Garcia Chuqui, Juan Carlos PDF

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
A
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UI
Q
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BI
Y
“DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE GENTAMICINA SULFATO A
EN MULTIDERM CREMA DEL LABORATORIO FARMINDUSTRIA S.A POR
I
POTENCIA ANTIBIÓTICA “
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INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES

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FA
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL

DE
DE
QUÍMICO FARMACÉUTICO
CA
TE
AUTOR: Br. GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS

IO
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ASESOR: Mg. CRUZADO RAZCO, LIZARDO.

BI
TRUJILLO-PERU
2013
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
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A Dios;
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Porque somos ciegos en el camino de la vida, él guía nuestros pasos hacia el camino de la verdad, porque
sin él nada sería posible. Y en su infinita sabiduría nos da lecciones difíciles de aprender comprendiéndolas
en el camino de nuestras vidas.
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I A
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A mi papá Pedro José y mi mamá Segunda,
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con amor y cariño, por ser mis primeros mentores, por ser mi apoyo moral, por su amor, cariño,
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comprensión y apoyo sin condiciones ni medida, porque creyeron en mí, porque en gran parte, gracias a
ellos veo alcanzado mi meta.
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Los amo!!! I A
Juan Carlos
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AGRADECIMIENTO
Una vez finalizado mi informe de prácticas pre-profesionales, tengo la obligación de enfrentarme al capítulo más
A
complicado de este trabajo, que no es otro que el de los agradecimientos. He de sintetizar en unas breves líneas mi
sentida y sincera gratitud hacia las personas que me han ayudado. Sin ellas, hubiese sido del todo imposible afrontar
IC
con éxito la elaboración de este trabajo de investigación, en la que tanta ilusión he puesto.
M
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De forma muy especial, quiero dejar constancia de mi agradecimiento a la Dra. Noemí Sarmiento Herrera, a la que
nunca podré corresponder como merecería tantas oportunidades de conocimiento y sabiduría empleados en mi
Q
formación. Por si no fuera suficiente la deuda de gratitud que con ella tengo contraída, me ha distinguido al brindarme
O
las facilidades para este trabajo, y me honra cada día con su personal trato y afecto. Gracias, de corazón, por ser una
verdadera maestra.
BI
Y
Mi gratitud, para la Dra. Rosario Mimbela Mocarro, por haber trabajado conmigo todo el tiempo necesario con una
entrega y dedicación absoluta, además de su inestimable amistad, y porque supo trasmitirme su ilusión para despertar
A
en mí el "gusanito" de la investigación. Su apoyo y confianza en mi trabajo y su capacidad para guiar mis ideas ha sido
I
un aporte invaluable, no solamente en el desarrollo de este trabajo, sino también en mi formación como investigador.
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R M
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DE
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TE
A mis compañeros de la sección de Microbiología del área de control de calidad del Laboratorio Farmindustria S.A,
técnicos y químicos, por su inestimable ayuda incondicional, para la elaboración de este trabajo.
IO
BL
Agradecimiento al Mg. Lizardo Cruzado Razco, por aceptar realizar este trabajo de investigación bajo su dirección. Su
ideas propias, siempre enmarcadas en su orientación y rigurosidad han sido clave del buen trabajo que hemos realizado
juntos, el cual no se puede concebir sin su siempre oportuna participación.
BI
Por último, en el apartado personal, mi gratitud y todo mi amor a Pedro José Garcia Blas y Segunda Chuqui Diestra,
mis padres, compañeros y amigos, por su inestimable apoyo y comprensión para sobrellevar el abandono al que han
estado sometidos durante todo un año que he dedicado a éste trabajo. También gracias, una y otra vez a mis hermanos
y sobrinos, quienes innumerables veces me llamaban para expresarme su apoyo desinteresado, motivo por el que
durante tantas horas no he pensado en ninguna otra cosa más que en el superar mis miedos, en enfrentar los retos y en
seguir conservando la esencia de aquel joven que en el 2007 decidió estudiar y convertirse en un gran Químico
Farmacéutico.
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I A
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PRESENTACIÓN
Señores Miembros del Jurado:
A
En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de Grados
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y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
M
Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de
UI
Prácticas Pre-Profesionales: “Determinación y Cuantificación de Gentamicina
Q
Sulfato en Multiderm Crema del Laboratorio Farmindustria S.A por Potencia
O
Antibiótica “
BI
Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio establecido, a
Y
pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo del
A
I
presente trabajo de investigación.
AC
R M
Trujillo, Mayo del 2013

FA
DE
CA
GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS

TE
Autor
IO
BL
BI
INDICE
RESUMEN ........................................................................................................................ i
A
ABSTRACT...................................................................................................................... ii
IC
M
I. INTRODUCCIÓN .....................................................................................................1
UI
Q
II. MATERIAL Y MÉTODO .........................................................................................8
O
BI
2.1.MATERIAL ........................................................................................................8
Y
2.2.MÉTODO .........................................................................................................10
A
I
AC
III. RESULTADOS .......................................................................................................18

R M
IV. DISCUSIÓN............................................................................................................20
FA
V. RECOMENDACIONES ..........................................................................................24
DE
VI. CONCLUSIONES ...................................................................................................24

CA
TE
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.....................................................................25

IO
ANEXOS .........................................................................................................................27
BL
BI
RESUMEN
En el presente trabajo se determinó experimentalmente la Potencia Antibiótica de la Gentamicina Sulfato
A
en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A mediante el método placa cilindro de
IC
“Valoración Microbiológica”, descrita en el USP 35.
M
La metodología empleada fue el método microbiológico placa-cilindro basado en los lineamientos dados
UI
en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP). Se utilizaron el lote 10422212 de Multiderm crema, un
Q
estándar secundario de Gentamicina Sulfato y el microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC
O
12228.
BI
Con este método microbiológico se encontró 111,74 mg de Gentamicina Sulfato; lo que condujo a
resultados satisfactorios y concordantes con las especificaciones del contenido de Gentamicina Sulfato
Y
del lote evaluado; según la USP 35. A
Se determinó las condiciones de ensayo apropiadas para este método, siendo las principales: la utilización
I
AC
del microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 y del medio antibiótico Nº 11; la
M
proporción de inoculación en el medio de 0,03 mL por cada 100 mL de agar; la dosis media del estándar
R
de 1,00 μg; tiempo de difusión del antibiótico en el agar inoculado de 8 horas; tiempo de incubación de 18
FA
horas y temperatura de incubación entre 36,7ºC.
Se demostró mediante el diseño experimental, con la evaluación estadística de los resultados

DE
experimentales y teniendo como base los criterios de aceptación permitidos, que el método analítico es
especifico, selectivo, lineal (r2 = 0,9989), preciso (CV <5%) en el intervalo de concentraciones estudiadas.
CA
Finalmente, con los resultados obtenidos se pudo concluir que el método microbiológico placa-cilindro
para la determinación de la potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato en Multiderm crema del

TE
Laboratorio Farmindustria S.A es confiable para demostrar la efectividad antibiótica; de acuerdo a los
IO
requerimientos de la calidad establecidos por la USP 35.

BL
Palabras claves: Potencia Antibiótica, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Gentamicina Sulfato,
BI
Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.
ABSTRACT
In the present work I determine experimentally the Antibiotic Power of the Gentamicina Sulfato in the
Multiderm cream of the Laboratory Farmindustria S.A by means of the method plate cylinder of "
A
Microbiological Valuation", described in the USP 35. The used methodology was the microbiological method
IC
plate - cylinder based on the limits given in the Pharmacopoeia of the United States (USP). 10422212 of
M
Multiderm were in use the lot it cremates, a secondary standard of Gentamicina Sulfato and the
UI
microorganism Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. With this microbiological method one found
Q
111.74 mg of Gentamicina Sulfato, which he led to satisfactory and concordant results with the specifications
O
of Gentamicina Sulfato's content of the evaluated lot; according to the USP 35.
BI
One determined the test conditions adapted for this method, being the principal ones: the utilization of the
microorganism Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 and of the antibiotic way N º 11; the proportion of
Y
inoculation in the way of 0,03 mL for every 100 mL of agar; the dose happens of the standard of 1,00 µg;
A
time of diffusion of the antibiotic in the agar inoculated of 8 hours; time of incubation of 18 hours and
I
AC
temperature of incubation between 36,7ºC.

M
It was demonstrated by means of the experimental design, with the statistical evaluation of the experimental
R
results and taking the criteria of acceptance as a base allowed, that the analytical method is specific, selective,
FA
linear (r2 = 0,9989), I add (CV <5 %) in the interval of studied concentrations. Finally, with the obtained
results it was possible to conclude that the microbiological method plate - cylinder for the determination of
DE
the antibiotic power of Gentamicina Sulfato in Multiderm cremates of the Laboratory Farmindustria S.A it is
reliable to demonstrate the antibiotic efficiency; in agreement to the requirements of the quality established by
CA
the USP 35.

TE
IO
Palabras claves: Potencia Antibiótica, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Gentamicina Sulfato,
BL
Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.

BI
ii
I. INTRODUCCIÓN
La industria farmacéutica, como segmento vital del sistema de asistencia de la salud, conduce la
investigación, fabricación y comercialización de productos farmacéuticos y biológicos, así como
dispositivos médicos usados para el tratamiento agudo o crónico y el diagnóstico de la
A
IC
enfermedad 1.
M
UI
Los medicamentos son compuestos esenciales para el ser humano y sus organizaciones sociales.
Se utilizan principalmente para diagnosticar, prevenir, curar o aliviar enfermedades; y en general
Q
para proteger y preservar la salud. A pesar de que han sido considerados como un "bien social”
O
BI
su uso no está exento de riesgos, entre ellos los relacionados con la dosificación, el
incumplimiento de condiciones durante el diseño, procesamiento, almacenamiento, distribución,
Y
prescripción, dispensación y modalidades de conservación y uso por los pacientes 2, 3.
I A
AC
La fabricación de productos farmacéuticos, así como la de otros productos relacionados con el
campo de la salud, es indispensable realizar una inspección completa al proceso de la producción

M
aplicando normas establecidas a fin de garantizar al consumidor que los productos que recibe
R
FA
son de buena calidad 4.

DE
Por lo anterior, para todos los medicamentos, especialmente los antibióticos, es indispensable
garantizar su eficacia y calidad, pues de lo contrario se pone en riesgo la salud del paciente. En
CA
este sentido, se debe evaluar el comportamiento de estas sustancias tanto in vitro como in vivo,
para así certificar la idoneidad de los productos empleados para las terapias. Por eso, a pesar de
TE
que la industria farmacéutica es la que ha desarrollado una de las mayores experiencias en lo

IO
relacionado al aseguramiento y control de calidad, en la actualidad, dichas organizaciones

BL
necesitan establecer sistemas cada vez más eficientes para ser competitivas y de esta manera
satisfacer las necesidades de los clientes y de la propia empresa, además de culminar con el
BI
proceso de comercialización de los productos 5, 6.
En la industria farmacéutica se requiere de una serie de pruebas que aseguren la calidad de los
componentes de un determinado medicamento, como por ejemplo, los ensayos de estabilidad,
que se definen como estudios cuyos resultados sustentan la proposición de aprobación, la
comprobación y/o la modificación del periodo de validez o de las condiciones de
almacenamiento rotuladas de un producto farmacéutico. Otra prueba importante es la
determinación de la potencia o actividad, conceptualizada como el contenido de principio activo
A
o fármaco presente en un producto farmacéutico o en una unidad de dosificación. Ambos
IC
parámetros son fundamentales para garantizar a la empresa productora y a los clientes el
M
cumplimiento de ciertas especificaciones para mantener un alto nivel de efectividad y eficiencia
UI
en el producto. De modo que, éstos se convierten en dos de los ensayos más importantes durante
Q
el control de calidad de los mismos, pues permiten conocer su rango de acción y las diferentes
O
dosis necesarias, además de la duración y permanencia de éstas con respecto al tiempo y las
BI
condiciones de almacenamiento 7.
Y
Los adelantos recientes en el descubrimiento de drogas, principalmente en el campo de la
A
I
biotecnología y en los controles requeridos sobre los procesos de fabricación, están planteando
AC
nuevos desafíos al control de calidad y a los sistemas que operan internamente en la industria y
M
que deben ajustarse a las normas establecidas 1.

R
FA
La garantía de calidad y el control de calidad desarrollan y siguen procedimientos operativos
internos convencionales encaminados a asegurar la calidad, la inocuidad, la pureza y la eficacia

DE
de la provisión de drogas 1.
CA
El control de la calidad es parte de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y comprende el

TE
muestreo, especificaciones y ensayos como también a los procedimientos de organización,

IO
documentación y autorización que aseguren que los ensayos necesarios y pertinentes realmente
se efectúen, y que no se permita liberación de los materiales, ni se autorice la venta o suministro

BL
de los productos, hasta que su calidad haya sido aprobada como satisfactoria, el control de la
BI
calidad no se limita a las operaciones de laboratorio, sino que debe estar presente en todas las
4
decisiones concernientes a la calidad del producto .
El control de calidad dentro de una organización tiene varias funciones principales: pruebas
analíticas de laboratorio de los productos, muestreo, inspección, y pruebas de la materia prima
entrante, componentes del empaque, y el prospecto (inspección física del producto y de las
operaciones intermedias criticas) y control del producto a lo largo de su distribución. Deben de
A
existir especificaciones detalladas y métodos de prueba convalidados con los que se evalúen los
IC
productos y la materia prima 1.
M
UI
Otro concepto a considerar, cuando se aplican las BPM en la industria farmacéutica es el de la
Q
Validación de Procesos, definida por la OMS como el acto documentado para probar que los
O
procedimientos, procesos, equipos, materiales, o sistemas aplicados producen efectivamente los
BI
resultados esperados. Las BPM también se encargan de prevenir las contaminaciones cruzadas,
Y
así como las confusiones que puedan producirse con algunos ingredientes o durante el etiquetado
2
. A
I
AC
La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece, mediante estudios en

M
laboratorio que las características de desempeño del procedimiento cumplen los requisitos para
R
las aplicaciones analíticas previstas. El objetivo de la validación no es comparar un método con

FA
otro ya existente, sino conocer mejor sus características. Los estudios de validación constituyen
una parte esencial de las BPM, deben efectuarse conforme a protocolos definidos de antemano.
DE
Debe prepararse y archivarse un reporte escrito que resuma los resultados y las conclusiones
registrados. Deben establecerse procesos y procedimientos sobre la base de un estudio de

CA
validación. Los cuales se sometan periódicamente a una revalidación para asegurar que con ellos
TE
se puedan seguir obteniendo los resultados deseados. Se debe prestar especial atención a la
validación de los procedimientos de proceso, limpieza y de los métodos analíticos 4,8.

IO
BL
La investigación de los últimos tiempos está apoyada y facilitada por los métodos instrumentales
BI
y de análisis; los cuales entre sus diversas ventajas, incluyen el hecho de requerir cantidades de
muestra cada vez más reducidas, así como también la rapidez con que se realizan los
procedimientos de cálculos mediante computadoras. 9
En la Industria Farmacéutica, los laboratorios de control de calidad junto con las BPM y los
procesos de validación constituyen las "piedras angulares" del sistema de aseguramiento de la
calidad, eficacia e inocuidad. Las pruebas analíticas físicoquímicas que los laboratorios emplean
para demostrar la pureza, potencia, identidad, desempeño, estabilidad y otras características, son
A
muy valiosas. Las técnicas microbiológicas para comprobar la ausencia de contaminaciones, con
IC
gérmenes de alteración o patógenos, en productos estériles o no estériles, deben reunir, al igual
M
que las físicoquímicas, una serie de características para que sean confiables 10.
UI
Q
Para la valoración de antimicrobianos se tienen metodologías referenciadas por los organismos
O
de control y vigilancia; algunas se evalúan con técnicas instrumentales, o bien, mediante
BI
bioensayos. Estos últimos se refieren a ensayos que requieren seres vivos para la determinación
de una característica de calidad en los medicamentos 11.
Y
I A
Las valoraciones microbiológicas forman parte integral de la evaluación de calidad requerida
AC
para la fabricación y comercialización de muchos productos biológicos y de algunos

M
medicamentos o biológicos. Debido a los múltiples factores operativos y biológicos que surgen
R
de su fundamento biológico, por lo general presentan una mayor variabilidad que las pruebas
FA
químicas 12.
DE
En condiciones adecuadas, la actividad (potencia) de los antibióticos puede demostrarse por su
efecto inhibidor obre los microorganismos. En la evaluación de la potencia de las sustancias

CA
antibióticas el efecto medido es la inhibición del crecimiento de una cepa apropiada de

TE
microorganismos, o sea, la prevención de la multiplicación de los microorganismos de prueba. Se
utilizan dos técnicas generales: la valoración en cilindro- placa (o en placa) y la valoración

IO
turbidimétrico (o en tubo) 12.

BL
BI
El ensayo de la placa-cilindro para medir la potencia del antibiótico se basa en la medición del
diámetro de zonas de inhibición de crecimiento bacteriano que rodea a cilindros que contienen
distintas diluciones del compuesto de prueba, las cuales se colocan sobre la superficie de un medio
nutritivo sólido inoculado previamente con un cultivo de un microorganismo adecuado. La
inhibición producida por el compuesto de ensayo se compara con la producida por concentraciones
conocidas de un estándar de referencia 13.
El ensayo turbidimétrico de potencia antibiótica se basa en la inhibición del crecimiento microbiano
A
indica por la medición de la turbidez (transmitancia) de suspensiones de un microorganismo
IC
apropiado en un medio líquido al cual se le han agregado cantidades graduadas del compuesto a
M
ensayar. Los cambios de transmitancia producidos por el compuesto de la prueba se comparan con
UI
los producidos por concentraciones conocidas del material de referencia 13.
Q
O
Bajo las condiciones adecuadas, la actividad (potencia) de los antibióticos puede demostrarse por su
BI
efecto inhibidor sobre los microorganismos. La reducción en la actividad antimicrobiana también
Y
revela cambios sutiles no comparables mediante métodos químicos. En consecuencia las
valoraciones microbiológicas o biológicas siguen siendo, por lo general, el estándar para disipar
A
I
dudas en cuanto a la posible pérdida de actividad 12.
AC
Para dar pie al diseño y evaluación de la valoración de potencia antibiótica de la gentamicina, se

M
utilizó el método placa-cilindro, el cual fue sustentado en referencias bibliográficas y los datos
R
FA
obtenidos.
DE
FARMINDUSTRIA S.A, fabrica y comercializa productos farmacéuticos sólidos no
penicilínicos, líquidos y semisólidos; posee una línea de más de cien productos en el mercado
CA
para la sanidad humana. Dentro de estos productos se encuentra el Multiderm crema, antibiótico
cuyo principio activo es la Gentamicina Sulfato (aminoglucósido).

TE
IO
Los aminoglucósidos poseen un espectro antimicrobiano de acción activa frente a bacilos

BL
gramnegativos no anaerobios. Entre las bacterias grampositivas, muchos estafilococos son
sensibles in vitro, pero su uso clínico debe restringirse a una combinación con un β-lactámico.
BI
La gentamicina fue el primero de los aminoglucósidos modernos y presenta una amplia actividad
contra muchos bacilos gramnegativos; la resistencia ha aumentado de manera considerable en
especial entre las cepas intrahospitalarias 14.
Los aminoglucósidos representan un grupo importante de antibióticos utilizados tanto de forma
tópica como sistemática en el tratamiento de infecciones producidas por bacilos gramnegativos.
Los aminoglucósidos ejercen sus efectos bactericidas por la unión a la subunidad ribosómica 80S
e interfieren con la síntesis proteica.
A
El sulfato de gentamicina deriva de un producto de fermentación de Micromonospora purpurea.
IC
Se encuentra disponible como crema o pomada tópica al 0,1 %. Es utilizada por algunos
M
cirujanos dermatológicos para las operaciones en las orejas, sobre todo en pacientes diabéticos u
UI
otros pacientes inmunocomprometidos, con el fin de proveer profilaxis contra la otitis externa
Q
maligna debido a P.aeruginosa. La fórmula oftálmica es útil para el cuidado de las heridas
O
quirúrgicas en el área periorbitaria 15.
BI
La visión de Farmindustria S.A es brindar valor y el mejor servicio a sus clientes externos e
Y
internos, trabajando en un ambiente confianza y crecimiento personal. Para alcanzar el propósito
A
de la misión, la validación de cada uno de los métodos analíticos (como por ejemplo la
I
AC
valoración microbiológica de gentamicina sulfato) aplicados en un laboratorio especifico, podrá
demostrar con un alto grado de confianza, por medio de evidencia documentada que el proceso
M
produciría de forma consistente y permanente productos que poseen la características de calidad

R
FA
predefinidas cumpliendo y generando valor al cliente. Con métodos de análisis validados se
alcanzan las metas de calidad que se haya trazado como parte de los procesos de mejoramiento
DE
continuo del sistema de calidad, formando una empresa cada vez más líder en la industria
farmacéutica del país.

CA
Farmindustria S.A, fabrica y comercializa productos farmacéuticos, dentro de estos productos

TE
encontramos antibióticos (Multiderm que posee como principio activo Gentamicina sulfato) a los
IO
cuales se les debe garantizar sus efectividad y calidad para lo cual son destinados. La efectividad
BL
de estos productos antimicrobianos, se evalúa para determinar la capacidad de los mismos de
otorgar la protección necesaria o su efecto inhibidor contra cualquier tipo de infección, viral o
BI
bacteriana. Para ello se realiza la valoraciones microbiológica de antibióticos que nos permite
cuantificar la concentración y la potencia de un principio activo en el fármaco para obtener una
medida del efecto de este comparado con la misma dosis de un estándar y de esta forma salir al
mercado con las características predeterminadas.
En el control de calidad de antibiótico se requiere del análisis específico por medio de la
valoración microbiología del antibiótico, que sometido a un proceso de validación garantice de
forma consistente y permanente la confiabilidad y validez de los datos obtenidos y poder así
juzgar de la seguridad(calidad) del producto para su comercialización.
A
Al realizar la valoración microbiológica del Multiderm crema se crea evidencia documentada de
IC
un alto grado de confianza, que el procedimiento descrito suministra una serie de direcciones
M
precisas y definidas del método analítico que deben seguirse al realizar y efectuarse en el
UI
laboratorio para garantizar y cumplir los requerimiento de la aplicación analítica propuesta. Por
Q
lo que se planteó el siguiente problema:
O
¿Qué cantidad de principio activo Gentamicina Sulfato se identificó en el Multiderm crema
BI
del Laboratorio Farmindustria S.A por Potencia Antibiótica?
Y
Los objetivos planteados fueron:
I A
AC
Objetivo General:
M
1. Determinar la Potencia Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del

R
Laboratorio Farmindustria S.A.

FA
2. Determinar la concentración de Gentamicina Sulfato mediante el método de Potencia

DE
Antibiótica en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A.

CA
Objetivos específicos:
TE
1. Determinar si la concentración de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del

IO
Laboratorio Farmindustria S.A, corresponden a las establecidas en la USP 35.
2. Determinar si el método microbiológico placa-cilindro empleado para estimar la Potencia

BL
Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria

BI
S.A es confiable y preciso.
3. Determinar si el microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 es sensible al
antibiótico Gentamicina Sulfato en medio de cultivo N° 11 en la condiciones propuestas .
II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1. MATERIAL
2.1.1. Material de Laboratorio:
A
IC
 Frascos de 100 mL, 250 mL, 1000 mL y 200 mL. Pyrex® Clase A.
M
Frascos de 500 mL. Pyrex® Clase A.
UI
 Fiolas de 10 mL, 50 mL y 100 mL. Kimax® Clase A.
Q
Micropipetas (10 -100 µL). Transferpette® S.
O
 Pipetas graduadas de 5mL, 10 mL y 25 mL, estériles. Brand® - Clase A.
BI
 Placas petri estériles de 20 x 90 mm aproximadamente.
 Placa Petri de vidrio (20x100 mm). Pyrex® USA.
Y
 Cilindros de acero inoxidable estériles diámetro interno 6mm, diámetro
A
I
externo 8 mm y altura 10 mm con una tolerancia de + 0,1 mm.
AC
 Perlas de vidrio.
M
 Frascos Roux.
R
 Tubos.
FA
 Tips estériles.
 Vernier calibrado (0-150 mm) Digital. Mitutoyo.

DE
 Propipeta. Seropet Kartell.

CA
2.1.2. Reactivos, soluciones y Medios de cultivo:

TE
a. Reactivos:

IO
Cloroformo.
 Hidróxido de sodio.
BL
 Ácido clorhídrico.
BI
 Ácido fosfórico.
 Hidróxido de potasio.
 Fosfato monobásico de potasio.
 Fosfato dibásico de sodio dihidro.
 Cloruro de sodio.
b. Soluciones:
 Solución salina 0,9 % estéril.
A
Solución amortiguadora de fosfato N° 3 (Según USP 35).
IC
 Solución de Hidróxido de sodio 1 N.
M
 Solución de Ácido clorhídrico 1 N.
UI
 Solución de Ácido fosfórico 18 N.
Q
 Solución de Hidróxido de potasio 10 N.
O
 Solución Buffer pH-4.
BI
 Solución Buffer pH-7.
Y
Solución Buffer pH-10.
I A
c. Medios de cultivo:
AC
 Agar antibiótico N° 1. Merck®

M
 Agar antibiótico N° 11.DifcoTM

R
FA
d. Equipos:

DE
Baño María. Memmert
 Cabina de Bioseguridad. Esco®

CA
 Incubadora programada entre 32°C-35°C. Presicion
 Incubadora programada entre 36 °C – 37,5 °C. Memmert

TE
 Autoclave a vapor. Amsco

IO
 Autoclave eléctrica. Autester.
 Potenciómetro. Methrom 827.

BL
BI
2.2. MÉTODO 12
2.2.1. Preparación de Medios de Cultivo y Soluciones de Trabajo.
a. Medios de Cultivo
A
IC
Para la preparación de los medios requeridos para la siembra y crecimiento de
M
un microorganismo se siguieron las instrucciones dadas en el Anexo Nº 01.
UI
Podrán utilizarse ligeras modificaciones de los ingredientes individuales, o
Q
medios deshidratados reconstituidos, siempre y cuando los medios resultantes
O
posean las mismas propiedades de promoción de crecimiento o superiores y
BI
produzcan una curva de respuesta estándar similar.
Y
Se disolvió los ingredientes en agua para hacer 1 L y se ajustó con las
A
soluciones de Hidróxido de sodio 1N o Ácido clorhídrico 1N, según sea
I
AC
necesario, para obtener el pH especificado después de la esterilización con
vapor.
R M
b. Soluciones amortiguadoras de fosfato y otras soluciones

FA
La preparación de soluciones reguladoras de pH se hizo de acuerdo como está

DE
indicado en el Anexo Nº 1. Se preparó la solución amortiguadoras Fosfato Nº 3
(0,1 M; pH=8) y la solución salina 0,9 % estéril; las cuales fueron esterilizadas
CA
posteriormente a su preparación y ajuste, por calor húmedo. Se midió el pH
después de la esterilización.
TE
IO
2.2.2. Estandarización del Método.

BL
Se llevó a cabo en un ambiente limpio, asegurando que la limpieza de los

BI
equipos se realice antes y después de la prueba. El material de vidrio utilizado
en la prueba estuvo esterilizado por método de calor a vapor.
10
La temperatura fue controlada durante la siembra del microorganismo y
preparación del inóculo; así como en la incubación de las placas.
2.2.3. Estándar de referencia.
A
La potencia de los antibióticos en el estudio se estableció en “Unidades” o µg de
IC
actividad. La “Unidad” de actividad de Gentamicina sulfato que se empleó es la
M
establecida y definida según el Maestro Federal de los Estados Unidos designado
UI
para este antibiótico. De esta forma para el desarrollo del estudio se empleo un
Q
estándar secundario obtenido a partir de un Estándar de Referencia USP de
O
Gentamicina Sulfato, de Protocolo: 11100185 y de Potencia 594.73 µg/mg.
BI
2.2.4. Muestra de estudio.
Y
La muestra que se utilizó en el análisis fue el Multiderm crema al 0,09 - 0,135 g
A
%, con principio activo Gentamicina Sulfato, de Lote 10422212 y Potencia USP
I
AC
asignada 90 -135 % (indicada en la hoja de inspección del producto terminado)

M
ANEXO 2.
R
La planificación y la ejecución de las valoración microbiológica del antibiótico

FA
muestra (Multiderm crema) se realizó según lo establecido en la USP con
respecto a las especificaciones para Gentamicina Sulfato descritos en la técnica

DE
de Valoraciones Microbiológicas de Antibióticos y en las especificaciones
descritas para la realización de la Validación de los Procedimientos

CA
Farmacopeicos. (USP35, Antibióticos-Valoraciones Microbiológicas (81) pag.
78 y Validación de Procedimientos Farmacopeicos (1033) pag. 5719).

TE
IO
Los análisis estadísticos para la Valoración Microbiológica se realizaron

BL
utilizando el Software (Hoja de cálculo) “Valoración Microbiológica de
Antibióticos, Método de cilindro en placa. Esta Hoja de cálculo fue validada

BI
para proporcionar cálculos en la Valoración Microbiológica de Antibióticos por
el Método de cilindro e placa, demostrando reproducibilidad de resultados frente
a cálculos hechos con una calculadora de mano. Anexo N° 03
11
2.2.5. Preparación y estandarización de la suspensión del microorganismo de
ensayo.
Basados en la técnica de valoraciones microbiológicas descrita en la USP 35, se
determinó:
A
IC
Microorganismo de prueba para el antibiótico Gentamicina Sulfato:
M
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228.
UI
Medio de cultivo (Agar) a emplear para los repiques: Agar antibiótico N°1.
Q
O
Método de valoración: Difusión en placa.
BI
2.2.6. Cultivo bacteriano.
Y
La cepa de Staphylococcus epidermidis liofilizada se obtuvo de las colecciones
A
estandarizadas de la American Type Culture Collection (ATCC). Se reconstituyó
I
AC
el vial liofilizado y a partir de este cultivo de origen se sembró por agotamiento
en placas con agar nutritivo (AN) (Anexo N° 01) y en caldo nutritivo (Anexo N°
M
01) para su recuperación, los medios se incubaron de 32 a 35 °C durante 24

R
FA
horas.
A partir de los aislamientos de cultivo primerio se realizó su identificación a

DE
través de métodos microscópicos mediante tinción Gram y macroscópicos
mediante observación de colonias. Para mantener la viabilidad del

CA
microorganismo durante la validación a partir del cultivo se realizaron

TE
subcultivos en agar nutritivos cada 3 días.

IO
2.2.7. Preparación del inóculo.

BL
Se sembró el Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 en un tubo de Agar

BI
Antibiótico N° 1 inclinado y se incubó a 32-35 °C por 24 horas.
Se lavó el crecimiento del cultivo inclinado de 24 horas con 3 mL de solución
salina estéril SR y perlas de vidrio estériles y se inoculó la superficie de 250 mL
de Agar Antibiótico N° 1 que se halló en el lado plano de un frasco Roux. Luego
12
se esparció la suspensión en forma pareja sobre la superficie del agar con ayuda
de perlas de vidrio estériles; se movió el frasco de lado a lado permitiendo que la
suspensión se ponga en contacto con toda la superficie del agar y se incubó de 32
°C a 35°C por 24 horas.
A
Se preparó la suspensión madre, añadiendo 30 mL de solución salina estéril SR
IC
al frasco Roux, cuidadosamente, se movió el frasco de lado a lado con ayuda de
M
las perlas de vidrio, lavando el crecimiento de la superficie del agar. Se transfirió
UI
asépticamente la solución a un frasco estéril con 20 mL de la solución salina,
Q
obteniendo al final un volumen de 50 mL de la suspensión madre.
O
BI
2.2.8. Determinación de la cantidad de suspensión madre para inóculo.
Y
La cantidad de suspensión madre del microorganismo que se utilizó como
A
inóculo se determinó inoculando diferentes volúmenes de la suspensión madre,
I
AC
comenzando con el volumen sugerido (0,03 mL por cada 100 mL del medio
antibiótico N° 11) para inóculo por la USP 35. Se dejó las placas servidas con la
M
capa siembra previa secada de la capa base (Agar antibiótico N° 11) unos 15
R
minutos y se procedió a dejar caer seis cilindros de valoración sobre la superficie

FA
inoculada desde una altura de 12 mm, utilizando una pinza estéril para asegurar
el espaciado uniforme en un radio de 2,8 cm y se tapó las placas para evitar la

DE
contaminación. Se llenó los seis cilindros en cada placa con 100 microlitros de la
CA
dilución media del estándar de referencia en una concentración de 1,0 µL/mL.
Se incubaron las placas a 36,7 °C durante 18 horas, después de este periodo de

TE
incubación se determinó la cantidad de suspensión madre para el inóculo que

IO
mostró una demarcación satisfactoria de las zonas de inhibición obtenida por la

BL
relación dosis respuesta optima a partir de la cantidad de cultivo del
microorganismo en las placas. (USP 35)

BI
13
2.2.9. Preparación del estándar (Método de la curva patrón).
Diluciones del patrón: La preparación de la solución madre y diluciones de
prueba del estándar se realizaron según lo establecido por la USP 35 en la
A
valoración microbiológica de antibióticos.
IC
Solución stock madre (1mg/mL).- Se pesó una cantidad equivalente a 50 mg de
M
Gentamicina y se transfirió a una fiola de 50 mL. Luego se enrasó con Solución
UI
amortiguadora de Fosfato N°3.
Q
O
Esta solución puede durar hasta 14 días en refrigeración si es un estándar USP.
BI
Solución madre final (1 µg/mL).- A partir de la solución Stock Madre se tomó
Y
1 mL y se llevó a una fiola de 100 mL. Se enrasó con Solución amortiguadora de
Fosfato N° 3.
I A
AC
De la solución anterior se preparó las siguientes concentraciones:

M
a. Concentración 0,64 µg/mL (S1).- Se tomó 0,64 mL de solución estándar

R
y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó con Solución amortiguadora de

FA
Fosfato N°3.
DE
b. Concentración 0,80 µg/mL (S2).- Se tomó 0,80 mL de solución estándar

CA
Fosfato N°3.
TE
c. Concentración 1,0 µg/mL (Dilución Estándar de Referencia) (S3).- Se
tomó 1,0 mL de solución estándar y se llevó a una fiola de 10 mL; se enrasó

IO
con Solución amortiguadora de Fosfato N°3.

BL
d. Concentración 1,25 µg/mL (S4).- Se tomó 1,25 mL de solución estándar

BI
Fosfato N°3.
14
e. Concentración 1,56 µg/mL (S5).- Se tomó 1,56 mL de solución estándar
Fosfato N°3.
A
2.2.10. Preparación de la muestra (Preparar por triplicado).
IC
Dilución de la muestra: se determinó la cantidad de muestra a pesar para la
M
valoración del antibiótico presente en el producto a partir de información que
UI
proporcionó el fabricante de la potencia asignada al producto en el certificado de
Q
análisis.
O
BI
Se pesó 3,0 g de muestra, se trasvasó a una pera de decantación y se añadió 25
mL de cloroformo. Se agitó por 5 minutos hasta la disolución total de la crema.
Y
A
Luego se agregó 75 mL de Solución amortiguadora de Fosfato N° 3 y se agitó
I
AC
por 5 minutos. Se dejó 3 minutos en reposo hasta la separación de fases,
trasvasando 10 mL de la fase acuosa (fase superior) a una fiola de 100 mL. Se

M
enrasó la fiola con Solución amortiguadora de Fosfato N°3.

R
FA
Finalmente enrasar la fiola con Solución amortiguadora de Fosfato N° 3.
La dilución de prueba de cada una de las muestras se trabajó en concentración

DE
1,0 µg/ mL igual al nivel medio del estándar.

CA
2.2.11. Preparación de las placas de valoración (Se emplean 3 placas petri estériles
TE
por cada dilución).

IO
Se prepararon placas de valoración utilizando placas de petri de 20 x 90 mm

BL
aproximadamente a las que se les adicionó 21 mL de medio antibiótico N°11. Se
dejó solidificar el medio en una superficie nivelada durante 40 minutos para

BI
formar una capa de agar base lisa de profundidad uniforme. Se agregó 4 mL de
inóculo como capa de siembra, inclinando la placa petri atrás y hacia delante
para esparcirlo uniformemente sobre la capa base y se dejó solidificar. El inóculo
se preparó adicionando un volumen de 0,04 mL de suspensión madre del
15
microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 por cada 100 mL de
medio agar antibiótico N° 11 fundido a una temperatura de 45 a 50 ° C. Se dejó
solidificar durante una hora.
Una vez sólida la segunda capa de agar, se colocó sobre la superficie 6 cilindros
A
estériles y equidistantes en forma circular en cada una de las placas.
IC
Inmediatamente se cubrió las placas. En todas las placas se aplicó 100 µL de la
M
solución S3, tal como se muestra en el Anexo N° 04 (Las aplicaciones se realizó
UI
con tips estériles).
Q
O
Por cada una de estas soluciones, se preparó 3 placas, obteniendo al final 21
BI
placas por cada lote trabajado. Estas se incubaron por 16 a 18 horas entre 36 °C y
37, 5°C. Transcurrido este tiempo se midió los diámetros de los halos de
Y
inhibición obtenidos en cada una de las placas.
I A
AC
2.2.12. Cálculo de Potencia.

R M
Para calcular la potencia a partir de los datos obtenidos de la medición de los

FA
halos se procedió a interpolar con la curva de estandarización. Con ayuda del
programa o Software se trazó la curva usando los promedios de todas las

DE
mediciones y una transformación logarítmica de las concentraciones con
respecto a la medición de los halos de inhibición. Además se aplicó el Método de

CA
regresión Lineal mediante el procedimiento de mínimos cuadrados y se hizo la

TE
prueba de linealidad para comprobar la relación entre las concentraciones y lo
valores obtenidos.
IO
BL
Finalmente el porcentaje o valor de las unidades internacionales de potencia se
calculó haciendo una comparación por regla de tres con el patrón de referencia
BI
utilizado para el antibiótico, del cual sí se conoce con certeza la potencia.
USP < 111> Diseño y análisis de valoraciones biológicas.
Límite: 3,15 mg/g -4,55mg/g (90,0-130,0 %).
16
2.2.13. Evaluación de Resultados
a. Plan de recolección y elaboración de datos.
Instrumentos.-El instrumento que se utilizó para recolectar los datos fue:
A
La Hoja Reporte.
IC
Procedimiento.-La Hoja Reporte se elaboró de acuerdo a lo indicado en
M
USP/BP/PH. Eu; con el fin de que el contenido esté dirigido hacia los
UI
objetivos de la investigación.
Q
Dicho formato recogió en la primera parte los datos del producto
O
farmacéutico a analizar, indicando fecha de inicio así como fecha final del
BI
análisis.
Y
En esta parte se especificó también los datos del estándar (nombre,
A
protocolo, potencia, peso y fecha de expiración); los datos del
I
AC
microorganismo utilizado; los códigos de los equipos a utilizar; el número
de lote de cada uno de los medios que se preparó y la temperatura a la cual

M
serán incubados.
R
FA
En la segunda parte de La Hoja Reporte, se detalló en sí la hoja de cálculo

DE
para hallar la Potencia Antibiótica del producto. Anexo N° 05

CA
b. Análisis de datos.- Los datos fueron procesados y ordenados en tablas de
doble entrada.
TE
IO
BL
BI
17
III. RESULTADOS
DATOS HALOS DE INHIBICION (en mm)

S1 S3 S2 S3 S4 S3 S5 S3
A
1 13.59 15.25 14.85 15.93 16.25 15.85 17.58 15.51
IC
2 13.08 15.58 14.52 15.66 16.63 15.52 17.66 15.58
M
3 13.7 15.95 14.45 15.77 16.52 15.46 17.66 15.62
4 13.18 15.72 14.65 15.85 16.42 15.59 17.85 15.42
UI
5 13.01 15.32 14.63 15.96 16.45 15.66 17.78 15.48
Q
6 13.17 15.42 14.69 15.28 16.58 15.77 17.56 15.54
O
7 13.78 15.36 14.85 15.45 16.58 15.82 17.5 15.69
BI
8 13.58 15.27 14.59 15.63 16.75 15.49 17.63 15.77
9 13.6 15.54 14.66 15.72 16.58 15.63 17.25 15.69
Y
PROMEDIO 13.41 15.49 14.65 15.69 16.53 15.64 17.61 15.59
I A
TABLA N° 1.- MEDIDA DE HALOS DE INHIBICIÓN PRODUCIDOS EN LAS PLACAS QUE
AC
CORRESPONDEN A LAS SOLUCIONES DEL ESTANDAR MEDIO Y LAS

CONCENTRACIONES DEL ESTANDAR.
R M
FA
DATOS HALOS DE INHIBICION (en mm)

M1 S3(1) M2 S3(2) M3 S3(3)
DE
1 15.66 15.22 16.63 15.11 16.27 15.52

2 15.99 15.12 16.77 15.32 15.96 15.32
3 15.96 15.51 15.96 15.52 16.02 15.42
CA
4 16.63 15.32 15.85 15.63 15.85 15.25

5 16.12 15.42 15.96 15.22 16.05 15.53
TE
6 16.12 15.63 15.85 15.32 15.85 15.36

7 16.22 15.63 16.55 15.51 16.02 15.44
IO
8 15.99 15.22 16.22 15.21 16.02 15.58

BL
9 16.32 15.22 16.11 15.22 15.99 15.22

PROMEDIO 16.11 15.37 16.21 15.34 16.00 15.40
BI
TABLA N° 2.- MEDIDA DE HALOS DE INHIBICIÓN PRODUCIDOS EN LAS PLACAS QUE

CORRESPONDEN A LAS SOLUCIONES DE LAS MUESTRAS.
18
SOLUCION
DE PROMEDIO
S3 S3 S3 S3 S3 S3 S3
ESTANDAR TOTAL
MEDIO
A
PROMEDIO 15.49 15.69 15.64 15.59 15.37 15.34 15.40 15.604
IC
M
TABLA N° 3.- PROMEDIO DEL ESTANDAR MEDIO (S3) DE LA CURVA ESTANDAR.
UI
Q
O
SOLUCIONES
BI
S1 S3 S2 S3 S4 S3 S5 S3
DEL ESTANDAR
Y
PROMEDIO
13.41 15.49 14.65 15.69 16.53 15.64 17.61 15.59
CORREGIDO
A
CORECCIÓN 0.11 -0.09 -0.04 0.02
I
AC
COEFICIENTE DE
2.20 1.50 0.91 1.41 0.86 0.92 0.98 0.73
VARIACIÓN (%)
R M
FA
TABLA N° 4.- CORRECCIÓN Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN DE LOS PROMEDIOS

DEL ESTANDAR MEDIO (S3) Y DE LAS SOLUCIONES S1, S2, S4, S5 DE LA
CURVA ESTÁNDAR.
DE
CA
M1 S3(1) M2 S3(2) M3 S3(3)

SOLUCIONES DE LAS MUESTRAS
TE
PROMEDIO CORREGIDO 16.11 15.37 16.21 15.34 16.00 15.40

IO
CORECCIONES 0.24 0.26 0.20

BL
COEFICIENTE DE VARIACIÓN
1.67 1.24 2.18 1.14 0.78 0.82
BI
(%)
TABLA N° 5.- CORRECCIÓN Y COEFICIENTE DE VARIACIÓN DE LOS PROMEDIOS

DEL ESTANDAR MEDIO (S3) Y DE LAS SOLUCIONES M1, M2; Y M3.
19
IV. DISCUSIÓN
El desarrolló del método de difusión en placa-cilindro para la valoración de potencia antibiótica
A
de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria, el cual fue
IC
sensible a una dosis media de 1 ug, pudo obtener resultados precisos dentro de las
M
especificaciones establecidas por la Farmacopea de los Estados Unidos (USP 35).
UI
Q
Se utilizó como microorganismo de prueba al Staphyloccus epidermidis ATCC 12228, debido a
O
que el Laboratorio en mención realizó anteriormente pruebas de comparación con el
BI
Staphyloccus aureus ATCC 29737; siendo los resultados insatisfactorios, debido a las
características propias de estos microorganismos, la actividad propia del antibiótico Gentamicina
Y
Sulfato, concentraciones del inóculo, tiempo de difusión en el agar y de incubación. Se utilizó la
A
temperatura entre 36 y 37,5 °C como la óptima que permite el crecimiento de esta bacteria y la
I
AC
difusión del antibiótico. Como medio de cultivo se empleó el agar antibiótico Nº 11, debido a
M
que es un medio adecuado para el crecimiento del microorganismo a ensayar y ofrece un pH

R
óptimo (7,8-8,0) que evita la degradación de la Gentamicina Sulfato, lo cual ocurre cuando se
FA
trabaja con pHs ácidos debido a la naturaleza básica de esta droga.
Como diluente se utilizó buffer fosfato pH 8, de manera de favorecer la estabilidad del

DE
antibiótico y cloroformo para disolver la Gentamicina Sulfato en la crema ya que al ser éste
ligeramente miscible con el agua permite la difusión del antibiótico en el agar, sin inhibir la
CA
respuesta del microorganismo frente al antibiótico.

TE
Según la USP 35 (2013) los halos de inhibición obtenidos en un análisis de cilindro en placa,
IO
deben estar por encima de 14 mm de diámetro para considerarlos como una zona de inhibición
BL
satisfactoria. Con una concentración del 0,03 % del inóculo, la cual es la empleada por la
mayoría de los laboratorios que aplican métodos microbiológicos para la Gentamicina Sulfato,
BI
los halos de inhibición obtenidos tenían diámetros mayores a 14 mm con bordes claramente
12
definidos que facilitaron su lectura y mejoraron la precisión en el análisis .
20
Dentro de las restricciones el diseño de valoración recomendado emplea una curva estándar de
cinco concentraciones y una sola concentración de cada preparación muestra. Por lo que se
realizó el ensayo de potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato con diferentes sistemas de
A
concentración de dosis, obteniéndose resultados confiables y reproducibles. En las preparaciones
IC
de la solución madre del estándar y muestras problemas, se siguió las indicaciones de la
M
Farmacopea de los Estados Unidos de referencia (USP 35) 12.
UI
Q
Antes de proceder con la incubación de las placas de Petri inoculadas fue necesario que el
O
antibiótico difunda adecuadamente en el agar; caso contrario se produce un crecimiento de los
BI
microorganismos en paralelo con la escasa difusión del antibiótico, teniendo como consecuencia
Y
una actividad inhibitoria no satisfactoria.
Es decir que brindan tamaños de zonas de inhibición fuera del intervalo de 11 a 19 mm, que no
A
I
12
adecuados debido a que contribuyen a la variabilidad de la valoración .
AC
M
La potencia del antibiótico se calcula mediante la interpolación de una recta estándar o patrón
R
obtenida por transformación logarítmica y ajustada por cuadros mínimos.

FA
El método de potencia del antibiótico permite ajustar los datos a una línea recta evaluando un
intervalo de concentración estrecho en el que los resultados se acercan a la linealidad.

DE
Según los resultados se obtuvo la gráfica de la recta, el cual nos permitió establecer que los
resultados son directamente proporcionales a la concentración de la dosis. Anexo N° 06

CA
En la bibliografía consultada se encontró una metodología semejante a la propuesta en: el

TE
microorganismo utilizado, inoculación y acondicionamiento del microorganismo en las placas.
Pero difiere en las concentraciones de las dosis (St1 a ST5) del estándar, la preparación del
IO
estándar, solventes utilizados.

BL
Los resultados de la valoración se consideraron válidos porque la potencia está entre 80% -125%
BI
de la potencia asumida al preparar la solución madre de la muestra. Si la potencia calculada
hubiese estado fuera del intervalo de 80% -125%, el resultado para la muestra pudo quedar fuera
del intervalo de concentración estrecho en el que se ha establecido la linealidad, en cuyo caso, se
21
deberá ajustar la potencia asumida de la muestra según corresponda y repetir la valoración para
12
obtener un resultado valido .
Por lo que no se encontró un trabajo similar de acuerdo a los parámetros óptimos planteados en
A
la presente investigación, las condiciones óptimas de trabajo expuestas en la presente tesis son
IC
resultados referenciales para una posterior estandarización y validación de la metodología de
M
análisis.
UI
Q
Al realizar el estudio estadístico de los datos obtenidos se obtuvo los siguientes resultados: la
O
curva de calibración realizada entre el logaritmo de la concentración en la variable dependiente
BI
(Y) y el diámetro el halo (mm) en la variable independiente(X) resultó ser lineal en el intervalo
Y
de concentraciones comprendidas entre 0,64 y 1,56 µg/mL. Al aplicar la regresión lineal a los
A
datos se obtuvo la ecuación de la recta que se expresó según y= 10.4649 x +26,015. El
I
coeficiente de correlación fue de 0,9989.
AC
M
La regresión lineal obtenida es el diseño del modelo matemático, representado como una
R
ecuación, que permite establecer o simular el comportamiento de la variable dependiente con

FA
12
respecto a la variable independiente .
En el anexo N° 06 se muestra la curva de calibración para Gentamicina Sulfato (Estándar)

DE
teniendo una regresión lineal y un coeficiente de correlación de 0,9989 hasta una concentración
de 1,56 µg/mL arriba de esta concentración el sistema puede perder su respuesta lineal. Dentro
CA
del intervalo de concentraciones 0,64 y 1,56 µg/mL se puede construir una curva de calibración
TE
lineal es el rango lineal.

IO
El coeficiente de correlación obtenido es nuestro índice estadístico que mide la relación lineal
BL
entre las dos variables cuantitativas (Log de concentración y diámetro) y una variable
BI
independiente Y (Log de la concentración). El coeficiente de correlación obtenido es muy
cercano a 1 existiendo una correlación positiva casi perfecta. El índice indica que existe una
dependencia total entre las dos variables denominada relación directa: cuando el halo tiene
mayor diámetro (mm) la concentración µg/mL del principio activo es mayor, es decir cuando
22
una de las variables aumenta, la otra también lo hace en idéntica proporción, es decir hay una
relación directamente proporcional.
El coeficiente de variación nos indica la relación existente entre la desviación de una muestra y
A
su medida. Si comparamos la dispersión en varios Grupos de mediciones, tendrá menor
IC
dispersión aquella que tenga menor coeficiente de variación. En la tabla N°04 y N°05 se
M
muestran los valores obtenido de los coeficientes de variación de las soluciones de la curva
UI
estándar y de las muestras.
Q
O
Con un nivel de confianza de 95% que se corresponde con valores α de 0,05 informa con un
BI
95% de seguridad que nuestro valor estimado se encuentra en un intervalo de confianza. Los
Y
valores obtenidos de los intervalos de confianza, muestran los valores que componen el intervalo
dentro de la cual se considera que se encuentra el verdadero valor de aquella característica que se
A
I
está estimando, el diámetro del halo en milímetros con respeto a la concentración del principio
AC
activo.
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
23
V. RECOMENDACIONES
1. Utilizar microorganismos ATCC para eliminar variables biológicas externas que pueden
interferir con los ensayos.
A
2. Tratar en lo posible de utilizar estándar USP, tener precaución en las condiciones de
IC
conservación.
M
3. Realizar diferentes pruebas en la dosis media del estándar, y ajustar la dosis hasta obtener los
UI
resultados satisfactorios.
Q
4. Antes de incorporar la segunda capa de agar inoculado, tener todas las placas listas; ya que la
O
operación debe realizarse rápidamente para evitar grumos debido al enfriamiento del agar. El
BI
agar inoculado no debe estar a una temperatura mayor de los 45 ºC.
5. Al incorporar el antibiótico en la placa inoculada, dejar difundir el antibiótico en diferentes
Y
periodos de tiempo (en esta fase de desarrollo del ensayo, el volumen de dosis adicionada,
A
cumple un papel relevante); ya que existe una relación directamente proporcional entre el
I
AC
volumen y el tiempo de difusión, la cual influye en las dimensiones de los halos de inhibición.
R M
VI. CONCLUSIONES
FA
1. Se determinó la Potencia Antibiótica de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del

DE
Laboratorio Farmindustria S.A, obteniéndose resultados proporcionales en comparación con los
resultados de las dosis de la muestras y de los estándares USP utilizados.

CA
2. Se determinó la concentración de Gentamicina Sulfato mediante el método de Potencia

TE
Antibiótica en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A.
3. La concentración de Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria

IO
S.A, corresponde a las establecido en la USP 35 (no menor de 900 μg por mg).
BL
4. El método microbiológico placa-cilindro empleado para estimar la Potencia Antibiótica de
Gentamicina Sulfato en el Multiderm crema del Laboratorio Farmindustria S.A es confiable y

BI
preciso.
5. El microorganismo Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 es sensible al antibiótico
Gentamicina Sulfato en medio de cultivo N° 11 en la condiciones propuestas.
24
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Remington G, A. Farmacia: Garantía y Control de Calidad. 20° ed. Tomo 1.Mexico: Ed. Médica
Panamericana; 2003. p. 1137-1141.
A
2. Quevedo F. 2004. El control de la calidad integral de los medicamentos. Revista Diagnóstico.
IC
2004. Vol. 43, no. 2.
M
3. Jiménez M, Estival M. 1995. Estudio de la estabilidad microbiológica de la ampicilina
UI
trihidratada suspensión oral de 125 mg. Revistas Médicas Cubanas. Sintefarma Revista
Q
electrónica. Junio 1995, vol. 1, no. 2.
O
4. DIGEMID. Manual de Buenas Prácticas de Manufactura de Productos Farmacéuticos. Perú;
BI
1999. p. 9, 23, 26.
Y
5. Méndez P, Díaz J, Silva E, González P, Moreno E, Amaya P, Serrato N, Sáenz E. 2005. Estudio
A
comparativo de la actividad antimicrobiana de diferentes presentaciones comerciales de
I
antibióticos de administración intravenosa a través de métodos in vitro. Revista Colombiana de
AC
Ciencia, Química y Farmacia. 2005. Vol. 34, no. 2.

M
6. Camacho A, Arias J. 2002. Implementación y estandarización de la técnica para la

R
determinación de potencia microbiológica de Neomicina en crema tópica fabricada en una planta

FA
productora de medicamentos. Departamento de Microbiología. Pontificia Universidad Javeriana.

Bogotá, Colombia. <http://www.javeriana.edu.co/ciencias/universitas/vol8n1/JARIAS.htm>
DE
7. Leiva A, Morales I, Pachco J, Demiranda J, Esquivel. M y Alvarado A. 2001. Guía para la

Realización de Estudios de Estabilidad de Medicamentos. Comisión Nacional de Calidad de
CA
Medicamentos. Subcomisión de Estabilidad de Medicamentos. Inf. 32, Costa Rica, Octubre

2001.
TE
8. Pradeau D. Análisis Químicos Farmacéuticos de Medicamentos. México: UTEHA; 1998. p.112.

IO
9. Goodman & Gilman. Las bases farmacológicas de la Terapéutica. 12º ed. México: Mc Graw
BL
Hill; 2012. p. 397- 414.

BI
10. Obregón G, Zavaleta A. 2000. Control de calidad de Discos de Sensibilidad Antibiótica

Comercializados en el Mercado Peruano. Revista Medicina Experimental. 2000. Vol. 17, no. 1-
4.
25
11. Méndez P, Díaz J, Silva E, González P, Moreno E, Amaya P, Serrato N, Sáenz E. 2005. Estudio
comparativo de la actividad antimicrobiana de diferentes presentaciones comerciales de
antibióticos de administración intravenosa a través de métodos in vitro. Revista Colombiana de
Ciencia, Química y Farmacia. 2005. Vol. 34, no. 2.
12. USP 35-NF 30. Farmacopea de los Estados Unidos de América. 2012; 1: 70-93 y 5702-5749.
A
IC
13. Belluci S. La Ciencia y Práctica de Farmacia. 20° ed. Estados Unidos: Panamericana; 2000. pp:
M
639.
UI
14. Moreno A. Farmacología Básica y Clínica. 18 ed. Editorial Médica Panamericana. España. 2008
Q
Pp: 827
O
BI
15. Defillo B. Farmacología Médica. 3 ed. Santo Domingo, 1985. pp:49.
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
26
A
IC
M
UI
Q
O
BI
ANEXOS Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
27
ANEXO N° 01. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y SOLUCIONES

AMORTIGUADORAS
I. PREPARACIÓN DE CALDO NUTRITIVO
pH: 7,0 + 0,2 a 25°C
A
IC
Preparación: Disolver 8,0 g en 1 Litro de agua purificada calentando en un baño de agua
hirviendo o en corriente de vapor; tratar en autoclave (15 minutos a 121°C).
M
Composición Típica:
UI
Peptona de carne ……………………………… 5,0 g
Q
Extracto de carne ……………………………… 3,0 g
O
BI
II. PREPARACIÓN DE AGAR NUTRITIVO
Y
pH: 7,0 + 0,2 a 25°C
A
Preparación: Disolver 20, 0 g en 1 Litro de agua purificada calentando en un baño de agua
I
AC
M
Peptona de carne ……………………………… 5,0 g

R

FA
Agar –agar …………………………….. 12, 0 g

DE
III. PREPARACIÓN DE AGAR ANTIBIÓTICO N°1

CA
pH: 6,6 + 0,2 a 25°C
Preparación: Disolver 30,5 g en 1 Litro de agua purificada calentando en un baño de agua

TE

IO

BL
Extracto de levadura ……………………………… 3,0 g

BI
Peptona de caseína .……………………………... 4,0 g
Peptona de carne ………………………………… .. 6,0 g
D (+) – glucosa ………………………………….. 1,0 g
Agar- agar ……………………………………… 15, 0 g
IV. PREPARACIÓN DE AGAR ANTIBIÓTICO N°11
Base para la determinación de Potencia antibiótica por la técnica de ensayo microbiológico.
pH: 7,95 + 0,05 a 25°C
A
Preparación: Suspender 30,5 g del polvo en 1 Litro de agua purificada. Mezcle bien. Caliente
IC
agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver completamente el polvo.
M
Autoclavar a 121°C durante 15 minutos. Para elevar el pH A 8,3 + 0,1, enfríe la base a una
UI
temperatura de entre 45 °C y 50°C y agregar NADH.
Q
O
Extracto de res ……………………………… 1,5 g
BI
Extracto de levadura ……………………………… 3,0 g
Digerido pancreático de caseína .…………………………….... 4,0 g
Y
Peptona ……………………………….. 6,0 g A
I
Dextrosa ……………………………….. 1,0 g
AC
Agar- agar ……………………………….. 15, 0 g

R M
V. PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN AMORTIGUADORA N° 3 (0,1 M; pH 8)

FA
Preparación.- Disolver 16,73 g de fosfato dibásico de potasio y 0,523 g de fosfato monobásico
de potasio en 1000 ml de agua purificada. Ajustar el pH con Ácido fosfórico 18 N o Hidróxido

DE
de potasio 10 N a 8,0 + 0,1.

CA
VI. PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN SOLUCIÓN SALINA (0, 9%; pH 4, 0 -6, 0)

TE
Preparación.- Disolver 9, 00 g de cloruro de sodio en 1000 mL de agua purificada. Ajustar el
pH con Ácido fosfórico 18 N o Hidróxido de potasio 10 N a 8,0 + 0,1.

IO
BL
BI
ANEXO N° 02. HOJA DE INSPECCION DEL MULTIDERM CREMA DEL LABORATORIO

FARMINDUSTRIA S.A
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
ANEXO N° 03. PROGRAMA ESTADÍSTICO / SOFTWARE (HOJA DE CÁLCULO)

“VALORACIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS, MÉTODO
DE CILINDRO EN PLACA.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
ANEXO N° 04. ESQUEMA SOBRE LA PREPARACIÓN DE LAS PLACAS DE VALORACIÓN
a. Esquema del diseño de análisis para la Preparación de La Curva Estándar con las
Soluciones de Antibiótico.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
b. E
I A
squema del diseño análisis para la preparación de las muestras.
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
Donde se colocó un volumen de 100 µL de la Solución estándar SR1, SR2, SR4, SR5, M1, M2 o
BI
M3.
Y en “SR3” se colocó un volumen de 100 µL de la Solución estándar S 3.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
ANEXO N° 05. HOJA REPORTE SOBRE LOS
RESULTADOS DE LA VALORACIÓN MICROBIOLÓGICA A
DEL MULTIDERM
I
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
ANEXO N° 06. DETERMINACIÓN DE LA CURVA ESTANDAR
RESPUESTA PREDICHA
PROMEDIO
CONCENTRACION LOG Cc (Y)
CORREGIDO
Y  y  b(x  x )
A
S1 0.06417 -1.1926 13.52 13.5342
IC
S2 0.08022 -1.0957 14.56 14.5484
M
S3 0.10027 -0.9988 15.60 15.5625
S4 0.12534 -0.9019 16.49 16.5767
UI
S5 0.15642 -0.8057 17.62 17.5835
Q
M1 0.10366 -0.9844 16.35 15.7136
O
M2 0.10519 -0.9780 16.48 15.7801
BI
M3 0.10128 -0.9945 16.20 15.6080
Y
HALLANDO EL VALOR DE LA PENDIENTE DE LA CURVA " b "
I A
YL = Respuesta Promedio de la Menor Dosis del Estándar
AC
YH = Respuesta Promedio de la Mayor Dosis del Estándar

Ŷt = Respuesta Promedio por cada Dosis del Estándar
M
YL = (3*S1+2*S2*S3-S5) / 5 YL = 13.5364
R
YH = (3*S5+2*S4+S3-S1) / 5 YH = 17.5857
FA
XL = Log de la Menor Dosis = -1.1926 b = (YH - YL) / (XH - XL)

XH = Log. de la Mayor Dosis = -0.8057 b = 10.4649
DE
CA
CURVA DE CALIBRACIÓN
TE
R
E
S
IO
P Y = 10,4649X + 26,015
U
r2 = 0, 9989
BL
E
S
T
BI
P
R
E
D
I
C
H
A
LOG DE LA CONCENTRACIÓN
ANEXO N° 07.- CALCULO DE LA POTENCIA INTERPOLADA A PARTIR DE LA

CURVA ESTANDAR
X (M1) X (M2) X (M3)

X  (y U  YS )/b
X1 = -0.01 0.08 0.06
X2 = 0.03 0.09 0.03
A
X3 = 0.02 0.02 0.04
IC
X4 = 0.09 0.01 0.02
M
X5 = 0.04 0.02 0.04
X6 = 0.04 0.01 0.02
UI
X7 = 0.05 0.07 0.04
Q
X8 = 0.03 0.04 0.04
O
X9 = 0.06 0.03 0.04
Sumatoria X =Tx = 0.34 0.37 0.34
BI
2
(Sumatoria) = Tx 0.11755 0.13737 0.11560
Varianza 0.0006627 0.001141 0.000141
Y
Varianza promedio 0.00065
I A
AC
YS = Respuesta predicha obtenida al reemplazar en la curva estándar el log-dosis (X) de la muestra

YU = Respuesta de la dosis de la muestra (valores de la muestra de halos obtenidos en la prueba del ensayo)
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
EVALUACIÓN ESTADÍSTICA
I. LINEALIDAD Y RANGO
A. CÁLCULO DE LA RECTA DE REGRESIÓN: Se determinó la curva de regresión, sobre los
A
puntos estándar individuales promediados. Para el caso de una recta la función toma la forma de:
IC
M
Y = bX + a
UI
Donde:
Q
X : Concentración del analito (Variable independiente )
O
Y : Respuesta (variable dependiente)
BI
b : Valor de la pendiente
Y
a : Término independiente (intercepto, estimador de la ordenad de origen)
I A
Fórmula para hallar “a” Fórmula para hallar “b”
AC
R M
n= número de muestras.
FA
DE
Valores obtenidos:
De la tabla descrita en el Anexo N° 06, se obtuvieron los siguientes valores: a = 26,015 y b =

10,4649
CA
Ecuación de la recta: Y = 10,4649X + 26,015

TE
B. INTERPRETACIÓN ESTADÍSTICA DE LA REGRESIÓN LINEAL:

IO
BL
B.1. Cálculo del coeficiente de correlación (r).

BI
Se determinó para evaluar el ajuste al modelo lineal propuesto y = bx + a. Y refleja el
grado de relación entre las concentraciones (X) y sus respuestas (Y).
Fórmula para hallar “r”:
El valor de:
r = 1 indica una recta perfectamente lineal.
r = -1 indica una recta perfectamente lineal negativa.
A
r = 0 indica que no hay correlación entre X e Y.
IC
Valor obtenido: r = 0,9989
M
UI
B.2. Cálculo del coeficiente de determinación “r2”
Q
Indica el grado de ajuste de la ecuación. La especificación: r2 ≥ 0,95
O
Valor obtenido: r2 = 99,89
BI
Interpretación: El 99,89% de las variaciones se debe a la influencia de la variable “X”
Y
(concentración del analito).
I A
PRECISIÓN
AC
I. DETERMINACIÓN DEL INTERVALO DE CONFIANZA: Para la estimación del intervalo,

M
el cual consta de dos valores numéricos (LCI, y LCS) que definen el intervalo, se consideró el
R
nivel confianza 0,95; referido por la USP.

FA
LCS: Límite superior del contenido del analito (Especificación)
LCI : Límite inferior del contenido del analito (Especificación)

DE
A. Cálculos Generales
CA
Fórmula para hallar “L”

TE
L = 2st/ √k
Donde:
IO
L : Amplitud del intervalo de confianza en logaritmos

BL
s : Desviación estándar = 0.0255

BI
t . t de Student para 24 grados de libertad en s = 2.306
k : Es el número de estimaciones que se han promediado = 24
Valor obtenido: L= 0.0391
B. Límite de confianza Superior
Fórmula para hallar “LCS”
LCS = M + L/2
A
Donde:
IC
M : Logaritmo de la Potencia = 0.0482
M
L/2: Mitad del intervalo de confianza hallado.
UI
Valor Obtenido: LCS = 1,1689
Q
O
C. Límite de confianza Inferior
BI
Fórmula para hallar “LCI”
Y
LCI = M - L/2
Donde: A
I
M : Logaritmo de la Potencia = 0.0482
AC
L/2: Mitad del intervalo de confianza hallado.

M
Valor Obtenido: LCI = 1,0682

R
FA
II. INTERPRETACIÓN:
DE
La precisión del ensayo es tal que el limite fiducial del error no es menor del 95% y no mayor
del 105% de la potencia estimada.

CA
Valores obtenidos: 106.82% - 116,89%

TE
Interpretación: Los valores obtenidos se encuentran dentro del rango de especificado.

IO
BL
BI
REPORTE DE VALORACIONES MICROBIOLÓGICAS DE ANTIBIÓTICOS
FECHA DE ANÁLISIS: 2012-05-23 al 2012-05-24
MATERIA PRIMA PRODUCTO X
DATOS DE LA MUESTRA:
Nombre: Multiderm Crema
Lote: 10422212 Nombre del Principio Activo: Gentamicina
Etapa: Producto terminado Concentración: 100 mg OP: 100113130
A
DATOS DEL ESTÁNDAR Cáculo de Peso de Estándar
Nombre: Gentamicina Sulfato 594.73 --- 1 mg
IC
Protocolo: 11100185 Peso: 84.3 mg
Potencia: 594.73 ug/mg 50000 --- x
Expira: Febrero 2013 x= 84.07
M
(Teórico)
PREPARACIÓN DEL INÓCULO:
Organismo de Prueba: Staphylococcus epidermidis Número ATCC: 12228
UI
Medio N° (tubo): 1 Lote de preparación: M1 25-12
Medio N° (FrasRoux): 1 Lote de preparación: M1 26-12
Condiciones de incubación: Temperatura: 33.5 Tiempo: 24 horas
Q
MEDIOS Y DILUYENTES:
Capa Base: Medio N° 11 Lote de preparación: M11 18-12
O
Capa Siembra: Medio N 11 Lote de preparación: M11 18-12
Volumen de inóculo: 0.03 mL/100mL
BI
Temperatura de Incubación: 36.7 Hora de inicio: 15:00 Hora de término: 08:00
Solución amortiguadora de Fosfato N° 3 Lote de preparación: B3 11-12
Cloruro de Sodio: Lote preparacón SS 29-12
Y
EQUIPOS/INSTRUMENTOS USADOS (COLOCAR CÓDIGO)
Balanza: CCF-013 Incubadora: CCM -032 Micropipeta; CCM-030 CCM-031
Vernier: Serie 0006343 Baño María: CCM-006 Otros: ¨-
DILUCIONES DEL ESTANDAR

Solución Estándar de referencia
IA
AC
50135.739 x 1 x 1 = 1.003 ug/mL
50 100 10
Concentraciones
RM
S1 0.64 x 1 0.064173746 ug/mL

=
10 1
S2 0.8 x 1 0.080217182 ug/mL
=
10 1
FA
S3 1 x 1 0.100271478 ug/mL
=
10 1
S4 1.25 x 1 0.125339348 ug/mL
=
10 1
S5 1.56 x 1 = 0.156423506 ug/mL
DE
10 1
MUESTRA PROBLEMA Diluciones
Peso M1: 1036.6 mg Equivalente a: 103.66 mg de P.A. 103.66 x 10 x 1 = 0.10366 ug/mL

100 100 1
CA

100 100 1
100 100 1
x =
TE
Peso M4: mg Equivalente a: mg de P.A. 10 x 1
RESULTADO PROMEDIO: 111.7 % 0.11 g%

IO
OBSERVACIONES:
BL
BI
REALIZADO POR VERIFICADO POR

Juan Carlos García Rosario Mimbela
FOR-CCM-065 V01
CALCULO DE POTENCIA ANTIBIOTICA
CALCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS DE : Gentamicina

Fecha de Análisis: 2012-05-23 Analista: Juan García
Nombre del Concentración declarada: Unidades: Lote: 10422212
Multiderm Crema
producto: 100 mg OP: 100113130
Nombre Estandar: Gentamicina Sulfato Protocolo: 11100185 Expira: Febrero 2013

Potencia Declarada : 594.73 ug/mg Peso del estándar: 84.3 mg
1. CURVA DEL ESTANDAR : Y=Y+b(X - X)

1.1 DATOS DEL LABORATORIO :
A
HALOS DE INHIBICION (EN mm)
DATOS
S1 S3 S2 S3 S4 S3 S5 S3 M1 S3(1) M2 S3(2) M3 S3(3) M4 S3(4)
1 13.59 15.25 14.85 15.93 16.25 15.85 17.58 15.51 15.66 15.22 16.63 15.11 16.27 15.52
IC
2 13.08 15.58 14.52 15.66 16.63 15.52 17.66 15.58 15.99 15.12 16.77 15.32 15.96 15.32
3 13.7 15.95 14.45 15.77 16.52 15.46 17.66 15.62 15.96 15.51 15.96 15.52 16.02 15.42
4 13.18 15.72 14.65 15.85 16.42 15.59 17.85 15.42 16.63 15.32 15.85 15.63 15.85 15.25
5 13.01 15.32 14.63 15.96 16.45 15.66 17.78 15.48 16.12 15.42 15.96 15.22 16.05 15.53
M
6 13.17 15.42 14.69 15.28 16.58 15.77 17.56 15.54 16.12 15.63 15.85 15.32 15.85 15.36
7 13.78 15.36 14.85 15.45 16.58 15.82 17.5 15.69 16.22 15.63 16.55 15.51 16.02 15.44
8 13.58 15.27 14.59 15.63 16.75 15.49 17.63 15.77 15.99 15.22 16.22 15.21 16.02 15.58
UI
9 13.6 15.54 14.66 15.72 16.58 15.63 17.25 15.69 16.32 15.22 16.11 15.22 15.99 15.22
PROM Yt 13.41 15.49 14.65 15.69 16.53 15.64 17.61 15.59 16.11 15.37 16.21 15.34 16.00 15.40
Promedio S3 de la curva estándar 15.60417
Corrección 0.11 -0.09 -0.04 0.02 0.24 0.26 0.20
Q
Promedio
13.52 14.56 16.49 17.62 16.35 16.48 16.20
corregido
CV% 2.20 1.50 0.91 1.41 0.86 0.92 0.98 0.73 1.67 1.24 2.18 1.14 0.78 0.82
S1 S2 S4 S5 M1 M2 M3 M4
O
1.2 HALLANDO EL VALOR DE LA PENDIENTE DE LA CURVA " b " YL = Respuesta Promedio de la Menor Dosis del Estándar
YL = (3*S1+2*S2*S3-S5) / 5 YL = 13.5364 YH = Respuesta Promedio de la Mayor Dosis del Estándar
YH = (3*S5+2*S4+S3-S1) / 5 YH = 17.5857 Ŷt = Respuesta Promedio por cada Dosis del Estándar
19
BI
18
XL = Log de la Menor Dosis = -1.1926 b = (YH - YL) / (XH - XL) PROM Yt
Y  y  b(x  x )
CONCENTRACION LOG Cc
Corregido Respuesta 17
XH = Log. de la Mayor Dosis = -0.8057 b= 10.4649 predicha (Y)
S1 0.06417 -1.1926 13.52 13.5342 16

HALLANDO EL INTERCEPTO DE LA CURVA "a" S2 0.08022 -1.0957 14.56 14.5484
15
Y
a= 26.015 S3 0.10027 -0.9988 15.60 15.5625
S4 0.12534 -0.9019 16.49 16.5767 14
DETERMINACIÓN DE LA POTENCIA DE LA MUESTRA S5 0.15642 -0.8057 17.62 17.5835
13
M1 0.10366 -0.9844 16.35 15.7136
IA
12
1.3 HALLANDO EL VALOR DE " X " M2 0.10519 -0.9780 16.48 15.7801
X =Sumatoria X / k = -0.9990 X = Log de las Concentraciones M3 0.10128 -0.9945 16.20 15.6080 11

1.4 HALLANDO EL VALOR DE " Y " k = Número de Dosis = 5 M4 10
AC
Y = (YL - YH) / 2 = 15.5611 -1.5 -1 -0.5 0
PROM Yt Corregido M1 M2 M3 M4
2. PRUEBA DE LINEALIDAD DE LA CURVA ESTANDAR (COEFICIENTE DE DETERMINACION) : r2 = 99.89
3. POTENCIA INTERPOLADA A PARTIR DE LA CURVA ESTANDAR (M') :

X = (YU - YS) YS = Respuesta predicha obtenida al reemplazar en la curva X  (y U  YS )/b X (M1) X (M2) X (M3) X (M4)
RM
b curva estándar el log-dosis (X) de la muestra X1 = -0.01 0.08 0.06

YU = Respuesta de la dosis de la muestra (valores de la X2 = 0.03 0.09 0.03
muestra de halos obtenidos en la prueba del ensayo) X3 = 0.02 0.02 0.04
X4 = 0.09 0.01 0.02
M' (M1)= Sumatoria (X) / f = 0.0609 M' (M3)= Sumatoria (X) / f = 0.0569 X5 = 0.04 0.02 0.04
M' (M2)= Sumatoria (X) / f = 0.0664 M' (M4)= Sumatoria (X) / f = X6 = 0.04 0.01 0.02
FA
X7 = 0.05 0.07 0.04
f = Número de Datos = 9 X8 = 0.03 0.04 0.04
4. POTENCIA DE LA MUESTRA (P') : X9 = 0.06 0.03 0.04

M (M1)= M' + Log R = 0.046463 Log R (M1)= -0.0144 R (M1)= 0.967  X =Tx = 0.34 0.37 0.34
M (M2)= M' + Log R = 0.045628 Log R (M2)= -0.0208 R (M2)= 0.953 (Sumatoria)2 = Tx 0.11755 0.13737 0.11560
DE
M (M3)= M' + Log R = 0.052516 Log R (M3)= -0.0043 R (M3)= 0.990 Varianza 0.0006627 0.001141 0.000141
M (M4)= M' + Log R = Log R (M4)= R (M4)= Varianza promedio 0.00065
P' (M1) = Antilog M = 1.112920 Porcentaje encontrado (M1) : 111.29 % P' (M3) = Antilog M = 1.128540 Porcentaje encontrado (M3) : 112.854 %
P' (M1) = Antilog M = 1.110780 Porcentaje encontrado (M2) : 111.08 % P' (M4) = Antilog M = Porcentaje encontrado (M4) : %
5. VARIANZA (S2) :
CA
2 2
n=f-h f= 9 S = (Sumatoria X - Sumatoria (Tx) ) / f) / n =
2 0.000648
h= 3 h = Número de Muestras Ensayadas : S (M)= 0.0255
n= 24 K= 4
6. INTERVALOS DE CONFIANZA : p = 0.05 XM = M ± 1/2 L

TE
T = de Tablas = 2.306004 '(T depende de los Grados de Libertad ( n ) = 24 ) XM = 0.0482 +/- 0.0196
L (M) = 2 * S * T / raíz (k) = 0.0391 0.0286 a 0.068
Antilogaritmo P' (M)= 1.0682 a 1.1689
7. CRITERIOS DE CONFORMIDAD : ESPECIFICACION % USP =

90-135
IO
Los límites calculados deben de estar incluídos en el rango para el antibiótico señalado en la USP
Intervalo de Confianza =
RESULTADO ESTIMADO 111.74 % ( 111.74 mg ) 106.82 % ---- 116.89 %
BL
( 106.82 ---- 116.89 mg )
CONFORME x NO CONFORME
BI
ANALISTA VERIFICADO POR:

Juan Garcia Rosario Mimbela
FOR- CCM -065 V-01
REPORTE DE VALORACIONES MICROBIOLÓGICAS DE ANTIBIÓTICOS
FECHA DE ANÁLISIS: 2012-05-23 al 2012-05-24
MATERIA PRIMA PRODUCTO X
DATOS DE LA MUESTRA:
Nombre: Multiderm Crema
Lote: 10422212 Nombre del Principio Activo: Gentamicina
Etapa: Producto terminado Concentración: 100 mg OP: 100113130
A
DATOS DEL ESTÁNDAR Cáculo de Peso de Estándar
Nombre: Gentamicina Sulfato 594.73 --- 1 mg
IC
Protocolo: 11100185 Peso: 84.3 mg
Potencia: 594.73 ug/mg 50000 --- x
Expira: Febrero 2013 x= 84.07
M
(Teórico)
PREPARACIÓN DEL INÓCULO:
Organismo de Prueba: Staphylococcus epidermidis Número ATCC: 12228
UI
Medio N° (tubo): 1 Lote de preparación: M1 25-12
Medio N° (FrasRoux): 1 Lote de preparación: M1 26-12
Condiciones de incubación: Temperatura: 33.5 Tiempo: 24 horas
Q
MEDIOS Y DILUYENTES:
Capa Base: Medio N° 11 Lote de preparación: M11 18-12
O
Capa Siembra: Medio N 11 Lote de preparación: M11 18-12
Volumen de inóculo: 0.03 mL/100mL
BI
Temperatura de Incubación: 36.7 Hora de inicio: 15:00 Hora de término: 08:00
Solución amortiguadora de Fosfato N° 3 Lote de preparación: B3 11-12
Cloruro de Sodio: Lote preparacón SS 29-12
Y
EQUIPOS/INSTRUMENTOS USADOS (COLOCAR CÓDIGO)
Balanza: CCF-013 Incubadora: CCM -032 Micropipeta; CCM-030 CCM-031
Vernier: Serie 0006343 Baño María: CCM-006 Otros: ¨-
DILUCIONES DEL ESTANDAR

Solución Estándar de referencia
IA
AC
50135.739 x 1 x 1 = 1.003 ug/mL
50 100 10
Concentraciones
RM
S1 0.64 x 1 0.064173746 ug/mL

=
10 1
S2 0.8 x 1 0.080217182 ug/mL
=
10 1
FA
S3 1 x 1 0.100271478 ug/mL
=
10 1
S4 1.25 x 1 0.125339348 ug/mL
=
10 1
S5 1.56 x 1 = 0.156423506 ug/mL
DE
10 1
MUESTRA PROBLEMA Diluciones

100 100 1
CA

100 100 1
100 100 1
x =
TE
Peso M4: mg Equivalente a: mg de P.A. 10 x 1
RESULTADO PROMEDIO: 111.7 % 0.11 g%

IO
OBSERVACIONES:
BL
BI
REALIZADO POR VERIFICADO POR

Juan Carlos García Rosario Mimbela
FOR-CCM-065 V01

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL

AUTOR: Br. GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS

ASESOR: Mg. CRUZADO RAZCO, LIZARDO.

Señores Miembros del Jurado:

Trujillo, Mayo del 2013

GARCIA CHUQUI, JUAN CARLOS

III. RESULTADOS .......................................................................................................18

VI. CONCLUSIONES ...................................................................................................24

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.....................................................................25

En el presente trabajo se determinó experimentalmente la Potencia Antibiótica de la Gentamicina Sulfato

horas y temperatura de incubación entre 36,7ºC.

Se demostró mediante el diseño experimental, con la evaluación estadística de los resultados

para la determinación de la potencia antibiótica de Gentamicina Sulfato en Multiderm crema del

requerimientos de la calidad establecidos por la USP 35.

Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.

temperature of incubation between 36,7ºC.

the USP 35.

Multiderm crema, Valoración Microbiológica, estándar secundario.

investigación, fabricación y comercialización de productos farmacéuticos y biológicos, así como

dispositivos médicos usados para el tratamiento agudo o crónico y el diagnóstico de la

Se utilizan principalmente para diagnosticar, prevenir, curar o aliviar enfermedades; y en general

incumplimiento de condiciones durante el diseño, procesamiento, almacenamiento, distribución,

La fabricación de productos farmacéuticos, así como la de otros productos relacionados con el

campo de la salud, es indispensable realizar una inspección completa al proceso de la producción

son de buena calidad 4.

que la industria farmacéutica es la que ha desarrollado una de las mayores experiencias en lo

relacionado al aseguramiento y control de calidad, en la actualidad, dichas organizaciones

proceso de comercialización de los productos 5, 6.

componentes de un determinado medicamento, como por ejemplo, los ensayos de estabilidad,

que se definen como estudios cuyos resultados sustentan la proposición de aprobación, la

comprobación y/o la modificación del periodo de validez o de las condiciones de

almacenamiento rotuladas de un producto farmacéutico. Otra prueba importante es la

determinación de la potencia o actividad, conceptualizada como el contenido de principio activo

que deben ajustarse a las normas establecidas 1.

La garantía de calidad y el control de calidad desarrollan y siguen procedimientos operativos

internos convencionales encaminados a asegurar la calidad, la inocuidad, la pureza y la eficacia

El control de la calidad es parte de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y comprende el

muestreo, especificaciones y ensayos como también a los procedimientos de organización,

se efectúen, y que no se permita liberación de los materiales, ni se autorice la venta o suministro

analíticas de laboratorio de los productos, muestreo, inspección, y pruebas de la materia prima

operaciones intermedias criticas) y control del producto a lo largo de su distribución. Deben de

La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece, mediante estudios en

las aplicaciones analíticas previstas. El objetivo de la validación no es comparar un método con

registrados. Deben establecerse procesos y procedimientos sobre la base de un estudio de

validación de los procedimientos de proceso, limpieza y de los métodos analíticos 4,8.

procedimientos de cálculos mediante computadoras. 9

procesos de validación constituyen las "piedras angulares" del sistema de aseguramiento de la

de una característica de calidad en los medicamentos 11.

para la fabricación y comercialización de muchos productos biológicos y de algunos

En condiciones adecuadas, la actividad (potencia) de los antibióticos puede demostrarse por su

efecto inhibidor obre los microorganismos. En la evaluación de la potencia de las sustancias

antibióticas el efecto medido es la inhibición del crecimiento de una cepa apropiada de

microorganismos, o sea, la prevención de la multiplicación de los microorganismos de prueba. Se

utilizan dos técnicas generales: la valoración en cilindro- placa (o en placa) y la valoración

turbidimétrico (o en tubo) 12.

nutritivo sólido inoculado previamente con un cultivo de un microorganismo adecuado. La

conocidas de un estándar de referencia 13.

El ensayo turbidimétrico de potencia antibiótica se basa en la inhibición del crecimiento microbiano

Para dar pie al diseño y evaluación de la valoración de potencia antibiótica de la gentamicina, se

FARMINDUSTRIA S.A, fabrica y comercializa productos farmacéuticos sólidos no