Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias

Biológicas.
MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

Producción de amilasas por microorganismos halófilos

y no halófilos en cultivo por lote sumergido.
Objetivo general.
 Evaluar la cinética de crecimiento y producción de amilasas provenientes de
microorganismos halófilos y no halófilos.
Objetivos específicos.
 Evaluar el crecimiento de un microorganismo amilolítico y la producción de
enzimas.
 Calcular la actividad enzimática de α amilasa presente en el biorreactor en un
medio almidón Castañeda.

Resultados.

T (h) As 600nm A residuales UA= pH

(mg/ml) nmol maltosa
ml h
0 0.076 0.138 29.88 5.62
6 0.197 0.119 3.56 6.67
12 0.173 0.122 15.40 8.09
18 0.192 0.152 45.22 7.72
24 0.232 0.131 75.046 8.60
30 0.286 0.158 5.74 8.71
36 0.189 0.248 3.103 8.65
Tabla 1. Resultados experimentales.

120.0000 10.00
110.0000 9.00
100.0000
8.00
90.0000
7.00
80.0000
6.00
D.O., Az, UA

70.0000
60.0000 5.00
pH

50.0000 4.00
40.0000
3.00
30.0000
2.00
20.0000
10.0000 1.00

0.0000 0.00
0 6 12 18 24 30 36

tiempo (h)

As 600nm Az residuales (mg)

UA=(nmol maltosa)/(ml h) pH
Grafica 1. Resultados experimentales.
 T (h) Abs
600nm
0 0.076
6 0.197
12 0.173
18 0.192
24 0.232
30 0.286
36 0.189

Tabla 2. Crecimiento de microrganismos en el biorreactor

0.29
0.23
0.2 0.17 0.19 0.19

0.10.08
AS

0.01
0 5 10 15 20 25 30 35 40
tiempo (horas)

Grafica 2. Crecimiento de microorganismos en escala logarítmica.

ln ( X 2 )−ln ( X 1 )
𝜇 𝑚𝑎𝑥 ¿
Δt
ln ( 0.197 )−ln ( 0.076 )
𝜇 𝑚𝑎𝑥 ¿ =0.158 h−1
( 6−0 )
ln ( 2 ) ln ( 2 )
t d= = =4.39horas
μ Máx . 0.158 ❑

T(h) ΔUA/6 ΔX/6

6 0 0.020
12 1.972 0
18 4.970 0.003
24 4.970 0.006
30 0 0.009
36 0 0
 Tabla 3. Resultados para Qx y Qp
6 0.03

5
0.02

4
0.02
3
QP

Qx
0.01
2

0.01
1

0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
T (horas)

ΔUA/6 ΔX/6
Grafica 3. Qx y Qp

Discusión de resultados.
En el presente trabajo, se utilizó como microorganismo de estudio a un aislado
proveniente de una muestra de papa, que previamente fué purificada, de modo que la
actividad amilolítica depende de este microorganismo.
En un trabajo donde se estudió el crecimiento y la producción de amilasa extracelular por
Aspergillus ochraceus (Ely Nahas , 2002) fueron realizados en un medio estacionario. El
máximo crecimiento del fungo fue encontrado después de 5 días de incubación a 30°C,
pero la máxima producción de amilasa fue obtenida después de 2 días. La mayor
producción de amilasa se obtuvo con lactosa, maltose, xilose y almidón como fuentes de
carbono. La producción de amilasa extracelular y el crecimiento micelial fueron
influenciados por la concentración de almidón. Otros carbohidratos favorecieron el
crecimiento pero no indujeron la síntesis de amilasa y glucosa la reprimió, indicando
represión catabólica en este microorganismo. La presencia de ambos mecanismos de
inducción y represión sugieren que por lo menos estas formas múltiples de regulación
están presentes en A. ochraceus.
Esto indica que la fuente de carbono favorece la producción de amilasas teniendo como
principal almidón, ya que las enzimas hidrolizan esta molecula mediante el rompimiento
de enlaces α 1-4, pero el crecimiento del microorganismo se ve favorecido por otros
carbohidratos como la glucosa que puede funcionar como represor por catabolito debido a
que el microorganismo se dedica a generar mayor biomasa pero no usar α amilasa. Esto
lo podemos ver en la gráfica 1 ya que el crecimiento fue muy poco de las 6 a las 30 horas
pero en este tiempo se observó la mayor actividad de la enzima.
La actividad enzimática observamos en la gráfica 1 que a partir de las 12 horas aumenta
teniendo como máxima a las 24 horas y la concentración de azúcares reductores se ve a
partir de las 6 horas hasta las 30 horas esto tiene sentido ya que al haber azúcares en el
medio el microorganismo aumentó su actividad para poder utilizarlos, estos dos
parámetros (azúcares reductores y actividad enzimática) guardan una estrecha relación,
en este caso podemos decir que la actividad enzimática fue inducida por la presencia de
azúcares en el medio.
Conclusiones.
 La producción de enzimas está asociada al crecimiento del microorganismo
estudiado.
 La actividad de α amilasa se ve favorecida por la cantidad de azucares reductores
en el medio.

Bibliografía.
 Ely Nahas, Mirela M. Waldemarin Control of amylase production and growth
characteristics of Aspergillus ochraceus
https://www.medigraphic.com/pdfs/lamicro/mi-2002/mi021a.pdf?
fbclid=IwAR3y8gCNgRyNrIP1iTds3mDxH9453qC_8PHJoF7Hc8O78RTvelJHdPO8
87k
 Meléndez Estrada M. Produccion, extracción, purificación usos y aplicaciones de la
enzima amilasa en la industria de los alimentos
http://repositorio.uaaan.mx:8080/xmlui/bitstream/handle/123456789/323/58245s.pd
f?sequence=1&fbclid=IwAR0U-
yNomYNndTsLIYWfngCm_2ow8ViirRRRDFF5LzHXShTHDzMbkHncHNA
