenal,
cilios, flagelos, tejido oseo calcificado.

- M. polarización: M. óptico + debajo del condensador (POLARIZADOR; es

desgastado oblicuamente inclinación 60° en cara inf.) y encima del ocular un
PRISMA DE NICOL DE ESPATO DE ISLANDIA –seccionado diagonalmente y pegado
de nuevo con bálsamo- (ANALIZADOR)
- El rayo llega a una cara de NICOL, allí se difracta en un rayo ordinario por
llegar al bálsamo con mucha inclinación –superando ang. Límite – es rechazado
hacia afuera y rayo extraordinario penetra el Nicol vibrando en 1 plano (paralelo
a sección principal), es reflejado hacia el eje óptico del microscópio pasando por el
objetivo y llegando a Nicol analizador.
- Si plano de polarización o sección principal es paralelo a sección principal del
prisma de Nicol polarizador, el rayo polarizado que se difracta es un rayo ordinario
que no pasa Nicol y rayo extraordinario atraviesa sin dificultad, iluminando el
campo (aparece sustancia anisótropa clara)
- Si rota analizador (sección principal perpendicular a sección de polarizador)
el rayo polarizado es extraordinario, no atraviesa analizador y campo se verá
oscuro. ASI SE ESTUDIA LA BIRREFIGENCIA DE UNA SUSTANCIA.
- Se reemplazó Nicol con filtros polaroide formados por cristales de
HERAPERITA –compuesto yodado de la quinina- solo dejan pasar rayos que vibran
perpendicular a ellos

 BIRREFIRNGENTES: alto grado de organización interna y asimetría, estas sust.

Coloreadas con colores vivos debido a matices de colores de interferencia.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA Y DE CONTRASTE DE FASE

-LONGITUD DE ONDA: distancia entre 2 crestas. Da el color

-AMPLITUD DE ONDA: distancia entre vértice sup. De una cresta y vértico inf. De
siguiente. Da intensidad osea brillo (+ amplitud -> + brillo) (- -> -)

-ONDAS EN FASE: 2 ondas con crestas y valles en paralelo. Si se interfieren toman

ondas de amplitud doble: INTERFERENCIA CONSTRUCTIVA brillo + intenso

ONDAS LUMINOSAS CON FASE ALTERADA

Crestas y valles no coincidentes, al interferirse forma onda luminosa de menos

amplitud o se destruye: INTERFERENCIA DESTRUCTIVA contraste negro

-Si onda de > amplitud atraviesa filtro segura -> - amplitud

-Si onda luminosa atraviesa material transparente y no absorvente, ondas se

retrasan y no altera amplitud

-Si onda luminosa atraviesa material transparente y absorvente, ondas retardan, -

amplitud al salir restable velocidad

*Estructuras de tejidos actúan como filtros neutro dan casi mismo grado de brillo,
para diferenciarlo habría que teñirlos, retarda velocidad en ¼ de onda, altera fase
de onda luminosa (no perceptible al hombre) se pueden ver mediante
INTERFERENCIA CONSTRUCTIVA dará + o – amplitud se distinguirá estructuras

MICROSCOPIO INTERFERENCIA

-Usado de interferómetro para medir grosor o índice de refracción del objetoj.

Midiendo Cuantitativamente grado de fase alterada

-Se usa 2 haces de ondas luminosas del mismo origen (ondas coherentes) . se
logra colocando el condensador un separador de haces luminosos.

*Un haz del OBJETO que pasa por este y altera fase según estructura que
atraviesa.
*Un haz de REFERENCIA mantiene ondas en fase, al llegar al objetivo por acción de
otro separador se junta con el haz del objeto (con fases alteradas) allí se
interfieren, dando + o – amplitud. Como haz de REFERENCIA es inalterable,
proporciona un Standard de medición
MIDE PESO Y DENSIDAD DE LA SUSTANCIA.

PERMITE VER ESTRUCTURAS SIN COLOR

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
-Permite observar finos detalles de estructuras transparente y al estado fresco
(ind refracción no puede modificar amplitud para ser visible)
-Incluye placas ópticas (retardora de la longitud de la onda) en el objetivo y en el
condensador un diafragma anular que lanza un cono luminoso encargado de
variar la amplitud, lo que lo hace visible.

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

-Lentes de cuarzo (ocular, objetivo, condensador, porta cubre objeto luz UV
absorbida por vidrio óptico). La imagénes producidas por UV serán recogidas a
nivel del ocular por un filme fotográfico, por uv ser invisible y dañina,
-Luz UV: long. Onda pequeña (2400 – 3650 Angstroms) -> resolución mayor que
luz visible

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
-Se basa en que algunas sustancias químicas(fluorescentes) pueden absorber
energía de ondas UV y luego las emite como ondas de mayor longitud de ondas
comprendidas dentro del espectro de la luz visible. El proceso se llama:
FLUORESCENCIA
-Las estructuras histológicas que contienen esta sustancia aparecen con un brillo
característico, mientras las que no son invisibles.
-Hay 2 tipos de fuorescencia:
* FLUORESCENCIA PRIMARIA O AUTOFLUORESCENCIA: existe en Vit A,
bacilo tuberculoso, la clorofila (fluorescencia roja) riboflavina (fluorescencia
amarilla), etc
*FLUORESCENCIA SECUNDARIA: inducida utilizando colorantes fluorescentes
(fluorocromos)
-Microscopía de fluorescencia: microscopio corriente + fuente de luz UV + uno a
más filtros capaces de impedir que la luz UV llegue al ojo.
-Aplicación:
 Inmunofluorescencia: acoplar sustanciasfluorescentes a antígenos y
anticuerpos, sin que pierdan capacidad de reacción. Así se detecta
reacciones antígeno- anticuerpo
 Citogenética: estudio de cromosomas, la mostaza de quinacrina se usa para
identificar las bandas de Q1 y con ello se puede tipificar los distintos tipos
de cromosomas del cariotipo.
 Identificación de sustancias químicas varias proteínas han sido identificadas así
MICROSCOPIO DE CAMPO OBSCURO
-Microscopio corriente + diafragma o interceptor para campo obscuro, que deja
pasar un hilo de luz periférica concéntrica, también se puede usar iluminación
oblicua, para mejores resultados condensador parabólico de Siedentopf, formado
por un lente gruesa plano-convexa, cuya curvatura es paraboloide de revolución
con foco corto, calculado para concentrar los rayos en la cara superior del
portaobjeto. Un disco opaco central intercepta todos los rayos de abertura
numérica inferior, permitiendo solo una iluminación lateral anular, así se obtiene
fondo negro por la reflexión total que sufren los rayos luminoso a la salida del
cubreobjeto al pasar al aire, ya que el rayo periférico llega hasta el objeto y como
su ángulo límite es mayor, regresa a condensador, pero si choca con partículas del
objeto que refractan el rayo, el campo será iluminado.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
1.MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN:
(Knoll y Ruska.Alemania) usa corriente de electrones y campos
electromagnéticos para producir imágenes, los microscopios de luz usan ondas
luminosas y lentes de vidrio.
Se aplica las sgts propiedades del electron:
-Se propagan en el vacío, un trayecto ondulatorio, longitudes de onda de
1000 a 1000 veces menor que los rayos visibles. La longitud de onda se
determina por voltaje que son acelerados.
-Pueden ser desviados de su trayectoria y concentrados por campos
electromagnéticos
-Son invisibles para el ojo humano, son capaces de impresionar las pantallas
fluorescentes y placas fotográficas
FUNCIONAMIENTO:
- La corriente de e es generada por un filamento de tungsteno al que se
aplica una diferencia de potencial de 60000 a 80000 voltios.
- EL haz es concentrado por un primer campo electromagnético generado
por una bobina, que actúa de condensador, y es enviado al objeto, luego
de atravesarlo es concentrado por un segundo campo electromagnético
generado por una bobina que actúa de objetivo, así se forma una imagen
real, aumentada e invertida del objeto. Los e- son recibidos por un tercer
campo electromagnético generado por una bobina que hace las veces de
 ocular proyectando la imagen sobre una pantalla fluorescente, donde se
hacen visibles las imágenes.
- Los e que llegan al preparado y lo atraviesan sin modificar curso al llegar
a la pantalla producen fluorescencia. Los e que chocan las estructuras del
preparado tienen mayo densidad, se dispersan y se desvían, siendo
detenidos por un diafragma y no llega a pantalla -> zonas oscuras son
regiones de alta densidad.
- La imagen útil se obtiene reemplazando la pantalla por una placa
fotográfica la cual es impresionada por los electrones
- En m. electr. Modernos se usa lentes auxiliares que se colocan entre
objeto y proyector, logrando mayores aumentos
VENTAJAS:
Permite altas resoluciones (10 a 15 A°) pueden producir de 20000 a 3000
aumentos directos; se les agrega el aumento de la ampliación fotográfica puede
llegar a aumentos de un millón o más. Permite conocer ultra estructura
biológica.
DESVENTAJAS:
-No observar células vivas, ya que deben estar deshidratadas.
-Cortes demasiados finos (200 a 1000 A°) por el escaso poder de penetración
-Las estructuras no pueden ser coloreadas, se usa “colorantes electrónicos”
metales pesados como osmio ( + imp) plomo uranio y lantano, que aumentan el
contraste de estructuras.

2.MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO:

Permite apreciar imágenes tridimensionales de células y tejidos, Se forma
con un rayo fino de 100 A° o menos. Los e desplazan tocando punto por punto, los
tocados emiten electrones (secundarios) lo que son captados por detectores
especiales que generan corriente de e proporcionales a la intensidad de emisión
de electrones secundarios. Estas se transmiten a las placas detectoras de un tubo
de televisión en la pantalla aparece la imagen de la superficie.
No es necesario cortes finos porque no tiene que atravesar muestra
La resolución es limitada 100 A° max. Por su gran profundidad permite
imagenes con notable calidad tridimensional.

OTROS MEDIOS DE OBSERVACIÓN DIRECTA DE CÉLULAS Y TEJIDOS

A. EXTERIORIZACIÓN Y TRANSLUMINACIÓN DE ORGANOS
 Algunos órganos pueden ser exteriorizado y estudiados in vivo por
transiluminación y a través del microscopio con un aumento relativamente
bajo. EJM: secreción pancreática, ovulación
B. LACÁMARA
B. LA CÁMARATRANSPARENTE
TRANSPARENTE
Cámara anterior del ojo es una cámara transparente natural. EJM: circulación
sanguínea, trasplante óvulo,endometrio –menstruación-.
C. CULTIVO DE CÉLULAS Y ORGANOS
Medula espinal en linfa coagulada- Tejido implantado en coagulo sanguíneo
que contiene jugo de embrión como estimulante a crecimiento.
El método de cultivo de órganos aisla el rudimento embrionario de un
órgano para valorar su capacidad de crecimiento y diferenciación. Esto
proporciona medios de experimentación con tejidos y células.

OTROS MEDIOS DE OBSERVACIÓN INDIRECTA DE CÉLULAS Y TEJIDOS

A. HISTOGRAFÍA: Fotografía de cortes histológicos por medio de rayos X,
emitidos por una ampolla y aplicando directamente el corte sobre el lado
sencillo de una película fotográfica de granos muy finos. Corte debe ser
delgado y fijado. Los negativos obtenidos –después de revelados y fijados - se
secan y montan en bálsamo entre porta y cubreobjetos y se examinan a
microscopio. Se usa para estudio de distribución celular o tisular de los cuerpos
de elevado peso atómico elevado del organismo (hierro, yodo, etc.) o
introducidos (bismuto, antimonio, oro, etc. O imágenes obtenidas por
impregnación con metales pesados (osmio, oro, uranio)
B. HISTORRADIOAUTOGRAFÍA: Se basa en reactividad de elementos (isótopos
radiactivos) introducidos es organismos animales, son detectados en los cortes
histológicos por su capacidad de impresionar la emulsión fotográfica expuesta
a su acción durante un tiempo determinado. Las sustancias marcadas (isotopos
radiactivos) se incorporan en estructuras con elemento inactivo
correspondiente al isótopo radioactivo, localizándose en los lugares donde
ellos se sintetizan o renuevan, por lo que se puede seguir evolución o
metabolismo.
Para estudiar ADN (compuesto timidina –timina- ) se usa Timidina Tritiada.
Será revelado en núcleo y mitocondrias por la radioactividad adquirida.
Para estudiar ARN (–uracilo-) se usa Hirudina Tritiada
C. MICROINCINERACIÓN: consiste en fijar los tejidos en alcohol absoluto para
conservar las sustancias minerales en su posición original, luego se incluye
parafina y se obtiene cortes delgados de 3 a 5 micras, extendiéndolas en
alcohol tibio o aceite de parafina y se recogen en láminas de vidrio duro y poco
fusible. Se introducen en horno de cuarzo fundido, 500 a 600 °C durante 15
min. Se destruye materia orgánica y la imagen queda fija en porta objeto. Ya
cubierto con cubreobjeto, se examina con luz incidente oblicua o en fondo
oscuro mate; a este mecanismo se le conoce ESPODOGRAMA.