CUESTIONARIO LECTURA ARTICULO CIENTIFICO

MICROORGANISMOS AISLADOS DE INTERÉS INDUSTRIAL

Sebastian Garzon Ruiz - 1006410888

1. ¿Qué grupo de microorganismo estudiaron en el artículo que le correspondió leer?
En el artículo leído se estudiaron microorganismos lipoliticos aislados de aguas
residuales
2. ¿Cuáles son las características de ese grupo de microorganismos? Puede escribir
una o varias.
- Las lipasas producidas por M.O lipoliticos son uno de los grupos de enzimas
con mayor cantidad de aplicaciones industriales y biotecnológicas.
- Cuando actúan en medio acuoso pueden producir glicerol, ácidos grasos,
monoglicéridos y diglicéridos, mientras que en ausencia de agua, la reacción es
reversible (esterificación, interesterificación, y transesterificación), generando
glicéridos.
- Las lipasas son proteínas ubicuas distribuidas ampliamente en la naturaleza,
presentes en los animales, en las plantas y en los microorganismos, éstos últimos
(bacterias y hongos).
- La variabilidad, la adaptabilidad y las ventajas en la producción de las lipasas
microbianas.
3. ¿Qué muestras utilizaron en el estudio para aislar a los microorganismos?
Muestras de sedimentos de aguas residuales con grasas provenientes de una
industria productora de aceites vegetales (Barranquilla, Colombia).
Para el aislamiento se utilizó el método de siembra por extensión en superficie.
4. ¿Qué significa la palabra screening en microbiología industrial?
Detección y aislamiento de microorganismos de interés industrial de una población
compleja de organismos utilizando procedimientos selectivos.
Screening Primario: Detección y aislamiento de microorganismos potencialmente
útiles.
Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening
primario para separar los que tienen interés potencial de los que tienen interés real y
mejorar estas cepas seleccionadas.
5. ¿Por qué usaron los medios seleccionados en el artículo?
Evaluación de la actividad enzimática en los aislamientos
6. ¿En la investigación, realizaron la conservación de los microorganismos aislados?
¿Si es así, de qué manera lo hicieron?
Las cepas seleccionadas fueron purificadas por siembra en medio de cultivo solido
GEN (glucosa, extracto de levadura, cloruro de sodio, agar) a 30°C por 24 horas en
el caso de las bacterias, y los hongos en el medio de cultivo sólido PDA (papa
dextrosa agar, Merck) a 25-30°C por 72 horas. Posteriormente, cada aislamiento fue
conservado por triplicado en microtubos con caldo conteniendo glicerol al 40% y
almacenados a -20°C.
7. ¿Qué técnica o técnicas usaron los investigadores para determinar la actividad:
lipolítica de los microorganismos?
 - Detección de la actividad lipolítica: Los microorganismos fueron cultivados en 5
mL del medio de cultivo mínimo FAM + aceite de oliva (1% v/v) modificado, pH
7,0.
- Para la detección hidrolítica de los triacilgliceroles se emplearon dos
estrategias:
1. la primera consistió de cajas de Petri con agar FAM + aceite de oliva (1% v/v)
Suplementado con Rodamina B al 0,001%
2. La segunda estrategia consistió en utilizar agar Tributirina (peptonade carne 2,5
g/L, Bacto peptona 2,5 g/L, extracto de levadura 3,0 g/L, tributirina 10 mL/L y agar
20 g/L)
- Ensayo con lipasa extracelular: fue cuantificada por un método
spectrofotométrico, usando p-nitrofenilpalmitato
- Efecto del pH en la producción de la enzima: Para la determinación del pH
óptimo de crecimiento del microorganismo y para la producción de la enzima
- Efecto de la temperatura en la producción de la enzima: Para la determinación
de la temperatura óptima en la producción de la lipasa.
-Caracterización bioquímica y molecular del microorganismo con mayor
actividad lipolítica: El microorganismo que mostró la mayor actividad lipolítica
fue caracterizado bioquímicamente usando el sistema MicroLogTM Minutes, GN2
MicroplateTM BIOLOG y el programa del sistema de identificación microbiana,
MicroLogTM y evaluado en diferentes medios de cultivo microbiológicos.

8. ¿Los autores pudieron aislar los microorganismos exitosamente? ¿Cuáles fueron los
resultados más relevantes del ensayo?

Uno de los M.O obtenidos fue Serratia marcescens ECU1010 y Serratia marcescens.
Se obtuvieron 149 aislados microbianos, de éstos 128 correspondían a bacterias y
21 a hongos. De los 149 aislados obtenidos, 37 (cerca del 25%) mostraron actividad
lipolítica en medio FAM y halo de lipólisis en agar tributirina.
Con el p-NPP como sustrato, la cepa CCEI-1 mostró la mayor capacidad para
sintetizar lipasas a un pH de 8,0, aunque, su actividad lipolítica también fue estable
en rangos de pH neutros y alcalinos (7 y 9) evidenciados por la hidrólisis enzimática
entre el 74 y 81%, respectivamente.
9. ¿Cuál fue la conclusión más importante del artículo?
Las aguas residuales con altos contenidos de grasas y aceites, forman ambientes que
estimulan el desarrollo de poblaciones microbianas que usan los lípidos presentes en
el medio como fuente de carbono y sustrato para su metabolismo, estas condiciones
favorecieron el aislamiento de 37 microorganismos productores de lipasas, entre
ellos la cepa CCE-1 identificada como S. marcescens,
 10. ¿Qué técnicas de conservación de microorganismos a nivel industrial existen?
Explique con un diagrama o mapa conceptual una de e

TÉCNICAS DE CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS

A NIVEL INDUSTRIAL
Los métodos de conservación para microorganismos se agrupan
atendiendo a los factores tiempo y características fisiológicas de
la cepa en tres grandes grupos

Largo plazo Corto plazo Métodos alternativos

Garantizan al máximo la Son los que se utilizan cuando En este grupo se engloban
estabilidad genética, al evitar no se pueden emplear los métodos no empleados
la aparición de generaciones métodos de elección, habitualmente, pero a los que
sucesivas y por tanto son los fundamentalmente por carecer es necesario recurrir a la hora
más utilizados en M.O que de los equipos necesarios, de conservar grupos deM.O
han sido sujetos a porque la cepa microbiana no muy determinados que no
manipulaciones genéticas resiste los tratamientos de la resisten bien la iofilización o la
conservación por estos congelación, como por
métodos o porque las cepas ejemplo los géneros
contengan construcciones bacterianos Spirillum,
genéticas trayendo consigo Rhodospirillum, etc.
que estas pierdan elementos,
determinadas características
especiales que se utilicen

CONGELACIÓN LIOFOLIZACION

Se congelan las células en suspensión en
un líquido con un agente crioprotector y se
guardan a temperaturas inferiores a cero
grados centígrados, con lo que el agua se
congela, de esta forma, al no disponer las
células de agua en forma líquida, no hay
crecimiento
Factores que influyen
en la viabilidad y
estabilidad de las
células conservadas
- Edad de las células
- Velocidad de congelación y
descongelación.
- T° de almacenamiento
- Empleo de agentes crio
protectores
Este método es uno de los más eficaces para la
conservación de muchos tipos de M.O como:
bacterias, hongos, bacteriófagos y virus;
La liofilización consiste en la eliminación
del agua de una sustancia congelada por
sublimación del hielo bajo vacío. Este
proceso consta de tres etapas, la
precongelación del producto para asegurar
una estructura completamente congelada;
el secado primario con el que se
elimina la mayor parte del agua por
sublimación; y el secado secundario con el
que se remueve el agua que queda ligada.
Los factores que influyen específicamente en
la eficacia de la liofilización
- Tipo de microorganismo
- Concentración celular

- Temperatura durante la sublimación

- Grado de deshidratación alcanzado

-Atmósfera de oxígeno en el tubo

- Condiciones de almacenamiento

-

Corto plazo
Por suspensión en agua
Por transferencia
destilada o en agua de
periódica o subcultivo.
La cepa microbiana se guarda en
forma de cultivo activo en el medio
de cultivo en el que ha crecido,
consiste en la transferencia del
cultivo a un medio de cultivo
fresco a intervalos que aseguren la
viabilidad del mismo. Estos
intervalos varían dependiendo de
las características del
microorganismo en cuestión,
algunas especies requieren ser
transferidas a nuevos medios
después de días o semanas, y otras
después de meses o años.
Métodos alternativos
- Desecación sobre sustratos
inertes.
mar estéril - Desecación en papel de filtro.
- Desecación en suelo, arena,
Es un método alternativo muy silicagel, etc.
utilizado y que da altos porcentajes - Desecación en bolitas de
de viabilidad en diversos tipos de alginato.
microorganismos, tanto hongos - Desecación en sal gorda para
filamentosos como levaduras y halobacterias.
algunas bacterias. Consiste en - Recobrado de las células.
suspender en agua estéril unas
cuantas células del cultivo que se
quiere conservar. Se pueden
preparar en criotubos de los
anteriormente mencionados. En
este caso la concentración celular
no debe ser superior a 104 -105
células/ml en el caso de bacterias.
Los resultados obtenidos en
laboratorios de microbiología en la
conservación de microorganismos
por este método muestran altos
porcentajes de viabilidad en
períodos a veces superiores a 5
años.