Índice

1. Introducción 2

2. Marco Teórico 2

2.1 Anatomía del Páncreas.........................................................................2

2.1.1 Localización.........................................................................................3

2.1.2 Descripción macroscópica.................................................................4

2.2 La insulina como molécula de interés fisiológico................................4

2.3 Mecanismo de acción de la insulina en mamíferos.............................5

2.4 Insulina en microorganismos eucariotas..............................................6

2.5 Insulina en bacterias..............................................................................7

3. Objetivo general 8

3.1 Objetivos particulares............................................................................8

4. Hipótesis 8

5. Metodología 9

5.1 Extracción de insulina y procesamiento del tejido...............................9

5.2 Diagrama HACCP................................................................................10

5.3 Ensayo de Bioidentidad (Convulsiones en ratones)..........................11

5.4 Pruebas de evaluación de calidad.........................................................13

5.5 Etiquetado y Envasado.............................................................................13

1. Cronograma 13

2. Materiales, equipo y reactivos. 14

3. Referencias 15

0
1. Introducción
En Mexico uno de los recursos que ha tenido mayor relevancia a lo
largo de la historia sobre todo en las comunidades de las zonas
aridas y semiáridas son las especies del genero Agave. Esta planta
mejor conocida como maguey, se ha hecho notar por la importancia
que adquiere desde el punto de vista agroecológico y
socioeconómico por los multiples usos dependiendo de la región
donde se ecuentre que van desde su empleo para la elaboración de
mezcal, tequila, pulque, composta, bioplasticos, extracción de
compuestos bioactivos, entre otros.
Estas actividades generan una gran cantidad de residuos
agroindustriales, los cuales pueden ser aprovechados para obtener
productos de intreres industrial, entre estos desechos se encuentra
el bagazo y pencas de Agave augustifolia, A. cupreata, A. tequilana
Weber, A. salmiana, A. atrovirens, A. mapisaga principalmente.
Debido a que este material es rico en lignocelulosa, azucares y
metabolitos secundarios, pueden ser fraccionados para
posteriormente se utilizados en la obtención compuestos bioactivos
tales como saponinas y sapogeninas. Recientemente se han
estudiado y aislado estos compuestos por su importancia a nivel
industrial ya que las saponinas son triterpenos y glicosidos
esteroidales que consisten en agliconas no polares con una o mas
fracciones de monosacáridos, esta combinación de elementos
polares y no polares explican su comportamiento como jabon en
soluciones aucosas. Debido a sus propiedades como agente
espumante las saponinas son utilizadas en la industria comestica y
farmacéutica.
Pos su parte las sapogeninas exhiben actividades farmacológicas,
lo que las ha convertido en objeto de estudio para el desarrollo de
nuevos fármacos, entre tales actividades se encuentran efectos
antiiflamatorios, anticancerígenos, antibacteriales, antifungicos y
antivirales. De tal manera que han sido consideradas como una
alternativa de excelentes posibilidades comerciales y de
industrialización debido a su alto precio en el mercado el cual puede

1
 variar de acuerdo a su nivel de pureza desde 6 hasta 142 dolares
por gramo de producto.

2. Marco Teórico
Insulina

3. Objetivo general Páncreas de PCC2 Condiciones

Obtener saponinas y sapogeninas a partir de residuos
adecuadas de
Cerdo almacenamiento y
agroindustriales como bagazo y pencas de diferentes especies de
extracción.

agave generados por productores de tequila, mezcal o pulque de

diferentes regiones de Mexico. Lavar con SSF
PCC2 Proporción exacta
. para la extracción. estéril al 0.9% y
almacenar en
3.1 Objetivos
15 mL departiculares
HCl congelación a -4º C
(1M) / 1 L de
Caracterizar fisicoquímicamente el extracto de pencas y bagazo de cada
etanol 75%
región.
PCC2 Conocer la Realizar la
Extraer
cantidad parasaponinas/sapogeninas
realizar la de pencas y bagazo pertenencientes a
proporción ácido-
las diferentes
cuantificación de la especies de agave.
alcohol/g de tejido.
insulina obtenida.

Realizar tamizaje fitoquimico de cada extracto perteneciente a las

Agregar cantidad
diferentes especies de agave.
definida de l-insulina
PCC2 Mantener las
conocida
Cuantificar e indentificar la saponina y sapogenina
Homogenizar mayoritariaindicaciones
el páncreas en cada de
temperatura y tiempo.
extracto. en licuadora y dejar en
agitación 12 hrs. a 4°C

4. Hipótesis
La obtención y cantidad de saponinas/sapogeninas presentes en los
residuos agroindustriales como bagazo ydurante
Centrifugar pencas generados por
productores de tequila, mezcal 15ymin.
pulquea 3000 rpm influenciados por
se verán
las diferentes especies utilizadas ena la
PCC2 Condiciones
4° producción
C de cada una de
las bebidas fermentadas
adecuadas de y destiladas.
centrifugación y
temperatura.

. Realizar reextracción
PCC2 Cuidar que la
(sobrenadante separar y
extracción de
mantener en hielo. sobrenadante sea limpia.
5. Metodología
Volumen
equivalente de
6. Diagrama HACCP
alcohol-ácido Resuspender en
alcohol-ácido y poner
PCC2 Medición exacta del
en agitación 1 hra. 2
volumen.
Más.
 Repetir centrifugación
agregando ambos
sobrenadantes.
Ajustar a un pH
de 8.5 a 9.0 con
NaOH
Dejar toda la noche.
PCC2 Condiciones de pH
exactas.

Centrifugar 15 min. a PCC2 Condiciones

exactas.
3000 rpm a 4°C

Se Mide el sobrenadante y se
PCC2 Medición exacta. agregan 4 volúmenes de
acetona-éter

Centrifugar a 4°C por 5 min a

3000 rpm. Resuspender en
buffer de fosfatos

Realizar pruebas de esterilidad a 3

PCC2 Condiciones
producto terminado con caldo adecuadas de
tioglicolato y soya tripticaseina almacenamiento.
 7. Cronograma
Tabla 2.- Cronograma de actividades en el periodo del desarrollo del proyecto

Semana Fecha Actividad

1 5 de Octubre 2016 Preparación de soluciones

Obtención de páncreas de
cerdo y su conservación.

2 12 de Octubre 2016 Extracción de insulina

porcina con alcohol-ácido

3 19 de Octubre 2016 Purificación de insulina con

acetona-éter

4 26 de octubre 2016 Pruebas de calidad y

eficacia (actividad y
potencia).

4
5 9 de Noviembre 2016 Pruebas de calidad y
eficacia (actividad y
potencia).

6 16 de Noviembre Formulación de la
presentación farmacéutica
del producto biológico
terminado.

8. Materiales, equipo y reactivos.

Tabla 3.- Material requerido a lo largo de la experimentación

Material Equipo Reactivos

Cristalería Licuadora Etanol 75%

Matraz Erlenmeyer 2 L Centrífuga HCl concentrado

Pipetas Volumétricas Máquina de hielo NaOH concentrado

1,2,5,10 y 20 mL Agitador magnético Acetona

Éter

Tubos de ensaye para Buffer RIA

centrífuga Buffer de fosfatos

Vaso de precipitados Metacresol

100, 250, 500 y Fenol

1000 mL Glicerol

Varilla de vidrio Glucosa anhidra

Campana de vidrio Insulina isófona

Reactivo de Biuret

Material desechable
Jeringa 1,3,5 y 10 mL
Agujas de para insulina
Gasas estériles
Algodón
Hisopos estériles
Cajas Petri con: Agar

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 Sangre, Mc
Conkey, SDA,
Sales Manito
Biológicos
Páncreas de cerdo

9. Referencias
 Ahmed, H. (2004). Principles and Reactions of Protein
Extraction, Purification, and Characterization. USA: CRC press.
 Garcia, H. (2000). Electroforesis en geles de poliacrilamida:
fundamentos,. LABORATORIOS BETERÁ.
 Glaehter, Y. F. (2013). Biotecnologia alimentaria. Bogota: ECBTI.
 Rivera, R. (2011). Limpieza y conformacion del conjunto
radicular. Mexico: UNAM.
 Toledo, A. (1995). Cristalización de insulina: factores que
influyen en la cinética de crecimiento. Revista cubana de
enfermeria.

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