Instituto de Ciencias y Estudios Superiores de Tamaulipas, A.

Practica #6:

Método de aislamiento por siembra por estría en placa

Asignatura: Microbiología

Docente: Q.F.B Betsy Janet Rojas Ahumada

Alumna: Evelyn Vianey Vargas Méndez

Grado: 4º semestre Grupo: “A”

Fecha de elaboración: 11/02/2020

Fecha de entrega: 18/02/2020

Objetivos

 Conocer la estructura de las bacterias en diferentes medios

 Realizar el sembrado por estria en las cajas petri

Fundamento

. El aislamiento

Para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir, una sola célula de

un microorganismo en un medio solido o liquido, esterilizado previamente. De esta
manera, aislamos un solo microorganismo del resto y se podrá multiplicar en
condiciones favorables. Un clon está constituido por una población de células
descendientes de un solo microorganismo. Una colonia es un clon lo
suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un medio
sólido. Una colonia de bacterias de tamaño medio contiene, aproximadamente,
109 células individuales, casi tantos individuos como personas pueblan la Tierra.

Para aislar células individuales, los microorganismos han de ser diluidos,

debido al gran numero en que normalmente están presentes. La dilución se
realiza, normalmente, por uno de los siguientes sistemas: siembra por estría en
placa, vertido en placa y extensión en placa.

El método de siembra por estría en placa Es el método más fácil y el más

usado para obtener cultivos axénicos . Para ello, con un asa de siembra se toma
una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la
superficie de un medio sólido preparado en una placa Petrí (a las placas Petri
también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías
en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio
menos microorganismos. A continuación, se fiamea el asa, se toca en la región
donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma
técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias
veces se logra separar células individuales.
 A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo
que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para
formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon
derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células
quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por
tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene
repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. La
colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad,
cultivos axenicos.

Material y reactivos:

• Cristal violeta
• Lugol
• Alcohol acetona
• Safranina o fucsina básica
• Portaobjetos
• Aceite de inmersión
• Abate lenguas
• Hisopos
• Microscopio
• Caja de tinción
• Agua destilada
• Mechero de bunsen
Método para realización de la técnica

I. Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un hisopo (bastón

estéril de algodón).
II. Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
III. Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
IV. Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un
minuto.
V. Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana
(lugol). El lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en
agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
VI. Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona
durante unos segundos.
VII. Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para
distinguir las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar
de incoloras) con un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
VIII. Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de
color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.

Método de aislamiento por siembra por estría en placa: Para obtener un

cultivo axénico:

a. esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un

mechero.
b. introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra.
c. sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en
una placa Petri
d. volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada
y hacer un segundo grupo de estrías en una región nueva de la
placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta
conseguir que los grupos de células se diluyan y se separen células
aisladas.
e. Después de la incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para
estar seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para
ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una segunda
placa.

Diagrama de aislamiento
 Esterilizar un
asa de siembra Incubar
por flameado

Repetir el
Recoger
proceso de
muestra
siembra

Sembrar Volver a
haciendo esterilizar el
estrias asa

Diagrama de la técnica

extender la
recoger muestra muestra sobre fijar la muestra
el portaobjetos

aplicar el tinte
enjuagar entre
violeta y esperar aplicar lugol
cada tincion
un minuto

aplicar fuscina
enjuagar con observar al
para distinguir
alcohol cetona microscopio
b. gram(-)

Resultados y observaciones
haciendo la inoculacion incubacion
por estria en diferentes
medios

medios que fueron viables de

acuerdo al crecimiento de las
colonias

agar vogel
sal y manitol jhonson

agar
sangre agar s. 110

Conclusión:

La realización de esta práctica fue de suma importancia debido a que en ella se

dio la oportunidad de conocer un nuevo método de siembra, asimismo fuimos
capaces de identificar los diferentes microorganismos en sus respectivas colonias
ya que se encontraban en condiciones para su facilitada proliferación.

Bibliografía

https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-
aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02
/56/cap309.htm