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Clase 16 Las Plantas Como Biorreactores
Clase 16 Las Plantas Como Biorreactores
Transparencias 3-7
Transparencias 8-24
Una estrategia comúnmente utilizada para reducir los costos de purificación consiste
en acumular la proteína sintetizada en el espacio extracelular o apoplasto. El
transporte al apoplasto se logra fusionando el extremo amino terminal de la proteína
de interés a un péptido señal que determina el transporte de la proteína al retículo
endoplásmico y de allí a la vía de secreción. Estos tipos de péptidos señal se hallan
ampliamente conservados en su función y son procesados en forma co-traduccional
por una peptidasa específica presente en el lumen del retículo endoplásmico. Como el
apoplasto está en contacto directo con el medio que rodea las raíces, si la planta es
crecida en un sistema hidropónico, la proteína recombinante se acumulará en este
medio por rizosecreción, facilitando así el proceso de purificación puesto que el
número de proteínas totales secretadas es generalmente bajo. Si además la solución
que circula en torno a la rizósfera se renueva constantemente, puede desarrollarse un
sistema continuo de extracción de la proteína recombinante.
Otra estrategia que permite reducir los costos de purificación se basa en la fusión de la
proteína de interés a una oleosina (transparencia 17). Las oleosinas son proteínas
pequeñas que se encuentran insertadas en la monocapa de fosfolípidos que
constituyen los cuerpos grasos. Estas proteínas se acumulan en las semillas de las
plantas oleaginosas a niveles elevados. En colza, representan entre el 8 y el 20% del
total de las proteínas de la semilla y son inducibles por estrés osmótico, ácido
jasmónico y ácido absícico. La construcción genética mostrada en la transparencia 17
incluye una secuencia de reconocimiento específica para una proteasa. Una vez
realizada la purificación, la proteína de interés se rescata de la fusión por tratamiento
con la proteasa que reconoce esta secuencia peptídica.
Uno de los factores críticos a tener en cuenta cuando se diseña una estrategia de
expresión en plantas es la elección de la especie vegetal a transformar. Muchas veces
la elección se hace sobre la base de la experiencia previa en un cultivo en particular
sin tener en cuenta cuál será el destino final de la proteína sintetizada, sus
características intrínsecas y las necesidades de producción, lo que puede conducir al
fracaso de la estrategia de expresión. La transparencia 23 enumera las principales
ventajas asociadas a distintas plantas que se han utilizado para la producción de
proteínas heterólogas. Algunas de estas especies, como es el caso de Lemma, han
sido propuestas como particularmente apropiadas para su utilización como
biorreactores.
Transparencias 26-39
Transparencias 40-46
Los anticuerpos séricos de mamíferos están constituidos por dos cadenas pesadas y
dos cadenas livianas, unidas entre sí por puentes disulfuro. El extremo amino terminal
de las cuatro cadenas es variable y determina la especificidad, reconocimiento y unión
al antígeno. En mamíferos se producen cinco clases de inmunoglobulinas (G, M, A, D
y E) con distintas propiedades efectoras. Los anticuerpos secretorios son más
complejos que sus contrapartes en suero. Son dímeros de los anticuerpos séricos
unidos por un componente adicional llamado cadena de unión o J. Además, hay un
polipéptido extra, el componente secretorio, que protege al anticuerpo de la acción de
proteasas. Las fuentes tradicionales de anticuerpos son los hibridomas, líneas de
células B murinas que son inmortalizadas por fusión a un mieloma. Al igual que en
otros sistemas basados en células en cultivo, los costos de establecimiento,
mantenimiento y aumento en la escala de producción son altos. El 14% de los
tratamientos clínicos actuales requieren anticuerpos y sólo 4 moléculas ocupan casi el
75% de la capacidad de producción actual. Se calcula que hay más 100 anticuerpos
monoclonales en investigación con probabilidades de ser incorporados al mercado en
los próximos años, lo que superaría ampliamente la capacidad de producción actual.
Estas perspectivas han promovido la búsqueda de otros sistemas de producción de
anticuerpos. Al ser moléculas que requieren el ensamblaje de varias subunidades, su
expresión en bacterias es extremadamente difícil. Por otra parte, y aunque se investiga
su producción en animales transgénicos, tanto la fase de desarrollo como el aumento
en la escala de producción son lentos en este sistema, dependiendo del ciclo normal
de crecimiento y cría de los animales. La producción de estas moléculas complejas en
plantas transgénicas resulta una alternativa sumamente promisoria. El ensamblaje
final in planta se logra por cruzamiento genético de las plantas transgénicas
precursoras que producen cada una de las subunidades. La transparencia 41 presenta
un esquema de este proceso.
Transparencias 47-55
Transparencias 56-73