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Evolución de la Metamorfosis en Insectos

James W. Truman
Department of Biology and Friday Harbor Laboratories, University of Washington, 620 University Road, Friday Harbor, WA 98250, USA
Correspondence: trumanj@janelia.hhmi.org
https://doi.org/10.1016/j.cub.2019.10.009

La evolución de la metamorfosis de los insectos es una de las sagas más importantes de la historia animal, transformando
pequeños y oscuros artrópodos del suelo en un grupo terrestre dominante que ha conformado profundamente la evolución de la
vida terrestre. La evolución del vuelo inició la trayectoria hacia la metamorfosis, favoreciendo el aumento de las diferencias entre
los estadios juveniles y los adultos. El paso inicial modificó el desarrollo postembronico, dando lugar a las diferencias entre ninfas
adultas características de las especies hemimetabólicas. El segundo paso fue completar la metamorfosis, la holometabolia, y
ocurrió alterando profundamente la embriogénesis para producir un estadio larvario, la ninfa se convirtió en la pupa para acomodar
el desarrollo diferido necesario para hacer el adulto. Estas pautas cambiantes de la historia de la vida estaban íntimamente
vinculadas a dos sistemas hormonales, los ecdisteroides y las hormonas juveniles (JH), que funcionan tanto en el dominio
embrionario como en el posembrionario y controlan los genes que especifican el estadio Kru¨ppel homolog 1 (Kr-h1), broad y E93.
Los ecdisteroides inducen y dirigen la muda a través del receptor de ecdisona (EcR), un receptor hormonal nuclear con numerosos
objetivos, entre ellos una red de factores de transcripción conservada, la "cascada de Ashburner", que traduce las caracterís ticas
del pico de ecdisteroides a las diferentes fases de la muda. Con la evolución de la metamorfosis, los ecdisteroides adquirieron una
función metamórfica que aprovechó la capacidad represora del EcR no ligado, convirtiéndolo en una puerta de entrada controlad a
por las hormonas para el desarrollo de los tejidos que preceden a la metamorfosis. JH dirige la acción de los ecdisteroides,
controlando la expresión de Kr-h1 que a su vez regula los otros genes que especifican la etapa. JH aparece en grupos de insectos
basales cuando sus embriones pasan del crecimiento y el patrón a la diferenciación. Como una gran parte de la embriogénesis se
aplazó a la vida posembrionaria con la evolución de la holometabolia, la JH también adquirió un potente papel en la regulació n del
crecimiento y el desarrollo posembrionarios. Los detalles de su participación en la expresión amplia y la supresión del E93 se han
modificado a medida que los ciclos de vida se hicieron más complejos y probablemente subyacen a algunos de los cambios
observados en el paso de una metamorfosis incompleta a una complete.

Introducción de hormonas y la caracterización química. Sin embargo, los estudios

Los anfibios y los insectos proporcionan a la mayoría de la gente su
primer contacto con la metamorfosis. La sorprendente transformación
de un renacuajo en rana es relativamente rápida, pero se puede seguir
su progresión día a día a medida que sus extremidades se extienden y
su cola se reordena. La metamorfosis en los insectos, sin embargo,
parece más mística ya que su exoesqueleto externo esconde los
cambios graduales que ocurren en el interior, y sólo se ven los
resultados cuando la vieja cutícula externa se desprende
abruptamente, como cuando la mariposa emerge de su crisálida. La
metamorfosis es un rasgo de la vida antigua que se extiende
profundamente hasta las raíces de los anfibios y muchos grupos de
invertebrados. Los insectos son inusuales, sin embargo, en que su
metamorfosis es un rasgo derivado que evolucionó mucho después de
que colonizaron la tierra. Hoy en día existen órdenes de insectos que
se aproximan a los diferentes pasos de la evolución de la
metamorfosis, de modo que los estudios comparativos permiten
reconstruir los cambios moleculares, de desarrollo y endocrinos que
acompañaron a esta transición.
La metamorfosis de los insectos está bajo control hormonal, que ha
sido objeto de estudio experimental durante casi un siglo. La
importancia de los insectos como competidores por la comida y la fibra,
así como su impacto en la salud humana y animal, impulsó una
extensa investigación sobre su fisiología y desarrollo, y especialmente
sobre cómo controlan su metamorfosis. En las primeras etapas de esta
investigación se utilizaron típicamente insectos grandes que facilitaron
las manipulaciones quirúrgicas y el aislamiento de cantidades
suficientes de tejido para la extracción
genéticos y moleculares subsiguientes pasaron gradualmente a la
Drosophila melanogaster, que sigue sirviendo como una forma de
platino inigualable para el descubrimiento de genes. Sin embargo,
muchas características derivadas de la Drosophila, como un número
invariable de estadios larvarios y una sustitución casi completa de las
células larvarias por las del adulto en la metamorfosis, han dado lugar a
una desvalorización o a la pérdida de algunos aspectos del control
hormonal que se observa en los insectos menos derivados. En
consecuencia, a pesar de que los trabajos sobre la Drosophila son
responsables del descubrimiento de prácticamente todos los genes que
intervienen en la recepción de hormonas, sus efectos posteriores y la
especificidad de la etapa de acción, las funciones más amplias de esos
genes a menudo se han mantenido oscuras durante decenios y
finalmente se han mostrado en insectos con pautas de historia de vida
menos derivadas. Por ejemplo, el trabajo en el escarabajo de la harina,
Tribolium castaneum, proporcionó la prueba de que el gen tolerante al
metopreno (Met) sí codifica el receptor de la hormona juvenil (JH), una
hormona clave que suprime la metamorfosis [1,2]. Además, los
estudios sobre este escarabajo y la cucaracha Blattella germanica
mostraron que el factor de transcripción de la hélice Eip93F (E93) es un
gen que especifica la etapa maestra y que se encuentra en la parte
superior de una cascada de genes que produce el fenotipo adulto [3].
Además de Drosophila, esta discusión se basa en otros sistemas de
modelos de insectos como Bombyx mori, Manduca sexta, Tribolium
castaneum, Oncopeltus fasciatus, Pyrrhocoris apterus y Blattella
germanica, para los cuales la información genómica y

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Ametabolous Hemimetabolous Holometabolous

Palaeoptera
Pala Polyneoptera
eoptera Polyn eoptera Paraneoptera
Paraneoptera
aa

Mantophasmatodea
Ephemeroptera
Archaeognatha

Phasmatodea
Grylloblattid e

Thysanoptera

Hymenoptera

Siphonaptera
Raphidiopter
Megaloptera
Phthiraptera

Lepidoptera
Dermaptera

Embioptera

Trichoptera
Coleoptera
Zygentoma

Neuroptera
Plecoptera
Orthoptera

Mecoptera
Hemiptera
Mantodea

Psocodea
Zoraptera

Blattodea
Odonata

Diptera
0
N

66
Age [millions of years ago]

145

200

250
300

360
Holometabola
420
Pterygota
485
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Figura 1. Filogenia de los insectos mostrando los principales tipos de desarrollo.

La figura muestra cómo los tres tipos principales de desarrollo de los insectos, ametabólico, hemimetábulo y holometábulo, se mapean en la filogenia de los
insectos, con ejemplos de las etapas inmadura y adulta para cada una. El asterisco indica las formas neometabólicas que han evolucionado
independientemente una historia de vida con una larva, una pupa y un adulto. Para los órdenes mayores el ancho de las cajas muestra el número de familias
a través del tiempo. La filogenia de [134.135] con distribuciones familiares adaptadas de [14] basado en el [136].

número característico de instantes entre la eclosión y la metamorfosis,

las técnicas de supresión de genes se pueden entretejer en una rica
historia de experimentación endocrina. Aunque estos pocos sistemas
no empiezan a cubrir el asombroso rango de variación que se ve en los
insectos, es alentador que las estrategias de historia de vida altamente
derivadas, como la neotenia femenina en Strepsiptera [4,5] y los
insectos de escala [6] o la completa metamorfosis que evolucionó en
paralelo en los trips 7], utilizan los mismos interruptores moleculares
que regulan los patrones más tradicionales de la historia de la vida.
Esta revisión explora los cambios en el desarrollo que acompañaron a
la evolución de los estadios larvarios y pupales de los insectos. A
continuación se centra en los dos principales sistemas hormonales que
regulan la muda y la metamorfosis de los insectos y considera cómo
evolucionaron esos sistemas para apoyar la creciente complejidad de
las historias de vida de los insectos. Por último, examina nuestro
creciente conocimiento de la función de los genes de especificación de
etapas que regulan el fenotipo de cada una de las principales etapas
de la vida y cómo estos genes y su control han cambiado con la
creciente complejidad de las historias de vida de los insectos.
Estrategias de Historia de Vida de los Insectos
Debido a que su rígido exoesqueleto limita el crecimiento y los cambios
en la morfología, la historia de la vida de un insecto está marcada por
las mudas, durante las cuales se forma una nueva cutícula y la antigua
se desprende, un proceso llamado ecdisis. Por consiguiente, el
crecimiento del joven alterna entre un período de alimentación y
crecimiento (la muda) y una muda. El lapso entre una ecdisis y la
siguiente se denomina instar. En la mayoría de los insectos, hay un
pero la decisión de iniciar la metamorfosis depende típicamente de que se
alcance un tamaño característico específico de la especie [8]. Por lo tanto,
una nutrición subóptima o lesiones o enfermedades pueden dar lugar a la
intercalación de mudas adicionales hasta alcanzar este tamaño. Sin
embargo, los insectos son extremadamente diversos en sus estrategias de
alimentación, y en algunas especies la larva puede optar por un estadio
más temprano para iniciar la metamorfosis si las condiciones de
alimentación son malas (por ejemplo [9]).
Según cualquier criterio, los insectos son un grupo de ensayo
terrestre espectacularmente exitoso con diversas estrategias de historia
de vida y 28 órdenes existentes (Figura 1). Los verdaderos insectos y
otros hexápodos como los colas de primavera (Collembola) y los
dipluranos (Diplura) se apartaron de sus ancestros crustáceos
acuáticos y formaron parte de la invasión de artrópodos en tierra que
comenzó hace más de 450 millones de años. La historia de la vida de
estos primeros insectos era similar a la de las colas de cerdas
saltarinas (Archaeognatha) y los peces plateados (Zygentoma) de hoy
en día. Estos insectos primitivos sin alas tienen un estilo de vida
ametabolous que muestra un desarrollo directo: la cría es una miniatura
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versión del adulto y su morfología es esencialmente inalterable durante
su crecimiento a un adulto. Como la mayoría de los otros artrópodos,
los adultos de estos órdenes ametábolos continúan mudando,
alternando típicamente una muda con un periodo de reproducción [10].
Los insectos son los únicos invertebrados que han evolucionado en
el vuelo motorizado y fueron dueños de los cielos por más de 100
millones de años hasta que los pterosaurios aparecieron a finales del
Triásico. El vuelo proporcionó un medio para evitar la depredación,
para moverse rápidamente entre los parches de alimentos dispersos, y
para llevar a cabo dispersiones de largo alcance.Los primeros órdenes
de insectos alados, como los extintos Paleodictíopteros y
Megasecópteros, también se consideraban ametáboles porque sus
juveniles tenían pequeñas alas articuladas que con el tiempo se hacían
lo suficientemente grandes como para soportar el vuelo en estadios
posteriores [11,12]. Sin embargo, la evolución de las alas y el vuelo
planteó problemas de desarrollo, cuya solución dio la oportunidad de
dar el primer paso hacia la metamorfosis [13]. En lugar de crecer como
pequeñas alas articuladas, el crecimiento de las alas en los jóvenes se
produjo en almohadillas alares inmóviles, que luego se transformaron
en alas articuladas en la muda del adulto. Un segundo cambio
relacionado con las alas evidente en los insectos alados de hoy en día
(el Pteryogota) fue que la muda del adulto se convirtió en una muda
terminal. El cese de la muda del adulto estaba probablemente
relacionado con hacer el ala lo más ligera posible. La reducción de
peso ocurre por la muerte de las células epidérmicas que secretan la
cutícula de la membrana del ala después de la aparición del adulto. Sin
embargo, sin estas células, la cutícula de la membrana del ala no se
puede volver a hacer. Los únicos insectos existentes que mudan sus
alas son las efímeras (Ephemeroptera), un orden muy basal que tiene
una etapa subimago alada que rápidamente muda al adulto alado. Los
subimagos tienen alas gruesas y son voladores muy torpes.
Curiosamente, la pérdida de la muda de los adultos parece ser
irreversible: dos órdenes de insectos parásitos, los piojos (Pthiraptera)
y las pulgas (Siphonaptera), no tienen alas cuando son adultos, pero
ninguno ha recuperado la muda de los adultos.
La evolución del vuelo, entonces, introdujo la estrategia de la
metamorfosis incompleta, también conocida como desarrollo
hemimetábolo. La etapa inmadura se llama ninfa, y las ninfas
típicamente se parecen a las adultas pero carecen de alas. Las
almohadillas de las alas externas aparecen durante el crecimiento de la
ninfa, pero no se transforman en alas funcionales hasta que el adulto
muda. Las ninfas y los adultos suelen ocupar hábitats similares,
explotan fuentes de alimento similares, pero a menudo tienen
diferentes tipos de cutícula. Si bien las ninfas y los adultos suelen tener
morfologías similares, en órdenes como las Odonata (libélulas) y las
Efemerópteras (efímeras) que tienen ninfas acuáticas que se
transforman en adultos aéreos, las dos etapas pueden mostrar
marcadas diferencias en la forma del cuerpo. La alta movilidad del
adulto hemimetábolo probablemente prepara el terreno para el paso a
la metamorfosis completa.
La evolución del estilo de vida hemimetabólico implicó
principalmente alteraciones en el desarrollo postembronico.Al igual que
en sus antepasados ametábulos, el plan básico del cuerpo adulto se
estableció durante la embriogénesis, aunque en algunos grupos se
produce cierto grado de retraso en el desarrollo, como la adición de
nuevas hileras de unidades visuales (ommatidia) al ojo en crecimiento.
Sin embargo, el paso al desarrollo holometálico implicó una alteración
fundamental del desarrollo embrionario para producir un estadio
larvario que tenía poco o ningún parecido con el adulto. Las
adaptaciones de los estadios larvario y adulto se desacoplaron del
desarrollo, lo que permitió la evolución de un estadio larvario con una
movilidad reducida pero con una mayor capacidad de explotar los
recursos alimentarios sin
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affe que afectan a las especializaciones de los adultos para la
dispersión y la reproducción [14]. Esta innovación en la historia de la
vida dio como resultado la rápida diversificación y radiación dentro del
Holometabola [15], que incluye los órdenes que tienen más especies
(Coleópteros), más biomasa (Himenópteros), y los mayores impactos
en la agricultura (Lepidópteros) y en la salud humana y animal
(Dípteros).
En los insectos holometabólicos, la transición de la larva al adulto
tiene lugar a través de la etapa de transición sin alimentación, conocida
como la pupa. Los fósiles más antiguos e inequívocos de larvas
holometabólicas son de hace unos 320 millones de años [16].
Curiosamente, en esta era de insectos gigantes, los primeros
holometabolos eran bastante pequeños. Su pequeño tamaño puede
haberles permitido explotar nichos que no estaban disponibles o no
eran productivos para sus parientes más grandes. Una caída en los
antiguos niveles de oxígeno puede haber condenado posteriormente a
los gigantes, pero habría tenido poco efecto en las pequeñas formas
holometabólicas y podría haber abierto la puerta a su radiación [16].
Algunos grupos hemimetábulos, como los trips y algunos
hemiptéranos, han desarrollado independientemente un estilo de vida
holometábulo, una condición a veces llamada ‘neometabolismo’ [17].
La larva de los insectos con metamorfosis complete
Ideas Las ideas sobre la metamorfosis de los insectos se remontan a
Aristóteles [18,19] y más tarde fueron construidas por el anatomista Sir
William Harvey, quien consideró la larva como el producto de un "huevo
imperfecto", del cual el animal eclosionó antes de adquirir su forma
típica de la especie. La pupa sirvió entonces como un segundo huevo
en el que la forma adecuada del animal se construyó a partir de los
restos de la larva. El posterior refinamiento de estas ideas sostuvo que
la pupa correspondía a la ninfa de las formas hemimetábolas [20,21],
pero estas ideas sobre la correspondencia de los estadios de vida en
los insectos holometabólicos y hemimetábulos han sido cuestionadas
por otros investigadores que consideraban que las larvas y las ninfas
eran estadios equivalentes [22,23]. Sostenían que la pupa es un último
estadio ninfal modificado [22] o que la última muda ninfal se divide en
un proceso de dos pasos con la pupa formando el primer paso [23]. Se
pueden encontrar discusiones sobre estas últimas ideas en otros
documentos [24,25], pero encontramos que la idea de la larva que
surge de un estadio embrionario modificado encaja mejor con los datos
de desarrollo, endocrinos y moleculares disponibles [26-28]. Utilizaré
los términos "larvas" y "ninfas" para los estadios de alimentación
inmadura de los insectos holometabólicos y hemimetabólicos,
respectivamente.
Durante la embriogénesis, las regiones del embrión se organizan en
primordías destinadas a formar patas, antenas, ojos, etc. En los
insectos hemimetábulos, tales primordías crecen y se modelan a sí
mismas formando versiones en miniatura de la estructura adulta. Los
embriones de las especies holometabólicas tienen el mismo conjunto
de primordías, pero los experimentos clónicos con Drosophila
demostraron que sólo una parte de cada primordio se utiliza para hacer
una estructura larvaria reducida, mientras que el resto se reserva para
contribuir más tarde a la contraparte adulta [29]. Este patrón está bien
ilustrado para el ojo compuesto (Figura 2A) [30,31]. En los embriones
hemimetábulos, el primordio del ojo comienza a organizarse con una
fila de ommatidia en su borde posterior, seguida de la adición de filas
sucesivas a medida que una onda morfogenética progresa
anteriormente a través del primordio. La ninfa eclosiona con un ojo
compuesto bien desarrollado, aunque algunas especies retienen un
primordium a lo largo del margen anterior para añadir filas adicionales
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A Embryo
Nymph Adult
Grasshopper

Hatch
Birth photoreceptors

0 E1 50 100%
E2 Growth
E3
Embryo Larva Pupa Adult
Moth

50 Growth Morphogenesis Differentiation

0 E1 100%
E2
E3
Day 0 Day 4 Isomorphic Morphogenetic
B C Growth: phase phase

Eye p * * Molt

Primordium size
* *
Wing
Eye
Wing
L3 L4 L5 Pupa

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Figura 2. Modificación del desarrollo embrionario y posembrionario asociado a la evolución de la larva

Comparación del desarrollo de los ojos en un insecto hemimetábulo generalizado (saltamontes) con el de un insecto holometábulo (polilla). La línea temporal embrionaria (% de
desarrollo) muestra el tiempo de deposición de las tres cutículas embrionarias (línea negra: epicutícula; línea roja: procutícula). Los fotorreceptores comienzan a nacer en momentos
similares, pero los embriones de polilla producen sólo los primeros fotorreceptores, mientras que los saltamontes muestran una producción prolongada de fotorreceptores. La porción
no utilizada del primordio del ojo (naranja claro) en la oruga se mantiene a través del crecimiento larvario y eventualmente forma el disco imaginario del ojo que forma el ojo compuesto
adulto. Adaptado de [28] y basado en [31,47]. Cronología de la muda embrionaria [38,52]. (B) Las orugas de Manduca sexta tienen algunas primordías imaginarias que invaginan
temprano para formar un disco imaginario (el disco del ala, en verde) y no contribuyen a la larva, mientras que otras (en rojo) se asocian con su contraparte larval y hacen la cutícula
larval pero en el último estadio larval se desdibujan e invaginan para hacer un disco imaginario de formación tardía. Las imágenes confocales de monturas enteras teñidas de yoduro
de propidio muestran el primordio del ojo (p, contorno punteado) en el día 0 del último estadio larval cuando forma parte de la monocapa epidérmica y en el día 4 cuando ha invaginado
para formar el disco ocular; el asterisco indica fotorreceptores larvales justo detrás del primordio. Durante el mismo período el disco alar se transforma de un simple saco a una
estructura plegada compleja con incipientes venas alares. Adaptado de [41]. (C) Las primordías imaginarias que se convierten en discos de formación temprana (verde) frente a los de
formación tardía (rojo) muestran diferentes patrones de crecimiento isomórfico: como disco de formación temprana crecen a través de los períodos de intermolt y muda mientras que en
la estrategia de formación tardía el crecimiento se produce sólo en la fase temprana de cada muda larval. Bajo ambas estrategias el crecimiento cambia a un modo morfogenético
temprano en el último estadio larval.

en las mudas ninfales posteriores. En cambio, en los embriones de
las especies holometabólicas, el primordio del ojo sólo forma un
conjunto inicial y posterior de fotorreceptores que se diferencian en
los simples ojos laterales (stemmata) característicos de las larvas.
La porción anterior del primordium permanece inactiva durante el
crecimiento de la larva pero, en el último estadio larvario, sufre
morfogénesis en el disco imaginario del ojo [31].
Las patas de los lepidópteros presentan un desafío metamórfico
más complejo, porque el animal hace dos tipos diferentes de pata
compleja durante su vida: la oruga tiene patas torácicas acortadas
modificadas para agarrar, mientras que la polilla o mariposa adulta
tiene las típicas patas para caminar. La formación de una pata
caminante, ya sea durante la embriogénesis en un grillo [32,33] o
postmortem bryónica en un disco imaginario de una pata de
Drosophila, ocurre a través de un patrón similar de reclutamiento
de genes con patrón proximodistal [34]. Esta cascada de patrones
se detiene en un punto intermedio en los embriones de la polilla
Manduca sexta, produciendo la pata de oruga modificada [35]. La
pierna de la oruga, sin embargo, conserva un remanente
del primordio de la pata embrionaria [36,37], que sufre una extensa
proliferación y morfogénesis en el último estadio larvario y se
combina con algunas de las células larvarias mientras completan el
programa de patrones para hacer la pata caminante adulta [37].
La forma larvaria, entonces, surge de la detención de los
patrones ancestrales de crecimiento y patrones de tejido. Las
estructuras que se organizan antes de la detención se adaptan a la
forma larval, mientras que el resto del primordio se transporta para
contribuir al sistema adulto (Figura 2A). El momento en que los
programas embrionarios se detienen para formar la estructura
larval y el grado en que las células larvales contribuyen luego a la
versión adulta varía según la especie y el sistema de órganos
considerados [27].
Los embriones de los insectos suelen hacer tres cutículas
embrionarias, y éstas están bien desarrolladas en formas
hemimetábicas [38]. La primera cutícula embrionaria es delicada y
se deposita con la finalización de la segmentación y el
establecimiento de la primordia embrionaria. El embrión entra
entonces en una fase de rápido crecimiento y patrón que se
termina en gran parte en el cierre dorsal cuando

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deposita una segunda cutícula embrionaria, llamada cutícula
proninfal. Esta etapa proninfa tiene la forma general de la ninfa,
aunque sus proporciones pueden estar limitadas por los confines
de la cáscara del huevo. Su cutícula difiere de la cutícula ninfal y
puede tener especializaciones para el escape de la cáscara y el
sitio de oviposición. Luego sigue la diferenciación y maduración de
los tejidos y la deposición de la primera cutícula ninfal. Propusimos
que la proninfa era el precursor del estadio larvario [26] porque los
procesos de patrón que se interrumpieron en la fabricación de la
larva fueron los que ocurren durante la formación de la proninfa.
Además, algunas proninfas muestran adaptaciones de
comportamiento únicas, como los movimientos de arrastre del
cuerpo que les permiten escapar del sitio de oviposición [39], y
tales especializaciones específicas del estadio pueden haber sido
preadaptaciones importantes para la evolución de la larva [26].
Además, argumentamos que los embriones de holometabólicos
sólo sufrieron dos mudas durante la embriogénesis [26]; sin
embargo, en trabajos posteriores [38] se demostró que varias
especies de insectos holometabólicos también hacen tres cutículas
embrionarias, aunque la segunda cutícula está algo reducida y
carece de endocultura.
La Pupa y los Discos Imaginarios y Primordia
Como se ha descrito anteriormente, el origen de la etapa de pupa ha
sido un tema controvertido a lo largo de los años. En apoyo de la
opinión clásica de que la pupa corresponde a la ninfa hemimetálica,
propusimos [26] que el estadio inmaduro responsable del crecimiento
pasara de la ninfa a la proninfa, ya que esta última se transformaba en
una larva capaz de alimentarse. El número de estadios
proninfales/larvales aumentó para acomodar el crecimiento, mientras
que el número de estadios ninfales disminuyó a medida que la ninfa se
convirtió en un estadio de transición sin alimentación, ahora reconocido
como la pupa. La pupa proporcionó entonces un molde o plantilla para
el cuerpo del adulto, en el que las estructuras adultas se diferenciaron y
maduraron posteriormente, pero también desarrolló adaptaciones para
asegurar su supervivencia, como un tipo de cutícula característica. Si la
pupa se produce en un entorno protegido, entonces la cutícula pupal es
típicamente delgada, transparente y sin adornos; las pupas expuestas
al entorno, como la crisálida de las mariposas, tienen una cutícula
endurecida que puede ser adornada con extensiones y coloración que
ayudan a su camuflaje o la protegen de los ataques de otros
artrópodos.
La pupa se forma típicamente a partir de células larvarias
reprogramadas, así como de células de primordio imaginario (por
ejemplo [37]). La contribución relativa de estas dos depende del órgano
y la especie de que se trate. Un primordio imaginario es un conjunto de
células larvales con una capacidad embrionaria latente que les permite
desdiferenciarse parcialmente y experimentar el crecimiento y la
morfogénesis para formar parte o la totalidad de una estructura adulta.
Los primordios imaginarios suelen estar asociados a las estructuras
larvarias correspondientes, pero sus células siguen siendo diploides
mientras que las células larvarias circundantes pueden convertirse en
altamente poliploides. La condición ancestral de tales primordías es
probablemente similar a la observada para las primordías antenales, de
patas y de ojos de los lepidópteros (Figura 2B,C) [27,40]. Estas
primordías son partes integrales de la epidermis larval, formando una
nueva cutícula larval en cada muda y agregando capas de endocuticula
a través de la intermolt. Sin embargo, al principio del último estadio
larval, dejan de hacer endocuticula, se desprenden de la cutícula larval,
se desdibujan parcialmente e inician la proliferación y la morfogénesis
[41]. A medida que crecen, a menudo invaginan en la cavidad corporal
para convertirse en discos imaginarios de formación tardía.
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Una condición más derivada se ve cuando el primordio
imaginario no contribuye a la larva sino que invagina en el cuerpo,
donde se convierte en un disco imaginario de formación temprana.
Los discos de formación temprana no se encuentran en el
escarabajo Tribolium, aunque se encuentran en grupos más
derivados de escarabajos [26]. En los lepidópteros, los únicos
discos de formación temprana son los discos alares y genitales
(Figura 2B), mientras que en los dípteros superiores, como la
Drosophila, prácticamente todas las estructuras adultas provienen
de discos de formación temprana [29]. Las únicas células
epidérmicas que conservan un patrón ancestral de desarrollo son
los histoblastos abdominales, pequeñas colecciones de células
diploides que forman la cutícula larvaria y luego la pupal antes de
que proliferen y se extiendan por el abdomen para formar la
cutícula adulta.
Las primordías imaginarias muestran dos fases diferentes de
crecimiento (Figura 2B,C). En los estadios larvarios preterminales,
su crecimiento es sensible a las condiciones nutricionales y
proporcional al de la larva en su conjunto. A lo largo de este
período, los discos de formación temprana tienen una clara ventaja
de crecimiento con respecto a sus homólogos de formación tardía
(Figura 2C). En el mejor de los casos, secretan sólo una fina
epicutícula [40] y puede proliferar a través de los períodos de
muda e intermolt. Sin embargo, las primordías que se transforman
en discos en el último estadio larvario son partes integrales de la
epidermis larvaria en los estadios preterminales. Como tales,
forman cutículas a través de la última parte de la muda y del
intermolt y su proliferación se limita a un breve estallido al
comienzo de cada muda. En el último estadio, ambos tipos de
primordía cambian a un programa morfogenético que hace que su
crecimiento sea independiente del aporte de nutrientes externos
[41,42].
Los ecdisteroides y el control de la muda y
la metamorfosis
Los ecdisteroides son esteroides polihidroxilados que se fabrican a
partir del colesterol alimentario o de esteroles vegetales relacionados
[43] (Figura 3A). Su función principal es inducir la muda y cumplen esta
función en todos los artrópodos [44,45]. En los insectos, los
ecdisteroides circulares suelen proceder de las glándulas protorácicas,
aunque en algunas especies otros tejidos como la epidermis, los
enocitos y las gónadas adultas también tienen esta capacidad. Las
glándulas protorácicas secretan ecdisona que luego es hidroxilada a 20
hidroxiecdisona (20E) por ecdisona 20 monooxigenasa en los tejidos
periféricos [43,46]. 20E se considera normalmente la forma activa de la
hormona, pero la ecdisona puede funcionar por sí misma al principio de
la muda o de los programas metamórficos (por ejemplo [47]). El control
de la secreción de ecdisona de las glándulas protorácicas es complejo,
pero los dos principales actores son las hormonas peptídicas de las
células neurosecretoras del cerebro: la hormona protorácica y los
péptidos similares a la insulina [48]. Las funciones de los ecdisteroides
en el control de la metamorfosis de los insectos tienen sorprendentes
paralelos con las hormonas tiroideas en la dirección de la metamorfosis
de los anfibios [49,50]. Estos paralelismos se enfatizarán a lo largo de
esta sección.
Como se ve en la Figura 3A, los niveles de ecdisteroides son bajos a
través de la muda pero muestran un pico importante durante cada
muda. Como la ecdysona 20-monooxigenasa es aumentada durante
las mudas [43,46], los tejidos periféricos en lugar de las glándulas
protorácicas determinan la composición de los esteroides durante el
pico. Típicamente, la ecdisona predomina al principio del pico y la 20E
se vuelve predominante más tarde (por ejemplo [51]; Figura 3A).
 Current Biology

Review

A PTTH Peripheral tissues B

insulins
DNA Ligand
Brain Ecdysone 20 EcR-A A/B binding binding
Prothoracic
Glands monooxygenase Activation C D E F
EcR-B A/B Activation
20E
E
Ecdysteroid titer

9-cis RA
Other EcR RXR or EcR EcR

Coleoptera
EcR RXR or EcR EcR

L4 L5 Pupa Adult Lepidoptera lipid

Days & diptera EcR USP

Co-repressors Co-activators
C Larval tissues 20E 20E
EcR USP EcR USP
EcR-B1 B1 B1
EcRE EcRE
Closed chromatin Open chromatin

Co-repressors Co-activators Other signaling pathways?

20E 20E
EcR USP EcR USP
EcR-A A A
Imaginal tissues EcRE EcRE RE
Closed chromatin Open chromatin
Current Biology

Figura 3. El sistema de ecdisterio de los insectos.

A) La ecdisona (E) es producida por las glándulas protorácicas y secretada principalmente bajo la influencia de dos hormonas del cerebro, la hormona
protorácica (PTTH) y las insulinas de los insectos. La E se convierte entonces en 20 hidroxiecdisona por los tejidos periféricos. El título de ecdisteroide está
basado en Manduca sexta [51.137] y muestra el total de ecdisteroides para las mudas de larvas y pupas pero ecdysone y 20E por separado para la muda al
adulto. (B) La estructura del receptor de ecdisona (EcR) muestra los diferentes dominios de la proteína. La mayoría de las especies expresan dos isoformas
de EcR que varían en la capacidad de transactivación de su dominio A/B [58]. Dependiendo del grupo de insectos, el EcR puede actuar como homodímero o
heterodimerizar con el receptor retinoide X (RXR). El RXR se une a ligandos como el ácido 9-cis-retinoico (9-cis-RA) pero hay variantes que carecen del
dominio de unión del ligando o se unen a un lípido estructural constitutivo. Esta última forma se llama Ultraspiráculo (USP). El EcR en este último grupo no
puede formar homodímeros. Adaptado de [58]. (C) Antes de la metamorfosis en Drosophila, los tejidos larvarios e imaginarios expresan diferentes isoformas
de EcR. En ambos casos, el complejo EcR-USP no ligado se une a su elemento de respuesta (EcRE) y se une a los corepresores que suprimen la
transcripción. La unión de los ecdisteroides conduce a la apertura de la estructura de la cromatina y a la activación de los genes. Las dos isoformas
principales difieren en esta capacidad y esta diferencia puede apoyar diferentes funciones para los ec- disteroides en los tejidos larvales frente a los
imaginarios. EcRE, elemento de respuesta de ecdysone; RE, elemento de respuesta para otros factores de transcripción.

El depósito de una nueva cutícula, ya sea durante el período
embrionario o posembrionario, requiere un pulso de ecdisteroides.
Cada una de las tres cutículas embrionarias producidas durante la
embriogénesis del saltamontes se asocia con un pico de
ecdisteroides [52]. En Drosophila, los embriones que carecen de
las enzimas biosintéticas de la ecdisona pasan por la
embriogénesis pero no forman una cutícula larval y tienen una
apariencia fantasmal que dio lugar a que tales mutantes fueran
llamados el "Grupo de Halloween". Esta colección de mutantes
proporcionó posteriormente las herramientas para la disección de
la vía biosintética del ecdisona [53]
El receptor de ecdysona
Tanto los ecdisteroides como las hormonas tiroideas actúan a través de
los miembros de la subfamilia de receptores nucleares de hormonas
del Grupo II: el receptor de hormonas tiroideas (TR) en el caso de los
anfibios, y el receptor de ecdysone (EcR) en los insectos [54]. La
estructura del EcR es típica de esta subfamilia (Figura 3B): tiene dos
dedos de zinc C4 en el dominio carboxilo para mediar la unión del
ADN, el dominio "E" de unión de los roedores ecdistéticos, y una región
aminoterminal A/B que se empalma diferentemente para formar dos
isoformas principales, EcR-A y EcR-B [55,56]. Estas dos isoformas se
encuentran en todos los insectos [57], pero no se sabe si sus funciones
difieren con los diferentes tipos de desarrollo metamórfico.
Al igual que otros miembros de esta subfamilia de receptores
nucleares, algunos EcRs de insectos pueden homodimerizarse o
formar heterodímeros con otro receptor nuclear, el receptor retinoide X
(RXR). En insectos más basales el RXR se une a los ácidos grasos
como el ácido 9-cis-retinoico, como se ve en su homólogo vertebrado.
El EcR-RXR ha sufrido una evolución considerable dentro de los
insectos (Figura 3B) [58]. El dominio de unión de los ligandos de RXR
se perdió aparentemente en las abejas. En los dípteros y lepidópteros,
RXR ha sido modificado para unirse a un lípido estructural y se llama
Ultraspiráculo (USP), mientras que EcR ha desarrollado una interfaz de
dimerización ampliada que facilita la fabricación de dímeros EcR-USP
pero evita la formación de homodímeros EcR [58]. Debido a que la
mayoría de los sistemas modelo para el estudio de la acción de los
ecdisteroides provienen de estos dos órdenes, sabemos mucho sobre
las funciones de los heterodímeros EcR-USP, pero poco sobre los
homodímeros EcR o los efectos de la unión de los ligandos a RXR.
El heterodímero EcR-USP está típicamente en el núcleo y unido al
ADN (Figura 3C) [59]. Sin ligando, el EcR-USP recluta proteínas
remodeladoras del nucleosoma para compactar la cromatina y causar
una represión local. Con la unión de 20E, se intercambian
coactivadores como las acetilasas de histona para que los
correpresores "abran" la estructura de la cromatina y faciliten la
transcripción.

Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019 R1257

 Current Biology

Review
A Intermolt Molt al inicio del pulso de ecdisteroides [51], es probable que sea la forma
responsable de estos eventos.
A esto le sigue la fase de inducción de la cutícula, que comienza con la
Ecdysteroid titer

Preparatory High Ecdysial secreción de una epicutícula externa y luego la procutícula hecha de
phase 20E phase
proteína y quitina. El que la cutícula sea rígida o flexible depende de su
composición proteica. Las capas externas de la procutícula (la exocutícula)
E or Decline
Cuticle of 20E acaban por entrecruzarse fuertemente, lo que las hace extremadamente
low 20E
induction duras y resistentes a la degradación. Las capas internas (la endocúticula)
phase continúan depositándose incluso después de que la vieja cutícula se
desprende y la nueva se expande. La ecdisona o los niveles bajos de 20E
no pueden evocar la producción de la cutícula, sino que se requieren niveles
altos de 20E (por ejemplo [47]). Esta diferencia es importante, ya que los
tejidos periféricos son responsables de la conversión de ecdisona en 20E
[43], controlando así la duración de la fase preparatoria y el inicio de la
B 20E producción de la cutícula. Una fase preparatoria prolongada es
High 20E especialmente importante para que la muda de la pupa al adulto permita el
Early genes tiempo suficiente para la diferenciación y el crecimiento necesarios para
Low 20E
(High threshold) hacer muchas estructuras adultas. La terminación prematura de esta fase y
(or E?) E74A, E75B la producción precoz de la cutícula se observan cuando se inyecta a las
Early/late pupas de lepidópteros una dosis elevada de 20E u otros agonistas de los
DHR3, DHR4 ecdisterios [65]: muestran una respuesta de "hiperecdisonismo",
Early genes convirtiéndose en adultos malformados con la cutícula desnuda y los ojos
(Low threshold)
e.g. E74B Late pequeños porque el alto 20E forzó la deposición de la cutícula antes de que
βFtz-F1 se completara la formación de la escama y el crecimiento del ojo

Current Biology

Figura 4. La relación de las fases del proceso de muda con el título

de ecdisterio y los diversos componentes de la 'cascada de
cenizas'.
(A) Las necesidades de ecdisteroides para las tres fases principales del
proceso de muda. (B) Los componentes de la cascada de factores de
transcripción que están activos durante las fases correspondientes de la
muda y su relación con el título de ecdisteroides. Los genes son ejemplos de
factores de transcripción de cada clase.
El dominio de vinculación de ligandos media la represión o activación
del núcleo en función de la presencia o no de ligandos. Las dos
principales isoformas de EcR difieren tanto en su funcionalidad como
en su distribución tisular. En Drosophila melanogaster, la EcR-B1 tiene
un dominio de activación de abolladura independiente del ligando que
falta en la EcR-A. La EcR-B1 se encuentra a través de los estadios
larvarios con la EcR-A uniéndose en el último estadio y en la
metamorfosis [56,60], pero en este último momento se separan en
diferentes tipos de células con células larvarias que expresan EcR-B1 y
células imaginarias sólo EcR-A [56].
Los ecdisteroides y el crecimiento y la muda
La acción de los ecdisteroides en la muda de la cutícula es una antigua
función de estas hormonas que precede a su implicación en la
metamorfosis. La cutícula del insecto tiene varias capas y está hecha
principalmente de proteína y fibras de quitina, un polímero de N-acetil-
glucosamina [61,62]. Incluso en el insecto más grande, la epidermis
que segrega la cutícula es sólo una célula de espesor. Esta monocapa
produce la cutícula que se encuentra por encima de ella.
El proceso de muda de la cutícula puede dividirse en varias fases
[63] que he condensado en tres. Estas fases están orquestadas por
diferentes características del pulso de los distroides E.C. (Figura 4A). El
aumento del título de ecdistroide evoca la fase preparatoria que implica
un componente de compromiso que determina la naturaleza de la
muda (por ejemplo, larva frente a pupa [64]) y los eventos celulares de
desprendimiento de la epidermis de la cutícula superpuesta (apólisis),
la secreción de líquido de muda en el espacio intermedio, la división
celular y la diferenciación de nuevos orgánulos epidérmicos como un
pelo sensorial y su encaje. Estos eventos pueden ser evocados por
niveles bajos de 20E o ecdisona (por ejemplo, [47]). Como la ecdisona
es la principal
La fase ecdysial es la última de la muda e implica la degradación y
desprendimiento de la vieja cutícula y la expansión y curtido de la
nueva. Durante esta fase, las proteasas y quitinasas degradan la vieja
endocútica, dejando la exocuticula altamente reticulada, pero delgada.
Una cascada de neuropéptidos orquestan entonces una secuencia de
comportamiento para romper y desprender la vieja cutícula (ecdysis
sensu stricto), y luego expandir y entrecruzar la nueva [66]. Estos
eventos requieren la retirada de los ecdisterios. Este requisito para la
retirada del 20E es la razón por la que los insectos tratados con
mímicos de ecdisteroides que no se metabolizan fácilmente suelen
morir al final de la muda sin desprenderse de su vieja cutícula [67].
Las diferentes fases de la muda tienen patrones característicos de
expresión génica (Figura 4B). Éstos se identificaron por primera vez en
el contexto de los efectos de la ecdisona sobre la metamorfosis
mediante el cultivo de las glándulas salivales de los tentanos
quironómicos de tamaño mediano [68]. La adición de ecdisona a las
glándulas larvarias evocó una secuencia temporal estereotipada de
"soplidos" -regiones de cromatina expandida que denotan actividad
transcripcional- a lo largo de sus cromosomas politénicos gigantes,
proporcionando la primera evidencia de que las hormonas esteroides
podrían activar directamente la transcripción de genes. La comparación
de los patrones de soplido con y sin inhibidores de la síntesis de
proteínas indicó que algunos genes eran objetivos directos de los
esteroides, mientras que otros se encontraban más abajo de este
conjunto inicial. El análisis cuantitativo de estas fumarolas y sus
necesidades de esteroides realizado por Michael Ashburner y sus
colegas [69], utilizando glándulas salivales de Drosophila, identificó una
red de interacciones genéticas a menudo llamada "cascada
Ashburner". Si bien muchos de estos genes son específicos de los
tejidos y codifican los genes efectores, existe un conjunto central de
factores de transcripción que se expresan en todos los tejidos, en cada
muda, y entre las especies [70-72]. Muchos de estos factores de
transcripción son receptores nucleares huérfanos y constituyen un
circuito genético que interactúa e interpreta ese título de ecdisteroide,
traduciéndolo en programas temporales de actividad genética
necesarios para las diferentes fases

R1258 Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019


de la muda [72]. No se han resuelto todos los detalles de las
interacciones en este circuito, pero se conoce lo suficiente sobre las
interacciones de los componentes individuales como para apreciar su
función general.
As Como se ve en la figura 4B, las diferentes partes de la cascada
están asociadas a las diferentes fases de la muda. Los primeros genes,
que son inducidos directamente por los ecdisteroides, incluyen clases
de bajo y alto umbral [73]. Los genes de la clase de bajo umbral, como
el E74B, parecen estar asociados con la fase preparatoria, mientras
que los genes de la clase de alto umbral, como el E74A y el E75B,
están asociados con la fase de iniciación de la cutícula. Los miembros
de la clase de alto umbral también suprimen los genes de bajo umbral,
con lo que se termina la fase preparatoria. Por consiguiente, la
duración de la fase preparatoria es relativamente plástica y puede
mantenerse mediante las condiciones hormonales apropiadas mientras
no se induzcan los genes de umbral alto. Los títulos elevados de
esteroides también evocan la activación de los genes tempranos, como
el receptor de hormonas 3 de la Drosophila (DHR3), que tienen cierta
sensibilidad a los esteroides pero que dependen de los genes
tempranos para su plena activación [74].
Los genes de salida, como los de las proteínas de la cutícula, son
objetivos de estos factores de transcripción, así como los ecdisteroides
(por ejemplo [75-77]). Todavía no se ha hecho una imagen completa de
cómo actúan todos los miembros de la cascada para dirigir el complejo
programa de ensamblaje de la cutícula. Genes como el DHR3 se
alimentan para activar genes tardíos como el b-Ftz-F1, cuya expresión
también requiere la eliminación del 20E [78]. El b-Ftz-F1 está implicado
en alguna inducción genética posterior de la cutícula (por ejemplo [76]),
pero también induce la producción del receptor de la hormona
desencadenante de la ecdisis, una hormona clave que controla el
desprendimiento de la cutícula [79]. Por lo tanto, el mantenimiento de
niveles elevados de 20E al final de la muda impide la expresión de b-
Ftz-F1 y el desprendimiento de la cutícula antigua.
Los ecdysteroides y la metamorfosis
Los ecdisteroides también impulsan el desarrollo metamórfico de
manera análoga a la de la hormona tiroidea y la metamorfosis de los
anfibios [49,50]. Los renacuajos anfibios comienzan en una fase previa
a la metamorfosis caracterizada por el crecimiento dependiente de
nutrientes del renacuajo, incluyendo sus yemas de las extremidades.
La secreción de tiroxina (T4) por la glándula tiroides causa
prometamorfosis caracterizada por la expresión de TRa, el crecimiento
acelerado y el patrón de las yemas de las extremidades, y la inducción
de TRb. Los tejidos desarrollados adquieren posteriormente actividad
de desiodinasa, lo que permite la conversión local de T4 en
triyodotironina (T3) [80]. Sólo la T3 es capaz de causar un clímax
metamórfico y actúa a través de la TRb para evocar los dramáticos
eventos de pérdida de cola y la erupción de las extremidades
delanteras.
Para los insectos, el período desde la eclosión hasta el comienzo de
la última etapa larval es análogo a la premetamorfosis de los anfibios
tanto los tejidos larvales como las primordías imaginarias crecen de
forma dependiente de los nutrientes a lo largo de este período. Este
estado de "premetamorfosis" se mantiene en gran medida por la
presencia de JH (ver abajo) y restringe la acción de los ecdisteroides a
la de la muda. Cuando el crecimiento de la larva o ninfa excede su
tamaño umbral para la metamorfosis [81], su siguiente muda será en el
último estadio larvario o ninfal. En el último estadio larvario del
Holometabola, los tejidos se someten a un cambio llamado compromiso
pupal [64]. Como en la prometamorfosis en los anfibios, durante el
compromiso pupal los programas de genes pasan del simple
crecimiento a la preparación de los tejidos para la metamorfosis. Estos
cambios se observan en los tejidos de las larvas (por ejemplo [82]) y en
los discos imaginarios y primordías que
Current Biology
Review
cambian al crecimiento morfogenético y al patrón de pupa [42]. Este
compromiso con la metamorfosis es irreversible y puede ocurrir en
forma de mosaico en diferentes momentos en los tejidos de la larva.
En Drosophila, este período también implica un aumento dramático
de la EcR, pero al comenzar la metamorfosis, los discos imaginarios y
las células larvarias expresan diferentes isoformas receptoras [56].
Estas diferentes isoformas receptoras reflejan diferentes roles para los
ecdisteroides en la metamorfosis de estas dos clases de células
(Figura 3C). Los tejidos de las larvas muestran una fuerte activación de
genes para iniciar la metamorfosis, y la falta de ecdisteroides o EcR o
la presencia de una forma dominante-negativa de EcR (EcRDN) [83]
previene la metamorfosis. Estos tejidos expresan el EcR-B1, que tiene
un dominio de activación adicional que soporta altos niveles de
inducción de genes en respuesta a 20E [59]. El desarrollo metamórfico
de los discos imaginarios, por el contrario, es bloqueado por la falta de
ecdyste-roids o la presencia de EcRDN, pero ocurre si se elimina el
EcR, incluso si el esteroide está ausente [84].
Por lo tanto, para los tejidos imaginarios, los ecdisteroides
proporcionan principalmente una señal permisiva que permite el
progreso de los programas en curso de patrones de tejido y
especificación celular. Estas células expresan el EcR-A, que carece de
un dominio de activación amino terminal. Como se sugiere en la Figura
3C, la acción del EcR-A probablemente enfatiza la función del EcR-
USP para apoyar la remodelación local de la cromatina,
proporcionando así acceso a otras vías de control del desarrollo para
impulsar los cambios premetamórficos [85]. De hecho, una de las
principales funciones de los ecdisteroides en los tejidos imaginarios es
eliminar la represión impuesta por su propio sistema receptor. En
consecuencia, las mutaciones que bloquean la producción de ecdisona
dan lugar a déficits de desarrollo mucho más graves que los mutantes
que eliminan la EcR o la USP (por ejemplo [55]). Curiosamente, se
observa un fenómeno similar en algunos tejidos de los renacuajos de
Xenopus en los que la eliminación de TRa permite que algunos tejidos
completen la metamorfosis en ausencia de la hormona tiroidea [86].
Hormona Juvenil y Control de la Naturaleza de la Muda
Los JHs (Figura 5A) controlan la entrada en la metamorfosis y permiten
que los pulsos de los ecdisteroides evocan diferentes tipos de mudas
[87]. Los JHs son una familia de sesquiterpenos, siendo el más común
el JH-III, epoximetilfarnesoaato. Según la especie o la etapa, la
estructura de los JH varía en el número de grupos de epóxidos y ramas
laterales de metilo frente a las de etilo. La JH se sintetiza por medio de
glándulas cefálicas emparejadas, los corpora allata. Tiene una amplia
variedad de funciones, la principal de las cuales es el control de la
progresión a través de las diferentes etapas de la vida durante el
crecimiento y la metamorfosis [87]. También puede regular aspectos de
la reproducción [88,89], así como controlar los polimorfismos de los
pigmentos, la determinación de castas en los insectos sociales, el
control del comportamiento en las abejas obreras, y algunos
polimorfismos estacionales [63]. Limitaré mi discusión sobre JH a sus
acciones sobre el crecimiento y la metamorfosis.
La JH es una hormona soluble en lípidos y penetra fácilmente en la
cutícula. Las dosis bajas aplicadas tópicamente pueden suprimir
localmente la metamorfosis en la epidermis subyacente, mientras que
el resto del insecto avanza en su historia de vida. Esto fue ilustrado de
manera sorprendente por el fisiólogo de insectos V.B. Wigglesworth,
quien escribió sus iniciales en la cutícula ninfal en la parte posterior de
la metamorfosis de Rhodnius mediante la aplicación juiciosa de un
extracto que contiene JH [90]. La capacidad de JH y sus imitaciones
para actuar a través de la superficie
Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019 R1259
 Current Biology
Review
A B
Brain CA Hemimetabolous Holometabolous
JH titer
JH-III
N-4 N-5 (last) Adult L-4 L-5 (last) Pupa
JH E JH Met
C D
X X
JH
hsp83
met
JH Kr-h1
tai met
JHRE
egfp dsRNA TcMet (RNAi) N5 Precocious adults Adult
(E) Ejemplos de Pyrrhocoris apterus que muestran que el derribo mediado por el ARNi de componentes en la vía de respuesta de JH en el 4º estadio ninfal
conduce a la formación de adultos precoces en lugar de ninfas en el 5º estadio. Imágenes de [97].
ha hecho de esta hormona un objetivo importante para el desarrollo de
agentes específicos para el control de insectos [67].
El patrón general del título JH es bastante consistente durante la
vida embrionaria y posembrionaria. Durante la embriogénesis, la JH
está a veces presente en el huevo recién puesto, pero se metaboliza
rápidamente y está ausente durante la embriogénesis temprana y
media, pero aparece después del cierre dorsal cuando los tejidos del
embrión completamente desarrollado maduran y se deposita la última
cutícula embrionaria [91-93]. El posterior crecimiento tanto de las larvas
como de las ninfas se produce en un entorno de alta circulación de JH
(Figura 5B). En los insectos hemimetábalos, los niveles de JH son altos
a través de la etapa ninfal penúltima, pero luego caen durante la muda
a la última etapa ninfal. JH está entonces ausente a través de la muda
hasta el adulto. En los insectos holometabólicos, el patrón es similar en
que JH está presente a medida que las larvas progresan a través de
sus instantes, pero luego desaparece temprano en el último estadio
larvario para establecer el escenario para la formación de la pupa. JH
reaparece entonces transitoriamente durante el pulso de ecdisteroide
prepupal que dirige la muda a la pupa, pero luego desaparece para
permitir la diferenciación de los adultos.
El receptor JH
Los efectos en el desarrollo de las funciones de la JH están mediadas por un
receptor intracelular de la familia de factores de transcripción de la hélice
básica de bucle de la hélice Per/Arnt/ Sim (bHLH-PAS) [94]. Está
relacionado con el receptor aril-hidrocarburo vertebrado, pero es el único
miembro de la familia cooptado para servir como receptor hormonal. Está
codificado por el gen tolerante al metopreno (Met), que se identificó por
primera vez en Drosophila en una prueba de detección de mutantes
resistentes al metopreno mímico JH [95]. Establecer que el Met era un
receptor JH fue complicado en Drosophila porque esta mosca tiene un
segundo gen receptor, expresado en células germinales (gce), que dio lugar
al Met por duplicación de genes [96]. La demostración de que Met, de
hecho, media las acciones antimetamorfas de JH procedía de insectos que
sólo tienen un gen Met, como el escarabajo Tribolium y el insecto Pirrocoris
(Figura 5D,E). En ambos, el derribo del Met por el ARN de interferencia
(ARNi) causó tanto una metamorfosis prematura como la pérdida de
sensibilidad a la JH exógena [1,97]. La prueba definitiva de que los Met y
Gce son receptores de JH vino entonces usando la genética de Drosophila
[98].
R1260 Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019
Figura 5. El sistema hormonal juvenil (JH)
de los insectos.
(A) El JH se sintetiza y se libera a partir de la
Corpora Allata (CA) emparejada situada en la
parte posterior del cerebro. La JH-III es la JH
más extendida. (B) Títulos típicos de JH para un
insecto hematófobo y un holometábulo
Adult basados en los títulos de las langostas [138], y la
polilla Manduca sexta [139.140]. Las regiones
sombreadas son períodos de la muda. (C) El
Kr-h1 camino para las acciones de desarrollo de JH
[después del 94]. JH se une a su receptor, Met,
que se une al citoplasma hsp83 en ausencia de
ligando. JH- Met luego se transloca al núcleo
donde se dimeriza con Taiman (Tai) y se une a
los elementos de respuesta de JH (JHRE). El
principal objetivo de JH para las funciones de
desarrollo es el factor de transcripción Kru¨ppel-
homolog1 (Kr-h1). (D) La pupa del escarabajo
Tribolium castaneum resultante de larvas
inyectadas con ARN de doble cadena en el 4º
Current Biology estadio larvario. Las larvas que reciben un
constructo de control (egfp) se someten a mudas
larvarias posteriores normales y forman pupas de
tamaño normal; las que reciben ARN Met, imitan
los efectos de la eliminación de JH y forman
precozmente pupas en miniatura. De [1],
derechos de autor (2007) Academia Nacional de
Ciencias, EE.UU.
Además, se demostró que el Met une las imitaciones de JH y JH en
concentraciones fisiológicas, y la interacción del ligando con los
residuos en la bolsa de unión del ligando se ha resuelto para el Gce
[99].
Met (o Gce) heterodimeriza con Taiman, otro miembro de la familia
bHLH-PAS también conocido como Coactivador de Respuesta a los
Esteroides (SRC) o Coactivador Interactivo de Esteroides b-Ftz-F1
(FISC) [94] (Figura 5C). Esta interacción es intrigante ya que Taiman
también participa en la acción de la ecdisona como parte de un
complejo coactivador con EcR-USP. El objetivo principal de JH-Met es
el gen Kru¨ppel homolog 1 (Kr-h1), que codifica un factor de
transcripción de dedos de zinc C2H2. En muchas especies, la
eliminación de Kr-h1 imita tanto la pérdida de JH como la pérdida de
Met (Figura 5E). También se cree que la JH tiene un receptor de
membrana aún no identificado que puede ser especialmente importante
para algunas de las funciones reproductivas de la JH [94]. Si este
receptor de membrana tiene un papel en la metamorfosis, es probable
que apoye al Met/Gce, ya que la eliminación de este último imita
totalmente la eliminación de la JH.
Las acciones de JH
Las acciones embrionarias de JH son poco conocidas. La HJ aparece
típicamente durante la embriogénesis alrededor del momento del cierre
dorsal, cuando el embrión pasa del crecimiento y el patrón a la
diferenciación de los tejidos de la ninfa o larva de primer estadio [26]. Sin
embargo, los embriones varían enormemente en cuanto a su sensibilidad a
la HJ exógena administrada antes de ese momento. Parecen ser insensibles
a la JH por medio de la segmentación y el establecimiento de yemas de
extremidades y otras primordías, período que concluye con la primera muda
embrionaria. En los embriones de grupos más basales, como los
saltamontes y los grillos, el tratamiento de la JH después de este período
detiene la morfogénesis y el siguiente pulso de ecdisona induce la
diferenciación prematura de los tejidos [26,33]. Esta acción de la JH en la
supresión del patrón tisular está en consonancia con su acción morfostática
sobre las primordías imaginarias que se describen a continuación. A
diferencia de lo que se observa en las especies hemimetábolas basales, en
los embriones holometábulos el tratamiento con JH tiene efectos
comparativamente leves, limitándose principalmente a la supresión de los
movimientos morfogenéticos (blastoquinesis) dentro del huevo [100]. De
hecho, la mayoría de los procesos morfogenéticos que son

sensibles al tratamiento de la JH en embriones de saltamontes se han
desplazado al reino posbronico en el Holometabola, donde todavía
muestran su sensibilidad a la JH.
Una acción embrionaria de JH es contraria a lo que se esperaba de
sus efectos posembrionarios. Como se describe a continuación, se
considera generalmente que JH tiene un efecto de "status quo" en la
muda, haciendo que el insecto produzca el mismo tipo de cutícula que
había tenido antes. En los grillos y saltamontes embrionarios, sin
embargo, el tratamiento de JH después de la muda E1 resulta en un
salto a una muda ninfal (E3), en lugar de repetir la muda E1 [26,33]. El
experimento inverso de prevenir químicamente la producción de JH en
los embriones de la cucaracha, Nauphoeta cinerea, tuvo el efecto
opuesto de bloquear la aparición de características ninfales [101]. En
Blattella germanica, el uso del ARNi materno para suprimir la
producción de JH o su receptor produjo una variedad de fenotipos, uno
de los cuales fue una detención como una proninfa aparente [102]. Es
necesario hacer más, pero en los embriones de estos insectos
hematófagos JH parece servir para promover el desarrollo de ninfas.
JH tiene dos categorías principales de acción durante la vida
posembrionaria. Su clásica acción de status quo está ligada al
pulso de ecdisteroides que causa una muda [103]. La presencia o
ausencia de JH al comienzo del pulso de ecdisteroide afecta al
"compromiso" de las células, determinando así si la muda será una
muda progresiva a la siguiente etapa o una muda de status quo
que repite la misma etapa [64]. El compromiso se produce al
principio de la fase preparatoria, de modo que las divisiones
celulares necesarias y la reprogramación de los genes de
respuesta se producen antes de que los altos niveles de 20E
provoquen la producción de cutícula. Se observa una relación
modificada durante la transición larvario-pupal, en la que el
compromiso pupal de las células larvarias es causado por el
pequeño pulso de ecdisteroide que termina la alimentación e
induce la búsqueda de un sitio de pupación. La muda de la pupa
en sí se retrasa durante horas o días hasta que se produce el gran
pico prepupal de los ecdisteroides.
Una segunda clase de acción de JH tiene que ver con el control
de la forma que el insecto tomará en la siguiente muda, la acción
morfostática de JH [104]. Como se ha detallado anteriormente, la
larva lleva primordía imaginaria ya sea como discos imaginarios
invaginados o como regiones de células diploides que tienen la
capacidad de desdiferenciarse parcialmente y sufrir morfogénesis
pupal. La presencia tónica de JH en los períodos de intermolt en
los estadios larvarios preterminales actúa para impedir que estos
discos y primordías inicien la morfogénesis prematura [41].
En los insectos hemimetábulos, la JH desaparece al final de la muda
hasta el último estadio ninfal para permitir la formación del adulto
(Figura 5B). Los insectos hematófagos también muestran el despeje de
JH de la circulación de las larvas del último estadio. En esta última, sin
embargo, JH reaparece durante el pulso de ecdisteroides prepupal. La
reaparición de JH tiene dos funciones. En algunos insectos asegura
que los tejidos imaginarios sufran una muda pupal en lugar de saltar
directamente al adulto [103]. Una segunda función se relaciona con el
hecho de que parte de la proliferación y el patrón celular de las
estructuras adultas comienza en la larva tardía y se extiende a través
de la muda de la pupa hasta las primeras fases del desarrollo del
adulto, cuando pueden apagarse con altos niveles de 20E. Niveles
altos similares de 20E se producen durante el pico de la prepúpula y la
presencia de JH impide que éstos desactiven permanentemente la
proliferación y el patrón [105]. JH parece desempeñar un papel similar
durante la pupación en Drosophila [106].
Current Biology
Review
Variaciones en los requisitos para JH
Las larvas de los insectos varían dramáticamente en la forma en que
responden a la implantación de cuerpos activos allata o al tratamiento
con JH exógeno. Muchas larvas de escarabajo y orugas responden
sometiéndose a mudas larvarias adicionales y convirtiéndose en larvas
gigantes. Por el contrario, los mismos tratamientos no causarán que las
larvas de Dípteros hagan un instar larval adicional. En la primera
especie, el número de estadios larvarios es algo plástico y puede
modificarse mediante manipulaciones nutricionales, mientras que en la
segunda el número de estadios larvarios es fijo. Sin embargo,
recientemente ha quedado claro que incluso en las especies que
muestran la clásica plasticidad mediada por JH, no todos los estadios
son sensibles a JH [107-109].
Los experimentos clásicos en un insecto chupasangre, Rhodnius
prolixus, y en la polilla de cera mayor, Galleria mellonella, mostraron
que una ninfa de primer estadio o la epidermis de las larvas de primer
estadio podían ser causadas para sufrir directamente una metamorfosis
si se exponían al ambiente hormonal del último estadio ninfal o larval.
Estos resultados fueron la base de la idea de que la presencia de JH
era esencial para cada muda larval o ninfal. Sin embargo,
recientemente se demostró que las larvas de Bombyx mori que
carecían del receptor de JH o de las enzimas para hacer JH, sin
embargo, progresaban a través de las dos primeras mudas larvarias y
sólo iniciaban la metamorfosis después del 3er estadio larval [107,108].
Estos estudios, y otros similares en el insecto Pyrrhocoris apterus
[108], muestran que la JH no es necesaria para las primeras mudas del
juvenil.
Estos resultados sugieren que se libera un factor promotor de la
metamorfosis después de las primeras mudas y, una vez que aparece,
se necesita JH para suprimir la metamorfosis y mantener la etapa
juvenil. El momento en que este factor promotor de la metamorfosis
aparece por primera vez puede determinar si hay o no plasticidad
controlada por JH en el número de estadios. Por ejemplo, se podría
especular que en Drosophila ese factor no aparece hasta después de
que la larva haya cruzado el umbral de tamaño para la metamorfosis y,
por lo tanto, ya se ha establecido el último estadio larvario. Hay una
lista cada vez mayor de péptidos que influyen en el crecimiento de los
insectos [110], como los del cerebro, del cuerpo graso y de los discos
imaginarios en crecimiento. La forma en que estos podrían relacionarse
con los factores que promueven la metamorfosis no está clara, pero es
probable que proporcione una historia intrigante para el futuro.
Estos resultados sugieren que se libera un factor promotor de la
metamorfosis después de las primeras mudas y, una vez que aparece,
se necesita JH para suprimir la metamorfosis y mantener la etapa
juvenil. El momento en que este factor promotor de la metamorfosis
aparece por primera vez puede determinar si hay o no plasticidad
controlada por JH en el número de estadios. Por ejemplo, se podría
especular que en Drosophila ese factor no aparece hasta después de
que la larva haya cruzado el umbral de tamaño para la metamorfosis y,
por lo tanto, ya se ha establecido el último estadio larvario. Hay una
lista cada vez mayor de péptidos que influyen en el crecimiento de los
insectos [110], como los del cerebro, del cuerpo graso y de los discos
imaginarios en crecimiento. La forma en que estos podrían relacionarse
con los factores que promueven la metamorfosis no está clara, pero es
probable que proporcione una historia intrigante para el futuro.
Genes de especificación de etapas y estrategias de historia de la vida
Un importante avance en la última década ha sido la apreciación del
papel de los genes de especificación de etapas. Por analogía con el
papel de los genes homeóticos que establecen diferencias a lo largo
del eje espacial del insecto, los genes de especificación de estadio
establecen diferencias de estadio a lo largo de su eje temporal. Son la
encarnación del "compromiso" y determinan el carácter de la
Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019 R1261
Current Biology

Review

Ai ii B
Br
+ +

E93
+
L P A L L-A mosaic
iii
Br/E93 E93 X
Br/E93
JH
Kr-h1
iv
Ecdysteroids Low 20E
MIFs?

D JH 20E
P2
C L8 L9 L10
P A JH/Met

C
L
X
Br/E93
L L L
X
E93
Kr-h1 Early genes
L (High thresh)
Br PN
L1 Early/late
N1 L1 E93 Broad Early genes
(Low thresh)
JH Late
Kr-h1
LF
LF Larval
Pupal
NF Pu Adult
Pu
Effector gene sets
E93
A A

Current Biology

Figura 6. Papel de los genes de especificación de etapa en la dirección de las historias de vida de los insectos.
(A) El derribo basado en el ARNi de ancho o E93 en el Tribolium castaneum altera la progresión a través del ciclo de vida. (i) Relación del ancho (Br) y E93 con la progresión normal de
la larva (L) a la pupa (P) y al adulto (A). (ii) La eliminación de la Ancha hace que la larva en el último estadio mude a un mosaico larvario-adulto en lugar de a una pupa. Imágenes en
(Ai) y (Aii) republicadas con permiso de La Compañía de Biólogos, de [119] ª 2008. (iii) El derribo de E93 en la larva resulta en múltiples mudas larvales en lugar de formar una pupa
(C). Adaptado de [125]. (iv) El derribo de E93 en la pupa resulta en una segunda pupa (P2) en lugar de un adulto (de [3]). (B) Niveles de expresión de amplio (Br), E93, y Kru¨ppel
homolog 1 (Kr-h1) en el Tribolium castaneum mostrando cómo sus niveles se relacionan con JH y los picos de muda de los ecdisteroides (barras rojas y negras) y con las interacciones
entre los diversos genes (niveles desde [125,128]). Otros factores inductores de metamorfosis (FIM) pueden estar involucrados en la inducción amplia y E93 en algunos tejidos del
último estadio larvario. (C) Resumen del cambio en la expresión de Kr-h1, amplio, y E93 en insectos hemimetábulos (como la cucaracha) y basales (Tribolium) y derivados (moscas
superiores) holometábulos. La expresión amplia es una característica de las etapas ninfal (N) y pupal (Pu) y es mantenida por JH actuando a través de Kr-h1. Los estadios precedentes
de proninfa (PN) y larva (L) se caracterizan por una expresión amplia escasa o nula. E93 determina el estadio adulto en todos los casos y sirve de puerta de entrada para la
metamorfosis de las especies hemimetabólicas y los holometaboles basales, pero su función de puerta de entrada es asumida por la amplia en el Holometabola derivado. D)
Intersección de las vías de salida de JH y de los ecdisteroides para determinar la naturaleza específica del estadio de las mudas de larvas, pupas y adultos. Los genes encajonados
son componentes de la cascada de Ashburner que son comunes a todas las mudas.

consiguiente muda. Estos genes, resumidos en la figura 6, incluyen
típicamente Kr-h1, proteína amplia e inducible por Ecdysone 93F (E93).
Todas se identificaron inicialmente en Drosophila y se asociaron a la
acción de los ecdisterios durante la metamorfosis. La función de amplio
para establecer el estadio pupal se demostró inicialmente en
Drosophila [112,113], pero el alcance de las funciones de E93 y Kr-h1
sólo fue revelado por el trabajo en insectos con desarrollo menos
derivado.
En los insectos holometabólicos, Kr-h1, broad, y E93 dirigen los
programas genéticos asociados con la larva, la pupa y el adulto,
respectivamente. Broad (también llamado Broad Complex, Br-C) fue el
primero en ser descubierto y su acción es más conocida. Pertenece a
la familia de factores de transcripción Bric-a-brac-Tramtrack Broad zinc
finger (BTB- ZF). Dependiendo de la especie, puede haber de cuatro a
seis isoformas principales que comparten un BTB común
pero varían en sus pares de dedos de zinc C2H2 en su terminal
carboxilo [114]. El dominio BTB puede interactuar con ambos co-
represores y co-activadores así como apoyar la remodelación de la
cromatina [115]. Sin embargo, las interacciones precisas que utiliza
Broad no son bien comprendidas. La proteína amplia aparece cuando
los tejidos larvales se comprometen con el desarrollo de la pupa [116] y
los mutantes de Drosophila que carecen de todas las isoformas
amplias permanecen como larvas de última etapa y no inician sus
programas premetamórficos [112]. Los experimentos en Drosophila
muestran que Broad suprime tanto los programas relacionados con las
larvas como con los adultos [113,117] mientras que activa los genes
específicos del estadio pupal. Esta acción dual de Broad es
sorprendentemente evidente en el Tribolium, en el que el derribo de
Broad por el ARNi resulta en que la larva del último estadio se
convierte en un mosaico larva-adulto en lugar de una pupa (Figura 6A)
[118,119].

R1262 Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019


En los insectos hemimetábulos, la amplitud se expresa durante los
estadios ninfales, pero luego desaparece en el último estadio cuando la
ninfa se transforma en adulto [120-122]. Este patrón de expresión
parece apoyar la propuesta de que el estadio ninfal corresponde a la
pupa holometabólica, pero el derribo basado en el ARNi de las ninfas
de los insectos Oncopeltus fasciatus y Pyrrhocoris apterus y de la
cucaracha Blattella germanica en un estadio temprano no causó una
metamorfosis precoz. Sin embargo, impidió que las almohadillas de las
alas de las ninfas se desplazaran hacia un patrón premórbico de
crecimiento mejorado [97.120.122], lo que sugiere un papel ancestral
de la amplitud en el control del crecimiento de las alas y la
morfogénesis. Sin embargo, un trabajo reciente sobre el grillo, Gryllus
bimaculatus, demostró que el derribo de Broad causa, de hecho, una
metamorfosis precoz [123]. Las diferencias entre los efectos en los
grillos en comparación con las otras especies pueden reflejar
diferencias en el papel de Broad o diferencias en la eficacia del derribo
de genes mediado por el ARNi. Las almohadillas de las alas de las
ninfas tienen los niveles más altos de expresión amplia [122] y un
derribo incompleto en algunas especies podría afectar a las alas pero
no al resto del animal. Obviamente, se necesita más trabajo para
establecer si el gen de especificación de etapa para la ninfa es amplio.
El E93 codifica un factor de transcripción de la hélice. Fue estudiado
originalmente en Drosophila porque era una ráfaga temprana
específica de la etapa que apareció por primera vez en la glándula
salival prepupal tardía [124]. Los experimentos de reducción de genes
en insectos hemimetábulos y holometábulos mostraron que el E93
especifica la etapa adulta [3]. En ausencia de E93, las cucarachas
ninfas permanecen como ninfas permanentes. De manera similar, en el
escarabajo Tribolium la forma adulta no se hace si se suprime la
expresión de E93. La supresión de E93 en el último estadio de la larva
resulta en una continua muda larval [125], mientras que el derribo en la
pupa resulta en la muda a otro estadio pupal [3] (Figura 6A). E93
funciona como una proteína pionera, abriendo sitios en toda la
cromatina para proporcionar accesibilidad a los conjuntos de genes
necesarios para hacer el adulto [126]. También reprime la expresión
amplia cerrando la cromatina alrededor del gen [126].
El Kr-h1 a menudo también se considera como el gen de
especificación del estadio para los estados ninfal y larval y, por lo tanto,
proporciona una razón para equiparar las ninfas y las larvas
[24,97,127]. Sin embargo, su participación en la muda de las larvas y
ninfas está en el contexto de su función de mediación de la acción de
JH [128.129]. Las mudas tempranas de las larvas que no requieren JH
tampoco requieren Kr-h1 [108], por lo que el Kr-h1 no es necesario
para la muda de las larvas per se. Además, el Kr-h1 pasa más tarde a
controlar la formación de la pupa en los casos en que JH reaparece en
la prepupa para evitar la formación de adultos precoces (por ejemplo
[130]).
La expresión Kr-h1, amplia, y E93 son todas sensibles a las señales
hormonales y también interactúan entre ellas (Figura 6B). Como se ha
señalado anteriormente, el Kr-h1 es el principal objetivo del JH y los
niveles de la proteína Kr-h1 se utilizan a menudo como un sustituto del
título de JH. La expresión amplia y E93 son inducidas por los
ecdisteroides pero también pueden ser inducidas por otros factores que
aparecen durante el último estadio larvario (por ejemplo [41]). Kr-h1
suprime la expresión de E93 tanto en las cucarachas [24] como en el
Tribolium [130]. Sin embargo, la relación de JH/Kr-h1 con la expresión
amplia es compleja. JH mantiene la expresión amplia en las ninfas
[120, 122], pero en las larvas holometabólicas JH inhibe la aparición de
la Amplia [116]. Pero una vez que las células larvarias se comprometen
con la pupila por inducción amplia, ahora actúan
Current Biology
Review
de manera "ninfal", porque JH ahora mantiene una amplia expresión.
De hecho, las pupas tratadas con JH mantienen una amplia expresión
y emprenden una segunda muda pupal en lugar de convertirse en
adultas [113]. Dependiendo de la especie, Broad y E93 pueden
inhibirse mutuamente [113,130].
Implicaciones Evolutivas de los Genes de
Especificación de Etapas y su Control
Ha habido una continua controversia sobre cómo los estadios ninfales y
adultos de las formas hemimetábolas evolucionaron a los estadios
larvarios, pupales y adultos del Holometabola. Broad y E93
proporcionan importantes conocimientos sobre esta controversia pero,
a primera vista, conducen a conclusiones algo contradictorias. Los
datos amplios apoyan la homología de la ninfa a la pupa. La proninfa
hemimetábola y la larva holometábola expresan relativamente poco
ancho, pero este gen se expresa entonces de forma prominente en la
ninfa y la pupa, respectivamente. La importante cuestión que se ha
discutido anteriormente es si broad actúa como un gen de
especificación del estadio para la ninfa, como lo hace para la pupa. La
resolución de este punto es necesaria para establecer la función
ancestral de broad y proporcionará una visión más clara del origen del
estadio pupal.
El papel del E93 ha presentado una imagen algo diferente. Está
claro que E93 determina la etapa adulta tanto en los insectos hemíticos
como en los holometálicos. En las ninfas hemimetabólicas, JH,
actuando a través de Kr-h1, suprime E93 y por lo tanto mantiene el
estado ninfal. En ausencia de Kr-h1, E93 se expresa y causa la
diferenciación adulta. Esto ha sido referido como la vía MEKRE93 [24],
con E93 proveyendo la puerta de entrada a la metamorfosis. Este es
también el caso del escarabajo Tribolium castaneum. La disminución
de los niveles de JH y Kr-h1 en el último estadio de la larva permite la
expresión de E93, pero el resultado es una pupa en lugar de un adulto.
En referencia a la inducción inicial de E93, el escarabajo muestra una
progresión de dos mudas de larva a pupa y luego de pupa a adulto en
lugar de una sola muda a adulto. Esto es coherente con la idea de que
la pupa surgió de la muda terminal que se dividió en dos partes para
dar cabida a la transición de larva a adulto [23]. En el escarabajo, sin
embargo, la expresión de E93 es transitoria porque JH y Kr-h1
reaparecen durante la transición larvario-pupal para suprimir E93 y
permitir la expresión amplia para causar la diferenciación pupal. La
desaparición de JH después de la ecdisis de la pupa permite entonces
la expresión de E93, la supresión de la diferenciación amplia, y la
diferenciación adulta.
Aunque la expresión E93 proporciona la entrada en la metamorfosis
en el Tribolium, aparentemente no cumple esta función en el
Holometabola más derivado, como la Drosophila. E93 todavía
determina el estadio adulto pero no se expresa hasta el final del
período preparatorio [131]. Además de especificar el estadio pupal en
las moscas, broad ha asumido el papel de guardián metamórfico, como
lo demuestran los mutantes nulos de broad que arrestan como larvas
premetamorfas [112].
Este cambio de E93 a amplio en el control de la entrada en la
metamorfosis puede explicar la variación observada dentro del
Holometabola en la necesidad de la señalización JH/Met/Kr-h1 para
hacer una pupa. Mientras que la falta de expresión de Kr-h1 durante la
transición larvario-pupal de Tribolium da lugar a que las primarias
imaginarias se sometan a una diferenciación adulta, en lugar de pupal,
no ocurre lo mismo con la falta de JH en muchas larvas de
lepidópteros, como Bombyx mori, o en Drosophila. En el Tribolium, el
uso del E93 para iniciar la metamorfosis significa que debe ser
suprimido por el JH/Met/Kr-h1
Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019 R1263
Current Biology
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para permitir una amplia expresión y el desarrollo de la pupa [125]. Sin
embargo, con el retraso de la expresión de E93 en Drosophila, ya no se
necesita JH durante la transición larvopupal para suprimir la
diferenciación precoz en el adulto. Sin embargo, JH sigue presente en
ese periodo en las moscas, debido a su segunda función de evitar que
los altos niveles de 20E de la muda de la pupa terminen los programas
de patrones metamórficos [105,106].
Más Información Sobre los Ciclos de Vida Derivados
Kr-h1, broad y E93 son también genes clave involucrados en los ciclos
de vida altamente derivados que se ven en algunos insectos. Dentro de
los órdenes hemimetabólicos, una historia de vida holometálica ha
evolucionado en los trips (orden Thysanoptera) y en algunos
Hemípteros: los insectos escama (Coccidae), las cochinillas
(Pseudococcidae) y las moscas blancas (Aleyrodidae). Los trips tienen
dos estadios larvarios que se alimentan, seguidos de dos o tres
estadios pupales que no se alimentan antes de convertirse en adultos.
La expresión amplia es baja en el primer estadio larvario, pero luego se
eleva en el segundo estadio larvario en preparación para la producción
de la propupa (el primer estadio pupal) y continúa durante la
producción de la pupa [7]. En los hemiptéranos, sólo los machos
muestran una metamorfosis compleja. Al igual que en los trips, en la
cochinilla harinosa japonesa, Planococcus kraunhiae, las amplias
transcripciones aparecen como la "larva" que se alimenta muda a una
prepupa y luego a una pupa [132]. Tanto en los trips [133] como en las
cochinillas harinosas [6], la expresión de E93 acompaña a la expresión
de la anchoa cuando entran en la serie de pupas, pero luego E93
continúa sola en la formación del adulto.
Esta evolución paralela de un ciclo vital similar al del Holometabola,
un grupo de insectos que son claramente miembros del clado
hemimetábulo, puede proporcionar una valiosa información sobre dos
aspectos de los cambios que dieron lugar al Holometabola. En primer
lugar, su metamorfosis desde su estado larvario a su estado adulto no
implica un solo estadio similar a una pupa, sino más bien dos o tres de
esos estadios. Esto difiere de la idea de que el instar ninfal terminal se
especializó como la pupa homometabólica (por ejemplo [22]). La
estrategia neometabólica se parece más a nuestra propuesta de que la
conversión de la proninfa en un estadio larvario de alimentación dio
lugar a una presión de selección para concentrar la actividad de
alimentación en la larva y hacer de la ninfa un estadio de transición
[26]. A esta transformación le siguió una reducción del número de
instantes de ninfa (pupa) a un solo instante de pupa, evidente en el
Holometabola actual. Los trips también pueden estar en el proceso de
tal reducción con un suborden (la Tubulifera) que tiene tres instantes de
pupa mientras que el otro (Terebrantia) ha reducido la pupa a dos
instantes.
Aunque los machos de los Hemípteros que muestran un estilo de
vida neometabólico hacen un macho móvil y alado, las hembras son
neotensas y permanecen sésiles y como larvas/náfagas. Típicamente,
estas hembras se reproducen asexuadamente durante parte del año y
sólo comienzan a producir machos en momentos de estrés. La
expresión de E93 es muy baja en tales hembras, asociada con su
fracaso para asumir una forma adulta [6].
Dentro del Holometabola, también se ha desarrollado la neotenia en
los Strepsiptera, un orden de insectos parásitos que están relacionados
con los escarabajos y son parásitos de las avispas y los Hemípteros.
La hembra permanece larviforme y nunca abandona el huésped
mientras que el macho sufre una metamorfosis normal. El macho
muestra la expresión esperada de ancho y E93 durante su progresión
metamórfica mientras que la hembra expresa poco o nada de estos dos
factores de transcripción [4,5].
R1264 Current Biology 29, R1252–R1268, December 2, 2019
Conclusiones
La vida de los insectos está dominada por las mudas que segmentan
su historia de vida en instantes discretos que permiten el crecimiento y
los cambios en la morfología. Cada muda es iniciada y coordinada por
un gran pulso de ecdisteroides que actúan a través de un circuito
genético conservado, la cascada de Ashburner, que traduce las
características del pulso de esteroides en la síntesis de una nueva
cutícula y el desprendimiento de la antigua (Figura 6D). Sin embargo, el
carácter de la muda está determinado por los genes de especificación
de etapas que seleccionan los conjuntos de genes efectores sobre los
que actúa la cascada. En el Holometabola, los genes de especificación
E93, y probablemente también los amplios, funcionan como proteínas
pioneras que abren grandes tramos de cromatina permitiendo el
acceso a los factores de transcripción necesarios para la diferenciación
de adultos y pupas, respectivamente. JH, actuando a través del factor
de transcripción Kr-h1, ejerce el mayor control sobre los genes de
especificación de etapa. La forma en que las hormonas del desarrollo y
los genes de especificación de estadios se relacionan con la evolución
de la ninfa y el patrón adulto de los insectos hematófagos en el patrón
larva/ pupa/adulto del Holometabola ha sido un tema persistente de
controversia.
La evolución de la larva homolétolica implicó alteraciones
fundamentales en la embriogénesis. En los órdenes hemimetabólicos,
la embriogénesis suele generar una aproximación en miniatura de la
forma adulta. En el Holometabola, por el contrario, la embriogénesis se
altera para producir una larva cuya forma tiene poca relación con la del
adulto. Se truncan los programas ancestrales de crecimiento y el
patrón, y las estructuras resultantes se adaptan para su uso en la
nueva forma larval. Este truncamiento también dio lugar a primordías
persistentes que sufren morfogénesis diferida al final del crecimiento
larval para hacer la primera aproximación del adulto en la forma de la
pupa. Las fases de crecimiento embrionario y el patrón alterado para
hacer la larva fueron las que ocurren durante una etapa embrionaria
críptica, la proninfa, que precede a la formación de la ninfa y a la
aparición normal de JH. Dada la sensibilidad de la etapa de la proninfa
a la exposición precoz de JH, un avance heterocrónico de JH en esta
etapa anterior puede haber causado el paro del patrón necesario para
formar la larva. La proninfa muestra bajos niveles de ancho en
comparación con la ninfa y esta característica de poca o ninguna
expresión de ancho en la larva es consistente con su origen en el
estadio de proninfa.
Aunque existen pruebas contradictorias sobre si Broad es realmente
un gen de especificación de etapa ninfal, su expresión es claramente
una característica de las ninfas (figura 6C). JH, a través de Kr-h1,
mantiene una amplia expresión a través de los estadios ninfales. Una
relación similar de Broad con JH también es evidente en la pupa
holometabólica. Una vez que las células larvarias se comprometen con
la pupa y comienzan a expresarse ampliamente, JH ya no puede
apagar esa expresión y, de hecho, JH es necesaria para una amplia
expresión durante la muda de la pupa para evitar la diferenciación
precoz de los adultos. Además, el tratamiento de las pupas con JH
favorece la reintroducción de la amplitud, lo que da lugar a una
segunda pupa en lugar de un adulto. Lo que no entendemos, sin
embargo, es cómo la JH suprime la expresión amplia en los estadios
larvarios mientras promueve la expresión amplia en las ninfas. La
respuesta puede estar en el control de la expresión amplia en la
proninfa, una relación que no ha sido examinada.
E93 determina la etapa adulta tanto en los insectos hemimetábulos
como en los holometábulos, pero su relación tanto con los amplios
como con los JH (vía Kr-h1) es compleja y diferentes características
apoyan puntos de vista alternativos sobre el origen de la pupa.

La transición entre ninfas y adultos es simple: JH, actuando a través de
Kr-h1, suprime E93 y mantiene amplia; la disminución de JH en el
último instar ninfal al baja la expresión de E93, suprimiendo así tanto
amplia como causando la diferenciación adulta. Esta relación se
modifica un poco en los holometabolanos basales, representados por el
Tribolium. Aquí la supresión de E93 por JH-Kr-h1 en la larva también
controla la entrada a la metamorfosis y esta relación se toma como
apoyo de que la transición larvario-pupal corresponde a la transición
ninfómana-adulta [24,97]. Sin embargo, la represión de E93 por JH-Kr-
h1 se ve de nuevo en la siguiente muda de la pupa al adulto. La muda
pupa-adulto es más parecida a la última muda ninfal, porque Broad
está ahora presente y JH-Kr-h1 funciona en la pupa para mantener
Broad e inhibir E93. Incluir a Broad en la relación indica que la muda
pupa-adulto corresponde a la muda ninfal-adulto.
Sin embargo, para interpretar finalmente las relaciones que se ven
en la metamorfosis, necesitamos más información sobre la regulación
hormonal de las mudas embrionarias de las especies más basales. Las
relaciones hormonales han continuado cambiando después de la
evolución de la metamorfosis completa, como se ve en grupos
altamente derivados como los Dípteros superiores (Figura 6C). En
estos insectos la entrada a la metamorfosis se ha dado ahora a lo
ancho y la expresión de E93 se retrasa hasta el final de la etapa pupal
al comienzo de la diferenciación adulta. Este cambio ha disminuido el
papel del pico de JH prepupal, y simplificado la regulación endocrina
sobre los metamorfosis.
AGRADECIMIENTOS
IAgradezco a Lynn Riddiford por las numerosas discusiones durante la
preparación de este artículo y por las lecturas críticas del manuscrito.
Importantes comentarios sobre el manuscrito también fueron proporcionados
por Marek Jindra, Joel Kingsolver, Stuart Reynolds y revisores anónimos.
Agradezco a Marek Jindra por suministrar las imágenes para la Figura 5D,E.
Muchas de las ideas surgieron durante el curso de la investigación
financiada por la Fundación Nacional de Ciencias, los Institutos Nacionales
de Salud y el Instituto Médico Howard Hughes.
REFERENCIAS
1. Konopova, B., and Jindra, M. (2007). Juvenile hormone resistance
gene Methoprene-tolerant controls entry into metamorphosis in
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