INGENIERÍA BIOQUÍMICA

7° SEMESTRE

MICROBIOLOGÍA ALIMENTARIA

ACTIVIDAD:
AISLAMIENTO Y MÉTODO DE SIEMBRA PARA BACTERIAS

INTEGRANTES:

Rivas Barrera Daniel

DOCENTE:

MARÍA DE LOURDES VARGAS Y VARGAS

PERIODO ENERO-MAYO 2020

Índice:

Objetivo…………………………………………….3
Introducción………………………………………..3
Materiales…………………………………………..3
Metodología………………………………………..4,5,6
Resultados……………………………………………7
Preguntas……………………………………………..8
PRÁCTICA # 1
AISLAMIENTO Y MÉTODO DE SIEMBRA PARA BACTERIAS
OBJETIVO:
El alumno aplicará las técnicas más comunes para el aislamiento y métodos de
siembra de bacterias.
INTRODUCCIÓN:
Las técnicas más usadas en laboratorio de Microbiología, es probablemente la
transferencia de microorganismos de un ambiente a otro con el propósito de
cultivarlos. Siempre hay muchos microorganismos en el aire que no circundan y en
toda la superficie en el medio ambiente. Debido a esto es necesario tomar las
debidas precauciones, para evitar que estos contaminantes penetren en cajas,
tubos, pipetas y demás utensilios de laboratorio. La cuestión sería más sencilla si
una vez aislada la cepa, esta se pudiera mantener indefinidamente en el mismo
recipiente original; pero los microorganismos, como la gente, requieren de una
provisión de alimentos continua, así como la alimentación constante de sus
productos de desecho. Después de una población de microorganismos ha estado
creciendo por cierto tiempo, debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de
otra manera el crecimiento y la supervivencia no puede continuar. Por esta y por
otras razones han ideado técnicas de inoculación y cultivo. La creencia de que
para la transferencia sea exitosa, el asa debe extraer gran cantidad de material de
cultivo, es uno de los errores más comunes en el principiante. Esto es obvio, si se
tiene en cuenta que una colonia de bacterias del tamaño de la cabeza de un alfiler
puede tener varios millones de microorganismos, que con una cantidad
pequeñísima de material (casi invisible) que se adhieran al asa, el método
analítico no se puede aplicar cuando hay más de una. Idealmente, uno debería
aislar una sola célula bacteriana individualmente y luego transferirla a un medio
estéril hasta que se divida para generar muchas más bacterias; todas de una
misma célula. Una población de ese tipo se denomina clona y, en este caso uno
puede tener certeza de haber logrado un cultivo puro.
MATERIAL Y EQUIPO
  15 pipetas de 1 ml  100 ml de solución salina al
 14 cajas Petri 0.85%
 Mechero Fisher  Agar nutritivo (para 14 cajas de
 Varilla de vidrio Petri)
 Asa de platino  Alcohol etílico
 Gradilla  Matraz Erlenmeyer de 500 ml
 11 tubos de ensayo (con tapón  Vaso de precipitado de 500 ml
de algodón)  Papel dextraza
 Algodón
METODOLOGÍA:
Pasos previos para la aplicación del método de diluciones en el aislamiento de
bacterias:
1. Lavar perfectamente el material y secarlo.
2. Poner a las pipetas el filtro de algodón y envolverlas.
3. Las cajas Petri se envuelven y junto con las pipetas se esterilizan en la
estufa a 160ºC durante una hora.
4. Preparar el agar nutritivo necesario y esterilizar en autoclave a 121ºC por
15 minutos.
5. Realizar el vaciado del medio del cultivo en las cajas Petri en condiciones
estériles (*) y dejar gelificar.
6. Al mismo tiempo esterilizar 10 tubos de ensaye con 9 ml de solución salina
al 0.85% cada uno.
Terminados los pasos anteriores, se procede a hacer las disoluciones de la
manera siguiente.
1. Se toma una muestra en este caso agua de perro
2. Con una pipeta se toma 1ml de la solución anterior procurando no mover el
sedimento al tomar la muestra, y verter al otro tubo con solución salina,
marcándolo como disolución 1x10-2.
3. Homogenizar el tubo anterior y con una pipeta tomar 1ml de su contenido,
añadiéndolo a otros de los tubos, marcar como disolución 1x10-3.
4. Proceder de la misma manera con los siguientes tubos hasta obtener la
disolución 1x10-10.
Después de usar las pipetas (una distinta en cada paso de disolución a disolución
y estéril) se devuelven a sus respectivas envolturas para evitar contaminar la
mesa de trabajo.
Método de aislamiento por varilla acodada.
Hechas las diluciones se escogen las adecuadas para el aislamiento. Las
diluciones que se utilizarán serán: 1x10-2, 1x10-4, 1x10-6, 1x10-8, 1x10-10.
El procedimiento que se describe a continuación es aplicado a cada una de las
diluciones que se elijan.
1. Se procede a tomar 0.1ml de la solución deseada con una pipeta estéril,
procurando homogenizar antes de tomar la muestra.
2. Depositar la muestra en el centro de una caja Petri con agar nutritivo.
3. Hacer por duplicado cada dilución.
4. Se extiende el inoculo por toda la superficie del cultivo, con ayuda de una
varilla de vidrio, esterilizando previamente la varilla bañándola con alcohol y
flameando al mechero. Trabajar en área estéril.
5. Etiquetar cada inoculo, poniendo: fecha del inoculo, numero de dilución y
nombre del alumno.
6. Incubar a 36°c de 24 a 48 horas.
Método de aislamiento por estría cruzada.
Los pasos para la aplicación de este método son los siguientes:
1. El asa platino se expone a la flama del mechero hasta quedar al rojo vivo.
2. Se coloca el asa a 10-15 cm de la flama del mechero, esperando
aproximadamente 20 segundos para que se enfrié.
3. Se toma el tubo con la dilución a inocular, introduciendo el asa hasta el
fondo del mismo, agitando su contenido para homogenizar.
4. Se saca el asa del tubo procurando que el aro contenga una delgada
película del líquido que servirá para ser inoculado.
5. Alzar a la altura de la flama del mechero la caja Petri con agar nutritivo,
utilizando la mano contraria con la que se tiene levantada el asa de platino y elegir
un punto en el medio de cultivo, al cual la pondremos punto 1 y comenzamos
hacer una serie de estrías.
6. Se flamea el asa en la llama del mechero hasta el rojo vivo.
7. Se le da un pequeño giro a la caja Petri de tal forma que la punta de la
última estría de la serie anterior, quede a modo para hacer la siguiente serie de
estrías.
8. Comenzando en el punto 2 y con el asa en condiciones estériles y
enfriadas, se hace la segunda serie de estrías terminando en el punto 3.
9. Se repite la operación como indica en el inciso 6, solamente que avanzando
del punto 3 al 4.
10. En la última serie de estrías, que comienza en el punto 4, después de
esterilizar el asa y de enfriarla, se hacen estrías más cortas, pero también más
separadas una de la otra, procurando que se termine esta serie en el centro de la
caja; esto se hace con el objetivo de tener colonias separadas en el centro de la
caja.
11. Se etiqueta las cajas, reportando en esta: fecha del inoculo, numero de
dilución, nombre del alumno.
12. Incubar a 36°c, de 24 a 48 horas.
El termino colonia se aplica a cada una de las masas de crecimiento sobre el agar,
las cuales son producto de células individuales que se dividen repetidamente
hasta formar dichas masas. De una colonia (cultivo puro) se toma algo de material
microbiano para transferirlo a otro recipiente, que es un tubo de conservación con
medio de cultivo, para luego usarse como abasto (cultivo patrón)
El procedimiento de transferencia principia con el flameado del asa hasta que este
esté al rojo vivo, para luego enfriarlo por 10-15 segundos. Con la otra mano que se
agarra la caja, de conde se saca la asada con los microorganismos. Se coloca la
caja sobre la mesa y se toma el tubo de conservación, se le quita la tapa al tubo (o
tapón de algodón) sosteniéndola con el dedo meñique de la mano contraria, hasta
que sea tiempo de volver a tapar el tubo. Nunca deje la tapa sobre la mesa porque
esto contamina el cultivo.
La boca del tubo se pasa sobre la flama del mechero una o dos veces para
destruir cualquier microbio indeseable que se pueda haber adherido al vidrio.
Se introduce el asa al tubo hasta el fondo de este, empezando la inoculación
formando ondulaciones hasta aproximadamente 2 cm antes dela boca del tubo. Se
saca el asa y se flamea hasta al rojo vivo, se flamea 2-3 veces la boca del tubo y
se tapa.
Resultados:
El crecimiento de los microorganismo cultivados por los dos métodos fue muy
rápido a las 24hr ya se tenía en la caja de la disolución 1x10-2 una gran alfombra
de colonias.
Se observó en el microscopio que los microorganismos presentes eran bacilos.
Preguntas
PREGUNTAS.
1. ¿Por qué es necesario, después de cierto tiempo, tener que resembrar de
nuevo al cultivar microorganismos?
Para conservar la sepa de los microorganismo ya que estos después de un cierto
tiempo se les agota la comida y mueren.
2. ¿Cuáles son los métodos de aislamiento estudiados en esta práctica?,
¿Cuál crees que sea el más eficiente?
Método de aislamiento por varilla acodada y método de aislamiento por estría
cruzada. De los dos el mejor sería por el método de varilla acodada, ya que es
más fácil de hacer y se puede evitar la contaminación al no estar abriendo la caja
tantas veces.
3. ¿Por qué no es conveniente hablar al momento de estar haciendo una
transferencia de microorganismos a su cultivo?
Porque los microorganismos que tenemos en la boca pueden viajar ya que al
hablar escupimos y estos llegan hasta donde se encuentra el cultivo y es seguro
que será contaminado.

4. ¿a qué se le llama colonia?

Tipo de asociación intraespecifica en la que cada individuo tiene una función, de
forma que no pueden independizarse unos de otros.
5. Explique a que se le llama colonia en microbiología.
Grupo de microorganismos, generalmente bacterias o levaduras, a los que se
considera procedentes de una única célula madre. Las colonias que crecen en una
placa de agar se diferencian en la forma, color, consistencia y brillo y, por lo tanto,
son características utilizadas usadas como factores de diferenciación e
identificación.
6. ¿con que fin se trabaja cerca del mechero al transferir microorganismos de
un medio a otro?
Los microorganismos son susceptibles al calor y pueden ser destruidos por la
flama que emana del mechero, es por eso que se trabaja con flama